游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L,线性范围为0．14—120nmol／L,回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

超敏C-反应蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:血清超敏C-反应蛋白(CRP)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法的建立. 方法: 采用双抗体夹心法检测血清CRP水平(1株抗CRP的单抗用于包被微孔板,另1株抗CRP的单抗用于Eu3 标记). 结果: TRFIA的线性测量范围为1～1000 mg/L,灵敏度为0.06 mg/L,批内和批间精密度分别为4.0%～7.2%,6.7%～10.8%. 与人IgG和白蛋白未见明显的交叉反应. 109份血清标本用本方法与国外试剂盒同时检测,其相关系数为0.916. 结论: CRP-TRFIA各项指标均达到临床检测要求,可替代国外产品试剂盒,用于临床血清CRP的测定.     

乙肝五项时间分辨免疫荧光分析与PCR-HBV定量的关系

目的 研究乙肝血清标志物时间分辨免疫定量检测结果与HBV-DNA定量之间的关系.方法 将 200例血清标本同时采用时间分辨免疫荧光定量和实时荧光定量PCR 技术,对乙肝五项含量和HBV - DNA 含量分别进行检测, 按照不同的乙肝病毒标志模式情况分组后,进行乙肝病毒标志物与HBV-DNA的分析研究.结果 乙肝病毒标志物 HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组HBV–DNA检出率为98.7%, HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组检出率59.3%, HBcAb单项阳性组检出率50%,HBsAb阳性组检出率0,全阴性组检出率0.结论 时间分辨免疫荧光分析与HBV–DNA关系密切,两者联用能更好的满足临床需求.     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价.结果试剂盒的可测范围为l～1 000 U/ml,灵敏度为0.17 U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%～5.9%,3.7%～6.5%.与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应.稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7 d.426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～12 U/ml.用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995.结论试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的 研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒的可测范围为1~1 000U/ml, 灵敏度为0.17U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%~5.9%,3.7%~ 6.5%。与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7d。426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~12U/ml。用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995。结论 试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立及应用

目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交叉反应,并初步可应用于百日咳疫苗中免疫原的监测。结论自制百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法能够较为可靠的监控百日咳疫苗质量。     

时间分辨免疫荧光分析检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一,具有高灵敏性和高特异性,用于生物分子的超微量检测.本研究者在建立一种灵敏度高、特异性强、操作简便的检测方法.方法 以Eu-DTTA{N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠}为示踪物,建立了用TRFIA检测乙型肝炎血清学标志物乙型肝炎病毒表面抗原的方法.结果 所建立的标准曲线分析范围分别为0.2～300 ng/ml,分析灵敏度为0.05 ng/ml,检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与免疫放射测定同时定量检测多份血清样本,相关系数高达95%.结论 TRFIA分析范围宽,灵敏度高,操作简便,具有优越的定量检测能力,价格适中,十分适合临床推广应用.     

检测β⁃CTX和N⁃MID水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法的建立和评价

目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能.方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu3+)和钐离子(Sm3+)分别标记2G6和5A3 MA...     

时间分辨免疫荧光法定量检测甲胎蛋白(AFP)试剂的性能研究

目的 在成功建立时间分辨免疫荧光法定量检测甲胎蛋白（AFP）反应模式并确定该检测试剂盒的生产工艺后,对该试剂盒的产品性能进行测定和评估.方法 按试剂盒操作说明书对试剂盒的准确度、精密度、剂量-反应曲线、最低检测量、稳定性、特异性等指标进行测定.结果 试剂盒准确度好,其线性检测范围为1～1000 IU/ml,最低检测量为0.11 IU/ml,分析内精密度〈5%,分析间精密度〈10%.CEA（1000 ng/ml）、CA125（600 IU/ml）、CA15-3（500 IU/ml）、CA19-9（500 IU/ml）及白蛋白（1000 ng/ml）与本试剂盒AFP的交叉反应值分别为0.35、0.28、0.25、0.31、0.42 IU/ml.结论 试剂盒各项性能指标均达到相关检定要求,满足临床检测的需要.     

