异甘草素抗肿瘤作用及促凋亡机制研究

目的研究异甘草素(ISL)抗肿瘤作用及促凋亡机制。方法建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,抑瘤率、脾脏指数及胸腺指数等指标检测ISL抑瘤作用及对免疫器官的影响;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况。免疫组织化学法检测ISL对肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cyt-c和Caspase-3表达的影响。以不同浓度ISL处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞,倒置显微镜下观察ISL对MDA-MB-231形态学的影响;荧光显微镜和流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率。结果 ISL高、低剂量给药组H22肝癌荷瘤小鼠的瘤重与模型组相比显著降低,ISL高、低剂量给药组小鼠肝癌H22实体瘤组织TUNEL阳性细胞核数量与模型组相比明显增多。与模型组相比,ISL高、低剂量给药组的促凋亡蛋白Bax、Cyt-c和Caspase-3的表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达下调。MDA-MB-231细胞经ISL作用后出现细胞回缩、胞体变圆和体积变小等形态学变化。MDA-MB-231细胞早期细胞凋亡率和晚期细胞凋亡率均显著升高,且呈浓度依赖性。荧光显微镜下观察到随着ISL浓度的增加呈绿色荧光或红色荧光的细胞均随之增多,提示早期凋亡或晚期凋亡细胞均显著增加。结论 ISL在小鼠H22肝癌荷瘤模型中具有诱导肝癌细胞凋亡的作用,其机制与上调Bax,下调Bcl-2表达,增加Cyt-c从而导致Caspase-3活化有关;ISL可以诱导人乳腺癌细胞的凋亡。     

黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的:研究黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:以H22肝癌细胞接种于正常小鼠左前肢腋窝皮下复制肝癌H22荷瘤模型。实验分为模型对照、环磷酰胺(30mg·kg-1)和黄芩素高、中、低剂量(80、40、20mg·kg-1)组。灌胃给药,每天1次,连续15d。末次给药后处死小鼠,剥离完整的肿瘤组织称重,并计算肿瘤抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡率;按试剂盒说明书测定肿瘤组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的活性;RT-PCR测定瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平。结果:高、中剂量黄芩素可显著抑制模型小鼠体内肿瘤生长(P<0.01或P<0.05),抑制率分别为61.63%和44.65%;可显著提高G0/G1期细胞百分比(P<0.05),并减少S期细胞(P<0.01或P<0.05)。与模型对照组比较,黄芩素高、中、低剂量组细胞凋亡率显著提高(P<0.01或P<0.05)。高、中剂量黄芩素可显著增强肿瘤组织中Capcase-3活性(P<0.01或P<0.05),抑制Bcl-2mRNA表达(P<0.01或P<0.05);高剂量黄芩素可显著提高肿瘤组织中BaxmRNA表达(P<0.05)。结论:黄芩素可促进肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的凋亡,其机制可能与增强Capcase-3活性、提高Bax表达,并抑制Bcl-2表达有关。     

