首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 46 毫秒
1.
目的评价CpG佐剂对以PfCP-2.9f/ISA720佐剂为基础的联合疟疾抗原的免疫原性。方法使用ISA720及ISA720+CpG佐剂与恶性疟原虫抗原制备制剂,免疫BALB/c小鼠,考察不同佐剂增强免疫的效果。通过检测免疫血清中特异性IgG的水平、识别天然抗原的能力、分析特异性IgG的亚类分布等指标进行评价。结果CpG佐剂显著提升了联合疟疾抗原在BALB/c小鼠中产生特异性抗体的量(P〈0.01),免疫血清能有效识别红内期疟原虫天然抗原,IFA滴度显著提高(P〈0.01),IgG亚类分析显示该佐剂能有效刺激小鼠产生针对PfCP-2.9和Pfclet-3的多种IgG亚类抗体。结论CpG显著提高了联合疟疾抗原的免疫原性。  相似文献   

2.
目的构建幽门螺杆菌(H.pylori)尿素通道蛋白编码基因(ureI)的真核表达重组载体,并在HeLa细胞中表达,为核酸疫苗的研制奠定基础。方法以H.pyloriSS1株基因组为模板,PCR扩增ureI目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组载体pcDNA3.1(+)/ureI;通过酶切、PCR及测序鉴定,筛选阳性重组载体;脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,Western blot检测其在HeLa细胞中的表达。结果以H.pyloriSS1株基因组DNA为模板扩增出特异的ureI基因片段,大小约585 bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了H.pylori真核表达重组载体pcDNA3.1(+)/ureI;该重组质粒能够在HeLa细胞中表达目的蛋白。结论成功构建了真核重组载体pcDNA3.1(+)/ureI,并能在HeLa细胞中表达。  相似文献   

3.
目的:研究T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗诱发小鼠体液免疫反应。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c小鼠随机分为pcNSA3.1组、pcDNA3.1/TCRVβ8组、pcDNA3.1/TCRVβ8+IL-2组、pcDNA3.1/TCRVβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6),双侧股四头肌内注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次。每次免疫前及免疫开始后至第8周,取鼠血,应用间接免疫荧光检测小鼠抗体生成情况。结果:pcDNA3.1/TCRVβ8组、pcDNA3.1/TCRVβ8+CpG+脂质体组、pcDNA3.1/TCRVβ+IL-2组小鼠血清中均产生了特异性抗独特型抗体,抗体滴度在第4周开始增高,第6周时达到高峰。在同一取血时间,pcDNA3.1/TCRβV8+CpG+脂质体组和pcDNA3.1/TCRVβ8+IL-2组小鼠抗体滴度均高于pcDNA3.1/TCRβ8组(P<0.001。结论:DNA重组质粒pcDN3.1/TCRVβ8可诱导小鼠产生特异性抗体淋巴瘤细胞的独特型抗体;IL-2、CpG和脂质体增强了TCRVβ8基因疫苗诱导的体液免疫反应。  相似文献   

4.
目的:构建含有肺炎链球菌(SPN)毒力因子CbpA抗原编码基因的重组质粒pcDNA3.1/CbpA,测定其诱导特异性免疫应答的能力并评价其保护效果.方法:PCR扩增SPN CbpA编码基因,将该编码基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建pcDNA3.1/CbpA重组质粒,经测序鉴定后转染COS-7细胞,WesternBlot鉴定目的蛋白的表达,重组质粒免疫BALB/c小鼠,TIGR4型SPN攻击后,监测其生存时间.结果:CbpA能在COS-7细胞中表达;pcDNA3.1/CbpA重组质粒主动免疫BALB/C小鼠后,体内产生特异性IgG抗体,并诱导小鼠对SPN感染产生有效的保护.结论:成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1/CbpA,可为SPN基因疫苗的研制提供依据.  相似文献   

