表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（（一）-epigallocatechin gallate,EGCG）在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞增殖和细胞周期的影响及其可能机制。方法不同浓度的EGCG作用T24细胞24h后,应用MTT法、集落形成试验和碘化丙锭（PI）染色分别观察T24细胞在增殖、集落形成和细胞周期等方面的变化;并检测CyclinD1和CDK4的变化。结果20—100μg／mL EGCG对T24细胞作用24h后的抑制率分别为4％-61％,与对照组相比,当EGCG为40—100μg／mL时抑制率有显著性差异（P〈0．05）。EGCG能抑制T24细胞集落形成,当浓度为20和40μg／mL时能完全抑制其细胞集落形成。EGCG能使T24细胞出现GO／G1期阻滞,与对照组相比,在40-80μg／mL时有统计学意义（P〈0．05）。EGCG能抑制细胞Cyclin D1和CDK4的表达。结论EGCG能显著抑制T24细胞增殖并诱导GO／G1期阻滞,后者可能与抑制Cyclin D1和CDK4表达有关。     

碱性成纤维细胞生长因子促体外培养人晶状体上皮细胞株增殖及细胞周期的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）与体外培养的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLECs）株增殖之间的关系及其对细胞周期的影响.方法 对人晶状体上皮细胞株（SRA01/04）进行无血清培养液培养,取对数生长期细胞进行实验,分别加入不同终浓度的bFGF （0.01、0.10、1.00、10.00及100.00μg/ L） ）共同培养24、48、72 h后MTT法测定细胞增殖情况,以流式细胞仪分析bFGF对细胞增殖周期的影响.结果 bFGF浓度为0.1μg/L、1.00μg/ L、10.0μg/ L、100.00μg/ L时,对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）;100.00μg/ L作用24h増殖率最大112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性; bFGF促进HLEC细胞周期发生变化,S期和G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞减少,说明bFGF通过促进HLEC细胞越过G1期限止点进入增殖状态.结论 bFGF可促进HLEC的增殖,改变细胞周期,是HLECs强有力的促增殖因子.     

蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖的抑制作用

目的 探讨蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖抑制作用及机制,为蜂毒素用于膀胱癌的临床应用提供依据.方法 体外培养T24细胞,分别用0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5和15.0 μg/mL蜂毒素处理,采用四甲基偶氮(MTT)法检测细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;TUNEL染色检测凋亡率和RT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA的表达.结果 蜂毒素处理后,T24细胞生长明显受到抑制,呈剂量依赖性;细胞出现典型的凋亡形态学改变;凋亡率随剂量升高以及Bax的表达升高而Bcl-2表达下降.结论 蜂毒素在体外能抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,机制可能为诱导其细胞凋亡.     

海洋刺参多糖对宫颈癌细胞周期的影响及其机制

目的研究海洋刺参多糖（SJAMP）对人宫颈癌细胞系HeLa细胞周期影响并探讨其作用机制。方法实验分为对照组（不用SJAMP）及1.6、3.26、.4 g/L不同剂量SJAMP组。应用免疫细胞化学法分别检测各组SJAMP对增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期抑制蛋白Mdm2表达的影响;流式细胞仪检测不同浓度SJAMP对HeLa细胞周期的影响。结果与对照组相比较,1.6、3.2和6.4 g/L SJAMP组均能抑制PCNA和Mdm2的表达（F=209.02~951.11,q=18.97~74.55,P〈0.05）,且具有一定的浓度依赖和时间依赖关系。经SJAMP处理的HeLa细胞发生G1期阻滞,对照组及1.6、3.2、6.4 g/L SJAMP组细胞的凋亡率分别为0.25%、4.32%、11.36%和30.04%,差异有显著性（F=26.95~259.21,q=3.34~36.36,P〈0.05）。结论 SJAMP对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用。其机制可能是SJAMP降低PCNA和Mdm2蛋白的异常表达,使细胞周期发生G1期阻滞,从而起到抑制细胞增殖的作用。     

