α_2-巨球蛋白的提纯及其抗血清制备

<正> α_2-巨球蛋白(Alpha-2-macroglobulin,简称α_2M)是血中具有生物活性的大分子糖蛋白,分子量725,000,沉降系数17～20s,人体正常含量200±60mg/dl,在一定条件下可解离成四个亚单位。最近十年来,α_2M 在人     

运动神经-肌肉接点的突触前α-受体属于α_1-受体

Langer曾按α-受体的分布将突触后α-受体划分为。α_1-受体,将突触前α-受体划分为α_2-受体。根据α-受体与选择性激动剂和/或阻断剂的相互作用,已有大量证据表明,静脉平滑肌等效应器细胞上存在突触后α_2-受体。同样,亦有证据提示,突触前膜上的α-受体亦不仅限于α_2-受体。 最近,Snider等在大鼠膈神经-膈制备发现,去甲肾上腺素(NA,50μM)可使刺激膈神经引起的乙酰胆碱(Ach)释放增加183％;非选择性α-受体阻断剂酚妥拉明(10μM)和选择性α_1-受体阻断剂WB4101(10μM)予处理可完全阻断NA引起的Ach释放增加;     

恶性疟原虫保护性单克隆抗体的分离和纯化

为制备亲和吸附剂,提取恶性疟原虫保护性抗原,我们用ProteinA亲和吸附柱,自小鼠腹水中提取抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。腹水上柱后,用0.1M PBS洗涤杂蛋白,用0.1M醋酸洗脱吸附的McAb。洗脱液经透折。浓缩后,用SDS—PAGE鉴定纯度,免疫荧光及双扩散试验检测其活性。 四个杂交瘤株(9_4D_1,9_4C_3,9_2D_4,9_3A_3)的腹水共60.3ml,过柱后收获McAb153.9mg,平均每毫升腹水可得2.25mg McAb,SDS—PAGE电泳图谱上显示二条区带,     

大鼠抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性定鉴

将人血红蛋白(Hb)免疫LOU/M(IgK-1a)大鼠,取脾细胞与IR983F大鼠骨髓瘤细胞融合,制备了3株大鼠抗Hb单克隆抗体(McAb)2A10、9B5,4F12杂交瘤细胞株。3种McAb腹水效价分别为1:16×10~4、1:3.2×10~4、1:323×10~4。培养上清效价分别为1:256、1:16、1:8。亚类测定分别为IgM、IgG2_a、IgG2_4、染色体记数2A10为60±5,9B5为72±6。3种McAb的亲和常数分别为1.28×10~6M~(-1)、6.35×10~7M~(-1),3.64×10~8M~(-1)。特异性检测表明3种McAb与人Hb及人红细胞的亲和力明显高于其它种类动物的红细胞,与无关蛋白无结合活性。用这些McAb检测Hb最低可测到1υg水平,检测人红细胞可检测到4～8个RBC/ml(相当于90～190ngHb/ml)。大大高于目前临床常用的测定潜血方法。     

猪血浆α_2巨球蛋白的提取

<正> α_2巨球蛋白(α_2M)天然存在于人和动物血浆中,是多种蛋白酶抑制剂,Berenblun等用以治疗动物辐射损伤,认为可以促进造血组织恢复,减少动物死亡。国内翁志根等用人α_2M制剂治疗辐射烧伤病人,促进了经久不愈创伤面的愈合,为探讨其作用机理,     

α-抗胰蛋白酶Pi~F等位基因与肺部疾病相关吗?

人类α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)属蛋白酶,它是肝脏合成的抑制性血浆蛋白质。现已鉴定出许多种α_1-AT遗传变异体,这些变异体受Pi等位基因控制,最常见的等位基因是Pi~(M1)、Pi~(M2)和Pi~(M3)。另三种罕见的等位基因(Pi~O、Pi~Z和Pi~S)与血清α_1-AT水平减低有关。Pi~O纯合子的个体,血清α_1AT水平极低。而Pi~Z和Pi~S等位基因纯合子个     

α_2-巨球蛋白(α_2M)对白细胞促凝血活性的影响

<正> α_2M是血液中一种具有重要生物学活性的大分子糖蛋白,由四个结构与分子量均相同的亚单位组成,由淋巴细胞、单核细胞及成纤维母细胞合成和释放。在体外实验中α_2M能改变网状细胞对各种刺激的反应,并在白细胞与红细胞生成过程中起作用。近年来研究发现,α_2M是血浆中一种重要的蛋白酶抑制因子,可抑制四种内肽酶活性。α_2M     

