黄瓜籽蛋白纤溶活性及抗凝溶栓作用研究

目的探讨黄瓜籽蛋白的纤溶酶活性、抗凝血和溶栓作用。方法纤溶酶活性测定采用纤维蛋白平板法;采用目内眦取血法和断尾法考察黄瓜籽蛋白对小鼠凝血和出血时间的影响;通过建立大鼠颈总动脉血栓模型,考察黄瓜籽蛋白的溶栓作用。结果黄瓜籽蛋白纤溶酶活性为:(1 632.26±117.33)IU/g;抗凝血实验对照组、黄瓜籽蛋白中、高剂量组小鼠出血时间和凝血时间均显著延长(p<0.01),表明黄瓜籽蛋白具有良好的抗凝血作用;溶栓实验结果表明,对照组、黄瓜籽蛋白低、中、高剂量组大鼠血栓湿重均显著减轻(P<0.01),对大鼠颈总动脉血栓形成具有明显的抑制作用。结论黄瓜籽蛋白具有较为显著的纤溶、抗凝血和溶解血栓的活性。     

地鳖虫纤溶活性蛋白组分抑制肿瘤作用研究

目的 地鳖虫纤溶活性蛋白组分对体内外肿瘤的抑制作用.方法 用MTT法、流式细胞术和AnnexinV-FITC/PI双荧光染色分别检测地鳖虫纤溶活性蛋白组分对体外培养的Hela细胞增殖、细胞周期及凋亡情况的影响;用S<,180>荷瘤小鼠检测地鳖虫纤溶活性蛋白组分的体内抑瘤作用.结果 地鳖虫纤溶活性蛋白组分对体外培养的Hela细胞具有抑制细胞增殖、改变细胞周期并能诱导细胞凋亡的作用,对S<,180>荷瘤小鼠具有抑瘤作用.结论 地鳖虫纤溶活性蛋白组分具有一定的抑制肿瘤作用.     

土鳖虫对大鼠抗凝血和促纤溶作用研究

目的：研究土鳖虫的抗凝、促纤溶作用。方法：土鳖虫给大鼠灌胃7天后测定凝血和纤溶两方面的指标。结果：土鳖虫在抗凝血方面未能表现出明显作用。在纤溶方面，土鳖虫表现出明显的血液纤溶酶原（Plg）活性提高和纤溶酶原激活剂（t-PA）活性提高。促进纤溶酶原活性的成分为非水溶性物质，而促进纤溶酶原激活物的成分存在于水提物中。结论：土鳖虫的作用主要在于促进纤溶功能，而不在于抗凝血。     

少棘蜈蚣活性蛋白提取及纤溶作用性质研究

目的 研究少棘蜈蚣活性蛋白的纤溶性及其性质.方法 通过硫酸铵分段盐析、DEAE纤维素柱和Sephadex G-75柱层析从少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch组织分离纯化出纤溶性活性蛋白,纤维蛋白平板法测定其纤溶性,SDS-PAGE测定样品纯度和分子量,温度、pH改变对少棘蜈蚣纤溶性蛋白活性的影响.结果 分离纯化到一种相对分子质量约为48.3 kD的纤溶性蛋白,水解纤维蛋白的比活力为42.36 u/mg.结论 少棘蜈蚣活性蛋白具有纤溶性,该成分在40℃下基本稳定,最适温度35℃,最适pH8.0.     

