汉防己甲素对环孢素A致小鼠肝肾损伤的作用

汉防己甲素对环孢素A致小鼠肝肾损伤的作用孙成春郝俊文尹秋霞王景祥(济南军区总医院济南250031)环孢素A(CsA)是目前临床广泛使用的高效免疫抑剂,其主要不良反应为肝肾毒性。汉防己甲素(Tet)是从防己科植物汉防己StephaniatetrandraS.More中提取的生物碱有钙拮抗及清除自由基等作用。本文探讨Tet对CsA所致小鼠肝肾毒性的保护作用。1材料与方法1.1试剂CsA口服液(赛斯平),杭州中美华东制药厂;汉防己甲素,江西彭泽制药厂;CsA单克隆....     

汉防己甲素对人多发性骨髓瘤干细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的:研究汉防己甲素对人多发性骨髓瘤干细胞CD138~- B细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测汉防己甲素对CD138~- B细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测汉防己甲素对CD138~- B细胞周期的影响以及药物诱导细胞凋亡的作用;应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测汉防己甲素对CD138~- B细胞中裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-Caspase)-3,cleaved-Caspase-9蛋白表达的影响。结果:与空白组及溶剂组比较,10,20,30,40μmol·L~(-1)汉防己甲素处理6,12,24 h对CD138~- B细胞的增殖均具有显著的抑制作用(P0.01);与空白组及溶剂组比较,汉防己甲素30,40μmol·L~(-1)时,G_0/G_1期细胞显著增多(P0.01),S期细胞明显减少(P0.05,P0.01),汉防己甲素10,20,30,40μmol·L~(-1)时,细胞凋亡率显著增加(P0.01);与空白组及溶剂组比较,20,30,40μmol·L~(-1)汉防己甲素处理后,cleaved-Caspase-3,cleaved-Caspase-9蛋白表达显著升高(P0.01),10μmol·L~(-1)汉防己甲素处理时,cleaved-Caspase-3蛋白表达明显增高(P0.05)。结论:汉防己甲素通过阻滞细胞周期在G_0/G_1期抑制CD138~- B细胞的增殖,通过活化细胞内与凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3,cleaved-Caspase-9促进细胞凋亡。     

汉防己甲素对兔结膜成纤维细胞增生的影响

目的：观察汉防己甲素对培养兔结膜成纤维细胞（rabbit conjunctival fibroblasts,PCF)增生的影响。方法：在体外培养的RCF中分别加入浓度为100、20、4、0．8、0．16μg/ml的汉防己甲素，在1、3、5、7后天用细胞计数法观察RCF生长情况，袍用流式细胞仪检测4μg/ml和2μg/ml汉防己甲素所引起的RCF细胞周期的变化。结果：各种实验浓度的汉防己甲素对培养RCF均有抑制作用并有时间剂量效应；流式细胞仪分析显示RCF经4μg/ml和2μg/ml的汉防己甲素处理48小时后对细胞周期均有影响；G1期细胞分别增加了15．5％和13．3％，S期细胞分别下降了10．3％和9．55％，G2期细胞分别下降了5．55％，4．23％，结论：汉防己甲素通过对细胞周期的影响抑制成纤维细胞的增生。     

汉防己甲素抗肿瘤作用的研究进展

文章回顾了近年以来国内外对汉防己甲素在抗肿瘤作用中的研究进展,对汉防己甲素抗肿瘤作用及其机制进行总结.统计表明:汉防己甲素在抗肺癌、慢性粒细胞白血病、肝癌、神经母细胞瘤、乳腺癌等有一定作用,其机制与逆转多药耐药、诱导细胞凋亡、放疗增敏、抑制肿瘤血管形成有关.说明了汉防己甲素在抗肿瘤方面有很大的潜在价值,但其抗肿瘤的药理机制及临床应用还需进行深入研究.     