AKT体内外抗肝癌作用及机理的初步研究

目的：观察AKT对人肝癌细胞SMMC-7721及小鼠H22肝癌移植性肿瘤的抑制作用，并探讨以紫草总色素为主要成分，制备而成的AKT的抗肿瘤作用机制。方法：用MTT法分析AKT对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用绘制作用生长曲线；建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型，通过绘制瘤块生长曲线及计算肿瘤抑制百分率评价体内抑瘤效果，流式细胞术检测不同剂量AKT作用SMMC-7721细胞48h后细胞凋亡率及细胞周期变化，并检测Bax及Bcl-2蛋白的表达情况；RT-PCR检测AKT作用SMMC-7721细胞24h后，bcl-2 mRNA及baxmRNA的表达情况。结果：（1）MTT提示AKT对SMMC-7721细胞具有显著抑制作用；（2）体内实验表明，AKT对小鼠H22肝癌移植性肿瘤有一定的抑制作用。（3）Giemsa染色后在光镜下可见AKT给药组多数细胞出现形态改变，胞体变小，胞质浓缩拉长，呈拉丝状，核质比增大，核膜完整，核固缩，染色质不均一或边集，胞浆内较多空泡的典型凋亡特征；Hoechst 33258染色后细胞核出现细胞核固缩，出现凋亡小体等明显的凋亡形态学变化；流式细胞术检测显示AKT作用SMMC-7721细胞后，中、高剂量组均检测到明显亚G1凋亡峰；给药组S期细胞明显降低，G2／M期细胞明显增多，细胞周期阻滞于G2／M期；药物处理后Bcl-2及Bax的表达均下调，且Bcl-2／Bax值降低；RT-PCR检测结果显示给药组bcl-2 mRNA及bax mRNA表达水平均出现下调，bcl-2／bax比值降低；体内实验瘤组织免疫组化结果显示给药组Bcl-2表达下调，Bax及Caspase-3表达均出现上调。结论：AKT对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显体外抗增殖作用，对小鼠移植性肿瘤H22也呈现了明显的抑制作用。其效应机制可能与阻滞细胞周期于G2／M期，下调bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达，上调Caspase-3表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖有关。     

奥曲肽诱导胃癌术前腹腔化疗淋巴结内肿瘤细胞凋亡

目的 探讨临床行卡铂腹腔内化疗前加用奥曲肽对胃痛淋巴结转移灶痛细胞凋亡的影响.方法 40例胃癌伴淋巴结转移患者行胃癌根治性切除术.20例腹腔化疗前加用奥曲肽(0.1 gq8h.×3)为治疗组.另外20例未用奥曲肽作为对照组.用免疫组化ABC法检测淋巴转移灶p53蛋白(p53)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)及Bcl相关X蛋白(Bax)基因表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 治疗组淋巴转移灶p53和Bax表达较对照组明显增强(P<0.05),并与细胞凋亡呈正相关;Bcl-2表达降低,并与细胞凋亡呈负相关.结论 胃癌术前腹腔化疗前加用奥曲肽可能通过p53、Bcl-2及Bax介导使转移淋巴结癌细胞凋亡增加,有助于提高根治性手术的治疗效果.     

木蝴蝶挥发性成分对H_(22)荷瘤小鼠实体瘤抑制作用及其机制初步研究

目的探讨木蝴蝶挥发性成分抗肝肿瘤作用及其可能的作用机制。方法本研究采用H22实体瘤模型,随机分为空白组、模型组、阳性对照组(环磷酰胺100 mg·kg~(-1))、木蝴蝶挥发性成分低、中、高剂量(17.5、35、70 mg·kg~(-1))组,灌胃给药12 d,计算肿瘤抑制率、胸腺及脾指数及血清中IL-2、IL-6的含量。HE染色法观察小鼠实体瘤生长情况。采用0~1.0 g·L~(-1)的木蝴蝶挥发性成分处理人肝癌SMMC-7721细胞,分别采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,TUNEL法检测其对肝癌细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测其对Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表达的影响。结果木蝴蝶挥发性成分高剂量的抑瘤率为42.08%;与模型组相比,木蝴蝶挥发性成分能明显提高小鼠的胸腺指数、IL-2及IL-6水平。木蝴蝶挥发性成分体外能明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导细胞凋亡,减少Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax、caspase-3 mRNA的表达。结论木蝴蝶挥发性成分具有明显的体内、体外抗肝肿瘤作用,其作用机制可能与增强机体免疫力、促进肿瘤细胞凋亡有关。     

