TRAIL联合化疗药物诱导人胃癌细胞系BGC-823凋亡观察

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物体外诱导胃癌细胞凋亡的作用及可能机制。方法:采用MTT法检测不同质量浓度TRAIL(10μg/L,100μg/L,300μg/L)与5-Fu(10mg/L,50mg/L,100mg/L)、阿霉素(ADM,0.1mg/L,1.0mg/L,10.0mg/L)联合应用对胃癌BGC-823细胞抑制率的影响;TUNEL法检测3种浓度的TRAIL与5-Fu(50mg/L)、ADM(1.0mg/L)联合应用对胃癌BGC-823细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学方法检测TRAILR1、R2、R3和R4在治疗前后的表达。结果:3种浓度的TRAIL对BGC-823细胞的抑制率与无药物组比较差异有统计学意义(P<0.05),100mg/L的5Fu与3种浓度的TRAIL均有协同作用(P<0.05),100μg/L、300μg/LTRAIL与3种浓度的ADM均有协同作用(P<0.05);5-Fu和ADM均能增强TRAIL诱导BGC-823细胞凋亡的作用;各治疗组TRAIL各受体表达水平无明显变化。结论:TRAIL可通过诱导肿瘤细胞的凋亡而产生抗肿瘤的作用;5-Fu、ADM与TRAIL有协同抗肿瘤作用,该作用与细胞膜上的受体无关。     

TRAIL与肿瘤关系的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）是肿瘤坏死因子超家族第三个成员,可诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,但不会损害正常组织细胞.其特异性受体死亡受体（DR）4、DR5在多数肿瘤细胞表达,正常细胞缺失,这使得应用TRAIL进行抗肿瘤治疗成为可能.TRAIL能触发细胞凋亡通路,激活caspase家族,促进线粒体凋亡途径的启动,诱导细胞凋亡.该文就TRAIL的结构、受体及其与肿瘤的关系作一综述.     

TRAIL联合化疗药物诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合化疗药物治疗神经母细胞瘤（NB）的作用及其可能机制。方法：不同浓度的TRAIL、化疗药物或TRAIL和化疗药物联合处理NB细胞株SMS-KCNR，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞毒作用，应用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率，透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果：KCNR细胞对TRAIL不敏感，对化疗药物相对敏感，存在剂量依赖性细胞毒效应；TRAIL与亚毒性浓度的化疗药物联用对细胞的杀伤作用显著增强：透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论：KCNR对TRAIL不敏感，但TRAIL与亚毒性浓度化疗药物联用可增强杀伤效应，这种细胞毒作用主要由凋亡介导。     

氯化锂增加获得性耐药人肺癌细胞系H460R对TRAIL的敏感性

目的:通过人工诱导建立肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)获得性耐药的肺癌细胞系,氯化锂联合rhTRAIL作用细胞,以期了解氯化锂增敏TRAIL的现象及机制。方法:通过低剂量rhTRAIL诱导人肺大细胞癌细胞系H460,建立TRAIL耐药细胞株H460R并鉴定,应用MTT和流式细胞术分析氯化锂和rhTRAIL联合给药后亲本株与耐药株细胞增殖和凋亡差异,应用RT-PCR和Western blot检测死亡受体表达。结果:rhTRAIL处理亲本株H460和耐药株H460R后细胞存活率存在显著差异(P<0.01),IC50分别为59.2ng/ml和294.8ng/ml。60ng/ml rhTRAIL处理耐药株及亲本株后平均细胞凋亡比例存在显著差异(10.5%vs 19.4%,P<0.01),耐药株表现出显著的TRAIL耐受现象。但联合20mmol/L氯化锂后,MTT及流式细胞术检测耐药株细胞增殖及凋亡发现H460R对rhTRAIL的敏感性显著增加。进一步研究发现死亡受体DR4和DR5的mRNA及蛋白水平升高,这可能是药物增敏的机制之一。结论:氯化锂能够增加获得性耐药细胞系H460R对TRAIL的敏感性,死亡受体表达增加是可能的增敏机制之一。     

TRAIL及其受体的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族成员之一,能选择性诱导多种肿瘤细胞系的凋亡,而对正常细胞没有作用。TRAIL通过活化Casepase或线粒体依赖的途径诱导细胞凋亡。这种凋亡信号可以被其诱骗受体(DcR)所阻断,并且受Bcl-2家族蛋白所调节。本文将介绍TRAIL诱导凋亡的信号传导途径以及TRAIL的临床应用。     