汉防己甲素现代药理作用研究进展

汉防己,又称粉防己,能够祛风止痛,利水消肿,是一种治疗风湿痹痛的传统中药。生物碱在粉防己中具有重要的药效物质基础,汉防己甲素属于其中的双苄基异喹啉类生物碱成分,生物活性多样,可以从多个方面实现抗肿瘤的作用,临床上也验证了其对多种炎症因子的抑制作用,对肝纤维化、肾纤维化等多种纤维化类疾病也有较好的防治作用,并且在与多种药物联合用药时,能够体现出良好的协同作用。近年来,经过国内外学者不断深入的研究,还发现汉防己甲素对神经系统以及缺血再灌注损伤也有一定的保护作用,同时,作为一种钙离子拮抗剂,汉防己甲素能够有效阻断细胞内外钙离子的沉积。综上所述,汉防己甲素在临床上的应用前景十分广泛,该文通过对上述及其他已经报道的汉防己甲素的药理作用进行了归纳,总结其各个药理作用实现的可能机制,综述其目前的研究进展,希望能够较为全面地揭示出汉防己甲素可能的应用方向,为其能够更好地在临床上应用提供启示和思路。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果:冬凌草甲素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论:冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素对肝癌BEL-7402/5-FU细胞增殖、凋亡、细胞周期及Hippo信号通路的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402/5-FU细胞增殖、凋亡和细胞周期及Hippo信号通路的影响。方法:采用不同浓度的冬凌草甲素作用于人肝癌BEL-7402/5-FU细胞,细胞计数法(CCK-8)检测细胞增殖抑制率,CCK-8法测定细胞耐药逆转指数,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR法检测各组细胞Yes相关蛋白(YAP)、转录共激活因子(TAZ)的mRNA表达水平,Western Blot法检测各组细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、结缔组织生长因子(CTGF)、生存素(Survivin)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)的蛋白表达水平。结果:不同浓度冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402/5-FU细胞具有不同程度增殖抑制作用,确定最适逆转浓度,即4μmol/L冬凌草甲素用于后续实验。冬凌草甲素能够阻滞细胞周期至G₂期,诱导细胞发生凋亡,抑制YAP、TAZ mRNA表达以及Survivin、Bcl-2蛋白表达。结论:冬凌草甲素能阻碍BEL-7402/5-FU细胞周期进程,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与干预Hippo信号通路有关。     

汉防己甲素联合紫杉醇逆转脑胶质瘤C6/MDR细胞耐药及其机制研究

目的评价汉防己甲素联合紫杉醇(paclitaxel,PTX)逆转耐药型脑胶质瘤(C6/MDR)细胞多药耐药的可行性,并探讨可能的耐药逆转机制。方法通过非耐药型脑胶质瘤C6和耐药型脑胶质瘤C6/MDR细胞系作对比,以体外细胞毒性为指标,采用MTT法分别考察PTX、汉防己甲素、PTX+汉防己甲素抑制C6和C6/MDR细胞增殖作用差异;以细胞摄取能力为指标,借助HPLC和流式细胞仪技术分别测定PTX和荧光探针罗丹明123(R123)在2种细胞内的含量,评价汉防己甲素促C6/MDR细胞摄取PTX和R123的能力;以细胞凋亡率为指标,采用Annexin V-PE/7-AAD一步染色法定量PTX、汉防己甲素、PTX+汉防己甲素干预后的2种细胞凋亡率;采用P-糖蛋白(P-gp)抗体结合试剂盒和Pgp-Glo TM分析系统分别考察汉防己甲素对C6/MDR细胞P-gp表达以及P-gp ATP酶活性的影响。结果汉防己甲素+PTX对C6/MDR细胞的半数抑制浓度(IC50,以PTX浓度计)为(5.88±0.43)nmol/L;在10μmol/L汉防己甲素的干预下,C6/MDR细胞内的PTX和R123累积量相比PTX组分别提高9.4倍和12.3倍,凋亡率相应提高了2.3倍;这种汉防己甲素介导的耐药逆转机制可能与降低C6/MDR细胞P-gp表达、刺激细胞内P-gp ATP酶活性有关。结论汉防己甲素联合紫杉醇在体外具有逆转C6/MDR细胞耐药的潜力。     