人α2巨球蛋白基因的克隆及其诱导区和巯基酯部位两个功能区域突变的检测

α_2-巨球蛋白(α2M)是人血浆中主要的蛋白酶抑制因子,它能抑制范围很广的人及细菌内肽酶。尽管目前对其分子结构和抑制功能有所了解,但是其体内功能以及在人类疾病致病机制中可能的作用还不为人知。我们知道,另外一种血浆主要蛋白酶抑制因子α_1抗胰蛋白酶(α1AT)的遗传缺陷,     

脂蛋白(α)单克隆抗体对抗原决定簇的测定及应用研究

应田淋巴细胞杂交瘤技术,建立了4株抗人血清脂蛋白(α)(LP(a))杂交瘤细胞株(BH6、BH7、BH11和BH21),并以制备的单克隆抗体(McAb)对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ig亚类测定:BH6为IgG1,BH7、BH11和BH21均为IgG2a,腹水效价为1×10~(-7)。特异性测定:LP(α)McAb与载脂蛋白(apo)AⅠ、AⅡ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E,人血清白蛋白,纤维蛋白溶酶原(pg)没有交叉反应。单抗相加试验和双抗体竞争试验结果证实,BH6和BH21为识别LP(α)上同一抗原决定簇的McAb;BH7和BH11则为针对LP(α)上另一抗原决定簇的McAb。分别利用单株和混合株McAb标记酶建立了可应用于人血清LP(α)含量测定的ELISA双抗体夹心法。     

单克隆抗体介导异种巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

本文研究了抗人胃癌McAb 1D_1-2在体外介导异种巨噬细胞(Mφ)对肿瘤细胞的杀伤作用。 材料与方法:(1)异种Mφ取用正常BALB/c小鼠腹腔Mφ,分别配成四种浓度。(2)选用胃癌细胞(GGC-8140)和喉癌细胞(Hep-2)两种肿瘤细胞作为靶细胞。(3)胃癌McAb 1D_1-2是本室利用淋巴细胞杂     

α_2-巨球蛋白的细胞因子载体效应

α_2-巨球蛋白(α_2M)在蛋白水解酶或其它因素作用下,使其分子内部硫醇酯键发生裂解,形成巯基和酰基,由此可与含有巯基的细胞因子通过二巯键结合成复合物,此时α_2M 出现细胞因子载体效应。现已发现α_2M 可作为巨噬细胞活化因子(MAF)、血小板来源的生长因子(PDGF)、血小板来源的转化生长因子-β(TGF-β)、β-成纤维细胞生长因子(β-FGF)、IL-β和IL-6的载体蛋白。当它们各自与α_2M 形成复合物后,其结果表现为延长IL-6的血浆半衰期,加速TGF-β从血液循环中排除,使IL-1β活性呈“隐蔽”状态。对MAF、PDGF、β-FGF 的活性也有不同影响。     

血浆蛋白酶抑制剂α_2-巨球蛋白(α2M)和α2M蛋白酶复合物对自然杀伤和抗体依赖性细胞介导细胞毒的抑制作用

近来的一些报导已经指出细胞免疫机制能被自然发生的蛋白酶抑制剂所抑制,而且蛋白酶和蛋白酶抑制剂之间的平衡在免疫调节上起一定作用.两种主要的血清蛋白酶抑制剂是α_1-蛋白酶抑制剂(α_1-抗胰蛋白酶)和α2M.已知α2M存在于淋巴细胞和单核细胞表面而且由单核细胞和B细胞亚群产生.α2M在体外可抑制包括混合淋巴细胞反应(MLR)、有丝分裂原刺激和母细胞化的免疫反应.α2M可分成快的α2M和慢     

抗α-苦瓜素单克隆抗体的制备与鉴定

用α-苦瓜素(α-MMC)免疫小鼠(BALB/c),分离免疫脾细胞,采用聚乙二醇(PEG)法将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗α-MMC素的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Mabselect亲和层析纯化McAb,所得McAb经亚类鉴定为IgG2b亚类,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测,所得McAb与α-MMC特异反应,与相同来源的MAP30无交叉反应,为深入研究α-MMC的结构与功能提供了检测手段。     

