白附子提取物对胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

目的：研究白附子提取物对人SHG-44脑胶质瘤细胞生长的影响,初步探讨白附子对胶质瘤细胞增殖和凋亡的作用机制。方法：培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白对照组和8、40、200及1 000 μg•L^-1白附子提取物组,MTT法检测白附子提取物对SHG-44细胞生长的影响,倒置显微镜观察细胞凋亡形态,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,细胞免疫组织化学法检测Bcl-2与Bax蛋白表达。结果：MTT结果,与空白对照组比较,8和200 μg•L^-1白附子提取物组细胞在30 min和3 h时,细胞增殖均明显受抑制,细胞增殖活性降低（P＜0.05);1 000 μg•L^-1白附子提取物组细胞在30 min、1 h和3 h时,细胞增殖活性均明显降低（P＜0.05）;不同浓度白附子提取物对胶质瘤细胞增殖抑制作用呈剂量-时间依赖性。镜下观察,与空白对照组比较,各药物组细胞均出现数量不等的凋亡小体。流式细胞术分析,部分细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高。细胞免疫组织化学检测,与空白对照组比较,200 μg•L^-1白附子提取物组细胞Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）,Bax蛋白表达增高（P<0.01）。结论：白附子提取物可抑制SHG-44细胞的增殖及诱导其发生凋亡,其作用机制与Bcl-2蛋白表达下降和Bax蛋白表达上升有关。
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穿心莲内酯对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：观察穿心莲内酯（Andro）对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,阐明其作用机制。方法：取对数生长期U87细胞,分为二甲基亚砜(DMSO)对照组、4H-穿心莲内酯(4H-Andro)对照组和Andro组, MTT法检测不同浓度(0、5、10、15、20和25 μmol•L^-1) DMSO 、4H-Andro 及Andro对U87细胞活力的影响,计算U87细胞半数抑制浓度（IC50）;Western blotting法检测各组U87细胞NF-κB蛋白表达强度。结果：通过浓度筛选,Andro平均IC50为8 μmol•L^-1。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol•L^-1 Andro处理24 h后U87细胞增殖活性降低（P<0.01）,增殖抑制率达到50%;Andro处理96 h时,U87细胞增殖活性进一步降低（P<0.01）,增殖抑制率达到65%。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol?L-1 Andro处理48 h后, U87细胞中NF-κB（即磷酸化p65）蛋白表达强度下降（P<0.01）。结论：Andro作为临床上常用的天然抗炎药物,具有抑制胶质瘤细胞增殖的功能,并且可通过靶向抑制NF-κB蛋白表达强度发挥作用。     

银杏叶提取物对U251胶质瘤细胞的促凋亡作用

目的研究银杏叶提取物对U251胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法银杏叶提取物干预U251胶质瘤细胞后,CCK-8观察60、100、150和200、250mg/L不同浓度银杏叶提取物作用下U251细胞的增殖状况,流式细胞仪分析用AnnexinV-FITC和PI双染检测不同浓度银杏叶提取物对U251胶质瘤细胞凋亡的影响。结果银杏叶提取物可抑制U251胶质瘤细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性反应;银杏叶提取物150mg/L、200mg/L干预U251胶质瘤细胞后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率(8.13±1.02、12.37±1.06)明显升高。结论银杏叶提取物可诱导U251胶质瘤细胞凋亡。     

