汉防己甲素对体外培养的兔结膜成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的：观察汉防己甲素（Tet)对体外培养的兔结膜成纤维细胞（RCF）生长的抑制作用，探讨其作用的可能机制，为防治与成纤维细胞增殖相关的多种眼病提供一种有效的药物。方法：应用MTT法测定不同浓度的Tet对RCF的抑制作用；用细胞计数法观察不同浓度的Tet在不同时间下对RCF的生长抑制作用；用流式细胞仪检测Tet对RCF细胞周期的影响。结果：给药48小时后，终浓度为0．16、0．8、4、20、100μg/ml的Tet对RCF的生长均明显抑制作用；且在上述不同浓度的Tet作用下，于1、3、5、7天计数细胞，发现Tet对RCF的抑制具有时间、剂量关系。流式细胞仪显示，RCF经2μ/mlTet处理48h后，G1期细胞增加了13．3％，S期细胞下降了9．55％，G2期细胞下降了4．23％。结论：汉防己甲素可抑制RCF生长，有时间剂量效应。Tet影响RCF细胞周期各时相群体，抑制G1期向S期的过渡，进而阻止细胞向G2期的过渡，从而抑制细胞增殖。     

汉防己甲素体外对正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的比较

目的:观察汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对正常结膜和翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的异同。方法:在相同的培养条件下,传第3代的正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞皆加入不同浓度的Tet,分别于加药后1和3d行MTT检测细胞的存活率。结果:用药后1d,4×10-5和2×10-5mol/LTet对正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞存活率无显著性差异(P>0.05),其余各浓度的Tet对翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用大于正常结膜成纤维细胞,正常结膜成纤维细胞的存活率大于翼状胬肉成纤维细胞(P<0.01)。用药后3d,4×10-5mol/LTet组翼状胬肉成纤维细胞的存活率大于正常结膜成纤维细胞(P<0.01);其余各浓度的Tet对两种成纤维细胞存活率无显著性差异(P>0.05)。结论:用药后3d,2×10-5mol/L及半数抑制量(10-5mol/L)以下浓度的Tet对翼状胬肉成纤维细胞起抑制作用,而对正常结膜成纤维细胞的影响较小。     

汉防己甲素抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的研究

目的:观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用并探讨其机制,寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物.方法:(1)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Tet作用下,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞形态的变化,并与丝裂霉素(Mitomycin,MMC)进行比较.(2)MTT比色法测定不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用,并与MMC进行比较.(3)流式细胞仪检测不同浓度的Tet作用48h,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞细胞周期的变化.结果:(1) Tet作用下,细胞胞体收缩,变圆,间隙增宽,药物浓度高时,细胞碎裂,浮起.0.1,0.2g/L MMC作用下大量细胞碎裂,溶解.(2)不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增殖均有明显的抑制作用(P＜0.01);0.1g/L与0.2g/L MMC、4×10-5 mol/L Tet与0.2g/L MMC对翼状胬肉成纤维细胞活性的影响无显著性差异(P＞0.05).Tet的IC50接近10-5mol/L(为0.848×10-5mol/L).(3)Tet作用下,翼状胬肉成纤维细胞周期中S期细胞增多,浓度越高,作用越明显.结论:汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,细胞分裂被阻止在S期(DNA合成期).可望用于对翼状胬肉的治疗.     

汉防己甲素及对眼科疾病防治的研究进展

汉防己甲素是一种中药的有效成分，它具有消炎，镇痛，降血压，降血糖，抗肿瘤、抗矽肺，抗心率失常等广泛的药理作用，本文概述了汉防己甲素的药理作用及在眼科疾病防治上的研究发现，有望在临床上进一步防治这些疾患，提供一种有效的药物。     

汉防己甲素对体外人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制效应

目的:研究汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人眼Tenon囊成纤维细胞(Tenon’s capsule fibroblasts,TCFs)的抑制效应。方法:用组织块和混合消化液培养法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞,并对培养的传代细胞进行形态学的鉴定。采用MTT法检测不同浓度的汉防己甲素(10-4,10-5,10-6,10-7mol/L)及0.2g/L丝裂霉素(MMC)对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用。结果:人眼Tenon成纤维细胞体外生长良好,经光镜和免疫组化观察证明该细胞为成纤维细胞。MTT法证实,随着Tet药物浓度的增大,TCFs增生活性降低,对应的TCFs抑制率升高。结论:Tet对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用。     

汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用，寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物。方法用MTT比色法测定不同浓度的汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用，并与丝裂霉素C（MMC）进行比较；用荧光定量PCR检测10^-5mol／L的汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞基质金属蛋白酶（MMP）MMP-3 mRNA的表达的影响。结果不同浓度的汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增生均有明显的抑制作用（P〈0．01）；10^-5mol／L的汉防己甲素作用24h其MMP-3 mRNA的表达量下降了27．12％。结论汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞具有明显的抑制作用，可望用于对翼状胬肉的治疗。     

