人骨形成蛋白2反义RNA对骨肉瘤细胞OS-9901生物学活性的影响

探讨骨形成蛋白（BMP）对人骨肉瘤细胞的作用及意义．方法：将重组人BMPZ基因的反义核酸逆转录病毒表达载体PDOR－AB用脂质体导入BMP表达阳性的骨肉瘤细胞OS－99OI，观察骨肉瘤细胞OS－99OI的BMP表达、增殖活性、肿瘤抑制基因＂m23的表达、细胞周期和电镜下形态改变．结果：转染后，OS－99o1细胞中内源性的BMP表达产物明显下降；增殖活性明显下降；肿瘤转移抑制基因＂m23表达未见改变；细胞周期分析表明：GI期细胞比例上升，S期比例下降；电镜观察可见细胞质中溶酶体增多，染色质有断裂现象．结论：反义核酸技术阻断BMPZ在OS－99o1细胞中的表达后，肿瘤细胞的增殖活性降低，证实骨肉瘤细胞中BMP的表达增加了肿瘤细胞的增殖活性．     

锂对A549细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨氯化锂（lithium chloride，LiCl）对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的A549细胞在细胞增殖和细胞周期方面的影响。方法以不同浓度的LiCl作用A549细胞24h后，采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测各组细胞的增殖活性；利用流式细胞术进行细胞周期分析；免疫细胞荧光技术检测糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase3β，GSK3β）在各组细胞中的表达；并通过Western blot检测LiCl对GSK3β、磷酸化GSK3β（p—GSK3β）及CyclinD1蛋白质表达水平的影响。结果LiCl能提高A549细胞的增殖活性。且随着LiCl浓度的升高，处于G1期的细胞数量减少，而S期细胞数量增多，与正常对照组相比，差异具统计学意义（10mmol／L组：P〈0．05；20mmol／L组：P〈0．01）。LiCl能使GSK3β表达降低而无酶活性的p-GSK3β表达升高；同时上调CyclinD1的表达水平。结论LiCl能加快A549细胞的G1／S期转换并促进增殖，GSK3β的活性受抑从而减少Cyclin D1的降解是其可能的机制。     

抗原致敏的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌细胞杀伤活性的研究

目的：观察肝癌细胞抗原致敏的树突状细胞（Dendritic cells,DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer cells,CIK）共培养后的细胞增殖活性、表型的变化及其对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。方法：采集健康供者的外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMNC）,常规诱导出DC、CIK,用肝癌细胞HepG2抗原冲击DC（Ag-DC）,并将其与CIK共培养（Ag-DC-CIK）,观察CIK和Ag-DC-CIK的细胞表型及增殖活性,并以肝癌细胞HepG2作为靶细胞,用MTT法检测CIK和Ag-DC-CIK的杀伤活性。结果：肝癌细胞抗原致敏的DC与CIK细胞共培养后,Ag-DC-CIK细胞群增殖活性明显增强,且高表达CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞,其增殖活性和杀伤活性较单纯的CIK细胞更高（P<0.05）。结论：肿瘤抗原致敏的DC与CIK共培养获得的Ag-DC-CIK增殖活性和对肝癌细胞的杀伤活性显著高于CIK细胞。     

非小细胞肺癌ras—p21蛋白表达与细胞DNA倍体的关系

目的：分析非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达与细胞ＤＮＡ含量和增殖活性的关系。方法：用ＡＢＣ免疫组织化学方法研究ｒａｓ－ｐ２１蛋白在３０例ＮＳＣＬＣ中的表达，以超过２０％的癌细胞着色为阳性。用流式细胞术检测细胞ＤＮＡ含量并计算增殖指数。结果：２３例异倍体和７例二倍体ＮＳＣＬＣｒａｓ－ｐ２１蛋白表达的阳性率无明显差别（６５．２％对８５．７％，Ｐ＝０．３０）。２１例ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达阳性和９例阴性的ＮＳＣＬＣ，其增殖指数无明显差别，［（２４．５５±５．８７）％对（２３．３２±４．６８）％，Ｐ＝０．５９］。结论：ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达与ＮＳＣＬＣ细胞ＤＮＡ含量和增殖活性无关，而与细胞的终末分化有关。     