野黄芩苷对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：探讨野黄芩苷（SCU）对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用,并初步阐明其作用机制。方法：培养U87细胞,采用不同浓度（20、40和80 mg·L^-1） SCU处理U87细胞（野黄芩苷组）,同时设空白对照组。MTT法检测各组U87细胞存活率,倒置显微镜观察U87细胞的形态表现,Annexin Ⅴ/PI双染检测各组U87细胞凋亡率,Western blotting法检测各组U87细胞中bax和bcl-2蛋白表达水平。结果：MTT法,与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1SCU组细胞存活率均明显降低（P<0.01）。倒置显微镜观察,与空白对照组比较,80 mg·L^-1SCU组细胞数明显减少,细胞体积变小,细胞间距变大;细胞出现皱缩、脱落,贴壁细胞轮廓模糊。Annexin Ⅴ/PI双染,与空白对照组比较,80 mg·L^-1SCU组细胞晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高（P<0.01）。Western blotting法,与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1 SCU组U87细胞中bcl-2蛋白水平降低,80 mg·L^-1SCU组差异有统计学意义（P<0.01）;与空白对照组比较,80 mg·L^-1 SCU组U87细胞中bax/bcl-2比值升高（P<0.01）。结论：SCU通过上调U87细胞中bax/bcl-2比值诱导细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的生长。     

芳香化酶对胶质瘤细胞系SHG-44细胞生长及分化的作用

目的 在人胶质母细胞瘤细胞系SHG－44细胞中检测到芳香化酶细胞色素P450（AROM）表达的基础上探讨AROM对胶质瘤细胞生长增殖及分化的作用。方法 通过构建反义AROM真核表达载体，转染SHG－44细胞，利用流式细胞仪、MTT法、免疫荧光染色及激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）等技术观察封闭AROM基因表达后细胞生长曲线、细胞周期及中间丝蛋白GFAP和Vimentin表达的变化。结果 成功构建了反义AROM真核表达载体PCI／as-AROM并使AROM的表达封闭达50％以上。SHG－44细胞在转 染了PCI／as-AROM和空载体PCI－neo后，生长曲线、细胞周期无明显变化，但GFAP免疫荧光强度减弱而Vimentin免疫荧光强度增强。结论 反光AROM可能对SHG－44细胞增殖无明显影响但对神经胶质瘤细胞的分化有一定的抑制作用。     

蛋白酶体抑制剂Lactacystin对胶质瘤C6细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：通过观察蛋白酶体抑制剂Lactacystin（LAC）对C6细胞增殖率的影响,探讨LAC引起胶质瘤细胞增殖率发生改变的机制,为临床上治疗胶质瘤提供理论依据。方法：体外培养大鼠胶质瘤C6细胞,选择处于对数生长期的细胞,实验分为对照组、LAC 2.5 μmol/L组、LAC 5.0 μmol/L组及LAC 10.0 μmol/L组,MTT法检测各组C6细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电势,RT-PCR方法检测各组细胞中Bax和bcl-2 mRNA表达,Western blotting方法检测各组细胞中Bax、bcl-2和P65 蛋白表达。结果：与对照组比较,LAC 5.0 μmol/L组和LAC 10.0 μmol/L组细胞增殖率、线粒体膜电势和P65蛋白表达水平降低（P<0.05）,而细胞凋亡率、Bax/bcl-2 mRNA和蛋白的比值增加（P<0.05）。结论：LAC通过诱导细胞凋亡抑制C6细胞的增殖率,其引起凋亡的方式可能是通过线粒体途径,此外在这个过程中NF-κB信号通路也可能影响细胞的增殖率。     

NPPB对人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨氯通道阻断剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡的诱导作用,并阐明其可能的机制。方法：体外培养脑胶质瘤SHG-44细胞,分为对照组及50、100和200 μmol·L^-1 NPPB组。采用MTT法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用免疫组织化学法和蛋白免疫印记法分别检测SHG-44细胞中凋亡蛋白的表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,作用24和48 h,100和200 μmol·L^-1 NPPB组SHG-44细胞活力明显降低（P < 0.01）。流式细胞术检测,100和200 μmol·L^-1 NPPB组细胞凋亡率分别为24.64%和41.85%,高于对照组（4.17%）（P < 0.01）。免疫组织化学和蛋白免疫印记法检测,100 μmol·L^-1 NPPB组SHG-44细胞中caspase-3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05或P < 0.01）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：NPPB可以通过下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达,使caspase-3活化,进而引起SHG-44细胞凋亡。     