瘦素通过调控细胞周期蛋白促进人肝癌细胞增殖

目的：观察瘦素对人肝癌细胞株Huh 7增殖活性的影响,并初步探讨其可能的机制。方法：在培养液中加入不同浓度的瘦素后,采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1和P21^waf1的表达。结果：MTT检测显示,瘦素可促进Huh 7细胞的增殖,有一定的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例;瘦素（100 ng/ml）处理24 h后,实时荧光定量PCR检测发现Cyclin D1 mRNA表达量增高至对照组的3.15倍,P21^waf1mRNA表达量则为对照组的55%,两者均有显著性差异（P〈0.01）。免疫细胞化学染色结合图像分析系统分析也发现100 ng/ml的瘦素处理24 h后,与对照组相比,Cyclin D1蛋白的表达明显增高（P〈0.01）,P21^waf1蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论：瘦素可通过促进Cyclin D1表达、抑制P21^waf1表达,使人肝癌细胞Huh7由G0/G1期向S期转换,从而促进其增殖。     

TNF-α对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用

目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用。方法采用不同浓度TNF-α（5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml）处理3T3-L1脂肪细胞48h、采用20μg/ml TNF-α处理不同时间（6h、12h、24h、48h）及罗格列酮（10μmol/ml）预处理6h的3T3-L1脂肪细胞与20μg/mlTNF-α作用48h;以2-DG摄入法检测细胞对葡萄糖的摄取率。结果与对照组比较,5μg/L、10μg/L和20μg/LTNF-α作用各组分别使葡萄糖摄取率减少了25%（P〈0.01）、43%（P〈0.01）、58%（P〈0.01）;20μg/L TNF-α处理3T3-L1脂肪细胞6h、12h、24h、48h使葡萄糖的摄取率分别减少10%（P〈0.05）、28%（P〈0.01）、40%（P〈0.01）、57%（P〈0.01）,罗格列酮预处理能使20μg/ml TNF-α组脂肪细胞对葡萄糖的摄取率增加37%（P〈0.01）。结论TNF-α以浓度和剂量依赖方式导致脂肪细胞胰岛素抵抗;罗格列酮能明显改善此作用。     

高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其机制的研究

目的观察高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响并探讨其机制。方法体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,给予不同浓度的高良姜素处理24h,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡,Western blot分析Caspase-3、Cytochrome C及Bcl-2蛋白表达。结果高良姜素可导致人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡并抑制其增殖,其作用具有浓度依赖性,在80mM最为显著;同时可改变细胞周期分布。与对照组相比,80mM高良姜素处理24h后MG-63细胞活力降低、凋亡率增加（P〈0.01）;G0/G1期百分比增高,S＋G2＋M期百分比降低（P〈0.01）;Caspase-3、Cytochrome C表达增加,Bcl-2表达降低（P〈0.01）。结论高良姜素可诱导人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡、抑制其增殖,并改变细胞周期分布,其作用与线粒体途径相关。     

木黄酮对白血病K562细胞增殖的影响

目的:探讨木黄酮(genistein)抑制白血病K562细胞增殖的机制.方法:用噻唑蓝染色法检测genistein对K562细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪进行细胞周期解析,通过细胞形态学观察细胞分裂;应用RT-PCR方法检测白血病细胞WT1 mRNA表达.结果:Genistein浓度分别为2～30μg/ml作用K562细胞72 h,细胞增殖呈浓度依赖性受抑,与对照组相比差异显著(P＜0.01),IC50=11.4μg/ml;细胞周期解析发现,浓度为30μg/ml的genistein作用K562细胞12 h,引起了明显的G2/M期阻滞,24 h后G2/M期细胞增至93%;细胞分裂指数与对照组比没有明显差别;30μg/ml genistein作用K562细胞24 h,3 h起WT1 mRNA表达开始降低,24 h时降至对照的30%.结论:genistein抑制K562细胞增殖,诱导G2期或M早期阻滞及下调WT1的表达.     

