索拉非尼对MHCC97-H 肝癌细胞增殖、 侵袭以及PRL-3 蛋白表达的影响研究

目的 探讨索拉非尼对体外培养MHCC97-H 肝癌细胞中肝再生磷酸酶3（PRL-3）表达水 平的影响,以及对肝癌细胞侵袭力的作用。方法 在24、48 及72 h 测定经不同浓度梯度索拉非尼处理 MHCC97-H 肝癌细胞增殖抑制率以筛选合适的干预浓度和时间。采用MHCC97-H 肝癌细胞培养传代, 用索拉非尼干预处理,瑞氏吉姆萨法染色观察形态学变化,MTT 法检测其增殖抑制率,Western blot 法检测 PRL-3 蛋白表达水平,Transwell 实验检测癌细胞侵袭力。结果 该实验索拉非尼体外最佳干预实验浓度和时 间分别为16 μmol/L 和48 h ;索拉非尼能诱导肝癌细胞株MHCC97-H 的凋亡,肝癌细胞增殖抑制率与时间 和剂量呈正相关。经索拉非尼作用后PRL-3 蛋白也出现不同程度下降,肝癌细胞侵袭能力明显下降。结论 索拉非尼能降低MHCC97-H 肝癌细胞株中PRL-3 蛋白表达水平,降低肿瘤细胞侵袭力,从而诱导肝癌细胞 凋亡;索拉非尼降低癌细胞的侵袭可能是通过下调PRL-3 蛋白进行。     

PI3K/AKT信号通路在促进口腔鳞癌侵袭转移中的作用

目的:研究PI3K/AKT信号通路在TNF-α诱导上皮间质转化(EMT)发生时促口腔鳞癌侵袭转移中的作用。方法:采用免疫蛋白印迹实验(western blot)方法、实时荧光定量RT-PCR,分别从蛋白质、mRNA水平检测炎症微环境中PI3K/AKT信号通路抑制剂作用前后关键因子表达变化。结果:TNF-α作用后,PI3K/AKT信号通路中关键因子AKT蛋白表达升高,E-钙黏蛋白mRNA表达降低,而加入相应抑制剂LY294002后,AKT的蛋白表达被抑制,E-钙黏蛋白较前者表达升高。结论:抑制PI3K/AKT信号通路可降低TNF-α诱导EMT发生促口腔鳞癌细胞侵袭转移的作用。     

PRL-3和EGFR在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织中的表达

目的 探讨再生肝磷酸酶-3(PRL-3)和表皮生长因子受体(EGFR)在鼻腔鼻窦鳞癌中表达及相关性.方法 采用免疫组化法对30例鼻腔鼻窦鳞癌组织行PRL-3和EGFR检测,并用20例鼻腔正常黏膜组织做对照.结果 PRL-3 和EGFR 在各级鼻腔鼻窦鳞癌组织中均有表达,与正常鼻黏膜比较差异有显著性(P＜0.05),均有...     

MiR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制胰腺癌细胞系生长侵袭能力的体外研究

目的 探讨MiR-21对胰腺癌细胞生长和侵袭的影响.方法 采用脂质体Lipofectamine 2 000将MiR-21 inhibitor和MiR-21 inhibitor阴性对照转染至胰腺癌细胞ASPC-1,qRT-PCR检测转染效果,细胞免疫荧光、Western blot检测转染后目的蛋白的表达,Transwell、划痕实验检测细胞迁移侵袭能力,MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布的改变.结果 成功构建稳定下调MiR-21的胰腺癌细胞亚系ASPC-1-MiR-21,荧光定量PCR结果显示MiR-21表达量明显下调,抑制MiR-21表达后ASPC细胞的侵袭和增殖能力均受到明显抑制;抑制MiR-21能明显增强PTEN蛋白和减低p-AKT蛋白表达水平,对AKT蛋白水平无明显影响.结论 抑制MiR-21表达可能通过调控PTEN/AKT通路抑制胰腺癌细胞AS-PC-1增殖和侵袭.     

miR-22、NLRP3、PI3K/AKT信号通路在卵巢癌中作用研究进展

卵巢癌是女性最致命的恶性肿瘤,有多种信号通路参与其的形成.PI3K/AKT通路可调控细胞内一系列重要的生物学活动,包括细胞的生长,增殖,转录等,该信号通路异常往往导致细胞异常增殖、肿瘤转移以及产生耐药性等重要生物过程的改变.miR-22通过靶向NLRP3抑制PI3K/AKT信号通路.本文将miR-22、NLRP3在卵巢...     