大黄素对荷人K562细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察大黄素对白血病K562细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的表达水平,探讨其作用机制。方法:建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,腹腔连续给药12d,处死裸鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜方法观察肿瘤细胞的凋亡情况,免疫组化方法观察肿瘤组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的mRNA水平。结果:各用药组抑瘤作用与阴性对照组相比差异均具有显著性(P<0.05),高浓度组与羟基脲组具有同等的抑瘤效应(P>0.05),光镜和电镜检测发现大黄素低、中、高浓度组均可见瘤细胞凋亡和坏死,其中以高浓度处理组最为显著,羟基脲处理组部分瘤细胞以坏死为主。免疫组化和RT-PCR结果表明大黄素处理后肿瘤组织中Bax蛋白和Bax mRNA表达上调,Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA表达下调。结论:大黄素可以明显抑制K562细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bax及Bcl-2的表达,从而促进细胞凋亡。     

海藻多糖对肝癌小鼠抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨海藻多糖对H22肝癌小鼠抗肿瘤作用的相关机制。方法观察不同药物剂量的海藻多糖对H22肝癌小鼠模型血清中VEGF、IL-2和细胞凋亡相关基因-2(Bcl-2)含量变化,同时计算抑瘤率。结果海藻多糖对H22肝癌小鼠肿瘤抑制效果以中剂量为佳,其可以提高血清中IL-2含量,减少VEGF含量水平。下调Bcl-2基因表达。结论海藻多糖对H22肝癌小鼠的肿瘤生长确实有一定的抑制作用,其机制为增强机体免疫功能,同时下调Bcl-2基因表达而达到抑瘤效果。     

消瘤平体内外对人宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡相关蛋白的影响

目的研究消瘤平体内外对人宫颈癌He La细胞生长的影响,以及对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas和Survivin含量的影响。方法常规培养He La细胞,加入不同浓度的消瘤平,M TT法分别检测培养3个时段后对细胞生长的影响。He La细胞接种于BALB/C-nu裸鼠,随机分为5组,阴性对照组、5-fu阳性对照组以及消瘤平3个剂量组,另设空白对照组,观察荷瘤裸鼠的一般状况。腹腔注射给药4周后,取瘤块和脾脏,称重计算抑瘤率和脾脏指数。取血,免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas、Survivin蛋白的含量。结果消瘤平体内外均能抑制He La细胞的生长;体内可明显增加荷瘤裸鼠的脾脏指数;中、高剂量的消瘤平可促进Bax的表达,抑制Bcl-2和Survivin的表达,高剂量的消瘤平还促进Fas的表达。结论消瘤平抗宫颈癌的作用机制与抑制He La细胞增殖,以及Bcl-2、Bax、Fas和Survivin基因蛋白诱导的凋亡有关。     

乙醇对小鼠胰岛瘤细胞凋亡的影响及其分子机制

目的观察乙醇对小鼠胰岛瘤细胞(NIT-1细胞)凋亡的影响及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的变化,探讨乙醇诱发小鼠胰岛瘤细胞凋亡的分子机制。方法体外培养的小鼠NIT-1细胞,不同剂量乙醇(0、50、100、2004、00 mmol/L)作用24 h,单细胞凝胶电泳实验(SCGE),AnnexinV/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡情况。不同剂量的乙醇作用6、122、4 h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因Bcl-2,Bax和Caspase-3 mRNA表达水平。结果SCGE实验结果显示,低剂量乙醇损伤不明显,高剂量(2004、00 mmol/L)组DNA迁移率、DNA损伤程度分级、DNA平均迁移长度与对照组比较,差异均有显著性。AnnexinⅤ/PI检测结果表明,2004、00 mmol/L乙醇组NIT-1细胞凋亡率升高,与对照组相比,差异有非常显著性。乙醇作用6 h,随着乙醇剂量增加,Bcl-2/Bax mRNA表达先升高后降低;乙醇作用12 h,400 mmol/L剂量Bcl-2/Bax比值下降;作用24 h,各剂量组Bcl-2/Bax比值均下降。Caspase-3 mRNA表达水平与乙醇剂量和作用时间相关。400 mmol/L剂量组作用24 h,Caspase-3 mRNA表达增加。结论乙醇可诱发体外培养的NIT-1细胞凋亡,凋亡的发生很可能与Bcl-2家族和Caspase-3激活有关。     

