激活素A和卵泡抑素对MG-63细胞株OCN、BMP-2蛋白表达的影响

目的 探讨激活素A (activin A)和卵泡抑素(follistatin,FS)对骨肉瘤细胞株(MG-63)骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨形态形成蛋白-2(BMP-2)蛋白质表达的影响以及骨形成作用.方法 采用细胞培养结合Western blot检测,观察不同浓度激活素A以及加用卵泡抑素后对MG-63细胞OCN、BMP-2蛋白质表达的影响,并采用PNPP底物比色法检测MG-63细胞的碱性磷酸酶含量.结果 激活素A明显上调MG-63细胞OCN、BMP-2蛋白质表达(P＜0.05),随着激活素A剂量增加以及作用时间延长,OCN、BMP-2蛋白质表达量逐渐加大,并促进碱性磷酸酶的生成,但加用卵泡抑素后该作用得到抑制.结论 激活素A上调OCN、BMP-2蛋白质表达及促进骨形成,而卵泡抑素抑制该效应.     

阿那曲唑对乳腺癌组织c-myc表达的影响

目的:探讨阿那曲唑对初次罹患乳腺癌患者癌组织c-myc表达的影响.方法:在患者知情情况下,行乳腺癌切除术前3 d到1 wk,获取40例患者部分肿瘤组织后,对患者施予阿那曲唑治疗.手术过程中获取肿瘤组织.将肿瘤组织研磨后,Western Blot分析乳腺癌组织中c-myc的表达.同时免疫组化检测乳腺癌组织雌激素受体表达情况.并用ELISA方法检测患者治疗前后血清中的雌二醇水平.结果:40例患者中,雌激素受体阳性患者为28例,占70%.经阿那曲唑治疗后,雌激素受体阴性患者c-myc表达无明显变化(P＞0.05);雌激素受体阳性患者c-myc表达有显著变化(P＜0.05),其中23例患者c-myc表达明显降低,2例没有变化,3例升高.阿那曲唑能够降低所有患者的外周血雌二醇的水平.结论:对于绝经后的乳腺癌雌激素受体阳性患者,阿那曲唑能够有效地降低癌基因c-myc的表达,从而降低癌细胞的转移性.     

NS398诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡及对bcl-2蛋白表达的影响

目的研究环加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂NS398抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖及诱导其凋亡的效应和机制。方法MTT比色法观察NS398的细胞毒性作用及其浓度依赖性；透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成。流式细胞仪检测细胞凋亡率及与NS398作用时间的关系；Western blot测定bcl-2蛋白表达。结果不同浓度（0.1～100μmol／L）NS398均可使细胞生长受到抑制；电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学变化；琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成；流式细胞术检测证实细胞凋亡率与NS398作用时间呈明显相关。Western blot检测显示随着NS398作用时间延长，可不同程度地降低bcl-2蛋白表达。结论NS398能抑制人MG-63细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控bcl-2蛋白表达有关。     

鹿茸多肽对人骨髓间充质干细胞BMP-2和Runx2表达的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中骨形态发生蛋白2(BMP-2) 和骨特异性转录因子2(Runx2)基因和蛋白表达的影响,阐明其对骨合成及hBMSCs向成骨细胞方向分化的作用机制。方法:体外培养的hBMSCs分为对照组和5、10、15、20 g·L^-1 VAP组,通过检测各组hBMSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测对照组和10 g·L^-1 VAP组hBMSCs增殖情况;荧光定量 PCR 法与Western blotting法测定对照组和10 g·L^-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因与蛋白的表达。结果:VAP各组细胞中ALP活性均高于对照组,其中以10 g·L^-1 VAP组细胞中ALP活性最高(P<0.01);CCK-8法,10 g·L^-1 VAP组hBMSCs增殖率明显高于对照组(P<0.05),VAP诱导培养第9天hBMSCs增殖率最高,且进入平台期,之后hBMSCs的增殖率开始下降;荧光定量 PCR和Western blotting检测,10 g·L^-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因及蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VAP能够提高hBMSCs中ALP活性,促进hBMSCs增殖分化,上调hBMSCs中BMP-2及其下游Runx2基因和蛋白的表达,这可能是VAP对hBMSCs骨形成及骨代谢影响的分子调控机制之一。     

