火针对大鼠脊髓损伤后运动功能及BDNF表达的影响

[目的]探讨火针对脊髓损伤后运动功能及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。[方法]将60只SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和火针组。采用改良Allen法制作脊髓损伤动物模型。火针组术后即刻及其后每隔24 h火针针刺大鼠脊髓损伤部位上下端的棘突间隙,另两组相应时间点行相同抓握。于伤后1、3、5、7 d采用大鼠脊髓损伤后运动功能(BBB)评分标准进行不同时段的行为学评分并取材。通过免疫组化法观察各组大鼠脊髓损伤后BDNF表达的变化。[结果]BBB评分显示,火针组的各时间点评分均高于模型组,特别是在造模并干预7 d后效果更加显著(P<0.05)。与假手术组相比,模型组和火针组的BDNF表达在各时间点均增加,火针组3、5、7 d的BDNF表达均高于模型组,差异具统计学意义(P<0.05)。BBB评分与BDNF表达量相关性分析显示两者呈高度相关。[结论]火针可促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复,其机制与促进BDNF表达有关。     

电针督脉对脊髓损伤大鼠脊髓组织线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响

目的：观察电针督脉对脊髓损伤（SCI）大鼠损伤区脊髓组织中线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响,探讨电针促进SCI神经修复的机制。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组各15只。采用精密打击器打击法构建胸10节段SCI模型。电针组大鼠予以电针“大椎”“脊中”,30 min/次,1次/d,共14 d。用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)运动功能评分法评估大鼠后肢的运动功能;HE染色法、尼氏染色法观察大鼠损伤区脊髓组织病理变化及神经元数量;免疫荧光染色法检测大鼠损伤区脊髓组织中神经干细胞增殖标记物巢蛋白（Nestin）、线粒体融合相关蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)及神经干细胞转录因子性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的阳性表达;实时荧光定量PCR法、Western blot法检测大鼠脊髓组织中Nestin mRNA及蛋白的表达。结果：与同时点假手术组比较,模型组大鼠造模后BBB评分降低（P<0.001）;脊髓组织中神经元肿胀、破裂、坏死严重,尼氏小体溶解严重,神经元数量减少（P<0.001）;Nestin、OPA1、SOX2阳性表达及Nes...     

祛痰通络中药对大鼠脑梗死后原位干细胞增殖 分化及神经功能恢复的影响

目的：观察大鼠脑梗死后脑内自体神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）的增殖、迁移与分化以及祛痰通络中药对其影响。方法：Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组（N组）、生理盐水组（A组）、祛痰通络中药治疗组（B组）,比较各组大鼠在脑梗死模型建立后24h、3天、7天、14天各时间点神经功能缺损评分,并应用免疫组化法检测并比较各时间点自体神经干细胞增殖情况、免疫荧光双标后观察增殖干细胞的分化情况。结果：脑梗死后第14天祛痰通络中药治疗组评分低于生理盐水组（P〈0.05）,第3天开始增殖细胞、第7天开始分化为神经元样细胞数均多于A组（P〈0.05）。结论：祛痰通络中药可促进脑梗死后自体神经干细胞的增殖并且更多的分化为神经元,从而促进脑梗死大鼠的神经功能恢复。     

"双固一通"法对帕金森病模型大鼠神经干细胞增殖及分化的影响

目的：探讨针刺治疗帕金森病（PD）的作用机制。方法：Wistar大鼠50只,随机分为正常对照组、假手术对照组、模型组、风府太冲组和“双固一通”组5组,以6-羟基多巴胺右侧纹状体微量注射法制备偏侧PD大鼠旋转模型,对比观察单纯针刺“风府”“太冲”和“双固一通”取穴法对PD模型大鼠神经干细胞增殖及分化的影响。采用免疫组织化学方法观察各组黑质、纹状体细胞增殖情况及神经干细胞数量变化,以免疫组织化学双标记法观测各组神经干细胞转化为神经元的数量。结果：两针刺组损毁侧黑质、纹状体增殖细胞显著增多（P〈0．01）,但只有“双固一通”组损毁侧黑质、纹状体神经干细胞及转化的神经元数量显著增加（P〈0．01）。结论：初步提示“双固一通”法能引起PD模型大鼠黑质和纹状体区神经干细胞发生明显增殖,并促使其向神经元方向分化。     

夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠神经干细胞分化趋势的影响

目的:观察夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织神经干细胞增殖分化的影响,探究其与急性脊髓损伤后神经细胞再生的关系。方法:选用72只体重在200~220 g之间的雄性SD大鼠。随机将大鼠分为假手术组,模型组,电针组和药物组,每组分术后1 d、7 d、14 d等时间点,每个时间点有6只。采用改良的Allen法建立大鼠T9~T10段脊髓急性中度损伤模型,用免疫荧光双标法检测各组大鼠脊髓组织中Brd U/nestin阳性细胞的共表达,用BBB评分反映大鼠的运动功能恢复。结果:治疗结束后,模型组、电针组和药物组BBB评分和Brd U/nestin阳性细胞数呈逐级增高趋势,其中与模型组相比,电针组Brd U/nestin阳性细胞数明显增多(P0.05),BBB评分明显提高(P0.05)。结论:夹脊电针干预后,Brd U/nestin表达增多,BBB评分提高,促进了大鼠神经干细胞的分化和运动功能的恢复。     

灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓神经干细胞增殖和分化的影响

目的探讨灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓自身神经干细胞增殖和分化的影响。方法将成年SD 大鼠随机分成损伤不用药组和损伤用药组。对两组动物 T12脊髓段施行右侧半横断后,在其腹腔内注射溴脱氧尿嘧啶(5’-Bromo-2’-deoxyuridine,BrdU 50mg/kg),每天2次,连续注射10天。损伤用药组动物胃饲灵芝孢子。在脊髓损伤后2周和4周,用免疫荧光组织化学法检测两组动物脊髓中央管室管膜细胞的 BrdU、nestin、neurofilament(NF)、oligodendrocyte specific protein 和 glial fibrillary acidic protein(GFAP)标记物,并分析其增殖和分化情况。结果损伤用药组大鼠脊髓室管膜细胞 BrdU 阳性染色数量[(45.67±3.62)个]高于损伤不用药组[(29.91±3.68)个]。在脊髓白质中,有些 BrdU 阳性细胞同时表达 oligodendrocyte specific protein 或nestin 或 NF 或 GFAP。结论灵芝孢子能够促进大鼠受损伤脊髓中央管室管膜细胞增殖,少数增殖后的细胞能分化为神经干细胞、神经元...     

火针对脊髓损伤大鼠神经干细胞Wnt/?-catenin通路基因表达的离体研究

目的观察火针对脊髓损伤Wnt/?-catenin通路上神经干细胞Wnt、?-catenin基因的调控作用。方法将60只SD雌性大鼠随机分为空白组5只、假手术组5只、模型组25只、火针组25只,模型组和火针组大鼠又分为1 d组、3 d组、7 d组、10 d组和14 d组;采用改良的Allen's法对模型组和火针组造模,观察各组BBB评分,Wnt3a和?-catenin基因表达变化。结果在7 d、10 d时模型组和火针组BBB评分明显高于同组前一时相,差异具有统计学意义(P0.05);火针组大鼠在治疗后各时间点BBB评分明显高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。在7 d、10 d时模型组和火针组Wnt3a基因表达量较同组前一时相均增加(P0.05);在7 d、10 d时火针组Wnt3a基因表达量高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05);?-catenin基因表达水平变化趋势与Wnt3a基本一致。结论火针可调控脊髓损伤神经干细胞Wnt3a、?-catenin基因表达。     

针刺对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞的影响

目的探讨针刺对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞（ENSCs）的诱导分化。方法 25只成年SD雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组和针刺治疗组。假手术组不损伤脊髓,模型组和针刺治疗组用改良Allen’s重物坠击法制备脊髓损伤模型。模型组不予任何处理;针刺治疗组予以针刺治疗,每日1次,7d为1疗程,共2个疗程。于2周后取材,对距离损伤中心5mm的脊髓行免疫组化染色,检测Nestin、Brdu、NSE、GFAP的表达。结果 Nestin和Brdu的表达针刺治疗组较模型组多,假手术组最少;NSE的表达针刺治疗组较模型组多,但少于假手术组;GFAP的表达模型组高于针刺治疗组,假手术组最低。结论针刺对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞有诱导分化作用。     