增殖细胞核抗原、ras癌基因产物P21与白血病的相关性

目的探讨急性白血病及骨髓增生异常综合征（MDS）患者增殖细胞核抗原（PCNA）、ras-P21表达的相关性及其临床意义。方法采用单克隆抗体免疫细胞化学染色技术（SP法）检测33例急性髓细胞白血病（AML）、18例急性淋巴细胞白血病（ALL）、25例MDS及10例正常人的增殖细胞核抗原（PCNA）及ras-P21的表达，分析其相关性。结果AML、ALL及MDS PCNA的阳性率分别为62％，56％和53％，三者阳性率差别无统计学意义（P〉0．05）。AML与ALL、AML与MDS的PCNA表达强度（阳性细胞％）差别无统计学意义（X^2值分别为2．027和0．5217）。2例半年内转化成AML的MDS患者为PCNA高表达。17例ras-P21阳性者均有PCNA表达。结论ras-P21和PCNA共同表达的白血病细胞增殖活性及恶性增殖的潜能更高，ras-P21和PCNA综合检测对于白血病细胞增殖活性和预后分析可能具有参考价值。     

大鼠表皮角化细胞Cx43表达和细胞增殖活性的关系

目的：研究大鼠前肢表皮角化细胞Cx43的表达和细胞增殖活性的拓扑学分布特点及二者间的关系。方法：常规石蜡切片,利用Cx43和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）免疫组化法,分析单位面积表皮细胞中Cx43表达的长度（LA）和PCNA阳性细胞核的百分率。结果：在水平方向上5 mm范围内,表皮细胞Cx43的表达随部位而异,且在距离始端大约3.0～4.5 mm处Cx43表达丰富。同时,在水平方向上10 mm范围内,角化细胞的增殖活性随部位而异,且增殖活性类似的角化细胞各自聚集成群,其直径大小约为10－3 m数量级;并在距离始端约3.0～4.0 mm处是角化细胞增殖活性低的位置。结论：大鼠表皮角化细胞间Cx43表达丰富处同时也是角化细胞增殖活性低的位置。     

用PCNA和AgNoRs评价颊癌生长前沿细胞增殖活性及其与淋巴结转 …

目的：探讨颊癌生长前沿细胞的增殖活性及其与淋巴结转移的关系。方法：用抗ＰＣＮＡ和ＡｇＮｏＲｓ染色分析４０例有、无转移颊癌中生长前沿区细胞和中央区细胞的增殖活性。结果：生长前沿区细胞的增殖活性高于中央区（Ｐ〈０．０５），有转移组前沿区细胞的增殖活性高于无转移组（Ｐ〈０．０５），结论：检测颊癌生长前沿区细胞的增殖活性，有助于预测颊癌的浸润转移能力，判断患者的预后。     

Cdk1在HepG2细胞的表达及活性对肝癌细胞凋亡的影响

目的观察Cdk1蛋白表达及其活性对肝癌细胞凋亡的影响。方法克隆Cdk1基因质粒和Cdk1siRNA,并将其转染到肝癌HepG2细胞中,另外应用roscovintine（Cdks的抑制剂）刺激细胞,然后给予紫外线（UV）照射。用Western Blot检测转染的Cdk1蛋白的表达,用核素标记测定其活性;用HO 33342（Hoechst 33342）的免疫荧光染色细胞核判断细胞凋亡的情况。分析Cdk1蛋白表达及活性对肝癌细胞凋亡的影响。结果 Cdk1可以在HepG2良好地表达;Cdk1siRNA可以有效地沉默Cdk1的表达;roscovintine可抑制Cdk1的活性;细胞凋亡率在roscovintine刺激细胞时最高比较Cdk1转染细胞组和Cdk1siRNA转染细胞组（P〈0.01）,在Cdk1转染细胞高于Cdk1siRNA转染细胞组（P〈0.01）和空载体转染细胞组（P〈0.05）,在Cdk1siRNA转染细胞最低。结论过度表达Cdk1可以增加肝癌细胞死亡,抑制肝癌的增殖。抑制Cdk1活性可更有效增加肝癌细胞死亡,抑制肝癌的增殖,可望成为研究和探讨肝癌靶点之一。     

用PCNA和AgNoRs评价颊癌生长前沿细胞增殖活性及其与淋巴结转移的关系

目的：探讨颊癌生长前沿细胞的增殖活性及其与淋巴结转移的关系。方法：用抗PCNA和AgNoRs染色分析叙例有、无转移颊癌中生长前沿区细胞和中央区细胞的增殖活性。结果：生长前治区细胞的增殖活性高于中央区（P＜0．05），有转移组前治区细胞的增殖活性高于无转移组（P＜0．05）。结论：检测颊癌生长前治区细胞的增殖活性，有助于预测颇癌的浸润转移能力，判断患者的预后。     