地黄多糖b的免疫抑瘤作用及其机理

从地黄中提取分离的多糖成分地黄多糖b(RPS-b),ip或ig给药抑制实体瘤S180的生长,ip给药对Lewis肺癌,B16黑素瘤和H22肝癌亦有效,最适有效剂量都在20mg·kg~(-1)体外实验证明,RPS-b对S180和HL60细胞生长均无明显的直接细胞毒作用.RPS-b在发挥抑瘤作用过程中,能提高S180荷瘤小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖能力,并较长时间维持在较高水平;也能部分阻碍瘤株对脾脏天然杀伤细胞(NK)活力的抑制作用.说明RPS-b是一种免疫抑瘤的活性成份,其抑瘤作用是依赖于机体防御系统而间接产生的,增强机体的细胞免疫功能是其作用的重要机理     

组织蛋白酶S抑制剂对兔血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 研究组织蛋白酶S抑制剂对培养的兔血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 获取兔主动脉组织,传代培养血管平滑肌细胞,将细胞分为对照组、单药组(血管紧张素Ⅱ)、联合组(组织蛋白酶S抑制剂+血管紧张素Ⅱ);采用流式细胞术和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测血管平滑肌细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤基因-2蛋白、B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达.结果 ①流式细胞术检查及TUNEL染色结果均显示,联合组血管平滑肌细胞晚期凋亡数量明显低于单药组;TUNEL染色10 h和12 h时点,单药组与联合组差异有统计学意义[ 10 h:(23607±176)比(36058±269)个,12 b:(29813±205)比(39146±263)个,均P＜0.05];②蛋白质印迹检测结果显示,与单药组相比,联合组B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X/B细胞淋巴瘤基因-2蛋白明显下降,组间差异有统计学意义(P＜0.05);联合组半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达明显降低,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 组织蛋白酶S抑制剂可能通过下调B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达减轻血管平滑肌细胞凋亡.     

秦皮乙素对小鼠皮下Hepa1-6肝癌移植瘤凋亡基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的:研究秦皮乙素对小鼠皮下Hepa1-6肝癌移植瘤凋亡基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。方法:40只C57BL/6J小鼠右腋皮下接种Hepa1-6肿瘤细胞,复制小鼠肝癌皮下移植瘤模型。实验分为5组,即模型(生理盐水)、环磷酰胺和秦皮乙素高、中、低剂量(700、400、200mg·kg-1)组。复制模型后第3天开始腹腔注射给药,15d后处死小鼠取出瘤组织,称瘤重,计算抑瘤率。RT-PCR检测凋亡基因Bcl-2mRNA、BaxmRNA的表达,Westernblot法检测Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达。结果:秦皮乙素高、中、低剂量组抑瘤率分别为55.42%、40.37%、20.33%,与模型组比较有显著性差异(P<0.01);秦皮乙素高、中、低剂量组BaxmRNA和Bax蛋白的表达均显著高于模型组(P<0.01),Bcl-2mRNA和Bcl蛋白的表达均显著低于模型组(P<0.01)。结论:秦皮乙素对小鼠Hepa1-6肝癌瘤生长起到一定的抑制作用,其机制可能与通过上调Bax、下调Bcl-2基因的表达有关。     