时间分辨免疫荧光法定量检测血清HBeAg/HBeAb的可行性分析

目的：探讨国产时间分辨免疫荧光法(time-resolved immunofluorescence assay,TRIFA)是否与全自动化学发光免疫分析法(automatic chemiluminescence immunoassay,CMIA)在定量检测HBeAg/HBeAb中具有同样的准确性和特异性。方法：157份来自中南大学湘雅医院感染病科门诊的HBV感染患者的血清标本,分别用CMIA和TRIFA两种方法进行HBeAg定量及HBeAg/HBeAb定性检测,并对结果进行对比分析。结果：两种方法定量检测HBeAg的直线回归方程为：Y=0.72779X–4.0551(r=0.712,P<0.001)。与CMIA比较,TRIFA检测HBeAg定性结果的灵敏度和特异性分别为89.89%和100%,两种方法诊断HBeAg符合率为94.27%。TRIFA检测 HBeAb定性结果的灵敏度和特异性分别为100%和95.45%,两种方法诊断HBeAb的符合率为97.45%。结论：TRIFA在HBeAg/HBeAb定量检测上的准确性、灵敏度和特异性与CMIA基本相当,二者HBeAg/HBeAb诊断符合率高。     

时间分辨免疫荧光技术定量检测HBsAb的应用价值

目的 探讨时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)定量检测乙肝表面抗体(HBsAb)在普通人群免疫力预测中的应用价值.方法 选择经ELISA检测,结果为HBsAb阳性的400例血清标本,按S/CO值分为4组,分别为第1组1.0～5.0、第2组5.1～10.0、第3组10.1～20.0、第4组>20.0,每组100例,以TRFIA检测以上受检者的HBsAb,并对检测结果进行对比分析.结果 以TRFIA检测结果>10 IU/L为阳性判定标准,400份标本TRFIA检测阳性362例,按阳性结果判断,两种方法测定结果符合率为90.5%,4组TRIFA检测阳性率分别为73%、95%、100%、100%;以TRIFA检测HBsAb结果>100 IU/L作为人体对乙肝病毒有效免疫的分界,4组的有效免疫率分别为5%、10%、75%、95%.结论 TRFIA作为定量检测HBsAb的一种方法,可以对普通人群的乙肝病毒免疫力进行预测,指导普通人群的疫苗免疫和加强免疫.     

HBV-M时间分辨荧光免疫分析方法学评价

目的探讨TRFIA检测HBV-M方法的相关性、精密度、准确性和重复性。方法不同浓度的HBV-M标准血清及已知高浓度倍比稀释后的5项标志物混合血清标本用TRFIA法分别作定量检测。结果HBsAg、HBsAb、HBeAg3项测得的相对荧光强度与含量之间相关关系良好rHBsAg=0.9999,rHBsAb=0.9924,rHBeAg=0.9999,P<0.01,均有非常显著相关性;而HBeAb和HBcAb则相对较差,P>0.05;已知浓度5项标志物混合血清标本理论值和实测值的相关关系良好,r值均达到0.9980以上,P<0.01;结果准确度较好。结论HBV-MTRFIA精密度、重复性良好并具有较高的可靠性。     

人血红蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及初步应用

目的建立人血红蛋白(Hb)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂,探讨在大便潜血(FOB)检测中的应用。方法采用固相双抗体夹心法建立检测Hb的TRFIA方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂盒的最低检测量为0.8ng/mL或32ng(Hb)/g(粪便),线性范围为0.8～1000ng/mL或32～40000ng(Hb)/g(粪便)。分析内和分析间变异系数分别为3.4%～8.9%和5.2%～13.4%。与羊、鸡、牛、猪、兔、狗Hb不发生交叉反应。90份临床确诊标本用本试剂盒和胶体金免疫层析(GICA)试剂同时测试,TRFIA法的敏感性和特异性均为100%,GICA法的灵敏度和特异性分别为95.6%、100%。结论Hb-TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适用于临床上大便潜血Hb的检测。     