PTEN/PI3K/AKT信号通路在胃癌中的研究进展

胃癌是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一,多种信号途径在胃癌的侵袭和转移等机制中发挥着作用.最近的研究证据表明,PTEN/PI3K/AKT信号通路在胃癌发生发展过程中起到了至关重要的作用,并与细胞的增殖、凋亡、血管生成、侵袭与转移息息相关.本文就近年来PTEN/PI3K/AKT信号通路在胃癌中的发病机制中的研究进展作一综述.     

ART调节PI3K/AKT通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的 探究青蒿琥酯(artesunate,ART)调节磷脂酞肌醇3-激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)信号通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法 体外培养HepG2细胞,分为对照组以及不同浓度(30μg/mL、60μg/mL和120μg/mL) ART组。比较不同组别Hep G2细胞的细胞增殖率、细胞迁移数量、侵袭数量以及Ki-67蛋白、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)、基质金属蛋白酶2 (MMP2)、MMP9和PI3K/AKT通路相关蛋白[磷脂酞肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化的蛋白酶B (p-AKT)]的表达水平。结果 不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞增殖率分别为(81.73±8.39)%、(65.26±6.48)%、(44.27±4.66)%,Ki-67蛋白表达分别为0.76±0.11、0.43±0.09、0.29±0.04,分别与对照组的(100.00±10.51)%、0.98±0.16比较均明显降低,且ART浓度越高,细胞增殖率和Ki-67蛋白...     

PI3K/Akt信号通路在增生性瘢痕中的调控作用

目的 探讨PI3K/AKT信号通路在增生性瘢痕中的调控作用。方法 构建兔耳增生性瘢痕模型,并随机分为4组：正常兔耳皮肤组（A）、瘢痕模型组（B）、DMSO刺激模型组（C）、PI3K特异性抑制剂（LY294002）刺激模型组（D）。通过组织病理学观察兔耳瘢痕的形态学变化;免疫组化和Western blot检测pAkt[S473]和p-Akt[T308]的表达量;免疫荧光双染色评估p-Akt[S473]和p-Akt[T308]的共定位情况;以及TUNEL评估皮肤组织中成纤维细胞的凋亡水平。结果 D组中瘢痕厚度及成纤维细胞数明显高于B和C组。免疫组化和Western blot检测结果表明,p-Akt[T308]和p-Akt[S473]在B组中的表达量明显高于A组,但在D组中显著低于C组。免疫荧光表明,p-Akt[T308]和p-Akt[S473]主要定位于瘢痕组织中的细胞浆内,且在D组中的共表达量低于B组。TUNEL检测结果证实,与A组相比,B组皮肤组织中细胞凋亡水平明显下调,且D组中细胞凋亡水平高于C组（P <0.01）。结论 阻断PI3K/Akt信号通路可通过抑制Akt磷酸化,导致...     

PI3 K／Akt 信号通路在肿瘤研究中的进展

磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路是肿瘤、炎症等发生发展过程中一条重要的信号通路。研究发现,在许多肿瘤组织中, PI3 K/Akt信号通路过度表达和活化与肿瘤的进展密切相关。上游分子通过与PI3K结合,使其构象发生改变,从而磷酸化激活Akt,Akt的活化能调控其下游分子,参与肿瘤调控通路。近年来,PI3 K/Akt信号通路在肿瘤中的重要作用受到众多学者的关注,多种肿瘤组织中检测到PI3 K/Akt信号通路的过度活化,因此靶向该信号通路的研究成为研究热点。目前关于靶向PI3 K/Akt信号通路的抗肿瘤药物在肿瘤治疗方面的临床试验已经展开,Wortmannin、LY294002等PI3K/Akt信号通路抑制剂有着广阔的临床应用前景。     

PI3K/Akt信号通路及PTEN与糖尿病肾病研究进展

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病发展过程中最常见的微血管病变,也是糖尿病严重的慢性并发症之一,其最终导致的终末期肾功能衰竭(ESRD)是糖尿病高病死率的主要原因,严重威胁着人类的健康[1-2].DN的致病因素复杂多变,具体的分子机制尚不明确.近年来,国内外学者认为,DN的发生发展与PI3K/Akt的过度激活关系密切.PI3K/Akt信号转导通路在细胞生长、增殖、凋亡、分化及葡萄糖代谢过程中发挥重要作用[3],它受到上游多种分子的调节以维持细胞和生命的稳态,例如胰岛素、生长因子的正向调节及PTEN的负向调节[4-5].     