银杏叶标准提取物对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨银杏叶标准提取物EGB761对过氧化氢（H2O2）诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞（PC12细胞）凋亡的保护作用及可能的机制。方法：PC12细胞常规培养生长至对数期,进行如下分组试验：正常对照组（NS）,H2O2组（H2O2,200μmol/LH2O2）,低剂量EGB761组（GL,10μg/mlEGB761＋H2O2）,中剂量EGB761组（GM,20μg/mlEGB761＋H2O2）,高剂量EGB761组（GH,50μg/mlEGB761＋H2O2）。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定PC12细胞活力;流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率;分光光度计测定过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）活力和抗氧化能力（T-AOC）以及丙二醛（MDA）含量;Western blot法测定胞浆内Bcl-2、Bax以及Caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,H2O2组的PC12细胞的活力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组的PC12细胞活力显著增强,且呈剂量依赖关系（P〈0.05）;GM组和GH组CAT,GSH-Px,T-SOD和活性和T-AOC均显著提高（P〈0.05）,MDA含量显著下降（P〈0.05）,GL组T-SOD活力和T-AOC水平升高以及MDA含量下降（P〈0.05）,而CAT和GSH-Px活力无显著变化（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组PC12细胞的Bcl-2的表达量增加,Bax的表达量下降,Bcl-2/Bax的比值显著增加（P〈0.05）,Caspase-3的表达显著降低（P〈0.05）。结论：H2O2可诱导PC12细胞凋亡,EGB761能显著抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡并对细胞有保护作用;EGB761有较强的抗氧化能力,通过其抗氧化作用改善H2O2诱导的氧化应激状态,并能显著提高Bcl-2/Bax的比值,抑制Caspase-3的活化,发挥保护作用。     

DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注Bax、Bel-2蛋白表达的影响

目的观察急性全脑缺血再灌注大鼠脑组织Bax、Bcl一2蛋白表达情况,研究8阿片受体激动剂DADLE对急性全脑缺血再灌注脑组织凋亡途径的影响以及其与脑保护作用的关系。方法将健康雌性sD大鼠50只（180—220g）随机分为5组：假手术组（Sham组,n=10）：只暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组（I／R组,n=lO）：采用改良的二血管阻断加低血压法建立全脑缺血再灌注模型,缺血15min后给予再灌注;DADLE处理组分为DADLE2mg／kg组（A组,n=10）、DADLE3mg／kg组（B组,n=10）、DADLE5mg／kg组fc组,n=10）：在I／R组的基础上于再灌注前经颈外静脉注射DADLE。手术结束后,采用免疫组化法检测脑组织Bax、Bcl一2蛋白表达情况。结果Sham组Bax与Bcl-2阳性细胞数显著少于其他各组（P〈0．05）,分别为（20．38±2．84）与（9．624-2．10）;I／R组Bax与Bcl-2阳性细胞数为（52．73±6．08）与（19．49±2．35）;而DADLE处理组中Bax阳性细胞数分别为：A组（43．71±3．85）、B组（37．92±4．08）、C组（36．20±3．94）;Bcl-2阳性细胞数分别为：A组（28．744-2．41）、B组（33．584-2．16）、C组（34．96士1．98）。Bcl-2／Bax的比值,Sham组显著高于I／R组[（49134-3．4）％VS．（35．84-3．2%,P〈0．05];DADLE处理组中,A组为（66．4±6．8）％、B组为（85．7±7．3炀、C组为（92．6±6．9）％。结论在大鼠急性全脑缺血再灌注损伤中,Bax与Bel-2蛋白的表达均明显上调,而DADLE可以通过影响Bax与Bel一2的表达程度减少细胞凋亡,发挥脑保护的作用;由Bel-2／Bax的比值可发现,该作用与使用剂量呈现“S型剂量效应曲线”。     