5.
目的:肺炎链球菌溶菌酶(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase,LytA)作为肺炎链球菌多价核酸疫苗候选抗原的保护效能评价.方法:PCR技术从肺炎链球菌R6标准株扩增LytA基因序列,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-LytA,免疫印迹(western-blot)检测重组质粒在哺乳动物BHK-21细胞中的表达.与前期构建的肺炎链球菌表画蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA)N端序列基因构建的质粒pcDNA3.1-PspA'核酸疫苗联合或单独肌肉注射免疫BABL/c小鼠,检测各组小鼠血清特异性抗体IgG水平,并观察免疫小鼠肺炎链球菌D39腹腔攻击21d生存情况.结果:ELISA检测发现3组(pcDNA3.1-LytA组,pcDNA3.1-PspA'组,pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA'组)实验组小鼠特异性IgG水平较空质粒对照组显著升高(P<0.001),pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA'组小鼠抗LytA特异性抗体IgG水平较pcDNA3.1-LytA组明显升高(P<0.01),但是与pcDNA3.1-PspA'组比较抗PspA特异性抗体IgG水平无显著差异(P>0.05).小鼠攻击试验提示pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA'组小鼠中位生存时间较pcDNA3.1-LytA组及空质粒对照组显著延长(P<0.01),但与pcDNA3.1-PspA'组比较中位生存时间无显著差异(P>0.05),生存曲线相似.结论:LytA联合PspA'的肺炎链球菌多价核酸疫苗免疫效能并不优于单一抗原PspA'的肺炎链球菌核酸疫苗,LytA作为肺炎链球菌多价核酸疫苗的优势候选抗原组分之一有待进一步研究.  相似文献   

6.
目的评价重组热休克蛋白A(rHspA)作为幽门螺杆菌(Hp)口服疫苗成分的效果.方法采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂(霍乱毒素,CT;大肠不耐热肠毒素B亚单位,LTB)共口服免疫BALB/c小鼠,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgA、IgA抗体水平,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况以及IL4、IFN-γ的变化.结果单纯口服rHspA组产生的抗体水平与对照组(PBS)相差不显著,而rHspA 佐剂组与对照组相差非常显著.rHspA 佐剂组小鼠脾淋巴细胞体外培养,在Hp抗原刺激作用下出现明显的增殖反应;不加佐剂免疫组分泌IFN-γ水平增加,IL-4水平未发现增加;而加佐剂免疫组除IFN-γ水平增加外,IL-4水平也发现显著增加.结论BALB/c小鼠口服rHspA和CT以及LTB混合制剂能有效激发机体产生全身和局部特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答.  相似文献   

7.
目的 寻找一种高效的特异性抗幽门螺杆菌IgY的制备和活性测定方法.方法 分别用福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂混合含幽门螺杆菌火活全菌及其超声碎片的试剂,对6只31周海兰褐种产蛋母鸡进行免疫,2周后二免,4周后三免.于初免后即开始收集鸡蛋,提取特异性抗幽门螺杆菌IgY,采用间接血凝试验测定卵黄中的抗体效价,体外抑菌试验测定其抑制幽门螺杆菌的活性.结果 母鸡在初免2周后,抗体效价可达1:256,初免3周后,抗体效价可达1:1024,初免4周后,抗体效价可达1:8192;同批样品在此水平可维持达11周以上,然后抗体效价呈缓慢下降趋势,26周后抗体效价仍可保持在较高水平.特异性抗幽门螺杆菌IgY具有明显的抑制HP生长的活性.结论 采取加强免疫方法,可高效地引起免疫应答,是一种较好的获得抗体的方法.  相似文献   

8.
BalB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的免疫应答   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的:评价重组尿酶B亚单位(rUreB)作为幽门螺杆菌(Hp)口服疫苗成份的效果、探讨Hp的免疫保护机制。方法:采用重组Hp保护性抗原UreB与粘膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位(CTB)共口服免疫BalB/c小鼠,ELISA分析血清、唾液和粪便、胃粘液中IgG、IgA抗体水平,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况及IL-4、IFN-γ的变化。结果:BalB/c小鼠口服rHreB和CTB混合制剂能有效激发机体产生全身和局部特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。结论:rUreB可以作为Hp疫苗成分用于Hp感染的预防和治疗。  相似文献   