Caspase 8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨Caspase8在TRAIL（肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）诱导神经母细胞瘤细胞株CHP212细胞凋亡中的作用及机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测TRAIL、Caspase8抑制剂（zIETD—FMK）＋TRAIL对CHP212细胞生长及凋亡的影响；应用比色法测定caspase8相对活性；应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果CHP212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感，存在时间和剂量依赖性；随TRAIL作用时间的延长，Caspase8活性逐步升高。于作用16h达高峰。zIETD-FMK能阻断Caspase8的活化而抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论TRAIL通过Caspase8信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase8活性增高。     

TRAIL与恶性血液系统肿瘤治疗

哺乳动物细胞可以通过两条通路启动凋亡,一条由TNF家族死亡受体介导,另一条通过细胞色素C从线粒体释放启动.死亡受体通路由TNF家族启动,如TNF-α,FasL和TRAIL,它们作为凋亡的细胞外活化因子与特异的受体结合而发挥作用[1].与前两者不同的是TRAIL优先诱导肿瘤细胞凋亡而不影响正常细胞,且多种方法可以提高肿瘤细胞对其的敏感性,在一定程度上可以克服肿瘤耐药,说明TRAIL是很有潜力且有效的肿瘤治疗方法,目前已有用于恶性血液系统肿瘤治疗的研究报告.为此,本文就TRAIL的研究现状及在恶性血液系肿瘤治疗中的应用进行综述.     

TRAIL联合化疗药物诱导喉癌HEP-2细胞株凋亡的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体Tumor necrosis factor related apoptosis-inducingligand,TRAIL)与化疗药物氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)联合使用诱导喉癌HEP-2细胞株凋亡.方法:不同浓度的TRAIL、5-FU、DDP单独及TRAIL与5-FU、DDP联合处理HEP-2细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其细胞毒作用,荧光显微镜下观察并计算凋亡率,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率.结果:HEP-2细胞对低毒性的TRAIL不敏感,对化疗药物相对敏感,TRAIL与低毒性的化疗药物联合作用于细胞后可增强杀伤效应.结论:TRAIL与低毒性的5-Fu、DDP联用表现出高效的杀灭肿瘤细胞作用.     

三氧化二砷逆转A549细胞对TRAIL耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)逆转人非小细胞肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药的机制。方法将处于对数生长期的A549细胞分为对照组(仅加入DMEM)及实验组,实验组又分为As2O3组(1μmol/LAs2O3处理)、TRAIL组(100μg/L TRAIL处理)及联合组(1μmol/L As2O3、100μg/L TRAIL联合处理)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测A549细胞核因子kappa B(NF-κB)、caspase-3、survivin mRNA的表达。结果作用24、48、72h后,联合组A549细胞的增殖抑制明显增强(P<0.05),且呈时间依赖性。As2O3、TRAIL联合作用48h可明显下调NF-κB、survivin mRNA,上调caspase-3mRNA的表达。结论 As2O3通过NF-κB通路下调survivin,上调caspase-3,从而增强TRAIL诱导A549细胞的凋亡。     

TRAIL联合顺铂对胃癌多药耐药基因GST-π的影响

目的探讨肿癌坏死因子相关凋亡配体(TRAIL)与顺铂联合应用对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药(MDR)基因谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂的抗癌活性并计算其亚毒性剂量IC10。流式细胞术检测TRAIL(200μg/L)及顺铂(亚毒性剂量)单用及联合应用后的细胞凋亡率。分别采用RT-PCR和ELISA法检测加药前后耐药基因GST-πmRNA及蛋白的表达情况。结果对照组、顺铂组、TRAIL组以及TRAIL顺铂联合用药组作用48 h后胃癌细胞凋亡率分别为2.69%、8.26%、9.71%和31.13%,与对照及单药组比较,联合用药组细胞凋亡明显升高(P<0.05)。RT-PCR和ELISA法结果显示,与单药组比较,联合用药组协同作用明显,多药耐药(MDR)基因GST-πmRNA和蛋白表达下降(P<0.05)。结论 TRAIL和顺铂联合应用能协同诱杀胃癌细胞,其机制可能是通过下调GST-π基因和蛋白表达,逆转或部分逆转MDR。     

