重组MUC1-MBP融合蛋白联合R848对小鼠T细胞免疫活性的诱导作用

目的：研究MUC1-MBP联合TLR7/8激动剂R848对小鼠T细胞免疫活性的诱导作用,为寻找重组MUC1-MBP融合蛋白的合适佐剂提供实验依据。方法：21只C57BL/6小鼠随机分为对照组（注射生理盐水）、MUC1-MBP+ R848组（注射MUC1-MBP+ R848）和MUC1-MBP+卡介苗（BCG）组（注射MUC1-MBP+ BCG）,每组7只。第2次免疫后第4~7天无菌取脾脏组织,测定脾指数;淋巴细胞增殖反应测定各组小鼠的刺激指数（SI）;ELISA法测定小鼠脾细胞培养上清中肿瘤坏死因子γ（TNF-γ）和 白细胞介素4（IL-4）水平;流式细胞术检测小鼠脾细胞中T淋巴细胞亚群比例。结果：与对照组比较,MUC1-MBP+R848组和MUC1-MBP+BCG组小鼠脾指数均升高（P<0.01）,SI升高（P<0.05）,TNF-γ水平升高（P<0.05或P<0.01）;且MUC1-MBP+R848组小鼠上述指标高于MUC1-MBP+BCG组（P<0.05或P<0.01）;IL-4水平略微升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,MUC1-MBP+ R848组和MUC1-MBP+ BCG小鼠脾细胞中CD3⁺细胞、CD4⁺细胞和CD8⁺细胞比例明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：MUC1-MBP 融合蛋白联合R848或BCG均能诱导小鼠倾向于Th1的细胞免疫应答反应,R848是良好的MUC1-MBP候选佐剂分子。     

重组鼠Muc1-MBP融合蛋白疫苗体内抗肿瘤作用

目的：研究重组鼠Muc1-MBP蛋白的体内抗肿瘤作用.方法：采用皮下注射法将不同剂量Muc1-MBP蛋白免疫小鼠,2wk/次,共免疫3次.在第3次免疫后4d,给予C57BL/6小鼠尾静脉注射LLC1细胞,或给予5GyX射线照射的ICR小鼠背部皮下注射MCF-7细胞.注射3wk后剥离并测量肿瘤大小;肿瘤组织行常规HE染色.免疫组织化学染色分析肿瘤周围浸润的淋巴细胞亚群.结果：LLC1细胞尾静脉接种后21d,肺肿瘤结节对照组,Muc1-MBP0.15g/L组小鼠分别为54和39个（100%）,Muc1-MBP0.3g/L组小鼠共计17个（60%）,提示Muc1-MBP0.3g/L组可显著抑制肺癌的生长（P〈0.05）,Muc1-MBP0.15g/L组作用较弱.皮下接种MCF-7细胞后21d,对照组,Muc1-MBP0.15g/L组小鼠100%（6/6）可见乳腺癌瘤体形成,平均体积分别为（142.8±70.2）和（96.1±53.4）mm3,Muc1-MBP0.3g/L组瘤体形成66.7%（4/6）,平均体积为（54.5±46.7）mm3.表明Muc1-MBP0.3g/L组免疫后可显著抑制人乳腺癌移植瘤生长（P〈0.05）,Muc1-MBP0.15g/L组作用较弱.免疫组化结果显示Muc1-MBP免疫组肿瘤周围有大量CD4＋和CD8＋T的细胞浸润到肿瘤周围.结论：Muc1-MBP诱导免疫能够明显抑制LLC1,MCF-7细胞的生长,为临床应用研究奠定了基础.     

重组MUCI、MBP融合蛋白对荷瘤鼠肿瘤生长的影响

目的:研究重组MUCI-MBP融合蛋白抗肿瘤作用机制。方法:将10只C57鼠随机分两组,分别用MUCI-MBP+PBS和PBS隔周免疫两次后第四天,尾静脉注射Lewis肺癌细胞5×105/只,清洁饲养,40天后,处死小鼠,取其肿瘤组织进行免疫组化染色。结果:34天后,PBS组鼠臀部长出肿瘤,MUCI免疫组鼠未见明显变化;免疫组化染色可见MUCI免疫组鼠肿瘤组织中有明显的CD4+、CDS+T细胞浸润,PBS组鼠肿瘤组织中未见明显的CD4+、CDS+T细胞浸润。结论:重组MUCI-MBP融合蛋白免疫的C57鼠体内产生了免疫应答,活化了Th1细胞,诱导产生了T细胞免疫,抑制了肿瘤的生长。     