火针对坐骨神经损伤大鼠神经功能及Nrg1/ErbB2通路的影响

目的 探讨火针对坐骨神经损伤大鼠神经功能及Nrg1/ErbB2信号通路的影响。方法 将54只雄性SpragueDawley大鼠随机分为假手术组、模型组、火针组,每组18只。模型组、火针组大鼠建立坐骨神经钳夹损伤模型。建模成功24 h后,火针组采用火针针刺大鼠右侧后肢环跳穴、委中穴,隔天1次,共干预14 d;假手术组与模型组仅进行与火针组相同的捆绑束缚,不进行其他处理。分别于干预1 d、7 d、14 d后对各组大鼠进行行为学检测,记录坐骨神经功能指数(SFI);然后各时间点各组随机处死6只大鼠,取损伤处坐骨神经,电镜观察损伤处超微结构的变化,免疫组化观察坐骨神经组织中Nrg1、ErbB2阳性表达情况。结果 火针组与模型组干预1 d、7 d、14 d后SFI均明显低于假手术组(P均<0.05);火针组干预7 d、14 d后SFI均明显高于同期模型组(P均<0.05),且火针组干预14 d后SFI明显高于干预7 d后(P<0.05)。干预14 d后,电镜下模型组有少量髓鞘再生,线粒体等细胞器结构趋于正常;火针组出现大量新生髓鞘,线粒体等细胞器结构正常。干预1 d后,各组大鼠...     

火针调控脊髓损伤后神经细胞凋亡靶点的实验研究

目的：观察火针对神经细胞凋亡及其相关靶点关键蛋白表达的影响,探讨火针改善脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的机制。方法：将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和火针组,每组分为1 d、3 d、7 d和14 d共4个时点。采用电动颅脑脊髓损伤撞击仪制备SCI模型,对火针组采用相应的干预方法,相应时点进行神经功能评分(BBB)、TUNEL检测和Western-blot检测。结果：BBB行为学评分显示,与假手术组比较,火针组在1 d、3 d、7 d及14 d神经运动功能情况均明显较低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,火针组在1 d、3 d、7 d及14 d神经运动功能情况均明显较高,差异具有统计学意义(P<0.05)。神经细胞凋亡结果显示,SCI后,与假手术组相比,模型组凋亡细胞明显增多,凋亡指数明显增加;与模型组相比,火针组大鼠脊髓损伤部位凋亡细胞减少,凋亡指数明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且火针组凋亡指数14 d时最低。DAP12、p-PI3K及TGF-β蛋白表达结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠DAP12蛋白相对...     

电针人中穴对脑梗死大鼠内源性神经干细胞分化的影响

[目的] 观察电针人中穴（GV26）对脑梗死（CI）后内源性神经干细胞增殖、分化的影响。[方法] Wistar大鼠随机分为电针组、模型组、假手术组、空白组,前3组每组24只,按干预和取材的时间分为1、3、7、14 d 4个亚组,空白组6只,采用神经功能缺损体征评分（NSS）评定各组大鼠神经功能缺损程度;苏木精-伊红（HE）染色法观察CI后内源性神经干细胞的形态改变;免疫组化、免疫荧光双标记法检测CI后内源性神经干细胞的增殖、分化。[结果] 神经功能方面,空白组、假手术组NSS评分无变化,神经功能正常,模型组、电针组CI大鼠随着时间的延长,两组大鼠在感觉、反射、肢体功能等方面均有改善,3、7、14 d时电针组NSS评分低于模型组,两组差异有统计学意义（P<0.05）;HE染色,空白组和假手术组脑组织形态未见明显异常,模型组和电针组均可见神经细胞的细胞核固缩、伴细胞空泡,随干预天数增加,逐渐有结缔组织、星形胶质细胞与正常细胞生成,电针组整体修复情况优于模型组;免疫组化,与空白组、假手术组比较,模型组大鼠各时相内源性神经干细胞（eNSPCs）特异性标识物齿状回巢蛋白（Nestin）目标蛋白平均光密度值（AOD）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP） AOD均明显升高（P<0.01）,与模型组比较,电针组各时相Nestin AOD均较高（P<0.05或P<0.01）,3、7、14 d时GFAP AOD均升高（P<0.05或P<0.01）;免疫荧光双标记,与空白组、假手术组比较,模型组大鼠Nestin及GFAP表达量均明显升高（P<0.01）,荧光信号强,与模型组比较,电针组各时相Nestin表达均升高（ P<0.05或P<0.01）,Nestin/5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）共标记信号强,3、7、14 d时GFAP表达升高（P<0.05或P<0.01）,GFAP/BrdU共标记信号强。[结论] 电针人中穴可明显改善CI大鼠神经功能损伤情况,促进内源性神经干细胞的增殖、分化为星形胶质细胞,从而有利于CI后神经功能网络的修复和功能的重建。     