白黎芦醇联合TRAIL基因对胃癌SGC-7901细胞增殖与抑制作用的实验研究

目的:探讨白黎芦醉(Resveratrol,Res)联合肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor-related apoptosis indticing ligand,TRAIL)在体外对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡作用及其机制,为将Res作为抗癌药物的临床应用提供理论和实验依据.方法:以人胃癌SGC-7901细胞株为研究对象,将Res与转染了 pBUD-TRAIL质粒的胃癌SGC-7901细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖抑制率;以FCM检测细胞凋亡率;以TUNEL法检测细胞凋亡等,观察联合应用埘肿瘤细胞的抑制作用.结果:MTT和FCM检测结果显示:TRAIL组肿瘤细胞抑制率为54.28%,凋亡率17.12%,Res联合TRAIL组抑制率和凋亡率均明显提高,分别为70%和22.03%,与对照组相比,具有显著性差异;TUNEL检测结果显示:TRAIL与Res联合组与对照组相比较,细胞核明显棕黄色深染,且阳性染色细胞数目明显增多,表明TRAIL与Res联合作用凋亡细胞明显增加.结论:Res联合TRAIL基因可显著抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞的凋亡,说明Res可增强TRAIL促进肿瘤细胞凋亡,两者具有协同作用.     

重组可溶性TRAIL联合化疗药诱导急性白血病细胞凋亡

目的肿瘤坏死相关凋亡诱导配体(TNT-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)作为肿瘤细胞诱导凋亡剂,可单独或与化疗药联合作用诱导多种肿瘤细胞株凋亡。本实验观察重组人可溶性TRAIL是否可有效诱导临床白血病患者的白血病细胞凋亡,并检验化疗药Ara-C联合TRAIL对白血病细胞的杀伤作用。方法将13例原始细胞比例均>60%急性白血病患者的骨髓标本的每份分4组:对照组、TRAIL组、Ara-C组、TRAIL+Ara-C组,进行细胞培养24h后,用AnnexinⅤ及碘化丙啶染色后流式细胞仪观察细胞凋亡率。结果对照组细胞凋亡率为(10.22±7.48)%,TRAIL组为(14.61±11.95)%,Ara-C组为(15.95±11.12)%,TRAIL+Ara-C组为(22.11±15.97)%。将4组标本进行组间方差检验,对照组与TRAIL+Ara-C组比较差异有统计学意义(P=0.015<0.05)。在TRAIL组中,13例中有3例(23%)显示对TRAIL诱导的凋亡敏感(若TRAIL组细胞凋亡率高于对照组10%以上,即认为对TRAIL敏感);在TRAIL+Ara-C组中,2例原对TRAIL不敏感的标本及1例对TRAIL敏感标本在TRAIL+Ara-C联合作用下,细胞凋亡率均高于对照组20%以上。结论1)TRAIL在体外可诱导急性白血病患者的白血病细胞凋亡;2)化疗药Ara-C与TRAIL联合应用可增加白血病细胞的凋亡率,包括先前对TRAIL不敏感的白血病细胞。     

TRAIL联合PDTC对SGC-7901细胞生长抑制和凋亡诱导的实验研究

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及TRAIL联合核转录因子核因子-κB（NF-κB）活性特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制和凋亡诱导作用,并寻找逆转TRAIL耐药的方法。方法采用不同浓度的TRAIL及TRAIL联合PDTC作用于胃癌细胞后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学染色方法观察药物作用前后NF-κB表达情况。结果单独使用TRAIL时,随着浓度从50μg/L增加到500μg/L,细胞的生长抑制率和凋亡率逐渐增加（P〈0.05）,但这种作用是非线性的。TRAIL联合0.05μmol/L、0.1μmol/L PDTC后肿瘤细胞的生长抑制率和凋亡率较单用TRAIL显著下降（P〈0.05）;而联合1μmol/L、10μmol/L PDTC后其作用较上有所上升（P〈0.05）。联合作用组p65蛋白在胞核中染色的强度低于单纯使用TRAIL组（P〈0.05）。结论TRAIL对胃癌细胞株SGC-7901具有一定程度的生长抑制和凋亡诱导作用;NF-κB信号转导途径可能具有双向调节作用,大剂量PDTC可能逆转胃癌细胞对TRA...     