手术刺激对腰椎后纵韧带内BMP-2及BMP-7 mRNA表达的影响

目的 通过手术建立动物模型,增加后纵韧带的张力,检测韧带中BMP-2及BMP-7的表达及水平.探讨机械应力刺激对后纵韧带骨化发生及发展的作用机制.方法 成年健康的新西兰大白兔80只,随机分为4组.手术方式:①腰椎后路全椎板切除组(全椎板组);②腰椎后路全椎板切除加肌肉切断组(全椎板加肌肉组);③单纯椎旁肌止点切断组(肌肉组);④对照组,不作任何处理.分别于术后2、4及8周.取实验动物手术节段后纵韧带标本,RF-PCR方法检测BMP-2及BMP-7 mRNA的表达水平.结果 ①全椎板切除加肌肉切断组的BMP-2及BMP-7水平上升最明显,与对照组相比差异有显著性;②全椎板切除组和单纯椎旁肌止点切断组的BMP-2及BMP-7水平上升,与对照组比较差异有显著性.结论 BMP-2在后纵韧带骨化的早期始动阶段发挥起动因子的作用,而BMP-7参与后纵韧带骨化的全过程.     

电离辐射对小鼠胸腺和脾细胞MDM2 mRNA和蛋白表达的影响

目的 :探讨 X射线全身照射诱导小鼠胸腺和脾细胞 G1期阻滞的分子机制。方法 :采用流式细胞术和斑点印迹杂交检测 X射线全身照射后昆明系小鼠胸腺和脾细胞中 MDM2 m RNA和蛋白表达的变化。结果 :2 Gy X射线全身照射后 4～ 8h小鼠胸腺细胞 MDM2蛋白的表达明显升高(P<0 .0 5)。时效和量效观察发现 ,无论是 75m Gy还是 2 Gy X射线全身照射 ,小鼠胸腺和脾细胞中 MDM2 m RNA水平在照后 1～ 48h均未见明显变化 ;0 .5～ 6Gy X射线全身照射后 4h,胸腺和脾细胞中 MDM2 m RNA转录亦未见显著改变。结论 :X射线全身照射可诱导小鼠淋巴细胞MDM2蛋白表达 ,从而限制 G1期阻滞的时间 ,使 DNA损伤修复后的细胞重新进入细胞周期     

电离辐射对小鼠胸腺和脾细胞MDM2mRNA和蛋白表达的影响

目的：探讨Ｘ射线全身照射诱导小鼠胸腺和脾细胞Ｇ１期阻滞的分子机制。方法：采用流式细胞术和斑点印迹杂交检测Ｘ射线全身照射后昆明系小鼠胸腺和脾细胞中ＭＤＭ２ｍＲＮＡ和蛋白表达的变化。结果：２ＧｙＸ射线全身照射后４～８ｈ小鼠胸腺细胞ＭＤＭ２蛋白的表达明显升高（Ｐ〈０．０５）。时效和量效观察发现,无论是７５ｍＧｙ还是１ＧｙＸ射线全身照射,小鼠胸腺和脾细胞中ＭＤＭ２ｍＲＮＡ水平在照后１～４８ｈ均未见明显变化     

局部应用辛伐他汀对拔牙窝内BMP-2 mRNA表达的影响及意义

目的：探讨局部应用辛伐他汀对拔牙窝内骨形成蛋白(BMP)〖KG-*3〗-2　mRNA表达的影响,阐明其作用机制。方法：选用健康雄性 Wistar大鼠56只,随机分为实验组28只和对照组28只,拔除右下颌中切牙后,实验组即刻植入载辛伐他汀聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)支架材料,对照组植入单纯 PLGA支架材料作为对照,于术后5 d、1周、2周和4周分别处死大鼠,设计针对BMP-2 mRNA的寡核苷酸探针,采用原位杂交技术检测拔牙窝 BMP-2 mRNA的表达。结果：术后5 d,实验组和照组均未见有BMP-2 mRNA阳性表达细胞;术后1周,实验组植入材料和牙槽窝骨壁之间的间充质细胞内可见染色较深的阳性细胞,而对照组偶见染色较浅的阳性细胞;术后2周,实验组在植入材料和牙槽窝骨壁之间的间充质细胞内可见较多颗粒清晰的阳性细胞,新形成的类骨质表面成骨细胞内也有BMP-2 mRNA阳性表达,阳性细胞数明显多于对照组;术后4周,实验组和对照组均可见BMP-2 mRNA阳性表达细胞。术后1周、2周、4周实验组BMP-2 mRNA阳性细胞数明显多于对照组（P<0.05）。结论：局部应用辛伐他汀可通过增加BMP-2 mRNA的表达促进拔牙窝骨损伤的愈合。     