响应曲面法优化防己中汉防己甲素及汉防己乙素的提取工艺

目的:以汉防己甲素和汉防己乙素的提取率作为考察指标,优化防己中汉防己甲素和汉防己乙素的提取工艺。方法:利用高效液相色谱法测定汉防己甲素和汉防己乙素的含量,采用响应曲面法考察乙醇体积分数、料液比及超声时间对提取效果的影响。结果:Design expert 10预测得到汉防己甲素最佳提取工艺为乙醇浓度为60%,料液比为1∶36.07,超声时间为57.12 min,提取率为13.53 mg/g;最佳提取汉防己乙素的提取工艺为乙醇浓度62.49%,料液比为1∶37.71,超声时间为59.38 min,提取率为8.71 mg/g。结论:该研究为防己中防己甲素和汉防己乙素的提取工艺提供实验依据。     

汉防己甲素大鼠在体肠吸收机制研究

目的研究汉防己甲素在大鼠在体肠吸收机制。方法采用大鼠在体肠段灌流实验，利用紫外分光光度法和HPLC法分别测定酚红和汉防己甲素的量，分别研究药物质量浓度和吸收部位对汉防己甲素吸收的影响。结果在5．4～21．8μg／mL药物质量浓度对小肠吸收速率常数（Ka）无影响；各肠段的Ka回肠〉空肠〉结肠〉十二指肠，分别为0．1686、0．1260、0．1254、0．1109h^-1。结论汉防己甲素的吸收符合一级动力学特征，吸收机制为被动扩散；汉防己甲素在各肠段均有较好的吸收。     

冬凌草甲素抑制人肝癌BEL-7402细胞生长及诱导细胞凋亡的机制研究

目的探讨冬凌草甲素体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制作用及诱导细胞凋亡作用机制。方法以8、16、24、32μmol/L冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡时的形态学变化。应用Westernblotting观察caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果冬凌草甲素可显著地抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时Westernblotting显示32000的caspase-3酶原蛋白的激活,出现20000的亚单位,凋亡过程中伴有Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长;冬凌草甲素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

汉防己甲素注射液细菌内毒素检查方法研究

目的:建立汉防己甲素注射液细菌内毒素检查法.方法:采用<中国药典>2005年版附录细菌内毒素检查法.结果:汉防己甲素注射液浓度为0.25mg·mL-1,用灵敏度为0.25 Eu·mL-1的鲎试剂检测细菌内毒素无干扰因素的影响.结论:汉防己甲素注射液可应用鲎试剂进行细菌内毒素检查.     

汉防己甲素滴丸的制备工艺优化及溶出度考察

目的优化汉防己甲素滴丸的制备工艺,并考察其溶出速率。方法首先以基质配比、基质与药物配比、滴制温度、滴速、滴距、冷凝温度作为考察因素,使用Plackett-Burman实验设计筛选出对汉防己甲素滴丸的成型率影响较为显著的关键因素;再以汉防己甲素滴丸成型率、滴丸质量差异作为评价指标,通过Box-Behnken效应面法优化其制备工艺参数;并通过转篮法比较了汉防己甲素滴丸与片剂的体外溶出速率。结果 Plackett-Burman实验设计分析表明,基质配比、滴制温度、冷凝温度对汉防己甲素滴丸的成型率影响较为显著;经Box-Behnken效应面法优化得到汉防己甲素滴丸的最佳制备工艺参数为基质配比为2.6∶1、滴制温度为82.4℃、冷凝温度7.5℃,制备的汉防己甲素滴丸成型率高、圆整度好、重量稳定、药物溶出速率较快。结论通过实验设计法优化制备的汉防己甲素滴丸质量符合要求,可以进一步放大研究。     

中药肌肉松弛剂“汉肌松”的药物化学及提制工艺的研究

汉防己的主要成分为汉防己甲素(汉防己碱 Tetrandrine)和汉防己乙素(Demethyl-tetrandrine),均为双叔胺型生物碱。根据一般季铵化合物常有神经肌接头阻滞作用的特点,以及汉防己乙素在碱性条件下与碘甲烷进行甲基化反应后能转化为汉防己甲素的文献资料,我们从汉防己中提取总生物碱,然后与碘甲烷在碱性条件下进行季铵化反应(其中汉     

