聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶的工艺研究

采用交联法制备了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)载体，并将其用于固定化L-天门冬酰胺酶。研究了聚乙二醇浓度、交联剂戊二醛浓度、活化剂甲醛浓度、酶溶液浓度等因素对PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶活力的影响。结果表明：在适当的条件下，PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶的活力可达20～40U／g，并且PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶具有良好的生化性质。     

聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶反应性质研究

研究了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)固定化L-天门冬酰胺酶催化缓冲液中天冬酰胺的反应过程,考察了底物浓度、给酶量、温度、搅拌速率等条件对固定化酶在缓冲液中间歇催化反应过程的影响;以及底物浓度、流量、温度、床层高度等因素对固定化酶在缓冲液中连续催化反应过程的影响。实验结果表明:在适当的反应条件下,聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶可以很好地水解缓冲液中的天冬酰胺。     

乙二胺羟丙基壳聚糖固定化天门冬酰胺酶的反应性质

研究了乙二胺羟丙基壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酰反应动力学性能，分别考察了固定化酶耐胃蛋白酶性能，保存条件对固定化酶活力的影响，固定化酶的米氏常数Km以及固定化酶在缓冲液中间歇催化底物和连续催化底物的反应动力学性能，结果表明，在适当的间歇和连续反应条件下，固定化酶均具有良好的水解天门冬酰胺性能和效率。     

壳聚糖修饰L-天门冬酰胺酶对酶活及抗原的影响

采用水溶性壳聚糖对L－天门冬酶胺酶进行化学修饰，修饰后的酶活回收率高达705，修饰酶的比活为每毫克蛋白质121.79U，pH值为7.4，更接近于人体血浆pH值(7.2-7.4），对底物的亲和力有所提高，稳定性增加，抗原性仅为自然酶的1／3，增加了临床使用的安全性。     

乙二胺羟丙基壳聚糖固定化天门冬酰胺酶的研究

研制了新型壳聚糖胺基衍生物-乙二胺羟丙基壳聚糖（EDA-HPCS）,并将其用于固定天门冬酰胺酶,分别考察了甲醛活化载体和戊二醛活化载体对固定化酶活力的影响,结果表明,在适当的固定化条件下,甲醛活化EDA-HPCS的固定化酶活力约为30U/g载体,而戊二醛活化EDA-HPCS固定化酶活力约为16U/g载体。     

降低L-天门冬酰胺酶毒副作用的研究进展

L-天门冬酰胺酶是儿童急性淋巴细胞白血病诱导治疗中不可缺少的重要药物，但其毒副作用限制了该酶的临床应用。目前如何减少L-天门冬酰胺酶的毒副作用是进一步推广应用的研究重点，本文对其作简要的综述。     

壳聚糖固定α-淀粉酶的研究

目的　从虾蛄壳提取壳聚糖 ,将α-淀粉酶固定在壳聚糖上。　方法　以自制壳聚糖为载体 ,一氯乙酸或三氯乙酸为交联剂 ,将α-淀粉酶固定化。　结果　三氯乙酸是较好的交联剂。固定化酶与原酶的最适 p H及最适温度基本相同 ,均为 6.5 ,5 0℃ ;固定化酶在 65℃仍有较高热稳定性 ,而原酶活力明显下降 ;固定化酶的表观米氏常数 Km =0 .6× 10 -2 g/ml,原酶 Km =1.1× 10 -2 g/ml;一定浓度 Cl-、Br-离子有助提高固定化酶活力。　结论　该固定化酶活力较高 ,热稳定性和贮存稳定性好 ,是良好的检测试剂。     

壳聚糖固定胰蛋白酶的研究

目的：从蟹壳中提取壳聚糖，将胰蛋白酶固定在从蟹壳中提取的壳聚糖上。方法：以自制壳聚糖为载体，戊二醛为双官能团交联剂，将胰蛋白酶固定化。结果：０．２ｇ壳聚糖（干）与４％戊二醛交联后再与５．０ｍｇ胰蛋白酶固定结合，效果较好。固定化酶的表现米氏常数Ｋ′ｍ＝１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，而天然酶Ｋｍ＝７．６ｍｍｏｌ／Ｌ；固定化酶最适温度为８０℃，比天然酶提高了２０℃；固定化酶最适ｐＨ为７．０．而天然酶为８．０。该载体来源广，易提取，固定化酶的贮存稳定性很好，２个多月重复使用，酶活力未见明显下降     

