端粒酶反义寡核苷酸基因对裸鼠体内膀胱癌生长的抑制作用

目的：探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)基因对裸鼠体内膀胱癌生长的抑制作用,阐明反义端粒酶基因对膀胱癌的治疗作用。方法：膀胱癌EJ细胞株分别采用换液培养和用硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸(PS-ASON)处理,将换液培养及PS-ASON处理的EJ细胞分别接种BALB/c裸鼠（对照组24只和PS-ASON处理组12只）,观察致瘤率;肿瘤形成至20 mm后将对照组裸鼠随机分为3组(n=8),隔日注射生理盐水（空白对照组）、PS-ASON（PS-ASON注射组）及化疗药物表阿霉素（表阿霉素组）。观察各组裸鼠致瘤时间、裸鼠体质量及肿瘤体积的变化,计算各组裸鼠生存率;光镜下观察肿瘤组织形态学变化。结果：PS-ASON处理组裸鼠致瘤率低于对照组（P<0.01）,致瘤时间长于对照组（P<0.01）,裸鼠平均体质量高于对照组（P<0.01）。按照不同分组,裸鼠注射不同药物治疗12 d后,PS-ASON注射组和表阿霉素组裸鼠肿瘤体积均小于空白对照组（P<0.01）;PS-ASON注射组与表阿霉素组裸鼠肿瘤体积比较差异无统计学意义（P>0.05）。空白对照组裸鼠体质量持续下降;接种16 d后,PS-ASON注射组裸鼠体质量明显高于空白对照组（P<0.01）;接种肿瘤8 d后,表阿霉素组裸鼠体质量低于PS-ASON注射组（P<0.01）;空白对照组裸鼠体质量与表阿霉素组比较差异无统计学意义（P>0.05）。光镜下观察,PS-ASON注射组和表阿霉素组肿瘤细胞出现大量凋亡和坏死。PS-ASON注射组裸鼠生存率明显高于空白对照组（P<0.001）和表阿霉素组（P<0.01）。结论：反义端粒酶基因对体内膀胱癌形成及生长有明显的抑制作用,抑制程度与化疗药表阿霉素相当,可以用于膀胱癌治疗的进一步研究。     

端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用

目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

转染人端粒酶RNA不同基因位点反义寡核苷酸的食管癌细胞在裸鼠体内生长情况观察

目的:观察不同基因位点的人端粒酶RNA(hTR)硫代修饰性反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠食管癌移植瘤的抑制作用.方法:40只裸小鼠随机等分为8组.将20μmol/L不同基因位点的hTR ASODN(ASODN-1、ASODN-2、ASODN-3、ASODN-4及ASODN-5)和无关序列寡核苷酸(N-ODN)分别转染食管癌EC9706细胞,72 h后采用裸鼠背部皮下注射的方法进行裸鼠体内成瘤实验,连续5周观察裸鼠体内食管癌移植瘤的生长情况.结果:空白对照和N-ODN组最早长出肿瘤,ASODN-4和ASODN-5组次之,ASODN-2、ASODN-1和ASODN-3组肿瘤长出最晚.35 d时ASODN-1组、ASODN-2组、ASODN-3组、ASODN-4组、ASODN-5组、N-ODN组及空白对照组肿瘤体积(V/mm3)分别为450.1±58.2、581.1±69.7、237.7±140.5、1 323.2±148.9、1 187.3±258.0、1 331.4±240.2及1 476.2±131.8,前3组与后4组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与ASODN-1、ASODN-2及ASODN-3组比较,ASODN-4、ASODN-5、N-ODN及空白对照组细胞异型性明显.结论:封闭hTR功能区的反义寡核苷酸可有效抑制裸鼠食管癌移植瘤的增殖及恶性表型的产生.     

超声微泡介导VEGF反义寡核苷酸对裸鼠膀胱癌移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨利用超声辐照微泡造影剂介导血管内皮生长因子(Vascular endotheliar growth factor,VEGF)反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制效应.方法:人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型建立后,将成瘤后的裸鼠随机分为3组:UM+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂与VEGF-ASODN混合物,并对移植瘤体用超声波进行辐照;UM组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂并以同样的条件进行体外超声辐照;单纯对照组每只裸鼠尾静脉注射生理盐水,各组处理每隔2d进行1次,共计5次.观察裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化SP法测Ki67、CD34、VEGF的表达,计算微血管密度、细胞增殖指数,TUNEL法测细胞凋亡指数.结果:UM+ASODN组裸鼠皮下肿瘤生长速度较对照组明显减慢,肿瘤组织VEGF的表达及微血管密度较对照组降低(P<0.05);与对照组相比,UM+ASODN组肿瘤细胞的凋亡增加(P<0.01),而细胞增殖减少(P<0.05).结论:超声微泡介导的VECF反义寡核苷酸转染能有效抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的生长.     