尿激酶型纤溶酶原激活物对毛囊外根鞘细胞增殖的影响

目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活物（Urokinase-type plasminogen activator,uPA）对体外培养的毛囊外根鞘（Outer root sheath,ORS)细胞增殖的作用。方法：体外培养了小鼠ORS细胞；用MTT法研究了uPA促进因子肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor,HGF)和uPA抑制因子Amiloride处理后ORS细胞地增殖变化。结果：体外培养的ORS细胞有uPA表达；HGF可促进uPA mRNA的表达并促进ORS细胞的增殖；Amiloride抑制uPa mRNA表达并抑制ORS细胞增殖。结论：毛囊ORS细胞表达uPA,HGF促进uPA的表达并促进ORS细胞增殖，Amiloride通过抑制uPA的表达和其活性抑制ORS细胞的增殖。     

RNA干扰iNOS基因对腺样囊性癌细胞增殖活性的影响

目的：采用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术下调腺样囊性癌细胞株ACC-M中iNOS的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖活性的影响。方法：采用siRNA干扰技术下调iNOS表达,RT-PCR法测定细胞内iNOS mRNA的表达;MTT法测定ACC-M细胞增殖活性的变化。结果：与对照组比较,iNOS的siRNA能有效地抑制实验组ACC-M细胞中iNOS的表达（P〈0.05）,并且实验组细胞的体外增殖活性降低（〈0.05）。结论：RNA干扰iNOS可以降低腺样囊性癌的增殖活性。     

米托蒽醌对人卵巢癌COC1细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的：研究米托蒽醌（Mitoxantrone,MXT）对人卵巢癌COC1细胞体外增殖与凋亡活性,及凋亡相关基因Mcl-1表达的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的MXT对COC1细胞体外增殖活性的影响;流式细胞分析方法（FCM）定量检测不同浓度的MXT作用后COC1细胞的凋亡率;Western-blot检测active caspase-3蛋白和Mcl-1蛋白定量;RT-PCR检测Mcl-1 mRNA的表达变化。结果COC1细胞生长抑制率和凋亡率均随MXT浓度的增加递增（P〈0.05）;COC1细胞生长抑制率随MXT作用时间的延长而增高（P〈0.05）;active caspase-3蛋白水平随着MXT作用浓度增高递增（P〈0.05）;Mcl-1 mRNA和蛋白表达水平随着MXT作用浓度增高递减（P〈0.05）。结论米托蒽醌能抑制卵巢癌COC1细胞的增殖,诱导其凋亡,此作用可能与MXT抑制COC1细胞中的Mcl-1表达有关。     

雌激素受体β亚型对人乳腺癌细胞株生物学特性的影响（摘要）

目的探讨雌激素受体β亚型（ERβ）对人乳腺癌细胞株生物学特性的影响和作用机制。方法构建ERβ稳定高表达的MDA—MB-435细胞株。运用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术和Transwell等方法，观察不同雌激素浓度下ERβ对该细胞株增殖、侵袭和转移特性的影响。采用RT—PCR和（或）Westernblot、明胶酶谱技术检测相关基因的表达水平。结果ERB可显著提高MDA—MB-435细胞的增殖速度和侵袭迁徙能力，且呈非雌激素依赖性。与对照细胞相比，ERβ高表达的细胞s期比例显著增多（P=0．01）；β21 mRNA表达水平降低33．3％（P=0．03），蛋白表达水平降低47．4％（P=0．02）；基质金属蛋白酶（MMP）-9mRNA表达水平增高91．3％（P〈0．01），活性增高67．3％（P=0．02）；Ets-1 mRNA表达水平增高62．2％（P=0．01），蛋白表达水平增高51．0％（P=0．01）；cyclinA、cyclinE、cyclinD1、MMP—1、MMP-2、MMP-7、血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在mRNA水平未见明显差异。结论ERβ有促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的作用。降低β21的表达、增加Ets—1和MMP-9的表达并增强MMP-9的活性是其可能的作用机制之一。     