回转器模拟失重对SGC-7901、HFE-145细胞增殖和周期的影响

目的探讨模拟失重对胃癌SGC-7901细胞和胃黏膜上皮HFE-145细胞增殖和周期的影响。方法采用回转器模拟失重,两种细胞各分为两组,回转组和1G对照组,实验时间共72h。采用免疫组化法观察两种细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达的变化,应用流式细胞仪测定细胞周期。结果与对照组相比,回转组SGC-7901细胞48h及72hPCNA抗体阳性率明显减少（P〈0.05及P〈0.01）,G0＋G1期细胞显著增多（P〈0.01及P〈0.05）;12h、24h及36h PCNA抗体阳性细胞的比率无显著性差异。与对照组相比,回转组HFE-145细胞12hPCNA抗体阳性率明显减少（P〈0.05）,G0＋G1期细胞显著增多（P〈0.05）。结论回转器模拟失重使胃癌SGC-7901细胞48h及72h时出现细胞周期阻滞、增殖抑制。胃黏膜上皮HFE-145细胞在12h时出现上述变化。     

三氧化二砷对人宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及对增殖细胞核抗原（PCNA）和凋亡相关蛋白bcl-2表达的影响。方法MTT法观察生长抑制作用；膜联蛋白V（Annexinv）-异硫氰酸荧光素（FITC）＋碘化丙啶（PI）双参数流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡，FCM测定细胞周期及PCNA、bcl-2表达。结果As2O3可显著抑制Hela细胞生长增殖，且剂量一效应关系显著（r=0.98，P〈0.01），其48h的IC50值为5．59μmol／L。Hela细胞经As2O3处理后可发生凋亡。As2O3能显著下调PCNA表达并使细胞周期阻滞于G3／M期（P〈0.01），但对bcl-2表达无影响（P〉0．05）。结论As2O3在体外可显著抑制人宫颈癌Hela细胞生长并诱导凋亡，其机制可能与细胞周期阻滞及降低PCNA蛋白表达有关。     

薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响

目的研究薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响。方法培养人宫颈癌细胞株Hela,不同浓度的薯蓣皂苷元干预24、48、72h,采用MTF、EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,WesternBlot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1。结果薯蓣皂苷元在20μmol／L浓度时抑制Hela细胞活力（P〈0．01）,呈现量效和时效特征;薯蓣皂苷元作用后EdU阳性细胞明显减少,薯蓣皂苷元引起G0／G1期细胞阻滞,减少S期细胞,降低Cyclin D1蛋白表达,而对Cyclin B1蛋白表达没有明显影响。结论薯蓣皂苷元通过阻滞细胞G0／G1期来抑制人宫颈癌Hela细胞株的增殖。     

健骨颗粒含药血清对成骨样细胞增殖及PCNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的:观察健骨颗粒含药血清对成骨样细胞增殖及PCNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响。方法:制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的成骨样细胞ROS17/2.8,MTT法检测细胞增殖,流氏细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR检测PCNA、Cyclin D1 mRNA表达。结果:与同浓度生理盐水血清组相比,中药血清组10%-30%浓度促细胞增殖均有显著性差异(P<0.05),其中浓度为20%时,两组间有非常显著性差异(P<0.01);中药血清组G0/G1期细胞比例明显低于同期生理盐水血清组,有非常显著性差异(P<0.01)。G2/M期、S期细胞比例及PI在干预48h时均高于同期生理盐水血清组,具非常显著性差异(P<0.01)。中药血清组较理盐水血清组PCNA、Cyclin D1 mRNA表达升高,组间有显著性差异(P<0.05)。结论:健骨颗粒含药血清能促进成骨样细胞的增殖、提高PCNA、Cyclin D1 mRNA表达。     