慢病毒介导靶向PRL-3 基因的siRNA 抑制肝癌细胞的侵袭性

 【目的】 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)的表达对肝癌细胞侵袭能力的影响&#65377;【方法】 设计&#65380;合成4对针对PRL-3 基因siRNA 的寡核苷酸序列,分别构建质粒,转染293T 细胞,据其对PRL-3 的抑制率,筛选最有效的PRL-3 基因RNAi 靶序列,设计并合成其siRNA 的双链DNA Oligo,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP 线性化载体连接产生重组慢病毒质粒LV-PRL3-SiRNA,并行PCR 和测序鉴定&#65377;将LV-PRL3-SiRNA,pHelper 1.0 和pHelper 2.0三种质粒DNA共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平经孔稀释法测定病毒滴度&#65377;重组慢病毒感染肝癌SMCC7721 细胞,行real time-PCR和western-blot验证PRL-3基因的沉默效果&#65377;用Transwell侵袭试验检测SMCC7721细胞体外侵袭力的改变&#65377;【结果】 成功构建PRL-3 基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为6 × 108 Tu/mL&#65377;和对照组相比,RNA 干扰组SMMC7721 细胞PRL-3 基因的mRNA 水平和蛋白水平的抑制率分别为75%和63%;其穿过人工基底膜的平均数(14.2 ± 0.8)明显少于空白对照组(33.0 ± 1.6)及非特异性siRNA感染组(31.2 ± 0.8),侵袭抑制率为58% (P < 0.01)&#65377;【结论】 降低PRL-3 的表达可抑制肝癌细胞的侵袭能力&#65377;     

结肠癌组织中PTEN蛋白表达与PI3K/AKT信号通路的关系

目的 探讨抑癌基因PTEN与结肠癌发生发展的关系及其与PI3K/AKT信号传导通路的相关性.方法 应用Western blot蛋白印迹技术和免疫组织化学方法检测 32例结肠癌及癌旁正常组织中 PTEN和p-AKT蛋白的表达.结果 PTEN蛋白在结肠癌中表达的阳性率 (31.25%)低于癌旁正常组织 (96.87%) (P＜0.01);而p-AKT蛋白在结肠癌中表达的阳性率(87.5%)高于癌旁正常组织 (15.62%) (P＜0.01);两种蛋白的表达呈负相关(r=-0.872,P＜0.01),且表达水平与肿瘤的分化程度、Duke's分期、有无淋巴结转移及远处器官转移有关(P＜0. 05).结论 PTEN蛋白表达缺失导致AKT信号传导通路持续活化可能在结肠癌的发生发展过程中起着重要作用.     

PRL-3在乳腺癌癌变过程中的表达及意义

目的研究PRL-3在乳腺癌癌变过程中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测60例乳腺癌组织及westelnblot方法检测27例乳腺癌及相应癌旁组织中PRL-3蛋白的表达,应用Χ^2及t检验分析其在乳腺癌组织中表达的意义及与临床病理特征之间的关系。结果免疫组化结果显示PRL-3蛋白在乳腺癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势;乳腺浸润性导管癌中PRL-3与患者的年龄、肿瘤大小、有无家族史、临床分期无明显关系,但与有无淋巴结转移、组织学分级相关。Westernblot结果显示癌组织中PRL-3的表达明显高于癌旁乳腺组织,且有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组。结论PRL-3蛋白的表达水平在乳腺癌癌变过程中呈现上升趋势,在一定程度上提示乳腺癌的发生发展及转移潜能。     

Carvacrol Promotes Cell Cycle Arrest and Apoptosis through PI3K/AKT Signaling Pathway in MCF-7 Breast Cancer Cells