促红细胞生成素后处理对大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡的干预及机制

目的：探讨促红细胞生成素后处理对再灌注损伤肺细胞凋亡的干预作用及其机制。方法：健康雄性成年SD大鼠40只,随机分为假手术对照组（C组）、缺血/再灌注组（I/R组）、促红细胞生成素＋缺血/再灌注组（EPO组）、促红细胞生成素＋溶剂对照组1（0.4%DMSO的PBS溶液）（D组）和促红细胞生成素＋U0126（U组）。对比观察各组肺组织湿/干重比值（W/D）的变化;原位缺口末端标记法（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡情况,计算凋亡指数（AI）;免疫组织化学方法测定肺组织Bcl-2、Bax蛋白的相对含量,RT-PCR法检测肺组织Bcl-2、Bax mRNA表达;光镜下观察肺组织的病理变化及测定肺泡损伤数（IQA）。结果：与C组比较,I/R组肺组织W/D显著升高,I/R组IQA显著升高,AI显著升高,Bcl-2蛋白和Bcl-2 mRNA表达明显下降,Bax蛋白和Bax mRNA表达明显上调,Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的比值降低（ P均〈 0.01）,肺组织形态学发生异常改变;与I/R组比较,EPO组、D组、U组的W/D显著降低,IQA显著降低,AI显著降低,Bcl-2蛋白和Bcl-2 mRNA表达增强,Bax蛋白和Bax mRNA表达减弱,Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的比值增高（P 〈0.05或P 〈0.01）,肺组织形态学结构异常改变有所减轻;与EPO组比较,D组的W/D、IQA、AI、Bcl-2蛋白和Bcl-2 mRNA、Bax蛋白和Bax mRNA及Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的比值均无明显差异（P〉0.05）,U组的W/D升高,IQA升高,AI显著升高,Bcl-2蛋白和Bcl-2 mRNA表达下降,Bax蛋白和Bax mRNA表达上调,Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的比值降低（P 〈0.05或P 〈0.01）,U组的肺组织形态学结构损伤较EPO组加重。结论：促红细胞生成素后处理能减轻肺缺血/再灌注损伤,其机制可能通过激活ERK1/2信号转导通路,上调凋亡抑制因子Bcl-2的表达,下调促凋亡基因Bax的表达,提高Bcl-2/Bax比值,使肺组织细胞凋亡减少。     

尾加压素Ⅱ对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制研究

目的：探讨尾加压素Ⅱ（U-Ⅱ）对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制。方法：将体外培养A549细胞分为正常对照组、顺铂组（25μg/mL）及U-Ⅱ＋顺铂组（10-7mol/L U-Ⅱ＋25μg/mL顺铂）,TUNEL法测定A549细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测A549细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果：与正常对照组相比,顺铂组肺腺癌A549细胞的凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax表达明显升高（P〈0.01）;与顺铂组相比,U-Ⅱ则能够抑制A549细胞的凋亡,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达（P〈0.01）。结论：U-Ⅱ可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达从而抑制肺腺癌A549细胞凋亡。     

顺铂诱导人宫颈鳞癌细胞Caski细胞凋亡的分子机制

目的研究顺铂对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究顺铂诱导宫颈鳞癌细胞凋亡的分子机制。方法运用体外细胞培养,顺铂以不同浓度（20、10、5、2、1μg/ml）作用于人宫颈癌Caski细胞。采用噻唑蓝（MTT）法测定顺铂对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNALadder现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变。结果顺铂对人宫颈癌Caski细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使Caski细胞G2/M期比例明显下降（P〈0.01）,S期比例升高（P〈0.01）;诱导细胞凋亡发生;顺铂作用Caski细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变。结论顺铂在体外可有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡分子机制与Bcl-2家族表达调控,线粒体膜跨膜电位下降的线粒体参与凋亡途径相关。     