五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用及其机制

目的：探讨五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用,阐明其作用机制。方法：培养大鼠脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组及50、100和200mg·L^-1五味子甲素组,采用MTT法检测C6细胞增殖率,流式细胞术分析细胞周期百分率,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养上清中CyclinD1、Bax、Bcl-2和Casepase-3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,24和48h时50、100和200 mg·L^-1五味子甲素组细胞增殖率均明显降低（P < 0.01）,72h时100和200 mg·L^-1五味子甲素组细胞增殖率明显降低（P < 0.05或P < 0.01）。与对照组比较,200 mg·L^-1五味子甲素组SubG₁期细胞百分率升高（P < 0.05）,S期细胞百分率降低（P < 0.05）。与对照组比较,100和200mg·L^-1五味子甲素组细胞CyclinD1蛋白表达水平降低（P < 0.01）,不同浓度五味子甲素组Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05或P < 0.01）,200mg·L^-1五味子甲素组Bcl-2蛋白表达水平降低（P < 0.01）,不同浓度五味子甲素组Bax/Bcl-2比值明显升高（P < 0.01）,200 mg·L^-1五味子甲素组Caspase-3蛋白表达水平升高（P < 0.01）。结论：五味子甲素通过下调CyclinD1蛋白表达水平、上调促凋亡因子Bax和Bcl-2表达水平而抑制C6细胞的生长。     

SF2523对人源脑胶质瘤干细胞TS576增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨PI3K和BRD4双重抑制剂SF2523对人源脑胶质瘤干细胞TS576增殖的抑制作用,并初步阐明其作用机制。方法：培养人源脑胶质瘤干细胞TS576,将其分为对照组和0.25、0.50、1.00、2.00 μmol·L^-1 SF2523组。采用CCK-8法检测各组TS576细胞存活率;将TS576细胞分为对照组和2 μmol·L^-1 SF2523组,利用细胞生长计数法检测各组TS576细胞数;将TS576细胞分为对照组和1及2 μmol·L^-1 SF2523组,采用流式细胞术检测各组不同细胞周期TS576细胞百分比;将TS576细胞分为对照组和1及2 μmol·L^-1 SF2523组,利用Annexin Ⅴ/PI染色法检测各组TS576细胞凋亡率;将TS576细胞分为对照组和1及2 μmol·L^-1 SF2523组,采用Western blotting法检测各组TS576细胞中B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和cyclinD1蛋白表达水平。结果：CCK-8检测,作用24、48和72 h时,与对照组比较,0.25、0.50、1.00和2.00 μmol·L^-1 SF2523组TS576细胞存活率均明显降低（P<0.01）。细胞生长计数法检测,与对照组比较,2 μmol·L^-1 SF2523组细胞数明显减少（P<0.05或P<0.01）。流式细胞术检测,作用72 h时,与对照组比较,1和2 μmol·L^-1 SF2523组G₁期TS576细胞百分比升高（P<0.05）,S期TS576细胞百分比降低（P<0.05）。Annexin Ⅴ/PI染色检测,作用72 h时,与对照组比较,1和2 μmol·L^-1 SF2523组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。Western blotting法检测,作用72 h时,与对照组比较,1和2 μmol·L^-1SF2523组TS576细胞中Bax蛋白表达水平升高（P<0.01）,Bcl-2和cyclinD1蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,Bax/Bcl-2比值升高（P<0.01）。结论：SF2523通过下调cyclinD1表达引起TS576细胞G₁期阻滞,通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达促进TS576细胞凋亡,从而抑制TS576细胞增殖。     