脂联素受体AdipoR1对肺癌细胞PC9增殖和迁移的影响

目的：观察过表达或敲低人脂联素受体1（AdipoR1）对肺癌细胞PC9增殖和迁移的影响,阐明AdipoR1对肺癌的调控作用。方法：逆转录聚合酶链反应（RT?PCR）检测AdipoR1在PC9细胞及正常人支气管上皮细胞HBEC中的表达量;利用分子克隆的方法构建AdipoR1过表达和shRNA干扰载体,转染至PC9细胞中并采用RT?PCR和Western blot方法检测AdipoR1的表达情况。运用CCK8方法和划痕愈合实验检测AdipoR1激动剂AdipoRon、AdipoR1过表达及AdipoR1敲低对PC9细胞的增殖和迁移活性的影响。结果：RT?PCR结果显示AdipoR1在PC9细胞中的表达量明显降低（P < 0.05）。RT?PCR和Western blot结果显示AdipoR1过表达的PC9细胞中AdipoR1 mRNA和蛋白的表达量明显高于空载体细胞（P均<0.05）,AdipoR1干扰组AdipoR1表达量明显低于阴性对照细胞（P均<0.05）。CCK8和划痕愈合实验结果显示,在24 h和48 h时,与溶剂对照组相比,AdipoRon能显著降低PC9细胞的增殖和划痕愈合率,过表达AdipoR1的PC9细胞增殖和划痕愈合率明显低于空载体细胞,而AdipoR1敲低能明显促进PC9细胞的增殖和划痕愈合率（P均<0.05）。结论：AdipoR1激动剂AdipoRon或AdipoR1过表达能抑制肺癌细胞PC9的增殖和迁移活性,而AdipoR1敲低则能明显促进肺癌细胞PC9的增殖和迁移。     

TLR4对胃癌细胞放射敏感性的影响探讨

目的探讨Toll样受体4（TLR4）对肿瘤细胞放射敏感性的影响。方法小鼠胃癌细胞株MFC分别经脂多糖（LPS）、瑞沙托维（TAK-242）和磷酸缓冲液（PBS）处理后进行5Gy照射和0Gy照射,分析MFC细胞TLR4表达情况、增殖活性、放射敏感性、凋亡率和细胞周期变化。结果 MFC细胞经5Gy X射线照射24h后TLR4表达水平显著下降;增殖活性、放射敏感性显著下降,凋亡率显著升高;细胞阻滞于G2/M期。经TAK-242和LPS处理后增殖活性、放射敏感性等均发生不同程度改变。结论 TLR4可对胃癌细胞放射敏感性产生较大影响。     

抗原负载的DC和CIK共培养后对MGC-803的杀伤活性

【目的】研究负载抗原后的树突状细胞（DC）对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）增殖活性、表型和功能的影响。【方法】分离外周血单个核细胞（PBMC），经不同细胞因子作用后定向分化成DC和CIK细胞，以胃癌细胞株MGC-803冻融物作为肿瘤抗原刺激DC后与CIK共培养，以流式细胞仪检测CIK细胞膜表面分子表达，MTT法检测共培养后CIK细胞对MGC-803杀伤活性的变化。【结果】CIK与负载MGC-803抗原的DC共培养后3d增殖活性开始显著提高，最高增殖倍数可达1179．5±1．29；CD3^＋CD8^＋和CD3^＋CD56^＋细胞较共培养前增多，且与负载抗原的DC共培养的CIK具有比单独培养的CIK更强的杀瘤活性。【结论】以肿瘤细胞冻融物诱导成熟的DC能进一步促进CIK增殖，提高其对胃癌细胞的杀伤活性，为指导临床应用DC和CIK联合治疗消化道肿瘤提供了实验依据。     

MicroRNA-630 对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制研究

研究 MicroRNA-630（miR-630）是否通过下调 4 影响三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-231）细胞的增殖。方法 转染 miR-630mimic 和 miR-NC 至离体培养的 MDA-MB-231 细胞中,Western blot检测 MDA-MB-231 细胞中 27、 67、 4 的表达情况,MTT 法检测细胞增殖情况,利用荧光素酶素实验验证 4 是 miR-630 的靶基因;再通过转染过表达 4 的质粒至 MDA-MB-231 细胞,检测 MDA-MB-231细胞中 27、 67、 4 的表达情况,MTT 法观察细胞增殖情况。结果 相比于空质粒组,转染 miR-630-mimic 后,MDA-MB-231 细胞中 Ki67、Sox4 的表达减少（ <0.05）,27 表达增加（ <0.05）,MDA-MB-231细胞的增殖减少（ <0.05）;荧光素酶试验结果显示,miR-630 能够降低 4-3''-UTR 质粒的荧光素活性（ <0.05）;相比于 miR-630+ 空质粒组,转染过表达 4 质粒后,MDA-MB-231 细胞中 67 表达增加（ <0.05）,27 表达减少（ <0.05）,细胞的增殖增加（ <0.05）。结论 miR-630 可以通过下调 4 从而抑制MDA-MB-231 的增殖。     