参芎颗粒对脑缺血大鼠海马神经再生及空间学习记忆的影响

[目的]建立气虚血瘀型脑缺血大鼠模型,观察具有益气活血功效的参芎颗粒对模型大鼠海马齿状回区神经细胞的增殖、分化、存活及空间学习记忆能力的影响。【方法】将大鼠分为假手术组、脑缺血（气虚血瘀证）模型对照组、参芎组、人参组、川芎组,每组20只,运用BrdU掺人法、免疫组织化学、Morris水迷宫测试法来观察参芎颗粒对脑缺血大鼠神经细胞增殖、分化、存活和空间学习记忆的影响。【结果】脑缺血可使海马齿状回颗粒下层新生细胞增多,参芎颗粒不能促进脑缺血大鼠新生细胞的增殖（P〉0．05）。但与脑缺血组比较,可以明显提高新生细胞的存活率,增加新生神经元数目（P〈O．01）,显著缩短模型大鼠找到水下平台的潜伏期（P〈0.01）,并优于人参组和川芎组（P〈0．01）。【结论】参芎颗粒（益气活血法）可促进气虚血瘀型脑缺血大鼠新生神经细胞的存活和向神经元定向分化,进而改善空间记忆功能,效果优于人参颗粒（益气法）和川芎颗粒（活血法）。     

苏氏接骨胶囊对胫骨干骨折大鼠模型促早期愈合作用及BMP-2表达的影响

[目的]探讨苏氏接骨胶囊(简称Su)对大鼠胫骨干骨折早期愈合的促进作用及骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达的影响。[方法] 36只6周龄雄性SD大鼠按照随机数字表分为假干预组、Su剂量140 mg/(kg·d)组(Su-140组)和Su剂量280 mg/(kg·d)组(Su-280组)。分组建立胫骨干闭合骨折髓内钉固定模型,术后第2天开始给予相应的药物干预。造模后10 d,过度麻醉心脏取血并处死各组大鼠。对大鼠患肢胫骨进行取材后,通过X线对骨折愈合情况进行初步检查;通过Micro-CT技术计算骨痂的骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N),并对骨痂进行组织形态学观察;通过免疫组化技术观察骨痂中BMP-2的表达,实时荧光聚合酶链反应(Real Time-PCR)定量检测血清BMP-2的含量。[结果]骨折造模术后10 d,假干预组、Su-140组及Su-280组3组大鼠的骨折断端均可见骨痂形成,骨折端愈合尚稳定,部分标本骨折断端稍有微动。经X线观察Su-280组骨折端愈合情况好于Su-140组及假干预组,Su-140组优于假干预组。Micro-CT检测结果提示,Su-140组和Su-280组的BV/TV值均高于假干预组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。Tb.Th和Tb.N 2个参数,Su-140组与假干预组间比较无统计学意义(P0.05),Su-280组与假干预组间比较有统计学差异(P0.01),Su-140组与Su-280组间比较有统计学差异(P0.01或P0.05)。免疫组化结果显示,Su-280组骨痂内有大面积的BMP-2表达区域,Su-140的表达区域较少,假干预组更少;RealTime-PCR结果显示,3组间BMP-2的含量差异存在显著性(P0.05),其中Su-280组与Su-140组和假干预组差异均有显著性(P0.05),Su-140组和假干预组间差异无显著性(P0.05)。[结论]苏氏接骨胶囊能促进大鼠胫骨干骨折的早期愈合及BMP-2的表达,且随药物浓度的增加,骨折愈合越快,其机制可能为Su促进BMP-2的表达,进而诱导成骨细胞及胞外基质的分化增殖,促进骨形成及骨愈合。     

壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究

【目的】观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响,为明确壮骨止痛胶囊防治骨质疏松症的作用机制提供实验依据。【方法】取2代培养的大鼠成骨细胞,在壮骨止痛胶囊含药血清为40％的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成,碱性磷酸酶(ALP)测定成骨细胞增殖和分化,噻唑蓝(MTT)法测成骨细胞生长曲线。【结果】成骨细胞在6d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,壮骨止痛胶囊含药血清可促进成骨细胞的增殖、ALP的分泌。【结论】壮骨止痛胶囊含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化。壮骨止痛胶囊含药血清可能通过直接促进成骨细胞增殖、分化,从而防治骨质疏松症。     