几丁聚糖对兔结膜上皮细胞和结膜成纤维细胞增殖的影响

目的　研究几丁聚糖对兔结膜上皮细胞和结膜成纤维细胞增殖的影响。方法　采用消化法培养结膜上皮细胞 ,组织块法培养结膜成纤维细胞。通过MTT比色法和细胞计数法测定几丁聚糖对两种细胞增殖的影响。结果　几丁聚糖在浓度 >0 0 3 %时能促进结膜上皮细胞的增殖 ,浓度为 0 12 %时促进作用最明显。结膜成纤维细胞在几丁聚糖浓度 >0 0 3 %时其增殖即受到抑制 ,抑制作用呈浓度依赖性。结论　几丁聚糖有望用于预防睑球粘连     

汉防己甲素抑制兔晶状体后囊膜混浊

目的 探讨汉防己甲素对白内障摘除术后晶状体后囊膜混浊形成的影响及其作用机制。方法 对48只实验兔行单眼囊外晶状体摘除及人工晶状体植入术。术前随机分为A组对照、B组术后结膜下注射地塞米松、C组术后结下注射汉防己甲素和D组术中植入汉防己甲素镀膜人工晶状体。术后不同时间检测各组术眼的房水细胞数、蛋白质和丙二醛含量,记录晶状体后囊膜混浊程度和湿重。结果 除术后14d房水丙二醛含量外,囊外晶状体摘除术后不同时间4个组的房水细胞数、蛋白质和丙二醛含量,以及晶状体后囊膜混浊的程度和湿重差异均有显著意义（P＜0．05）。其中B和C组术后不同时间房水细胞数、蛋白质和丙二醛含量均低于A组,差异有显著意义（P＜0．05）;B、C和D组术后不同时间晶状体后囊膜混混的程度和湿重均低于A组,差异有显著意义（P＜0．05）。结论 防汉己甲素可有效抑制兔眼晶状体摘除术后晶状体后囊膜混浊的形成;其最佳用药剂量和途径尚需深入探讨。     

染料木黄酮对兔结膜成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:观察染料木黄酮(genistein,Geni)对体外培养的兔结膜成纤维细胞(rabbitconjunctivalfibroblasts,RCF)增殖的影响。方法:应用MTT法测定不同生长时间及浓度的Geni,5-FU及二者联合药物对RCF生长的影响。结果:2.5￣40mg/LGeni对RCF生长抑制率分别为27.2%,34.0%,44.6%,55.1%,58.9%;不同浓度的Geni作用1,3,5,7d的生长抑制率,随时间、剂量增加而加大。Geni(5,10mg/L)与5-FU(1mg/L)联用的抑制率分别为45.6%和49.1%。结论:Geni对RCF的增殖有抑制作用,呈时间和剂量依赖性;与5-FU有协同效应。     

汉防己甲素对兔结膜成纤维细胞超微结构和兔眼内组织毒性作用

目的　观察汉防己甲素 (Tet)对兔结膜成纤维细胞超微结构的影响及对兔眼内组织的毒性作用。方法　用含 2、4mg·L-1的Tet作用于体外培养的兔结膜成纤维细胞(RCF) 4 8h ,观察Tet对其超微结构的影响 ;用含 30 0、6 0 0mg·L-1的Tet 0 1mL向兔眼玻璃体腔内注射 ,对照组玻璃体腔内仅注入 0 .1mL生理盐水。观察用药前、用药后 3、14d各组视网膜电流图 (ERG)、视觉诱发电位 (VEP)变化。结果　 2mg·L-1Tet作用RCF 4 8h后 ,电镜观察细胞超微结构无改变 ,而 4mg·L-1Tet作用RCF 4 8h后 ,细胞次级溶酶体数量增多 ,呈髓鞘样结构。向兔眼玻璃体腔内注射 30 0、6 0 0mg·L-1Tet 0 .1mL后 ,用药前及用药后 3dERG、VEP与对照组相比均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;而 6 0 0mg·L-1Tet行玻璃体腔内注射达 14d后 ,ERG、VEP与对照组相比有高度显著性差异 (P <0 .0 0 0 1)。结论　汉防己甲素对兔结膜成纤维细胞生长有一定的毒性作用 ,但适宜浓度的汉防己甲素应用于兔眼内组织防止成纤维细胞增殖是安全的。     

MTT法测定低分子量肝素对兔结膜成纤维细胞增殖的抑制作用

观察低分子量肝素（ｌｏｗｍｏｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｈｅｐａｒｉｎ,ＬＭＷＨ）对兔结膜成纤维细胞增殖的抑制作用,探讨其与地塞米松联合应用的价值,并与肝素的抑制作用相比较。方法应用ＭＴＴ法测定不同浓度的ＬＭＷＨ对结膜成纤维细胞增殖的抑制作用,同时比较单独应用ＬＭＷＨ、地塞米松、同一抗凝单位的肝素及ＬＭＷＨ联合地塞米松对成纤维细胞增殖的抑制作用。结果ＬＭＷＨ对兔结膜民纤维细胞增殖的抑制作用与浓度成正相     