小分子干扰RNA下调星形细胞上调基因1的表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调星形细胞上调基因1(AEG-1)表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法卵巢癌细胞株SKOV3分为3组:空白对照组(不做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和观察组(AEG-1 siRNA转染)。用反转录聚合酶链反应观察AEG-1 siRNA对AEG-1基因表达的影响;甲基噻唑基四唑法观察AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞凋亡和细胞周期的影响。结果空白对照组和阴性对照组AEG-1 mRNA表达、SKOV3细胞增殖、细胞凋亡率及在DNA合成前期(G0/G1期)、合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组SKOV3细胞AEG-1 mRNA表达显著低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞增殖在24、48、72 h较空白对照组和阴性对照组均显著减慢,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞凋亡率显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组SKOV3细胞在DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),而合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),差异均有统计学意义。结论 siRNA可通过下调卵巢癌SKOV3细胞AEG-1基因的表达,抑制其增殖,促进其凋亡。     

罗格列酮对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究罗格列酮对高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）生长的影响，从而探讨其对糖尿病血管并发症的作用及机制。方法利用组织贴块法体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞并分组给药，采用MTT比色法检测细胞生长活性；用Western blotting检测细胞增殖核抗原的表达；以流式细胞仪检测细胞周期的进程；RT—PCR检测MMP-2mRNA的水平。结果罗格列酮呈浓度依赖性抑制高糖诱导的大鼠VSMC的增殖；降低PCNA的表达（P〈0．05），明显降低细胞的S期数目百分比（P〈0．01），增加G0／G1期数目百分比（P〈0．01）；明显降低MMP-2mRNA（P〈0．01）的表达。结论从细胞分子水平说明罗格列酮可能通过降低PCNA的表达，阻止细胞进入S期，减少有丝分裂来发挥对高糖诱导的VSMC增殖的抑制作用，MMP-2在罗格列酮改善血管重构的过程中可能发挥了重要的作用。     

靶向沉默Notch1基因对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

目的探讨Notch1基因沉默对人膀胱癌细胞增殖的影响。方法用pGenesil质粒构建靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA1,并将其转染到膀胱癌细胞系T24中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测Notch1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况。逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记法（Western Blot）检测Notch1基因的mRNA和蛋白在转染前后表达变化。结果转染psiRNA1质粒后T24细胞的生长受到显著抑制,呈一定的时间依赖性（60?h内）,凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多（未转染组、空载体组、阴性对照组）,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且Notch1基因在mRNA和蛋白水平表达相对于对照组明显下调（P＜0.05）。结论沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖,Notch1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用。     

无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究

目的探讨无花果浆液（Fig fruit latex,FFL）对肝癌细胞SMMC7721及正常肝细胞L-02增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法采用MTT法、克隆形成试验、Brdu掺入试验,Hoechst33342染色、流式细胞术检测FFL作用后,SMMC7721、L-02细胞增殖、凋亡和细胞周期分布的变化,并通过RT-PCR观察其诱导凋亡的机制。结果用FFL处理后,肝癌细胞增殖活性降低（P〈0.05）,克隆形成下降（P〈0.05）,Brdu标记指数降低（P〈0.05）,Hoechst33342染色凋亡细胞增多（P〈0.05）;细胞周期分布改变,凋亡指数升高（P〈0.01）,G0/G1期细胞数增加（P〈0.01）,S期细胞数减少（P〈0.01）,在一定剂量内对正常细胞无明显影响。RT-PCR检测ADPRTL基因表达增强。结论与正常肝细胞比较,FFL通过上调ADPRTL基因诱导肝癌凋亡,促进肝癌细胞周期阻滞,抑制肝癌细胞DNA合成等作用,抑制肝癌细胞增殖。     