9.
纳米基因防龋疫苗的构建及其免疫大鼠的实验研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:制备pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米基因防龋疫苗,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备两种pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米颗粒载体系统,经鼻粘膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对葡聚糖结合蛋白B的特异IgG抗体滴度及唾液中针对葡聚糖结合蛋白B的特异SIgA抗体滴度。与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB及未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组作比较。结果:该载体系统经鼻免疫SD大鼠所产生的血清及唾液中针对GbpB的IgG和SIgA抗体滴度远大于未免疫组和空白壳聚糖纳米颗粒组,而与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB组抗体滴度相当。且维持的抗体滴度更稳定和持久。结论:成功构建了以葡聚糖结合蛋白B基因为免疫原的纳米基因防龋疫苗,并获得较好的免疫效果。  相似文献   

10.
目的:检测T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗的基因表达.方法:大剂量提取质粒,将BALB/c鼠随机分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+ IL-2组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6只),双侧股四头肌内注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次.接种疫苗后5 d,用RT-PCR法检测重组质粒mRNA表达.接种疫苗后7 d应用免疫组化检测重组质粒蛋白表达.结果:pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+ IL-2组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+CpG+脂质体组小鼠骨骼肌中均显示mRNA和蛋白表达,而pcDNA3.1组和全硫代CpG组未见mRNA和蛋白表达.结论:T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗在小鼠骨骼肌中有效地表达了基因产物.  相似文献   

11.
Aβ42重组多价DNA疫苗的构建及诱导Aβ抗体的产生   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的: 构建β-淀粉样蛋白(Aβ42)的多价重组DNA疫苗,确定是否诱导较高滴度Aβ抗体的产生.方法: PCR法从Tg2576转基因鼠基因组DNA中扩增人Aβ42基因片段;在Aβ42基因的5′端引物延伸连接IgG к轻链信号肽序列;利用GSGGSG linker基因串连两段Aβ42基因片段;将产物克隆入pcDNA3.1表达载体,分别构建pcDNA3.1-Aβ42,一价分泌型pcDNA3.1-sAβ42,二价分泌型pcDNA3.1-s2×Aβ42载体;转染COS-7细胞,免疫印迹检测Aβ42的表达;im接种BALB/c鼠,ELISA法测定抗体效价;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗体与Tg2576鼠脑切片中的老年斑的结合.结果: 测序证实所构建的pcDNA3.1-Aβ42,pcDNA3.1-sAβ42,pcDNA3.1-s2×Aβ42载体插入序列正确;Western Blotting证实在COS-7细胞中表达相应的蛋白.经6轮,22 wk加强免疫后,pcDNA3.1-Aβ42疫苗不能产生Aβ抗体、pcDNA3.1-sAβ42接种后产生较低的Aβ抗体(<1:1000),pcDNA3.1-s2×Aβ42第1次加强免疫后即产生抗体,抗体滴度随接种次数增多而升高,22 wk时抗体平均滴度达1:5000以上,可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑结合,并能被Aβ42肽抗原特异性中和.结论: 二价分泌型pcDNA3.1-s2×Aβ42疫苗,可在动物体内产生高效价的特异Aβ抗体.  相似文献   

12.
目的:探讨共刺激分子B7-1(CD80)对汉坦病毒核蛋白基因疫苗的免疫调节作用.方法:构建双启动子共表达B7-1基因和汉坦病毒核蛋白基因的真核表达载体pcDNA 3.1-B7-S,酶切鉴定后直接肌注免疫BALB/c小鼠,同时设对照组pcDNA 3.1 空质粒接种组、pcDNA 3.1-S接种组.ELISA法检测血清特异性抗体,MTT法检测T细胞增殖反应.结果:pcDNA 3.1-B7-S接种组鼠在抗体的产生水平及淋巴细胞增殖指数上均较pcDNA 3.1-S接种组明显增高.结论:接种B7-1基因和汉坦病毒核蛋白基因的共表达质粒优于注射单目的抗原基因表达质粒,为探索增强基因疫苗的免疫作用提供了新的途径.  相似文献   