阿那曲唑和他莫昔芬对绝经后乳腺癌患者肝功能的影响

目的观察单独口服阿那曲唑和他莫昔芬对绝经后乳腺癌患者肝功能的影响。方法绝经后乳腺癌患者共14例。实验组患者7例,口服阿那曲唑;对照组患者7例,口服他莫昔芬。所有患者均服药3年。分别于服药前及服药后每6个月检测肝功能的血清学指标。结果两组患者ALT（P=0.038）和GGT（P=0.003）的均数随时间变化均有所下降,差别有统计学意义。口服他莫昔芬组患者AST的水平较口服阿那曲唑组患者的高,差别有统计学意义（P=0.023）;而TBIL和AKP这两个指标水平则是口服阿那曲唑组高于口服他莫昔芬组,差别有统计学意义[TBIL（P=0.027）、AKP（P=0.047）];两组患者各监测指标的每次测量结果均数均在参考值范围之内。结论本次研究证据尚不足以证明阿那曲唑和他莫昔芬能够导致肝功能损伤,甚至引起脂肪肝。     

槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞生长周期及PI3K-Akt-mTOR通路表达的影响

目的 探讨槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞生长周期及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关蛋白表达的影响。方法 取人骨肉瘤MG-63细胞分为对照组和实验组,分别给予0.1%二甲基亚砜、200μg/mL槲皮素处理24 h、48 h、72 h。使用流式细胞仪检测各组细胞的生长周期,运用免疫蛋白印迹法检测各组细胞中Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达水平。结果 干预后48 h,与对照组比较,实验组的G₁期细胞比例增加,而S期细胞比例减少,且p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达水平降低（均P<0.05）。结论 槲皮素可能通过阻断PI3K-Akt-mTOR通路阻滞骨肉瘤MG-63细胞生长,从而发挥抗骨肉瘤效应。     

氟尿嘧啶联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞的抑制作用及其对TRPV5和TRPV6蛋白表达的影响

目的:研究氟尿嘧啶联合顺铂对骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制作用,探讨其对瞬时性受体电位通道5(TRPV5)和瞬时性受体电位通道6(TRPV6)蛋白表达的影响。 方法:常规培养MG-63细胞,以5×10⁴mL^-1的细胞密度种植细胞,实验分为对照组、氟尿嘧啶组、顺铂组及氟尿嘧啶联合顺铂组4组。CCK-8法检测不同时间MG-63细胞的生长抑制情况;分别于24、48和72 h采用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒检测MG-63细胞加入不同药物后的凋亡情况;免疫细胞化学染色法检测MG-63细胞在加药前后TRPV5和TRPV6蛋白的表达情况。结果:氟尿嘧啶和顺铂对MG-63细胞的抑制作用均显著,且随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞中黑色颗粒增多,胞体回缩,细胞老化或死亡。与两药单独或是联用作用于MG-63细胞24 h比较,随着时间的延长,48 h 和72 h两者对细胞的抑制作用明显增强(P<0.05)。与对照组比较,氟尿嘧啶组和顺铂组24、48和72h后凋亡率逐渐增加(P<0.01),随着药物作用时间的延长,细胞凋亡率亦呈升高的趋势。当加入氟尿嘧啶和顺铂72 h后,MG-63细胞表达TRPV5和TRPV6含量较加药前明显降低(P<0.05)。结论:氟尿嘧啶与顺铂联用可以提高MG-63细胞增殖抑制及凋亡作用,同时对MG-63细胞TRPV5和TRPV6表达水平具有明显的抑制作用。     