RNA干扰靶向沉默Gankyrin对结肠癌增殖及侵袭的影响

目的：观察靶向沉默Gankyrin 基因对结肠癌细胞SW620在增殖和侵袭方面的影响。方法：通过体外合成针对Gankyrin基因的siRNA,通过脂质体转染SW620细胞,设立对照组检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭能力。结果：细胞转染后,实验组的倍增时间为25．6±0．8小时,对照组倍增时间为21．7±0．6小时（P＜0．01）;细胞周期检测实验组的G1期细胞为68．3±0．7脖、S期细胞为29．6±0．9脖,对照组的G1期细胞为44．1±0．3脖、S期细胞为4．8±0．4脖（P＜0．01）;细胞凋亡检测实验组AnnexinV ＋PI-细胞比例为8．93±0．21脖,明显高于对照组1．31±0．06脖（P＜0．01）;细胞侵袭实验实验组细胞侵袭能率为34．2±0．3脖,明显低于对照组的53．9±0．6脖（P＜0．01）。结论：siRNA干扰Gankyrin基因表达能够明显降低SW620的增殖和侵袭能力,提示Gankyrin可作为结肠癌基因治疗的潜在靶点。     

RNA干扰IGF-1受体和EGF受体表达对鼻咽癌裸鼠移植瘤细胞周期的影响

目的探讨RNA干扰IGF-1受体和EGF受体表达对鼻咽癌裸鼠移植瘤的增殖状态和鼻咽癌CNE2细胞的细胞周期趋势的影响及其作用机制。方法应用免疫组织化学S-P方法和形态计量技术对鼻咽癌裸鼠移植瘤（实验组和对照组）组织切片进行PCNA染色、HE染色以及流式细胞仪检测鼻咽癌CNE2细胞（实验组和对照组）在细胞各期的细胞比例和增殖指数。结果实验组鼻咽癌皮下移植瘤PCNA标记指数为27．19±10．20,核分裂像计数为18．80±7．47;质粒对照组和正常对照组鼻咽癌皮下移植瘤PCNA标记指数别为36．47±9．03和37．07±8．63,核分裂像计数分别为37．53±5．25和38．03±6．15,同一组的两指标显著正相关（P〈0．01）。实验组鼻咽癌CNE2细胞处于G0／G1期、S期和G2／M期的细胞比例分别为63．80±0．64、33．29±0．21和2．91±0．04,而两对照组鼻咽癌CNE2细胞处于G0／G1期、S期和G2／M期的细胞比例分别为47．91±0．65（44．64±0．28）、42．71±0．11（45．70±0．15）和9．38±0．14（9．65±0．01）。实验组鼻咽癌CNE2细胞的增殖指数为36．2±0．65,而两对照组鼻咽癌CNE2细胞分别为52．09±0．08和55．35±0．08。结论EGFR和IGF-1R基因治疗鼻咽癌机理之一可能是通过改变鼻咽癌CNE2细胞周期趋势和降低移植瘤的增殖水平达到的;PCNA标记指数、核分裂像计数和G2／M期的鼻咽癌细胞比例在一定程度上均可反应鼻咽癌细胞的增殖水平,三者可作为评估鼻咽癌增殖活性的有用指标。     

DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响.方法：采用MTT、细胞计数检测DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;应用流式细胞仪检测DADS对HepG2细胞周期和细胞凋亡率的影响.结果：DADS使细胞增殖明显受抑制且抑制率呈药物浓度时间依赖性（P＜0.05）,DADS组细胞的倍增时间延长（P＜0.05）.与对照组比较DADS处理组G2/M期细胞比例显著增加,而G0/G1期细胞比例则明显下降,细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）.结论;DADS对人肝癌细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关.DADS能阻滞细胞周期在G2/M期,并诱导细胞凋亡.     

腺病毒载体介导IL-24基因对肺癌细胞的化疗增敏效应

目的研究携带人IL-24基因腺病毒载体（Ad-IL-24）联用顺铂（DDP）对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长和凋亡的影响。方法取对数生长期的NCI．H460细胞,MTr比色法检测Ad．IL．24联合DDP对细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞周期及检测细胞凋亡率。结果Ad-IL-24联合DDP对NCI-H460细胞的生长抑制作用和诱导凋亡效应均明显优于单用Ad-IL-24和单用化疗药物DDP,且G2／M期细胞比例显著增加（P〈0．05或〈0．01）。结论Ad-IL-24能提高NCI-H460肺癌细胞对化疗药物DDP的敏感性。