PD-1/ICOS信号转换受体通过增强CD19-CAR-T细胞增殖能力提高其对DLBCL的杀伤活性

目的 探讨共表达PD-1/ICOS信号转换受体通过增强靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞（CD19-CAR-T细胞）增殖能力提高其对弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）产生的抗肿瘤活性。方法 慢病毒感染法构建CD19-CAR-T细胞（bbz）以及共表达PD-1/ICOS信号转换受体的CD19-CAR-T细胞（PD-1/ICOS-bbz）；流式细胞术检测长期共孵育后T细胞CD69的表达；通过细胞计数检测CAR-T细胞的增殖情况;LDH法检测CAR-T细胞对靶细胞的细胞毒性；活体成像检测小鼠体内肿瘤细胞的生长情况；流式细胞术检测外周血中T细胞的比例。结果 成功构建bbz及PD-1/ICOS-bbz；长期共孵育后，PD-1/ICOS-bbz较bbz CD69表达水平更高，增殖能力及对靶细胞的细胞毒性均显著提高（P＜0.01）；PD-1/ICOS-bbz可以完全清除小鼠体内的淋巴瘤细胞，且PD-1/ICOS-bbz较bbz而言可以显著延长小鼠生存期（P＜0.01），同时PD-1/ICOS-bbz较bbz具有更强的体内增殖能力(P＜0.05)。结论 PD-1/ICOS-bbz较传统的二代CAR-T细胞具有更强的抗肿瘤活性，有望成为一种潜在的弥漫大B细胞淋巴瘤的治疗方案。     

熊果酸对喉癌 Hep-2细胞侵袭的影响及机制研究

目的：探讨熊果酸对人喉癌 Hep‐2细胞侵袭能力的影响及机制。方法不同浓度熊果酸处理人喉癌 Hep‐2细胞不同时间后,采用 M TT 法检测细胞的增殖活性,Boyden chamber 检测细胞的侵袭能力,Western blot 检测周期相关基因 NF‐κB蛋白表达的变化。明胶酶谱检测细胞培养上清液基质金属蛋白酶（MM P）‐9和 MMP‐2活性的变化。结果熊果酸对人喉癌Hep‐2细胞的生长具有明显的增殖抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性（P＜0．01）。 Boyden chamber 结果显示以熊果酸处理 Hep‐2细胞后,侵袭能力呈浓度依赖性下降（P ＜0．01）。 Western blot 结果显示熊果酸对人喉癌 Hep‐2细胞 NF‐κB蛋白表达呈浓度依赖性下调（P＜0．01）。明胶酶谱结果显示熊果酸对人喉癌 Hep‐2细胞 MM P‐9和 MMP‐2活性呈浓度依赖性下调（P＜0．01）。结论熊果酸通过降低 MMP‐9和 MMP‐2活性及 NF‐κB 蛋白表达来抑制人喉癌 Hep‐2细胞的增殖和侵袭。     

AMPK经过mTOR途径对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的  通过研究单磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）对血管平滑肌细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达及活性的影响,探讨AMPK影响血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用途径,为防治血管平滑肌细胞的异常增殖提供新的理论依据。 方法  组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMC,经不同浓度（0.1、0.25、0.5、1.0mmol/L）5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸（AICAR）干预后,用MTT法检测VSMC增殖的变化;用Western blot检测VSMC的p-AMPK的表达;用RT-PCR检测VSMC的mTOR的mRNA的表达,并用Western blot检测p-mTOR表达的改变。 结果  ①与对照组相比,0.1～1mmol/L的AICAR均呈时间剂量依赖性的抑制VSMC的增殖（P＜0.05）;②0.5mmol/L的AICAR可以引起胞内活性p-AMPK的表达;③与对照组相比,AICAR干预组mTOR的mRNA表达及p-mTOR的活性明显受到抑制（P＜0.05）。结论  AICAR可以激活VSMC中AMPK,激活的AMPK可能通过mTOR的途径抑制VSMC的增殖。