土鳖虫纤溶酶编码区序列的克隆与表达

目的:获得土鳖虫纤溶酶编码区序列,并进行原核和真核表达。方法:根据已报道的多种动物纤溶酶基因cDNA序列设计引物,用RT-PCR和3′RACE法克隆得到土鳖虫纤溶酶编码区序列;将该序列克隆进入大肠杆菌和毕赤酵母进行表达。结果:序列分析表明,所克隆的纤溶酶编码区序列长672bp,共编码224个氨基酸残基,起始氨基酸序列为IVGG,与多种动物纤溶酶一致。将此cDNA序列在大肠杆菌和毕赤酵母中进行表达,前者获得没有活性的表达蛋白,后者获得具有纤溶活性的重组表达蛋白。结论:首次报道了土鳖虫纤溶酶编码区序列,并进行了初步表达,为进一步研究其功能奠定了基础。     

蝉蜕不同提取工艺抗凝与纤溶活性比较研究

目的:比较蝉蜕不同提取工艺抗凝与纤溶活性。方法:以凝血酶原时间试验(PT)、活化部分凝血活酶时间试验(APTT)、血小板聚集率和血凝-纤溶动态图为指标,比较蝉蜕仿生胃/胰酶解物、水提物、醇提物、水提醇沉物的抗凝与纤溶活性差异,综合评价各提取物抗凝纤溶活性。结果:蝉蜕各提取物均不能延长家兔PT值,而仿生胃/胰酶解物和水提醇沉(渣)对于APTT、血小板聚集率、血凝-纤溶表现出抗凝纤溶作用。结论:蝉蜕仿生胃/胰酶解物和水提醇沉(渣)具有一定抗凝纤溶活性,具有后续研究价值。     

黄黑小斑蝥纤溶活性蛋白分离纯化及性质研究

目的以药用斑蝥(Mylabris)为原料,从其中分离纯化得到一种具有纤溶性的蛋白MFP(Fibrinolyric Protein of Myla-bris)。方法采用硫酸铵分段盐分、透析和DEAE-32纤维素离子交换层析等纯化方法进行分离纯化,SDS-PAGE电泳测定其分子量,纤维蛋白平板法测定其纤溶活性。结果该目的蛋白相对分子质量约为95.5 kD,其水解纤维蛋白的相对比活力为14.7 u/mg;该成分在35℃下最稳定,65℃及以上活性丧失,金属离子K+,Na+对其活力无影响,Mn2+,Ca2+对其有明显抑制作用,最适pH为6.0。结论研究分离出的斑蝥活性蛋白确为一种具有纤溶性的蛋白组分,并证明其纤溶作用机理为纤溶酶原激活;体外溶栓实验表明,其对血栓的溶解具有一定作用;溶血实验结果表明,该纤溶活性蛋白溶液无溶血反应。     

土鳖虫对大鼠体外血栓形成的实验研究

目的观察土鳖虫对大鼠体外血栓形成的影响。方法以土鳖虫水提液和生药粉悬液对大鼠灌胃7天后进行体外血栓测定。结果土鳖虫水提液组血栓重量和长度较空白对照组均明显增加(P<0.05),生药粉组血栓干重较空白对照组明显增加(P<0.05),土鳖虫对血栓长度的影响与血栓重量基本一致,此结果与以往土鳖虫具有抑制血栓形成的报道不一致。结论土鳖虫破血逐瘀的主要作用可能不在于抗凝血方面。     

土鳖虫提取物体外抗凝血活性研究

目的：比较土鳖虫不同提取物对人血浆的抗凝血活性,探讨其抗凝血机制。方法：测定土鳖虫提取物不同萃取部位对凝血酶原时间（PT）,凝斑酶时间（TT）,活化的部分凝血活酶时间（APTT）,纤维蛋白原凝固时间（FCT）的影响。结果：土鳖虫的乙酸乙酯部位显著地延长人门,APTT,下下和FCT;石油醚部位、正丁醇部位也有抗凝活性,作用较弱。结论：土鳖虫乙酸乙酯提取部分抗凝作用最强,能直接抑制凝血酶催化的纤维蛋白原凝固。     

中药影响纤溶系统活性的实验研究

中药影响纤溶系统活性的实验研究谢文光魏钰书王会信周良玉周承富蒋滋慧(四川川北医学院附属医院南充637000)为了探讨中药对纤溶系统的调节作用,我们分别用尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA),组织型纤溶酶原激活剂(tPA)激活纤溶酶原的纤溶试验,观察了20种常用活血化瘀中药和27种其它类药物对纤溶的影响。1材料与方法1.1材料被测药品均来源于本院药剂科,由本院中药室主管药剂师鉴定,符合《中国药典》规定。6542(5mg/ml)、氨....     