分泌抗α_2-巨球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系建立

<正> α_2-巨球蛋白(α_2-M)是人血清中α球蛋白的一种重要成分,含量约为血清总蛋白含量的3％,分子量82万左右。α_2-M有抑制多种蛋白分解酶和活化生长激素与胰岛素的作用,参予免疫调控,并可能具有抗放射性损伤的作用。     

慢性肺疾患和血浆α_2-巨球蛋白缺乏患者α_2-巨球蛋白基因改变的检测

α_2-巨球蛋白(A2M)是人体血浆中一种重要的非特异性血浆蛋白酶抑制因子,能抑制大部分肽链内切酶,对调节肺内蛋白酶的活性,尤其对不受α_1-抗胰蛋白酶抑制的蛋白酶可能起作用。它在人类的肝细胞、肺     

抗人IgM重链单克隆抗体的特性分析

本文报道取正常人混合血清纯化IgG,经断链后获得(Fc)5μ片段作为免疫原免疫动物,应用杂交瘤技术获得16株分泌抗人IgG McAb的细胞株。用琼脂双扩散、免疫电泳、ELISA等方法证实所分泌的McAb对人IgM呈高特异性。杂交瘤细胞诱生腹水的抗体效价在双扩散试验中可达1:256,在ELISA中可达10_(-7)。用被动血凝抑制试验及ELISA试验比较了其中4种McAb(M_5)、M_(1 2)、M_(2 3)、M_(2 5))的抗原结合力大小,表明M_(1 2)有较高亲和力。用ELISA固相竞争试验分析。证明该4种McAb针对同一抗原的不同决定簇。该16种McAb除M_(2 2)为IgA外,其余均属IgG1亚类。     

重组细胞分泌可溶性IL-2R的动态检测及放免分析

ELISA检测表明:重组CHO细胞产生的IL-2Rα分子主要分布在细胞膜上,少量分泌到膜外成为可溶性IL-2R(sIL-2R)。sIL-2R产生的时相与膜IL-2Rα相似,但后者有一个较长的高浓度稳定期。此结果提示:膜IL-2Ra代谢比培养液中sIL-2R明显活跃,但sIL-2R的水平并不随膜IL-2Rα含量增加而改变,sIL-2R这种恒定的代谢方式可能包含着独特的免疫生物学意义。放免受体分析表明:重组IL-2Rα的最大结合容量(Bmax)为33000/细胞,KD为1.5×10~(-11)M。大剂量IL-2才能阻断Wu69McAb与IL-2Rα的结合。提示:IL-2与Wu69 McAb结合IL-2Rα的位点虽然不同,但可能十分靠近。     

T200类糖蛋白参与人T细胞旁路活化途径

T细胞可通过T细胞受体和CD_2旁路途径活化。为了研究影响T细胞旁路活化途径的细胞表面分子,作者检测了分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤上清对anti T11_2+anti-T11_3(anti T11_(2/3)刺激的T 细胞旁路活化途径的影响。结果发现,名叫TA/211的McAb 其本身并不激活T 细胞增殖,但能引起亚适量的anti T11_(2/3)刺激T 细胞产生强烈的增殖反应,经免疫沉淀和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现,TA/211从静止T 细胞沉淀分子量为180KD、190KD、200KD 和220KD 的四条带上,表明TA/211识别人CD45分子上的共同抗原决定簇。有     

分泌抗α_2-巨球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系建立

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,α_2-M)是人血清中α球蛋白的一种重要成分。含量约占血清总蛋白量的3％,分子量82万左右,α_2-M有抑制多种蛋白分解酶和活化生长激素与胰岛素的作用。参予免疫调控,具有抗放射性损伤的作用。最近我们用细胞融合技术建立了分泌抗α_2-M单克隆抗体的杂交瘤细胞系,本文就这一细胞系的建立情况及初步鉴定结果报告如下:     

癌胚抗原单克隆抗体放射免疫分析和临床初步应用

本文报道 应用杂交瘤技术,获得了8种CEA单克隆抗体(McAb),这8种McAb经~(125)I标记NcA,NFA,NcA(J)抑制试验,证明是什对CEA抗原决定簇的,取其中的三种McAb混合后,其亲和常数为2×10~(-8)M,应用此混合McAb检测239例人次血清标本、85例正