端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸抑制膀胱癌细胞生长的机制

目的 :探讨端粒酶逆转录酶基因 (hTERT)反义寡核苷酸 (ASODN)对T2 4膀胱癌细胞生长的影响及作用机制 .方法 :采用脂质体介导技术 ,将hTERT基因ASODN转染入T2 4膀胱癌细胞中 ,应用端粒酶PCR ELISA法检测端粒酶活性变化 ,MTT法测定细胞生长变化 ,流式细胞术观察对细胞周期影响 .结果 :hTERT基因ASODN作用T2 4膀胱癌细胞后显著地抑制膀胱癌细胞端粒酶活性 ,吸光度A值降为 0 .4 5 .癌细胞生长增殖受限 ,抑制作用具有序列特异性和剂量依赖性 ,并出现细胞凋亡现象 ,凋亡率为 14 .8%,与SODN转染组及空白对照组进行比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) .结论 :hTERT基因ASODN能特异性抑制T2 4膀胱癌细胞生长 ,下调端粒酶活性 ,促进细胞凋亡 .为膀胱肿瘤基因治疗的临床应用提供新靶点     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分(hTR)模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF-7细胞.发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72 h,端粒酶活性较对照组降低61.0%(P<0.05);细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0/G1期细胞数增多,S期及G2/M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化.提示端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景.     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞生长的影响

目的检测针对端粒酶RNA的反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞株生长的影响。方法用PCR—ELISA法检测细胞内端粒酶活性。采用MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。采用电镜观察细胞超微结构的改变。结果端粒酶RNA反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶。结论端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌HNE-1细胞的生长。     

端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制裸鼠移植瘤生长机制的初步探讨

目的 端粒酶是迄今为止发现的最为广谱的肿瘤标志物,端粒酶RNA的反义寡核苷酸能够抑制由A549细胞株构建的裸鼠抑制瘤的生长,本研究旨在讨论其机制.方法 利用笔者前期实验获得的裸鼠抑制瘤组织,用流式细胞术检测反义寡核苷酸组(antisense ohgodeoxynucleotide group,ASODN)、正义寡核苷酸组(sense ohgodeoxynucleotide group,SODN)和生理盐水组(normal saline group,NS)移植瘤组织中癌细胞的凋亡指数.结果 反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组和生理盐水组的凋亡指数分别是(23.01±2.98)%、(5.48±1.20)%和(3.11±0.93)%,反义寡核苷酸组与正义寡核苷酸组之间、反义寡核苷酸组与生理盐水组之间的差异均有显著性(P值均小于0.01),正义寡核苷酸组与生理盐水组之间的差异无显著性(P=0.056).结论 端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制裸鼠移植瘤生长的机制可能是通过抑制端粒酶活性后诱导癌细胞发生了凋亡.     

VEGF反义寡核苷酸对裸鼠膀胱癌移植瘤的抑制作用研究

目的:观察以脂质体为载体介导血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸(Antisense oligonucteotides,ASODN)转染对裸鼠膀胱癌移植瘤的抑制作用.方法:建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型,以脂质体为载体介导VEGFASODN进行转染.观察裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化sP法测Ki67、CD34、VEGF的表达,计算微血管密度、细胞增殖指数,TUNEL法测细胞凋亡指数.结果:反义组与正义组的抑瘤率分别为71.08%和7.19%,反义组VEGF的表达、微血管密度、细胞增殖和凋亡指数与正义组及对照组相比均有明显差异,正义组与对照组之间各检测指标差异无显著性.结论:VEGF反义寡核苷酸能够抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的生长和微血管的生成,可能成为El后膀胱癌基因治疗的重要方向.     

端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨端粒酶逆转录酶(TERT)的反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌(TC)细胞凋亡的影响.方法:体外培养TC细胞,TERT ASODN和正义寡核苷酸(SODN)分别作用于体外培养的TC细胞,采用透射电镜,Hoechest荧光染色,流式细胞仪等方法分析ASODN TERT对TC细胞凋亡的影响.结果:透射电镜示ASODN可诱导TC出现典型的细胞凋亡形态,Hoechest荧光染色显示ASODN可使TC凋亡数目增多从52±16上升到178±32,流式细胞仪证实5 μmol/L ASODN处理组,SODN处理组及空白对照组的细胞凋亡率分别为10.4%,1.6%和无凋亡(P＜0.05).结论:TERT ASODN能增强TC细胞凋亡.     