土鳖虫水提物联合环磷酰胺抗肿瘤增效减毒作用研究

目的:探讨土鳖虫水提物对化疗药物环磷酰胺抗H22肿瘤的增效减毒作用。方法:将接种H22肿瘤的小鼠分为模型对照组、CTX组、土鳖虫水提物组和土鳖虫水提物+CTX组。给药10天,检测各组小鼠的抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,分析土鳖虫水提物对CTX的减毒增效作用。结果:土鳖虫水提物可抑制H22肿瘤的生长,抑瘤率为38.76%。单用CTX组抑瘤率为36.95%,联用土鳖虫水提物组抑瘤率为47.28%,与单用CTX组比较差异显著(P0.01)。与模型组比较CTX组胸腺指数和脾脏指数显著降低,但联合土鳖虫水提物组的胸腺指数和脾脏指数与CTX相比显著升高(P0.05)。结论:土鳖虫水提物对H22肿瘤具有抑制作用,对化疗药物CTX具有增效减毒作用。     

土鳖虫提取液对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究土鳖虫对脑缺血缺氧的保护作用。方法：采用结扎双侧颈总动脉和迷走神经的方法后观察小鼠存活时间；采用化学法测量缺血再灌注小鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮合成酶（NOS）活性，一氧化氮（NO）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的含量。结果：土鳖虫水提取液能明显延长小鼠耐缺氧时间；增强脑组织中SOD的活性，降低NOS活性，增加GSH含量和降低NO、MDA的含量。结论：土鳖虫提取液对脑缺血再灌注小鼠具有一定的保护作用。     

土鳖虫多肽对家兔血瘀模型的影响

目的：观察土鳖虫多肽的活血化瘀作用。方法：高分子右旋糖酐静注造成家兔血瘀模型，观察土鳖虫多肽对血瘀模型家兔血黏度、血小板聚集、血栓形成的影响。结果：土鳖虫多肽明显降低血瘀家兔血黏度、抑制血小板聚集和体外血栓形成。结论：土鳖虫多肽具有明显活血化瘀作用。     

地鳖纤溶活性蛋白对荷瘤小鼠肿瘤微血管密度及血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:研究地鳖纤溶活性蛋白(EFP)对H22和S180荷瘤小鼠肿瘤组织微血管密度(MVD)及血液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,以判定EFP是否具有抗肿瘤新生血管生成作用。方法:建立H22荷瘤小鼠动物模型,采用免疫组化方法标记CD34,检测了EFP对小鼠H22和S180肿瘤组织MVD的作用情况,采用双抗体夹心ELISA法检测H22和S180荷瘤小鼠血清中VEGF含量。结果:与对照组相比,EFP可显著降低MVD及VEGF的表达。结论:EFP有抑制肿瘤新生血管形成的作用。     

土鳖虫药效的实验研究进展

土鳖虫((庶虫)虫,Eupolyphaga sinesis Walker)作为一种传统中药,最早记载于秦汉著作《神农本草经》中,东汉张仲景的《金匮要略》、明代李时珍的《本草纲目》等历代医药著作中均有记述,其性寒、味咸,有微毒,能入肝、心、脾三经,专理血症,具有散血瘀、消坚     

地鳖纤溶蛋白含药血清对人肝癌和乳腺癌抑制作用

目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)及含药血清对人肝癌HepG-2和人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法制备EFP,并制备不同浓度EFP小鼠含药血清;采用MTT法分别将EFP和EFP含药血清加入HepG-2和MCF-7细胞悬液中,分别检测增殖抑制效果。结果 EFP直接用药各组均对HepG-2无抑制作用,而EFP含药血清各组对HepG-2细胞均有明显抑制细胞增殖作用;EFP组和EFP含药血清组均能不同程度的抑制MCF-7细胞增殖。结论 EFP有较强的体外抗肿瘤活性;血清药理学方法更能真实的反映药物作用。     