Objective: To examine the role of carvacrol in modulating PI3K/AKT signaling involved in human breast cancer pathogenesis using in vitro experimental model MCF-7 cells. Methods: MTT and lactate dehydrogenase assays were performed with cells treated with different doses of carvacrol (0–250 μ mol/L) at different time points (24 and 48 h). The nuclear morphology was assessed in MCF-7 cells with propidium iodide (PI) and acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) staining and analyzed by fluorescence microscopy. Events like cell cycle arrest and apoptosis were observed by flow cytometric analysis and expressions of p-Rb, cyclin D1, cyclin-dependent kinase 4 (CDK4), CDK6, Bax, Bcl-2, PI3K/p-AKT were analyzed by immunoblot. Results: Carvacrol significantly reduced cell viability with the half maximal inhibitory concentration value of 200 μ mol/L at 24 and 48 h (P<0.05). importantly, there was a significant increase in the accumulation of the G0/G1 phase upon treatment with carvacrol in MCF-7 cells (P<0.05 or P<0.01). A remarkable decrease in protein expressions of p-Rb, cyclin D1, CDK4 and CDK6 denoted cell cycle arrest (P<0.05 or P<0.01). In addition, carvacrol treatment significantly inhibited PI3K/p-AKT protein expressions leading to induction of apoptosis mediated by decreased Bcl2 and increased Bax protein expressions. Further, Annexin V/PI staining by FACS analysis, dual staining by AO/EB and PI staining studies suggested induction of apoptosis by carvacrol through PI3K/Akt signaling pathway in MCF-7 cells. Conclusion: Carvacrol significantly inhibited the breast cancer MCF-7 cell proliferation and induced apoptosis via suppressing PI3/AKT signaling pathway.     

miR-21对肺癌干细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-21对肺癌干细胞增殖、侵袭能力,以及对化疗药物敏感性的影响。方法采用流式细胞边缘群分选技术从人肺癌细胞系A549中分离出肺癌干细胞。应用脂质体分别介导成熟miR-21的阻遏物(inhibitors)和模拟物(mimics)来抑制和增强肺癌干细胞miR-21的表达;实时荧光定量PCR检测肺癌干细胞中miR-21表达水平的变化;噻唑蓝(MTT)法检测转染干预前后肺癌干细胞的增殖情况和对化疗药物的敏感性;Transwell小室检测肺癌干细胞迁移能力。结果抑制组肺癌干细胞miR-21表达水平明显低于非转染组和阴性对照组,而增强组肺癌干细胞miR-21表达水平则显著高于非转染组和阴性对照组(P<0.05);抑制组肺癌干细胞转染后各时间点增殖率较非转染组和阴性对照组明显降低,而增强组肺癌干细胞转染后各时间点增殖率较非转染组和阴性对照组显著升高(P<0.05);Transwell实验显示抑制组转染后48 h穿过人工基底膜的细胞数为(29.55±5.48)个,明显少于非转染组和阴性对照组,而增强组转染后48 h穿过人工基底膜的细胞数为(74.47±8.63)个,明显多于非转染组和阴性对照组(P<0.05);顺铂(DDP)和吉西他滨(GEM)对抑制组转染后48 h肺癌干细胞的IC₅₀值明显低于非转染组和阴性对照组(P<0.05);DDP和GEM对增强组转染后48 h肺癌干细胞的IC₅₀值则明显高于非转染组和阴性对照组(P<0.05)。结论下调miR-21的表达可以抑制肺癌干细胞的增殖和侵袭能力,增强其对化疗药物的敏感性。     

PTEN基因对子宫内膜癌细胞PI3K/AKT通路的影响

 【目的】探讨PTEN基因在子宫内膜癌PI3K/AKT通路中的作用,评估PTEN基因在抗肿瘤治疗中的意义。【方法】利用慢病毒载体系统, 构建人PTEN基因RNA干扰慢病毒载体和PTEN基因过表达慢病毒载体,分别转染PTEN野生型的HEC-1A细胞和PTEN突变型的Ishikawa细胞, 建立PTEN 基因敲减及过表达的细胞模型,Western Blot方法检测PTEN基因敲减或过表达前后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况, MTT法检测慢病毒转染前后细胞增殖的变化,流式细胞术检测慢病毒转染前后细胞周期及细胞凋亡率的变化。【结果】1. HEC-1A细胞转染PTEN基因干扰慢病毒载体后,细胞的增殖曲线和细胞凋亡率与对照组比较无明显变化。但Ishikawa细胞转染PTEN基因过表达慢病毒载体后,增殖曲线和细胞凋亡率显示其生长呈明显抑制状态。2.当HEC-1A细胞转染了RNA干扰病毒后（HEC-1A-RNAi）,Western Blot 结果显示PTEN蛋白表达下调,其EGFR, p-EGFR, mTOR, p-mTOR, AKT, p-AKT蛋白表达增强,当Ishikawa细胞转染了过表达载体病毒后（Ishikawa-PTEN）,Western Blot 结果显示其PTEN蛋白表达上调,p-EGFR,p-mTOR,AKT,p-AKT蛋白表达减弱。3.HEC-1A-RNAi细胞周期中G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,Ishikawa-PTEN细胞周期中G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。【结论】PTEN 基因可以抑制细胞增殖过程, 有可能成为子宫内膜癌患者基因治疗的选择之一。     