重组大肠杆菌表达的Ber e1纯化工艺中去除内毒素效果研究

目的 去除重组巴西坚果过敏原蛋白Ber e 1(rBer e 1)溶液中的内毒素,为后续实验和重组过敏原蛋白的临床应用打下基础.方法 采用亲和层析法、超滤法和离子交换法联合应用以及Triton X-114萃取法与亲和层析法联合应用,比较这两个方案去除重组蛋白溶液中的内毒素效果.结果 亲和层析法、超滤法和离子交换法联合应用的内毒素去除率为99.99％,内毒素浓度为6.25 EU/ml,蛋白回收率为42.8％;Triton X-114萃取法与亲和层析法联合应用的内毒素去除率为99.99％,内毒素浓度为2.09 EU/ml,蛋白回收率为26.1％.结论 Triton X-114萃取法与亲和层析法联合应用蛋白溶液内毒素的去除效果较佳,且内毒素含量以及Triton X-114残留量均在《中国药典》的规定范围内.     

人MUC1和鼠Muc1蛋白疫苗抗肿瘤作用的比较

目的：探讨重组人 MUC1-MBP 和 鼠 Muc1-MBP 疫苗的抗肿瘤作用,为肿瘤疫苗的临床应用提供实验依据。方法：用人MUC1-MBP和鼠Muc1-MBP融合蛋白分别免疫小鼠,实验分为阴性对照组、人MUC1-MBP组和鼠Muc1-MBP 组,ELISA 方法分别检测小鼠血清抗人 MUC1 抗体与抗鼠 Muc1 抗体的交叉反应;LDH 法检测小鼠抗人 MUC1和鼠 Muc1 特异的 CTL 活性。通过小鼠肺癌转移模型及皮下人乳腺癌移植瘤模型检测人 MUC1-MBP 和 鼠 Muc1-MBP 免疫诱导的抗肿瘤作用。结果：抗人 MUC1 抗体和鼠 Muc1 抗原可产生较强的交叉反应,抗鼠 Muc1 抗体与人 MUC1 抗原可产生较弱的交叉反应;人 MUC1-MBP 和鼠 Muc1-MBP 免疫均可诱导 CTL 杀伤活性,对 MCF-7 细胞杀伤活性分别为（48.7±7.1）% 和（54.6±7.8）%,对 LLC1 细胞杀伤活性分别为（61.9±10.2）% 和 （43.5±8.4)%。人 MUC1-MBP组和鼠 Muc1-MBP组小鼠 Lewis 肺癌的肺结节转移抑制率分别为 94.4% 和 68.5%;在人乳腺癌移植瘤实验中,人 MUC1-MBP组、鼠 Muc1-MBP组和 PBS 组小鼠肿瘤平均体积分别（23.5±15.7）、(56.5±46.7) 和(142.8±70.2) mm3,人 MUC1-MBP 组和鼠 Muc1-MBP组肿瘤体积明显小于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论：人 MUC1 和鼠 Muc1 有共同的 B 和 T 细胞表位,人 MUC1 诱导的交叉反应更强烈;人 MUC1-MBP 诱导的抗肿瘤活性强于鼠 Muc1-MBP抗肿瘤活性;人MUC1-MBP有希望发展成人类抗肿瘤疫苗。     

超滤技术去除苦参素注射液的细菌内毒素

目的:考察超滤技术去除苦参素注射液中细菌内毒素的效果。方法:采用10KDa截留分子量超滤膜对苦参素注射液进行超滤,以动态浊度法定量检测超滤前后苦参素注射液中细菌内毒素的含量。结果:样液超滤前细菌内毒素为8.0540EU/mL,超滤后为0.3024EU/mL,内毒素去除率为96.24%,其有效成分氧化苦参碱的透过率为96%。结论:超滤技术可以很好的去除苦参素注射液中细菌内毒素,有效成分损失少,可提高其用药安全性。     