地鳖纤溶蛋白对荷S180和H22小鼠的抑瘤作用研究

目的 研究地鳖虫纤溶活性先导蛋白(EFP)对荷S180和H22小鼠肿瘤的抑制作用.方法 通过体外实验,构建荷瘤小鼠模型,药物实验分为阳性对照组(环磷酰胺),阴性对照组(生理盐水),药物高浓度组、中浓度组和低浓度组.实体瘤通过瘤重计算抑瘤率,腹水瘤通过细胞浓度计算抑瘤率.结果 EFP对S180腹水瘤有较好的抑制率, 药剂量为2.90mg/kg的抑制率为69.56%,明显高于环磷酰胺(20mg/kg)的51.75%的抑制率;EFP对S180实体瘤有较好抑制作用,药剂浓度为1.45 g/kg时,抑制率为37.48%,高于环磷酰胺(20 mg/kg)的35.59%的抑制率,并呈现一定的药物剂量依赖性;药剂浓度为0.73 mg/kg时,对H22实体瘤抑瘤率为41%,高于环磷酰胺(20 mg/kg)的37%的抑制率.结论 EFP对荷S180和H22小鼠肿瘤有较好的抑制作用.     

蝎毒纤溶活性肽对低糖低氧/复氧损伤大鼠皮层神经元的保护作用

目的:研究蝎毒纤溶活性肽(SVFAPs)对大鼠神经元低糖低氧/复氧损伤的影响,探讨药物发挥神经保护作用的可能机制。方法:建立原代培养的大鼠皮层神经元的低糖低氧/复氧(OGD/R)模型,采用四唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞活力;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Hoechst染色和DNA片段法检测细胞凋亡;W estern b lot法检测PARP蛋白的表达。结果:经OGD/R损伤后细胞活力明显下降,细胞上清液中MDA、NO升高,SOD降低;出现凋亡典型的形态学特征,PARP蛋白表达下降;蝎毒纤溶活性肽(2～8mg/L)可不同程度提高低糖低氧/复氧后神经元的活力,降低细胞上清液MDA和NO含量,提高SOD活性。改善凋亡相关的细胞核形态学改变,并且减少凋亡特征性DNA片段化的发生,降低细胞凋亡率,保持PARP的完整性。结论:蝎毒纤溶活性肽对低糖低氧/复氧损伤的神经元具有保护作用,其机制可能与抗氧化和减轻细胞凋亡有关。     

蝎皮蛋白质组分对正常小鼠免疫功能的影响

目的研究蝎皮蛋白质组分对正常小鼠免疫功能的影响,为蝎皮开发利用和发现新的活性物质提供实验依据。方法采用刃天青和M TT法检测蝎皮水溶性总蛋白(STP)、总角蛋白(STKP)及水溶性蛋白组分Ⅱ(STPⅡ)对正常小鼠T、B淋巴细胞转化、NK细胞杀伤活性的作用。结果STP和STKP ig给药后,小鼠脾T淋巴细胞增殖反应高于正常对照组,但只有STP小剂量组与对照组比较差异显著(P<0.001)。B淋巴细胞增殖反应结果显示STKP大、小剂量均可加强增殖反应,与对照组比较差异极显著(P<0.05、0.01)。STP和STKP大、小剂量组NK细胞杀伤活性与对照组相比有升高趋势。STPⅡ两个剂量组100、200 m g/kg ig给药均能明显抑制正常小鼠T、B淋巴细胞增殖反应,与对照组相比差异极显著。STPⅡ大剂量组NK细胞杀伤活性与对照组相比有降低趋势,但无统计学意义。结论STP和STKP具有一定的提高免疫功能的作用,STPⅡ则具有抑制免疫功能的活性。揭示蝎皮蛋白质组分具有免疫调节药理活性,值得深入研究。