参麦注射液联合汉防己甲素对尘肺病肺纤维化的疗效

目的:探讨参麦注射液联合汉防己甲素对改善尘肺病患者肺纤维化指标的效果。方法:回顾性分析福建省职业病与化学中毒预防控制中心收治的42例尘肺病患者为研究对象,所有患者均给予参麦注射液联合汉防己甲素治疗,随访观察患者治疗前后肺纤维化指标变化情况。结果:患者治疗总有效率为95.2%,治疗后患者的纤维化指标I型胶原肽(CoI)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)、纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、转化生长因子β1(TGF–β1)水平均较治疗前有明显改善,差异具有统计学意义(P 0.05)。结论:参麦注射液联合汉防己甲素治疗尘肺病患者的临床疗效可靠。     

汉防己甲素对大鼠实验性肝纤维化胶原蛋白合成的抑制作用

结果表明汉防己甲素对CCl₄诱发的大鼠肝纤维化有明显的抑制作用。     

汉防己甲素对肾小球硬化大鼠肾脏转化生长因子β1的影响

目的：探讨汉防己甲素对肾小球细胞外基质（ＥＣＭ）和肾脏转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）表达改变的影响。方法：用阿霉素加单侧肾切除制备肾小球硬化动物模型,随机分为正常组、肾小球硬化模型组、汉防己甲素组和络活喜组。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交观察肾ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ表达。结果：两治疗组ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ表达均明显下调,肾小球ＥＣＭ也明显减少。结果：汉防己甲素通过下调ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ表达而减少肾小     

汉防己甲素逆转肺癌化疗耐药和凋亡抗性的实验研究

目的：研究中药汉防己提取的生物碱汉防己甲素逆转肺癌化疗耐药产生与凋亡发生的机理。方法：实验分对照组（只加培养基）和阿霉素组（ADR组）、汉防己甲素合阿霉素组（Tet／ADR组），后2组采用不同浓度汉防己甲素和阿霉素作用于人肺癌敏感株GLC-82和阿霉素耐药株GLC-82／ADR细胞，通过MTT法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用，流武细胞仪检测多药耐药相关蛋白（MRP）表达，碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡。结果：GLC-82／ADR耐药肺癌细胞株耐药指数（RF）为5．43，说明耐药株肺癌细胞对阿霉素明显耐药；汉防己甲素作用耐药肺癌细胞后其RF降至1．89，说明汉防己甲素可毗逆转GLC-82／ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药。化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达在12h、24h、36h、48h，ADR组与Tet／ADR组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01），说明汉防己甲素可以下调化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达。化疗耐药肺癌细胞凋亡在6h、12h、18h、24h，Tet／ADR组与ADR组、对照组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01），说明汉防己甲素协同阿霉素增强对化疗耐药肺癌细胞凋亡作用。结论：汉防己甲素可以逆转GLC-82／ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药，下调化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达，协同阿霉素增强对化疗耐药肺癌细胞凋亡作用。     

冬凌草甲素可抑制肝癌细胞增殖

中山大学第三附属医院研究人员以人肝癌细胞株BEL-7402细胞为研究对象，观察了不同浓度的冬凌草甲素对BEL-7402细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。结果发现，冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系：冬凌草甲素作用48～60h后，在BEL-7402细胞荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征：同时，端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性明显降低。研究人员介绍，端粒酶是一种特殊的核糖蛋白多聚酶，大量的临床资料表明，肝脏肿瘤细胞普遍表现出端粒酶活性，端粒酶活性的高低对于判断肝癌的疗效、     

汉防己甲素注射乳剂的制备及评价

 目的 制备汉防己甲素注射乳剂,并对其进行评价。方法 通过正交设计优选汉防己甲素乳剂的最佳处方,并对制备工艺进行优化。对样品进行质量、稳定性研究,并考察了汉防己甲素注射乳剂在大鼠体内的药动学和组织分布及对家兔耳缘静脉的刺激性。结果 汉防己甲素注射乳的最佳处方及工艺为：中链甘油三酸酯-大豆油(100 mg·mL-1∶50 mg·mL-1),磷脂30 mg·mL-1,油酸5 mg·mL-1,pH值7~7.5,用105 kPa高压均质2~4次,121 ℃热压灭菌15 min。本品在低温条件保存较为稳定。与注射液相比,汉防己甲素注射乳显著减小了药物刺激性,两者在大鼠体内药动学参数未出现显著性差异。结论 本研究制备获得的汉防己甲素注射乳工艺稳定,质量可控,并能减小汉防己甲素的刺激性。