13.
肺炎链球菌毒力蛋白DNA疫苗优势抗原组合筛选及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨肺炎链球菌DNA疫苗候选抗原联合免疫的优势抗原组合方式.方法 分子克隆肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)N端及肺炎链球菌溶血素(Ply)基因序列,构建重组质粒pcDNA3.1-PspA'和pcDNA3.1-PBD(PBD为Ply 点突变减毒体),免疫印迹(Western blot)检测重组质粒在哺乳动物BHK-21细胞中的表达(包括前期工作中构建的重组质粒pcDNA3.1-PsaA).将3种重组基因疫苗以不同方式组合肌肉注射免疫150只BALB/c小鼠(B组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PspA',C组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PBD,D组:pcDNA3.1-PspA'+pcDNA3.1-PBD,E组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PspA'+pcDNA3.1-PBD),检测各组小鼠血清特异性抗体IgG水平,观察免疫小鼠鼻咽部肺炎链球菌D39携带改变和D39腹腔攻击小鼠21 d生存情况.结果 成功构建3种重组真核表达载体,ELISA检测结果显示B组小鼠血清特异性IgG抗体水平与E组相似(P>0.05),均明显高于A、C、D组[A组:对照空质粒组pcDNA3.1(+)]小鼠(P<0.01);免疫小鼠鼻咽部D39携带菌落计数提示B组小鼠相似于E组小鼠(P>0.05),并明显少于C、D组和阴性对照组(A组和PBS组,P<0.01),并且D39腹腔攻击小鼠21 d生存时间分析亦提示其中位生存时间明显长于C组及阴性对照组(A组和PBS组,P<0.01).结论 PspA'联合PsaA的抗原组合方式具有高效的协同保护效能,可作为肺炎链球菌DNA疫苗的优势候选抗原组合.  相似文献   

14.
目的 探讨CpG在幽门螺杆菌疫苗研究中的佐剂效应。方法 将 60只BALB c小鼠分为 4组 ,分别以H .pylori尿素酶B亚单位 (rUreB) CPG、rUreB CT、单独UreB以及PBS进行口服免疫 ,ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类 (IgG1,IgG2a) ,RT PCR差异显示T淋巴细胞IFN γ、IL 4mRNA。结果 ①CpG rUreB组在胃、肠、气管和血清产特异性抗体水平显著高于PBS组和单独rUreB组 (P <0 0 1) ,与CT UreBs组差异不显著 (P >0 0 5 ) ;②抗原刺激后CpG rUreB组T淋巴细胞表达的IFN γ、IL 4mRNA显著高于PBS组和rUreB组。结论 ①CpG可能是H .pylori疫苗研究中有效的粘膜佐剂 ;②CpG rUreB组诱导的可能是Th1 Th2型免疫应答。  相似文献   

15.
目的:检测T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗的基因表达。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c鼠随机分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1/TCRVβ8组、pcDNA3.1/TCRβ8+IL-2组、pcDNA3.1/TCRVβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6只),双侧股四头肌内注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次。接种疫苗后5d,用RT-PCR法检测重组质粒mRNA表达。接种疫苗后7d应用免疫组化检测重组质粒蛋白表达。结果:pcDNA3.1/TCRVβ8组、pcDNA3.1/TCRVβ8+IL-2组、pcDNA3.1/TCRβ8+CpG+脂质体组小鼠骨骼肌中均显示mRNA和蛋白表达,而pcDNA3.1组和全硫代CpG组未见mRNA和蛋白表达。结论:T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗在小鼠骨骼肌中有效地表达了基因产物。  相似文献   