CXCR1调控STAT3信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨化学趋化因子受体1（CXCR1）对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 收集结肠癌组织和对应的癌旁组织,提取组织蛋白,Western blot法检测组织中CXCR1表达水平。以人结肠癌细胞HCT116为研究对象,细胞转染CXCR1小干扰RNA（CXCR1 siRNA组）,同时转染siRNA对照组。设置对照组,对照组中只加入转染试剂。培养48h后,Western blot法检测细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3表达水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。人结肠癌细胞与STAT3信号通路抑制剂AG490作用后,检测细胞增殖凋亡情况。结果 CXCR1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中CXCR1、p-STAT3、Bcl-2蛋白水平和细胞存活率明显低于对照组（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中Bax水平和细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。siRNA对照组细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3水平和细胞凋亡率、细胞存活率与对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。抑制剂作用后的细胞增殖凋亡趋势与CXCR1 siRNA组细胞相一致。结论 CXCR1在结肠癌组织中表达上调。抑制CXCR1的表达可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,作用机制与STAT3信号通路有关。     

PI3K/PKB通路在胃癌中的表达及其与PTEN相关性研究

目的探索PI3K/PKB信号转导通路在胃癌发生发展过程中的作用及其与PTEN的相关性。方法对112例胃癌及76例正常胃粘膜组织采用免疫组织化学Envision二步法检测PI3K、PKB和PTEN蛋白、采用原位分子杂交法检测PTENmRNA。结果胃癌组PI3K及PKB表达均明显高于正常胃粘膜组(分别为χ2=9.994,P<0.05;χ2=15.823,P<0.001);随着癌浸润深度的加深(χ2=7.896,P<0.05;χ2=7.939,P<0.05)和淋巴结转移的出现(χ2=9.455,P<0.05;χ2=8.115,P<0.05)PI3K及PKB表达明显增强。而PTEN在胃癌中的表达明显低于正常胃粘膜(χ2=78.494,P<0.001);在胃癌浸润超过肌层组明显低于未超过肌层组(χ2=11.308,P<0.01);伴淋巴结转移组表达明显低于无淋巴结转移组(χ2=17.870,P<0.001)。胃癌组PTENmRNA表达明显低于正常胃粘膜组(χ2=53.959,P<0.001)。且PTEN与PI3K及PKB蛋白表达强度呈明显负相关(r=-0.354,P<0.001;r=-0.222,P<0.05)。结论PI3K/PKB信号转导通路和PTEN在胃癌发生发展过程中分别起促进和抑制作用,两者呈负相关,PI3K/PKB通路有望成为PTEN失活时治疗胃癌的靶点。     

Mcl-1、PI3K通路活化对胃癌细胞生长及化疗敏感性的影响

目的:探讨Mcl-1以及PI3K通路活化对胃癌细胞生长及化疗敏感性的影响。方法:分别用阿霉素、足叶乙甙和PI3K通路抑制剂(wortmannin)在不同时间段处理胃癌细胞BGC-823后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞对药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况并分析细胞周期,Western blot法测定细胞Mcl-1蛋白活性,RT-PCR法测定细胞Mcl-1 mRNA活性。结果:阿霉素、足叶乙甙作用BGC-823 24 h后,Mcl-1蛋白活性降低,Mcl-1 mRNA表达下降。加用Wortmannin后,阿霉素、足叶乙甙对BGC-823凋亡诱导和周期阻滞作用持续增强,Mcl-1蛋白及mRNA表达进一步降低,肿瘤细胞对药物保持较高敏感性。结论:阿霉素、足叶乙甙至少部分是通过下调Mcl-1的表达诱导胃癌细胞凋亡。Mcl-1、PI3K通路活化可促进胃癌细胞的生存,降低化疗敏感性。