Caspase 8和Caspase 3在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用(英文)

目的探讨Caspase8和Caspase3在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导CHP212神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用。方法应用流式细胞仪检测TRAIL、Caspase8／Caspase3抑制剂＋TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。应用比色法测定Caspase8、Caspase3的相对活性。应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学的观察。结果TRAIL可诱导CHP212细胞的凋亡，并存在剂量依赖性；Caspase8／Caspase3抑制剂能抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。随TRAIL作用时间的延长，Caspase8、Caspase3的活性逐步升高，分别于作用16h、8h后达高峰。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论TRAIL通过Caspase信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase8和Caspase3活性的增高。     

衣霉素增强胃腺癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性

目的探讨衣霉素对TRAIL(TNF-related apoptosis-in-ducing ligand)诱导的胃腺癌细胞的凋亡的作用。方法PI染色流式细胞仪检测衣霉素与TRAIL作用于细胞前后细胞凋亡率的变化;双抗体流式细胞仪检测药物作用前后细胞表面TRAIL受体表达情况;W estern b lot检测药物作用前后caspase蛋白水平的变化;JC-1染色流式细胞仪检测药物作用前后线粒体膜电位的变化。结果衣霉素可明显增加TRAIL诱导的胃腺癌细胞凋亡率;衣霉素作用于胃腺癌细胞后,细胞表面TRAIL-R2表达明显增高;衣霉素促进TRAIL诱导的胃腺癌细胞caspase-3、PARP活化和线粒体膜电位减少。结论衣霉素可通过上调细胞表面TRAIL受体表达来增强胃腺癌细胞对TRAIL诱导的凋亡的敏感性,这种致敏性与激活caspase级联反应和线粒体膜电位减少有关。     

低剂量吡柔比星协同TRAIL高效诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）与化疗药物吡柔比星（THP）联合应用是否存在协同诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的作用,并初步分析其可能存在的分子机制。方法将不同浓度的TRAIL与THP单独或者联合应用于常规培养的MG-63细胞系,24h后采用M1Tr法测定细胞抑制率,于倒置相差显微镜下观察细胞的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡比例,RT—PCR检测药物作用后相关基因的表达水平。结果（1）TRAIL与THP均能抑制MG-63细胞增殖,但MG-63细胞对TRAIL不敏感,IC50〉10μg／mL;对THP相对敏感,IC50〈10μg／mL;（2）亚毒性浓度THP与不同浓度TRAIL联合,均呈现出高效协同作用（P〈0．05）,协同因子均大于1;（3）倒置相差显微镜及流式细胞术检测证实协同性杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现;（4）RT—PCR显示两种药物联用后死亡受体DR4及DR5表达水平得到明显的增高。结论亚毒性浓度THP与TRAIL联用表现出高效诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用,死亡受体DR4及DR5在药物作用前后表达水平的改变可能参与了这一凋亡过程。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞的杀伤作用研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)在肺癌细胞株A549中的表达及TRAIL对肺癌细胞的杀伤作用,探讨TRAIL治疗肺癌的可行性。方法采用RTPCR检测非小细胞肺癌细胞株A549TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL处理A549,MTT法检测药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。采用不同浓度TRAIL与不同浓度的化疗药物、中药联合作用于A549,观察其疗效。结果肺癌细胞株A549中有DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。经TRAIL(100μg/L)处理48h,肺癌细胞凋亡发生率约5%。TRAIL联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。结论A549中存在TRAILR类型的表达差异。TRAIL可诱导A549凋亡,联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

线粒体凋亡途径参与TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡

目的研究TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡的途径。方法PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡;广谱caspase抑制剂(z-VAD-fmk)、caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)和caspase-9抑制剂(z-LEHD-fmk)分别与TRAIL共同作用后PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测caspase-3的活化及PARP的裂解;JC-1染色、流式细胞仪分析线粒体膜电位的变化。结果TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,BGC-823较SGC-7901对TRAIL诱导的凋亡更敏感,TRAIL(100μg/L)作用24h细胞凋亡率分别是59.9%、24.3%;3种caspase抑制剂都能很大程度上阻止TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡;caspase-3、PARP在TRAIL作用早期即活化、裂解,且BGC-823比SGC-7901发生得更快;线粒体膜电位随TRAIL处理时间延长而不断下降。结论TRAIL能诱导胃腺癌细胞凋亡,且这种凋亡依赖于caspases;除死亡受体途径外,线粒体途径也参与了凋亡信号通路。     

肿瘤细胞TRAIL信号传递途径中抗凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosisinducing ligand，TRAIL）是近年来发现的一种凋亡分子，为Ⅱ型膜蛋白，属于TNF家族成员，能够诱导多种肿瘤细胞与转化细胞发生凋亡，而对正常组织及细胞无凋亡诱导作用。早期认为肿瘤细胞对TRAIL敏感还是耐受，与细胞表面TRAIL受体的表达和分布有关。近期研究表明，细胞内凋亡分子与抗凋亡分子的相互作用可能发挥了更重要的作用。现综述TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡途径中的抗凋亡机制。