端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌治疗作用的体外实验

目的：探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用。方法：用TRAP-银染方法检测25例膀胱癌组织和4例癌旁组织中端粒酶活性的表达。以端粒酶RNA模板区为靶点,不同剂量的序列为TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸（PS-ASON）作为实验组（A、B、C）,以硫代磷酸修饰 13个核苷酸的随机引物作为对照组（D）,仅加入培养液作为空白对照组（E）,与人膀胱癌细胞株BIU87细胞共同孵育1~30 d,计细胞数,光镜及电镜观察,DNA凝胶电泳检测、流式细胞仪测定和分析细胞的凋亡和坏死。结果：25例膀胱癌组织中,24例（96%）表达端粒酶活性,4例癌旁组织无端粒酶活性表达。与随机引物及空白对照组比较,实验组的ASON能明显减少细胞增殖数目,实验组细胞在第2、8天及8天后出现较明显的凋亡峰和DNA梯状电泳带,并出现退化、老化、凋亡和坏死的形态学变化,凋亡率明显增高（P<0.001）,并显示剂量的依赖性（P<0.01）。 结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌BIU87细胞增殖抑制,退化、老化、凋亡和坏死,对膀胱癌的治疗有潜在的意义。     

Effect of antisense oligonucleotides of telomerase on the growth of RCZ cells derived from renal cell carcinoma in culture

目的 :研究端粒酶反义抑制剂对肿瘤细胞的影响。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)及 1 3个寡核苷酸的随机引物与肾癌细胞株 RCZ细胞共同孵育 ,计数 1～ 43d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,通过 MTT法测定 ASON对细胞生长的抑制率。结果 :ASON实验组与随机引物对照组比较能明显减少细胞增殖数目 ( P<0 .0 1 )、增加抑制率 ( P<0 .0 1 )及延长倍增时间 ( P<0 .0 0 5) ;并且其抑制效果显示出剂量的依赖性 ( P<0 .0 5) ,具有序列选择特异性。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸抑制肾癌 RCZ细胞增殖 ,可能对肿瘤治疗有潜在的意义     

端粒酶hTERT基因反义核酸对膀胱癌细胞T24端粒酶活性的影响

目的 探讨hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)对膀胱癌细胞T24端粒酶活性的影响.方法 采用TRAP-PCR-ELISA法检测膀胱癌细胞的端粒酶活性;采用RT-PCR方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以免疫组化通过流式细胞仪检测hTERT基因蛋白水平的变化.结果 hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(ASPS-ODN)作用于T24细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制.结论 通过hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(ASPS-ODN)特异性抑制hTERT基因mRNA的表达降低膀胱癌细胞T24端粒酶活性.     

端粒酶的义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒粒酶反义寡核苷酸对肺癌细胞端粒酶活性的抑制作用.方法脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸转染A549肺腺癌细胞株,采用TRAP-PCR-ELIsA法半定量检测转染后肺腺癌细胞端粒酶活性,观察它们的变化结果端粒酶反义寡核苷酸转染A549细胞72h后,A549细胞端粒酶活性明显下调.结论端粒酶反义寡核苷酸可以有效抑制肺腺癌细胞端粒酶活性.     

盐霉素对人膀胱癌5637细胞的生长抑制作用

目的：探讨盐霉素对人膀胱癌5637细胞生长、凋亡和侵袭力的影响,阐明其可能的作用机制。方法：取体外培养的对数生长期人膀胱癌5637细胞,分为空白对照组和不
同剂量（15、30和60 μmol?L-1）盐霉素组。MTT比色法检测各组人膀胱癌5637细胞的生长抑制率,流式细胞术检测各组人膀胱癌5637细胞的细胞凋亡率,Matrigel侵袭实验检测各组人膀胱癌5637细胞的侵袭能力,Western蛋白印迹实验检测各组人膀胱癌5637细胞中Wnt/β-catenin途径β-catenin蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,各剂量盐霉素组膀胱癌5637细胞的生长抑制率明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,细胞穿膜数目减少（P<0.05）,β-catenin蛋白表达水平减少（P<0.05）。与低剂量(15 μmol?L-1)盐霉素组比较,高剂量(60 μmol?L-1)盐霉组人膀胱癌5637细胞生长抑制率升高（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞穿膜数目减少（P<0.05）,β-catenin蛋白表达量减少（P<0.05）。结论：盐霉素对人膀胱癌5637细胞的生长有较明显抑制作用,促进细胞凋亡,
降低细胞侵袭力,并且这种抑制作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号传导途径来实现的。     

端粒酶反义寡核苷酸体外抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)对宫颈癌Hela细胞端粒酶活性的影响.方法针对端粒酶RNA的ASON作用于Hela细胞,同时以加有转染剂FuGENE6者为对照组,计数连续作用1,3,5 d后的细胞数.TRAP方法测定端粒酶的活性.结果ASON组与随机引物及空白对照组比较,端粒酶活性降低,细胞的增殖速度延缓;有转染剂FuGENE6的ASON组的细胞增殖数目和端粒酶活性显著低于无FuGENE6的ASON组;细胞对有FuGENE6的ASON的摄取显著多于单纯的ASON.在FuGENE6的介导下,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关.结论针对端粒酶RNA的ASON能抑制Hela细胞的端粒酶活性,转染剂FuGENE6可以增强端粒酶ASON对宫颈癌细胞端粒酶活性的抑制作用.