兔结膜成纤维细胞的体外培养

目的：探索兔眼结膜成纤维细胞体外培养的方法。方法：分别采用组织块培养法、机械分离法、消化培养法、细胞悬液法和混合消化组织块培养法培养兔结膜成纤维细胞,观察细胞形态和生长特性。结果：单纯机械分离和消化培养法都可以得到单层贴壁细胞,细胞消化后再培养可缩短生长周期。结论：混合酶充分消化的组织块连同细胞悬液一同培养的方法,步骤简便且周期短。通过差别消化法和多次传代可以得到较纯的成纤维细胞。     

冬凌草甲素抑制兔小梁切除术后培养的结膜成纤维细胞增殖的初步研究

目的观察冬凌草甲素（Ori）对小梁切除术后培养的免结膜成纤维细胞（RCF）增殖的影响。设计实验研究。研究对象体外培养的小梁切除术后结膜滤过区来源RCF。方法制作兔眼小梁切除术模型,术后7天取兔滤过区结膜下组织进行成纤维细胞体外培养。分别用浓度依次为5、10、20、30、40、50μmol·L^-1。的Ori干预48小时。采用MTT法检测不同浓度药物对成纤维细胞生长的影响。主要指标成纤维细胞的光密度（OD）值和生长抑制率。结果加入Ori培养48小时后,5、10、20、30、40、50μmol·L^-1不同浓度组成纤维细胞的OD值分别为（0．402±0．013）、（0．347±0．011）、（0．293±0．015）、（0．236±0．022）、（0．184±0．023）和（O．125±0．014）,与无药对照组OD值（0．453±0．015）比较差异均有统计学意义（P=0．021～0．000）,并呈浓度依赖性减小（F=5．48,P=0．003）。浓度为5、10、20、30、40、50μmol·L^-1的Ori对成纤维细胞生长抑制率分别为11．26％、23．40％、35．32％、47．90％、59．38％和72．41％。结论Ori可以抑制培养的兔眼滤过区结膜成纤维细胞的增殖,抑制作用呈剂量依赖性。Ori可能成为一种治疗青光眼术后滤过泡纤维化的新药物。（眼科,2009,18：128-130）     

The effects of D-penicillamine and daunorubicin on conjunctival fibroblast proliferation and collagen synthesis

Two drugs, D-penicillamine and daunorubicin, were tested for their effect on proliferation and collagen synthesis of cultured conjunctival fibroblasts. This cell type is likely responsible for scar formation and ultimate filter surgery failure in glaucoma patients. Both drugs were antiproliferative; however, D-penicillamine required 2000 times the concentration of daunorubicin to achieve a similar degree of inhibition. D-penicillamine had a more consistent effect on intracellular collagen synthesis than daunorubicin at the doses tested. In contrast, at concentrations of daunorubicin where all proliferation ceased, intracellular production and extracellular transport of collagen were maintained.     

聚肌胞兔滤过术后结膜下注射对成纤维细胞的影响

目的研究聚肌胞注射液对兔滤过术后滤过道的组织病理学变化及毒性。方法对10只新西兰兔双眼小梁切除术,于术中、术后一组（每兔1眼）球结膜下注射聚肌胞,对照组（每兔另1眼）球结膜下注射生理盐水。术后3、5、10、15d行术眼眼压和裂隙灯显微镜检查。术后5、7、10、15d行术眼病理切片光镜观察。结果对照组的滤过泡于术后7d失败,聚肌胞组的滤过泡于术后14d失败,术后7～10d聚肌胞组巩膜瘘道阻塞率是40％,对照组巩膜瘘道全部阻塞。结论对兔眼滤过术中、术后应用聚肌胞可以抑制成纤维细胞增生,暂时提高兔眼滤过术的成功率,无副作用。     

载汉防己甲素壳聚糖纳米微球的制备及其对人翼状胬肉细胞增殖的抑制作用

目的　通过制备新型载汉防己甲素的壳聚糖纳米微球,研究其对于人翼状胬肉细胞增殖的抑制作用。方法　化学合成新型壳聚糖衍生物 （deoxycholic acid-modified chitosan,DAMC）,与汉防己甲素作用合成载药纳米微球,并检测其性能。载药纳米微球作用体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞第1天、3天、5天后,采用CCK-8法检测人翼状胬肉成纤维细胞的活性。结果　通过化学反应成功获得脱氧胆酸基团接枝的DAMC,可包载汉防己甲素药物,两者形成的载药纳米微球载药量较高,可高达76%。粒径50~500 nm,Zeta电位始终保持正电位。体外药物释放实验显示载药纳米微球缓释汉防己甲素可达48 h。细胞活性实验显示Tet组第1天、3天、5天细胞活性分别为（60.70±2.30）%、（50.22±2.35）%、（21.99±2.07）%,而Tet/DAMC组分别为（79.77±2.09）%、（63.24±2.83）%、（40.28±1.19）%,含10×10^-6 mol·L^-1汉防己甲素的载药纳米微球具有抑制人翼状胬肉成纤维细胞的作用,且细胞毒性较原药明显降低。结论　载药纳米微球具有缓释药物的作用,对人翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,且细胞毒性较原药明显降低,有望提高汉防己甲素防治翼状胬肉复发的效果。