国产阿那曲唑对绝经后乳腺癌疗效及性激素水平的影响

目的探讨国产阿那曲唑对绝经后乳腺癌疗效及性激素水平的影响。方法选取2013年1月至2015年1月无锡市妇幼保健院收治的绝经后乳腺癌患者110例,根据随机数字表法将患者分为观察组和对照组,各55例。对照组患者应用进口阿那曲唑治疗,观察组应用国产阿那曲唑治疗,用药方法均为每次口服1 mg,每日1次,28 d为1个周期,持续治疗3个周期。观察两组临床治疗效果及性激素水平变化。结果观察组总有效率与对照组比较差异无统计学意义[76.36%(42/55)比72.73%(40/55)](P>0.05)。两组服药3个月、6个月、1年,雌二醇、孕酮、催乳素、黄体生成素水平均较治疗前逐渐降低[对照组:(3.05±0.32)、(2.98±0.35)、(2.85±0.36)ng/L比(3.85±0.45)ng/L,观察组:(3.09±0.38)、(2.92±0.34)、(2.90±0.32)ng/L比(3.82±0.59)ng/L;对照组:(0.70±0.08)、(0.68±0.07)、(0.69±0.06)mg/L比(0.78±0.11)mg/L,观察组:(0.72±0.09)、(0.70±0.10)、(0.68±0.07)mg/L比(0.80±0.10)mg/L;对照组:(2.50±0.21)、(2.48±0.30)、(2.45±0.29)μg/L比(2.68±0.25)μg/L,观察组:(2.52±0.30)、(2.50±0.32)、(2.48±0.30)μg/L比(2.69±0.28)μg/L;对照组:(3.70±0.32)、(3.68±0.28)、(3.67±0.26)U/L比(3.89±0.36)U/L,观察组:(3.80±0.34)、(3.70±0.30)、(3.68±0.28)U/L比(3.90±0.38)U/L],两组在不同时点间差异有统计学意义(P<0.05),两组在组间和组间·不同时点间交互作用比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组、观察组不良反应以Ⅰ~Ⅱ级为主,对照组不良反应发生率为29.09%(16/55),观察组不良反应发生率为25.45%(14/55),差异无统计学意义(P>0.05)。结论国产阿那曲唑对绝经后乳腺癌的疗效与进口阿那曲唑相当,能有效降低患者性激素水平,安全有效,值得临床推广应用。     

siRNA沉默CAPN1基因对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、侵袭及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默钙蛋白酶1（CAPN1）基因对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、侵袭及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法将siRNA序列、CAPN1siRNA序列分别转染MG-63细胞,分为CAPN1siRNA组与siRNA组,以未转染的细胞作为对照组。采用qRT-PCR法检测细胞中CAPN1mRNA表达水平;采用四唑盐比色法检测细胞增殖率;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭率;采用Westernblot法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果CAPN1siRNA组细胞CAPN1mRNA表达水平、在培养12、24、36和48h的增殖率、侵袭率、Bcl-2蛋白表达水平均低于对照组和siRNA组,而Bax蛋白表达水平高于对照组和siRNA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;对照组和siRNA组细胞上述指标比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论siRNA沉默CAPN1表达抑制了MG-63细胞增殖和侵袭能力,并促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

钛表面改性对MG-63细胞分泌和OPG/RANKL表达的影响实验研究

目的检测纯钛钛片表面改性后的表面微型貌对MG-63人成骨样细胞分泌和表达OPG/RANKL mRNA的影响。方法将MG-63细胞传代培养后分别接种于采用砂磨抛光和喷砂-酸碱处理的两种不同钛片表面及对照组玻片表面,收集第2,4,6,8天的细胞采用RT-PCR和real time PCR法检测OPG/RANKL mRNA的表达量,并对结果进行统计学分析。结果具有多孔结构和较大粗糙度的喷砂-酸碱处理组OPG mRNA的表达量高于其余各组(P<0.05);时间点上,第8天的表达量高于前3个时间点,存在统计学差异(P<0.05),随时间延长,表达呈上调趋势。喷砂-酸碱处理组和砂磨抛光组钛片表面的RANKL mRNA的表达量高于对照组(P<0.05);时间点上,在第6天出现峰值后呈下降趋势。结论一定表面粗糙度和微孔结构以及足够的作用时间对OPG/RANKL mRNA的局部表达比有上调优势,表面微型貌和时间对表达有协同作用。     