大肠杆菌L—天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达

用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１,Ｅ２６和引物,以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＣＤＮＡ片段,将此片段插入ＰＫＫ２３３－２的ｔａｃ启动子下游,转化不同的大肠杆菌宿主菌株,结果表明以ＣＰＵ２１０００９为宿主菌时,转化子的酶表达量最高,重组Ｌ－天门冬酶胺酶占菌体总蛋白４８．３％,发酵液酶活力达４００ＩＵ／ｍｌ,比活为４     

甲壳胺-羧甲基纤维素钠高分子复合物固定酶的研究

本文采用天然高分子甲壳胺与羟甲基纤维素钠的高分子复合物作哉体,固定葡萄糖氧化酶和纤维素酶。得到的固定化酶活性较高、热稳定性好。固定化后的葡萄糖氧化酶比固定化前的最适反应温度提高50℃,固定化后的纤维素酶最适反应温度提高20℃。固定酶的贮存稳定性明显提高,并可反复使用。     

甲壳糖固定血管紧张素转换酶的制备及其性质

目的 将血管紧张素转换酶(ACE)固定化并测定其动力学性质。方法 以甲壳糖为载体，碳二亚胺(EDC)为交联剂，与分离纯化的ACE混合,使ACE固定化；并以马尿酰甘氯酰甘氨酸(HCG)为底物，分别测定了其游离酶和固定化酶的动力学性质。结果 固定化酶活力110u／g湿重，固定化率为22％，与游离酶比较，固定化酶稳定且具良好的耐热性，在50—80℃固定化酶较游离酶稳定。在pH7．1的底物缓冲体系中，37℃，游离酶Km=0.026mol／L；在间歇振摇下固定化酶的表现Km=0．040mol／L。游离酶最适pH为、8.0固定化酶最适pH为9．0。结论 用甲壳糖固定ACE方法简便可行，且固定后的甲壳糖性能稳定，有广阔的应用前景。     

以甲壳胺为载体固定乙酰胆碱酯酶

目的 探讨以甲壳胺为载体固定乙酰胆碱酯酶的最佳条件及固定化酶的理化性质.方法 以戊二醛为交联剂,将乙酰胆碱酯酶固定在甲壳胺上,并分别测定固定化酶与溶液酶的活力.结果 固定化酶与溶液酶的最适温度相同,均为37℃;固定化酶与溶液酶最适pH分别为8.2、8.0;固定化酶在50℃仍有较高热稳定性,而溶液酶活力明显下降;固定化酶的米氏常数Km=0.84 mmol/L,溶液酶的Km=1.16 mmol/L;固定化酶活力回收为44.66%,在重复使用8次后仍能保持原有活力的50%.结论 该固定化酶与溶液酶相比,其热稳定性提高,与底物的亲和能力增大,且重复使用性较好.     

L-门冬酰胺酶突变体的构建及其活性测定(英文)

目的:将L-门冬酰胺酶抗原表位区域的两个肽段作为突变对象,构建9个突变体,并对其酶活力和蛋白表达量与原酶进行比较研究。方法:根据丙氨酸扫描原理,应用重叠延伸PCR技术构建突变体,并对突变菌株进行基因测序和酶活力测定。结果:构建成功的突变菌株均具有酶活力,且蛋白表达水平不受影响。结论:首次采用基因修饰,改变L-门冬酰胺酶抗原表位区域的肽段,而不影响其酶活力,为后续研究和探讨L-门冬酰胺酶抗原表位结构与功能的关系提供了基础。     

蜗牛酶在聚(N-异丙基丙烯酰胺)中的固定化及应用

将蜗牛酶固定到聚(N—异丙基丙烯酰胺)上得到一种热可逆的固定化酶。研究了固定化酶的性能和对几种不同底物的作用情况。结果表明蜗中酶对羧甲基纤维素钠、甲壳胺和可溶性棉花都有较好的降解活性。     

壳聚糖对鞣酸絮凝作用的研究

以壳聚糖为絮凝剂，采用絮凝法除去中药药液中的杂质。以鞣酸为研究对象，从鞣酸浓度，体系温度，ＰＨ絮凝剂用量粘均分子量等方面探讨其絮凝规律，用正交试验优化其絮凝条件，为实施中药药液的絮凝法精制工艺提供参考。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶的研究

目的虾蛄壳提取壳聚糖，将胰蛋白酶固定在该壳体聚糖上，方法以自制壳聚糖为载体，一氯醋酸为交联剂，将胰蛋白酶固定化，结果，固相酶的最适温度为５０℃，原酶为４５℃固相酶最适ｐＨ值为７．０，原酶为８．０，固相酶的表面米氏常数Ｋｍ＝１２ｍｍｏｌ／Ｌ，原酶Ｋｍ＝２３ｍｍｏｌ／Ｌ，结论该固定化酶活力较高，抗酸能力强，热稳定性和储存稳定性好，是良好的检验试剂。