流行性出血热患者血浆内毒素含量测定及其与临床相关性的研究

本文用鲎试剂─合成基质偶氮显色法对90例流行性出血热（EHF）病人进行血浆内毒素定量检测。90例病人共检测了238份血浆标本，同时检测30例健康人血浆作为正常对照。血浆内毒素的正常值为50ng／L。88例病人血浆内毒素升高（大于50ng／L）。病人血浆内毒素越高，临床症状及体征越重。在EHF各期内毒素含量不同。在低血压期和少尿期内毒素浓度升高具有显著意义；发热期和多尿期内毒素轻度升高，恢复期内毒素含量正常。结果显示，EHF病人临床特征与血浆内毒素的含量有关。检测EHF病人的内毒素对揭示其发病机理、判断预后和指导治疗均有重要意义。     

重组卡介苗热休克蛋白70的纯化及内毒素去除的效果评价

目的：表达、纯化重组卡介苗热休克蛋白70（BCG HSP70）并去除其中的内毒素。方法：采用10 L发酵罐经IPTG诱导表达含有重组表达质粒pET28a/HSP70的BL21(DE3)工程菌（pET28a/HSP70/BL21）,SDS-PAGE检测BCG HSP70的表达。超声破碎菌体,裂菌后上清依次经过Ni Sepharose 4B亲和层析、Triton X-114洗涤、Superdex G-25凝胶过滤层析、Q-Sepharose FF离子交换层析进行纯化。SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,Lowry法检测蛋白浓度,37 ℃水浴孵育0～4 h检测纯化蛋白的稳定性,鲎试剂法检测内毒素含量。结果：工程菌pET28a/HSP70/BL21在发酵表达3 h后获得96 g湿菌,其中相对分子质量约为70 000的蛋白约占菌体总蛋白量的29.6%;表达产物纯化后在相对分子质量约70 000处可见特异性条带,该分子质量蛋白约占总蛋白量的96.5%;纯化后蛋白浓度约1.2 g•Ｌ^-1;37 ℃水浴中放置4 h后相对分子质量为70 000的蛋白约占总蛋白量的95.1%;纯化产物内毒素含量<0.01 EU• μg^-1。结论：成功表达、纯化了重组BCG HSP70,并有效地去除了其中的内毒素。     

重度慢性乙型病毒性肝炎患者血中内毒素水平的变化及其临床意义

目的研究重度慢性乙型病毒性肝炎患者血中内毒素水平的变化及其临床意义。方法采用显色基质鲎实验法测定30例正常人和30例重度慢性乙型肝炎患者中血清内毒素水平,并进行比较。结果重度慢性乙型肝炎患者的血清内毒素水平正常人组为（0．071±0．022）EU／ml,肝炎组为（0．186±0．051）EU／ml,两组比较差异有统计学意义（P〈0．001）。结论重度慢性乙型肝炎患者血清内毒水平明显升高,内毒素在重度慢性乙型肝炎的发生、发展过程中发挥重要的病理生理作用。     

人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的纯化

目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型主要衣壳蛋白 L 1的纯化方法。方法 :分别利用亲和层析和离子交换层析对重组融合蛋白 p ET30 a- 6× His- L 1进行了纯化。结果 :以包涵体形式表达的重组蛋白在变性条件下经 Ni- NTA Agarose、Q- Sepharose FF纯化 ,透析复性后均获得较高纯度 ,回收率分别为 30 %和2 9%。结论 :亲和层析和离子交换层析都是纯化重组 L 1蛋白的适宜方法 ,二者纯化效率相当。     

重组huMCP-1融合蛋白对人外周血单核细胞体外溶瘤活性的影响

目的：研究重组人单核细胞趋化蛋白－１（huＭＣＰ－１）融合蛋白对人外周血单核细胞体外溶瘤活性的影响。方法：采用乳酸脱氢酶释放法检测huＭＣＰ－１单独或与细胞因子协同作用下的单核细胞溶瘤活性。结果：１０ug/ml的重组huＭＣＰ－１可促进人单核细胞对人胃腺癌细胞ＳＧＣ－７９０１和Ｈce-８６９３细胞的溶瘤作用方面具有协同作用（Ｐ＜０ ．０１）。１００Ｕ/ml的ＩＦＮγ与１ug/ml的重组hrＭＣＰ－１在增强单核细胞对ＳＧＣ