补肾调肝方抗卵巢衰老的作用机制的研究

目的探讨大鼠卵巢自初始发育至衰老过程中卵巢颗粒细胞及其细胞因子的变化规律及补肾调肝方药干预影响,以期为补肾调肝方药抗卵巢衰老的作用机制研究提供理论依据。方法分别选取3月、6月、12月、18月、24月龄Wistar大鼠模拟其青春前期、青春期、性成熟期、近绝经期、老年期的生长发育过程;各月龄大鼠均设立干预组和对照组,干预组以补肾调肝方灌胃干预20ml/（kg·d）,对照组灌以同等剂量的无菌饮用水。以常规TUNEL染色法观察各组大鼠卵巢颗粒细胞状态,计算凋亡指数（AI）;并以RT-PCR对颗粒细胞促凋亡因子Bax及凋亡抑制因子Bcl-2的mRNA表达进行半定量分析。通过各月龄组之间的对比观察卵巢颗粒细胞及其细胞因子的变化规律,并通过干预组和对照组之间的对比对补肾调肝方药抗卵巢衰老的相关机制做相应探讨。结果 AI：对照组3、6、12月龄大鼠的AI均处于较低,18、24月龄大鼠AI均显著升高（P〈0.05）;与对照组相比,研究组大鼠各月龄AI均显著降低（P〈0.05）。Bax：对照组3、6、12月龄大鼠的BaxmRNA表达处于较低水平,18、24月龄显著升高（P〈0.05）;与对照组相比,干预组各月龄大鼠BaxmRNA表达均显著降低（P〈0.05）。Bcl-2：对照组3、6、12月龄大鼠Bcl-2mRNA表达处于较高水平,18、24月龄显著降低（P〈0.05）;与对照组相比,干预组各月龄大鼠Bcl-2mRNA表达均显著升高（P〈0.05）。结论凋亡抑制因子Bcl-2mRNA低表达及促凋亡因子BaxmRNA高表达所启动的颗粒细胞调亡过程可能为卵巢衰老的重要机制之一;补肾调肝方药可通过上调Bcl-2mRNA表达与下调BaxmRNA表达抑制卵巢颗粒细胞的调亡,可能为其抗卵巢衰老的作用机制之一。     

柿叶水提物抗肿瘤作用实验研究

探讨柿叶水提物对H22荷瘤小鼠和S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法：建立H22荷瘤小鼠和S180荷瘤小鼠移植瘤模型,观察分析柿叶水提物各组对荷瘤小鼠的生命延长率、抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、肿瘤坏死因子（TNF-α）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）的影响。结果：柿叶水提物高、中、低剂量组及环磷酰胺组对H22荷瘤小鼠的生命延长率分别为34．05％,21．08％,5．95％,51．89％,对S180荷瘤小鼠的生命延长率分别为30．11％,17．74％,4．30％,45．16％。柿叶水提物高、中、低剂量组及环磷酰胺组的抑瘤率分别为42．08％,25．04％,23．95％,72．77％。柿叶水提物高剂量组的胸腺指数为（3．9±1．0）mg·g^-1,较氯化钠溶液组（3．0±1．1）mg·g^-1提高（P＜0．05）,柿叶水提物高剂量组的脾脏指数为（11．8±1．9）mg·g^-1,较氯化钠溶液组（9．2±1．6）mg·g^-1高（P＜0．05）。柿叶水提物高、中、低剂量组TNF-α数值分别为（1．94±0．20）,（1．89±0．54）,（1．32±0．18）ng·ml^-1,较氯化钠溶液组（1．18±2．0）ng·ml^-1高（P＜0．05）。柿叶水提物高、中、低剂量组SOD数值分别为（312．4±15．06）,（304．14-16．1）,（301．1±19．22）U·ml^-1,较氯化钠溶液组（278．1±11．02）U·ml^-1高（P＜0．01或P＜0．05）。柿叶水提物高、中、低剂量组MDA数值分别为（5．85±1．12）,（6．31±1．17）,（6．62±1．03）nmol·ml^-1,较氯化钠溶液组（7．26±0．62）nmol·ml^-1下降（P＜0．01或P＜0．05）。柿叶水提物高、中、低剂量组NO数值分别为（47．0±7．46）,（51．2±9．07）,（56．1±9．98）μmol·L^-1,较氯化钠溶液组（62．2±1．22）μmol·L^-1下降（P＜0．01或P＜0．05）。结论：柿叶水提物有一定的抗肿瘤作用,其作用机制可能与调节细胞因子TNF—α的?