16.
目的:制备高效价E血清型沙眼衣原体(CT)的多克隆抗体.方法:用hep-2细胞培养制备并用超速离心方法纯化E血清型CT作为抗原,采用弗氏佐剂乳化抗原,背部皮下多点免疫4只家兔,收获免疫后血清制备多克隆抗体,用Western blot方法进行鉴定,ELISA法检测抗体水平.结果:所有家兔在全程免疫后都产生了高效价的血清抗体,最高滴度达1∶1600.Western blot实验结果显示,本研究制备的CT血清抗体能与CT全菌体抗原发生b异结合.结论:CT菌体抗原免疫家兔可成功制备高效价的血清抗体,为建立沙眼衣原体免疫检测方法打下了基础.  相似文献   

17.
插入CpG序列和IL—2基因的HBV重组真核表达载体的构建   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:构建插入CpG序列和IL-2基因的HBV重组真核表达载体。方法:采用PCR产物直接克隆方法,构建了编码HBsAg基因的真核细胞表达载体pcDNA3.1^ -HBsAg;并以此为基础通过重组DNA技术分别构建了在不同位置含不同数目的CpG序列的重组质粒pcDNA3.1^ -S/CpG1、pcDNA3.1^ -S/CpG2、pcDNA3.1^ -S/CpG1 CpG2及IL-2和HBsAg融合基因的表达载体pcDNA3.1^ -S/IL-2。通过脂质体基因转移技术导入Cos-7细胞中检测其瞬间表达。结果:通过酶切、PCR及测序证实已分别正确完整地插入IL-2基因和CpG序列,体外转染Cos-7细胞后可见基因的表达和分泌,结论:本实验成功构建了我们所设计的5种重组质粒,拟为今后探索优化基因疫苗的设计及HBV治疗性疫苗的研究奠定基础。  相似文献   

18.
嗜肺军团菌pilE基因体外表达及其免疫原性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 构建嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛pilE基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-pilE,研究其真核细胞中的表达及其免疫原性.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌pilE基因,将其定向插入载体pcDNA3.1( ),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1.-pilE.经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-pilE转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western-blot分别鉴定pcDNA3.1-pilE的瞬时和稳定表达产物.将pcDNA3.1-pilE作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN-γ产生水平、CTL杀伤活性等指标,评价疫苗的免疫原性.结果 扩增出了429 bp的PilE基因,在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,在相对分子质量15000处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA3.1-pilE在细胞内表达PilE蛋白.pcDNA3.1-pilE免疫组的免疫原性均高于对照组pcDNA3.1( )组(P<0.01).结论 成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中得到了表达,免疫小鼠后诱导了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答.  相似文献   

19.
Aβ1-15多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果   总被引:5,自引:1,他引:4  
[目的]构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果.[方法]基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgG κ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Western blot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合.[结果]测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8 ku的分泌型4×Aβ15蛋白.pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1:6 400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和.[结论]所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件.  相似文献   

20.
目的 确定自制免疫刺激复合物(ISCOMATRIX)作为HCA587蛋白疫苗佐剂的有效剂量,并探讨其与CpG联合作为HCA587蛋白疫苗佐剂的免疫效力和肿瘤治疗效果。方法 应用透析法将Quil A、胆固醇和磷脂制备成ISCOMATRIX,经磷钨酸负染并采用透射电子显微镜观察自制ISCOMATRIX的结构。建立小鼠免疫模型,将联合CpG的HCA587蛋白疫苗与不同剂量的自制ISCOMATRIX佐剂混合,经尾根部皮下免疫小鼠;采用酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测产生IFN-γ的脾细胞频数,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HCA587特异性抗体水平。在小鼠右侧胁腹部皮下接种B16-HCA587肿瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,按照处理方式不同将小鼠分为HCA587蛋白疫苗治疗组(接种100μL包含CpG与最佳剂量的自制ISCOMATRIX的HCA587蛋白疫苗)与PBS对照组(注射100μL的无菌PBS),使用游标卡尺测量肿瘤大小。结果 自制ISCOMATRIX佐剂呈典型的蜂窝状结构,直径20~30 nm,大小均一。12、36μg(QuilA浓度分别为0.012%、0.036%)的自制...  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号