抑制热休克蛋白70表达对人脑胶质瘤细胞生长的影响

目的：探讨抑制热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）表达对脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法利用细胞培养,电子显微镜及流式细胞仪的方法,观察民ＨＳＰ７０表达后对细胞生长的影响。结果体外培养脑胶质细胞株,经不同浓度槲皮素作用不同时间后,碘化丙碇染色荧光显微镜观察发现细胞核固缩、致密和碎裂现象;流式细胞检测发现亚二倍体峰,提示出现细胞凋亡。分析细胞周期,发现凋亡细胞主要出现在Ｇ０－Ｇ１期,随药物浓度的增加而增加     

土槿皮乙酸对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用

目的研究土槿皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用。方法采用MTT法检测0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、8、16 μg/ml PAB对C6细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后细胞周期的变化;皮下注射C6细胞建立C6种植瘤大鼠模型并测量种植瘤体积;免疫组化法测定大鼠脑胶质瘤C6细胞种植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化。结果体外实验结果表明,PAB呈剂量依赖性地抑制胶质瘤C6细胞生长,半数致死剂量(IC50)为0.03 μg/ml,同时,可使C6细胞周期阻滞于G2/M期;体内实验结果表明,PAB给药后大鼠种植瘤体积有所降低,种植瘤组织中PCNA表达呈下降趋势。结论PAB可抑制大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖,阻滞细胞周期中G2/M期、下调PCNA表达为其可能的作用机制。     

胶质瘤中hsa-miR-20a的表达及对细胞增殖的影响

目的探讨hsa-miR-20在胶质瘤中的表达情况及对胶质瘤细胞增殖的影响。方法应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测正常脑组织和不同级别脑胶质瘤组织中miR-20a的表达情况;脂质体转染miR-20a模拟物后,通过MTT比色法及流式细胞术观察胶质瘤U251细胞增殖的变化。结果 (1)与正常脑组织相比,胶质瘤组织miR-20a的表达水平显著增高(P=0.035);(2)胶质瘤组织恶性程度越高,miR-20a表达越高(P<0.001);(3)u251细胞转染miR-20a模拟物后,增殖能力明显加快,S期细胞比例明显增多(P<0.001)。结论 miR-20a能促进胶质瘤细胞的增殖,其高表达在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。     

重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的探讨重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法体外培养人脑胶质瘤细胞,设立对照组与重组人血管内皮抑制素实验组（终浓度分别为50、100、150 ng/ml）,采用MTT法来判定该抑制因子对人脑胶质瘤细胞有无抑制作用。结果对照组OD值为0.302±0.012,实验组的OD值分别为0.284±0.006,0.218±0.014,0.175±0.012,P值均〈0.05。结论重组人血管内皮抑制素能够抑制人脑胶质瘤细胞的增殖且呈剂量依赖性。     

五味子乙素对脑胶质瘤SHG-44细胞VEGF表达水平的影响及其细胞生长抑制作用

目的：探讨五味子乙素（Sch B）作用于脑胶质瘤SHG-44细胞后对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及细胞生长抑制作用,阐明其可能机制。方法：培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组和Sch B　50、100、200 mg•L^-1组,MTT法检测不同剂量Sch B作用SHG-44细胞后其生长情况;酶联免疫吸附实验和细胞免疫组织化学方法观察Sch B作用后SHG-44细胞VEGF蛋白表达情况。结果：与对照组比较,200 mg•L^-1Sch B作用SHG-44细胞24 h,细胞增殖活性轻度增加（P<0.05）;Sch B （50、100 和200 mg•L^-1）作用48或72 h,细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）;200 mg•L^-1Sch B作用SHG-44细胞72 h,培养上清中VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.01）。与对照组比较,Sch B作用SHG-44细胞72 h后,Sch B 50、100和200 mg•L^-1组VEGF蛋白阳性表达率均明显降低（P<0.01）。结论：Sch B能明显抑制SHG-44细胞VEGF蛋白表达及细胞生长,提示Sch B可能通过抑制脑胶质瘤血管生成而发挥抗肿瘤作用。