人催乳素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的建立人血清催乳素的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。方法采用双抗体夹心法建立人血清催乳素TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的定量范围为16～11000mU/L,灵敏度为1.36mU/L,批内批间的精密度分别为2.6%～7.6%,5.7%～9.0%;与人胎盘泌乳素(hPL)、人生长激素(hGH)、人黄体生成素(hLH)和人促卵泡激素(hFSH)无交叉反应。30份异常血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.997。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

血清人附睾分泌蛋白-4(HE4)时间分辨免疫荧光分析检测试剂的研制

目的利用时间分辨免疫荧光分析技术(TRFIA)建立血清人附睾分泌蛋白-4(HE4)的检测试剂。方法采用双抗体夹心法建立血清HE4-TRFIA检测试剂并对试剂的各项指标进行评价。结果 HE4-TRFIA检测试剂的灵敏度为0.73 pmol/L,测量范围为0.73~1 000 pmol/L,分析内和分析间的精密度分别为4.6%~7.5%和8.3%~14.4%。与CA15-3、CEA、AFP、HBsAg和CA125无交叉反应。317份正常女性血清标本测试结果提示本试剂的正常参考值范围是0~90 pmol/L。与进口的同类试剂检测,检测结果的相关系数R2为0.976。结论本HE4-TRFIA检测试剂各项指标均能达到临床检测要求,可望替代国外同类产品用于临床检测。     

加样时差及加样时间对时间分辨法检测弱阳性HBsAg标本的影响

目的:探讨加样时差及加样时间对时间分辨法检测弱阳性HBsAg标本的影响.方法:利用30份弱阳性HBsAg患者血清为检测对象,用加样时差和加样时间这2个条件进行实验.结果:30份标本在不同的加样时差所检测的结果不一致,加样时差对弱阳性标本的结果有影响;立即加样与30、45、60 min后加样比较有明显差异(P＜0.005).结论:加样时间及加样时差影响弱阳性HBsAg检测的重复性;在常规检测操作中应将初试中高值阴性标本做复试,且保证复试标本加样优先,以避免漏检弱阳性标本.     

时间分辨荧光免疫分析技术研究

时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)是一种全新的国际上公认的最有发展前途的非同位素免疫分析技术。镧系元素(Eu、Tb、Sm、Dy等)螯合物有突出的固有特点：激发最大波长到发射最大波长之间的Stokes位移很大，前者对后者无干扰。激发光谱段较宽，可增加激发能；发射光谱带窄，50％发射谱带宽度不足     

癌胚抗原时间分辨荧光免疫分析法的建立及方法学评价

目的建立癌胚抗原（CEA）时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）法。方法采用两株CEA单克隆抗体（CEA McAb），一株用于固相包被（4．00μg/mL），另一株用于标记铕（Eu3＋）制备Eu3＋-CEAMcAb（1：1600），固相双抗体夹心二步分析法检测人血清中的CEA，并对此方法进行方法学评价。结果本方法与甲胎蛋白（AFP）和糖类抗原19—9（CA19—9）的交叉反应率分别为O．25％和3．58％，而与其他常用肿瘤标志物无交叉反应；低、中、高浓度的CEA质控批内实验变异系数分别为4．75％，4．25％和2．89％，批间实验变异系数分别为9．55％，7．38％和3．69％；平均回收率为95．94％；试剂盒37℃烘烤7d后检测性能基本稳定；并与CEA化学发光免疫分析技术（CLIA）比对试验结果相关系数达0．9986；CEA—TrFIA法检测系统的检测低限（LLD）、生物检测限（BLD）和功能灵敏度（FS）分别为0．4315ng/mL、1．000ng/mL和1．000ng/mL；线性范围为1．000～500．0ng/mL。结论CEA—TrFIA法具有灵敏度高、特异性强、精密性好、线性范围宽、试剂有效期长和非放射性等优点，具有良好的临床应用价值。     

时间分辨荧光免疫分析技术及临床应用

标记免疫分析技术的出现使临床生化分析由常量分析向微量分析转变。20世纪80年代出现的时间分辨荧光免疫分析技术,以其独特的优势成为最有发展前途的非放射免疫标记技术。本文主要介绍时间分辨荧光免疫技术基本原理、基础试剂、基本技术以及近年来临床应用。