祛痰化瘀汤联合火针治疗女性青春期后痤疮39例

[目的]观察自拟祛痰化瘀汤联合火针治疗女性青春期后痤疮的临床疗效及对情志改变的影响。[方法]将78例女性痰湿体质青春期后痤疮门诊患者随机分成两组,对照组与治疗组每组各39例,治疗组予以祛痰化瘀汤联合火针治疗,对照组予以口服安体舒通、美满霉素。治疗4周后评估其疗效。[结果]对照组总有效率为76.9%,明显低于治疗组94.8%。两组对情志指标改变有明显差异,且治疗组改善较对照组显著,具有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗期间及治疗后,不良反应均未发现。[结论]祛痰化瘀汤联合火针可有效改善女性青春期后痤疮患者临床症状,疗效显著,无明显不良反应。     

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞的诱导凋亡作用

[目的]观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞凋亡的影响.[方法]采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用流式细胞仪(FCM)及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况.[结果]不同浓度灵芪胶囊含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成.[结论]灵芪胶囊含药血清具有诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关.灵芪胶囊含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关.     

麦门冬汤对大鼠骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的影响

[目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向肺泡上皮细胞分化的影响。[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞(GFP-BMSC)进行干预14 d,通过免疫组化、实时荧光定量聚核酶链反应(qPCR)方法,检测各组GFPBMSC细胞肺表面活性蛋白(SP-C)、水通道蛋白-5(AQP-5)蛋白及mRNA的表达。[结果]模型组、模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5蛋白表达明显高于DMEM对照组、麦门冬汤组(P0.01),其中模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5表达明显高于模型组(P0.01)。[结论]麦门冬汤在肺纤维化环境中可促进GFP-BMSC向肺泡上皮细胞分化,该作用可能是其改善肺纤维化的重要机制。     

脑梗死后神经细胞黏附分子的动态变化及滋补肝肾复方复健片的干预效应

[目的]观察复健片在不同时间点对脑梗死大鼠脑组织神经细胞黏附分子表达的影响,探讨其促进神经功能恢复的作用机制.[方法] 240只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和药物组共4个大组,并根据脑梗死病程每组又分为3、7、14、28、42 d共5个亚组,每个亚组动物数为12只.用改良的Longa EZ法制备大脑中动脉阻塞大鼠模型,药物组灌胃给予复健片水溶液,余各组分别灌胃给予同剂量的蒸馏水.用免疫组织化学法观察模型大鼠梗死周边区脑组织神经细胞黏附分子的表达.[结果]模型组大鼠脑梗死后脑内的神经细胞黏附分子(NCAM)表达逐渐增高,在28 d时达到高峰,后逐渐下降,其与正常对照组各时相比较有非常显著性差异(P<0.01).药物组在3 d时出现高表达,14 d时其表达达到高峰,持续至28 d时开始下降,药物组的NCAM表达与模型组同时间点比较有非常显著性差异(P<0.01).[结论]复健片可增加NCAM的表达,有助于轴突生长和靶向迁移,促进神经功能恢复.     

滋补肝肾复方对MCAO大鼠脑组织MLCP的调控作用

[目的]观察滋补肝肾复方对脑梗死大鼠神经功能、脑梗死体积及脑组织肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的影响,探讨其解除神经再生抑制的机制.[方法]60只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和药物组共4个组.用改良的Longa EZ法制备大脑中动脉阻塞大鼠模型,药物组灌胃给予滋补肝肾复方水溶液,余各组分别灌胃给予同剂量的蒸馏水.观察了治疗后各组大鼠的神经功能和脑组织梗死体积,用免疫组织化学法观察模型大鼠梗死周边区脑组织MLCP的表达.[结果]药物组与模型组比较显示,药物组大鼠的神经功能明显优于模型组,且梗死体积较模型组明显缩小,免疫组化研究显示药物组脑组织中MLCP表达虽然较正常对照组增多,但较模型组明显减少,两者之间有差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]滋补肝肾复方可改善神经功能,缩小脑梗死体积,抑制MLCP在脑梗死后的表达,从而促进神经发生.