阿那曲唑对绝经后乳腺癌患者血脂水平的影响观察

目的：观察激素依赖性绝经后乳腺癌患者口服阿那曲唑血脂水平的变化。方法：自2011年1月至2014年8月期间,依据患者雌孕激素受体阳性情况将109例绝经后乳腺癌患者分为治疗组（激素依赖性乳腺癌,口服阿那曲唑）与对照组（非激素依赖性乳腺癌,未予内分泌治疗）,定期检测两组患者的血脂水平：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）。结果：治疗组服药1年后,TC较对照组升高明显,差异有统计学意义;治疗组TG、HDLC、LDLC变化差异无统计学意义。结论：长期口服阿那曲唑的乳腺癌患者应定期监测血脂,对高血脂水平予以干预措施,以降低心血管疾病发生率。     

缺氧对成骨细胞VEGF和BMP-2表达的影响

目的　通过在缺氧条件下大鼠成骨细胞的培养 ,研究体外缺氧环境对成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)和骨形态发生蛋白 - 2 (BMP - 2 )表达的影响 ,为临床骨缺损和骨折治疗等方面提供理论依据。方法从新生SD大鼠颅骨中分离成骨细胞进行培养 ,建立成骨细胞缺氧模型。用免疫组化等方法测量缺氧组和对照组VEGF、BMP - 2的表达。用计算机图像分析系统测量阳性细胞的平均灰度值 ,进行统计学分析。结果　缺氧组VEGF免疫组化染色阳性细胞的平均灰度均低于对照组 ,并随缺氧时间的增加而更加明显 (P <0 0 1) ;BMP - 2阳性细胞的平均灰度在缺氧前 12h低于对照组 ,后逐渐升高 (P <0 0 1) ,即随着缺氧时间的延长VEGF的表达逐渐增加 ,而BMP - 2的表达逐渐减少。结论　体外条件下缺氧可以抑制成骨细胞的增殖 ,成骨细胞表达VEGF增强 ,但抑制BMP - 2的表达。     

转染RECK基因对人骨肉瘤MG-63细胞MMP-2活化及侵袭能力的影响

目的 观察转染RECK基因对人骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及细胞侵袭力的影响.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入MG-63细胞,RT-PCR、流式细胞术检测目的 基因的表达,明胶酶谱法、Matrigel侵袭实验分别检测MG-63细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞生长曲线法观察转染质粒DNA对细胞的毒性作用.结果 转染后RECK基因在MG-63细胞Mrna和蛋白水平分别有稳定高表达;明胶酶谱显示重组质粒转染组MMP一2的活化比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.01),Matrigel侵袭实验显示重组质粒转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.05);而MTT法测重组质粒转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异(均P>0.05).结论 RECK基因过表达可显著减少骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及其侵袭能力,RECK基因可能成为肿瘤治疗的新靶点.     

葛根素对大鼠MSCs增殖及骨向分化中BMP-2 mRNA表达的影响

目的:通过观察葛根素(Puerarin,Pue)对骨髓间充质干细胞(marrow pluripotent stromal stem cells,MSCs)增殖和向成骨细胞(osteoblasts,OB)分化过程中BMP-2 mRNA表达的影响,从分子生物学角度探讨中药防治骨质疏松症的可能机制。方法:采用全骨髓贴壁法,提取MSCs,通过形态学观察及流式细胞仪等方法鉴定所提取的细胞。实验分为空白组、Pue组、经典诱导组。采用MTT法检测Pue最佳促增殖浓度;通过RT-PCR技术检测Pue对MSCs向OB分化时BMP-2 mRNA表达的影响。结果:MTT比色法检测示10-7mol/L、10~(-8)mol/L Pue能够促进MSCs增殖;ALP染色细胞阳性率显示10~(-6)mol/L Pue能够促进MSCs向OB分化;10~(-6)mol/L Pue能够促进MSCs向OB分化过程中BMP-2 mRNA的表达增强。结论:Pue具有促进体外培养MSCs增殖及提高其向OB分化中BMP-2 mRNA的表达能力。