肿瘤抗原冲击致敏的IL—2基因修饰的巨噬细胞治疗肾癌的实验 …

目的：观察体外肿瘤抗原冲击致敏的白细胞介素２（ＩＬ－２）基因修饰的巨噬细胞对肾癌小鼠的治疗其相关的免疫机理。方法：通过重组腺病毒的介导，将ＩＬ－２基因转入新鲜分离的小鼠腹腔巨噬细胞，经肿瘤抗原冲击致敏后回输治疗原位肾癌小鼠，ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测脾脏ＮＫ和ＣＴＬ活性。结果：ＩＬ－２基因修饰的巨噬细胞经肿瘤抗原冲击后体内回输可使肾癌小鼠肺转移结节明显减少，存活期明显延长，４０％肾癌小鼠达到长期存活。     

IL-18基因修饰增强肿瘤抗原多肽致敏的树突状细胞体内诱导的抗肿瘤免疫反应

目的 :研究肿瘤抗原多肽致敏的白细胞介素 18(IL 18)基因修饰的树突状细胞体内诱导的抗肿瘤免疫反应。方法 :①以Lewis 3LL肺癌细胞特异性抗原肽mut1冲击致敏IL 18基因修饰的骨髓来源的树突状细胞 (DC IL 18 mut1) ,每次用其 1× 10 5 只皮下免疫小鼠 2次 ,然后测定脾细胞的NK活性及CTL杀伤活性 ;②以DC IL 18 mut1每次 2× 10 5 只皮下免疫 1次 ,然后再以 5× 10 53LL细胞攻击 ,在诱导及效应阶段分别以单抗阻断不同免疫成份 ,观察肿瘤的生长。结果 :以DC IL 18 mut1皮下免疫后可诱导出比DC mut1等免疫组更高水平的 3LL肺癌细胞特异性CTL ,并使NK活性明显增加 ;单抗体内阻断实验提示在DC IL 18 mut1免疫诱导阶段 ,CD4 + T细胞和抗原共刺激分子、IFN γ均起到重要作用 ,而效应阶段CD8+ T、IFN γ、NK起作用 ,而CD4 + T则是非必需的。结论 :DC IL 18 mut1皮下免疫后可诱导高水平的抗肿瘤免疫活性 ,其机理与抗原有效提呈、特异性CTL诱导、NK活性增加以及CD4 + 、CD8+ T、NK细胞、IFN γ参与密切相关。     

肠癌RNA转染小鼠骨髓来源单核细胞的抗肿瘤效应

目的 :以提取的CT 2 6小鼠结肠癌细胞RNA作为抗原物质 ,体外转染骨髓来源的单核细胞 ,回输小鼠体内 ,观察其抗肿瘤效应 ;同时平行比较传统肿瘤冻融抗原体外冲击单核细胞的抗肿瘤效应。方法 :小鼠骨髓细胞体外以GM CSF诱导培养获取单核细胞 ,流式细胞仪检测纯度 ;Trizol法提取获得CT 2 6细胞总RNA ,应用TransMessenger体外转染单核细胞 ,对照组单核细胞以肿瘤冻融抗原冲击 ;LDH释放法检测小鼠体内CTL杀伤活性 ,观察各组小鼠成瘤情况及生存期。结果 :小鼠骨髓细胞经诱导培养后 ,获得大量高纯度的单核细胞 ,流式细胞仪检测CD11b >95 % ;提取的CT 2 6细胞总RNA体外经Trans Messenger介导转染单核细胞后 ,回输小鼠 ,可以诱导体内生成高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)活性 ,使小鼠获得抵抗后继CT2 6细胞攻击的免疫保护能力 ,并显著高于肿瘤冻融抗原冲击的单核细胞回输组。结论 :抗原提呈细胞经肿瘤总RNA转染后 ,可以诱导机体产生CTL ,有效地诱发特异性抗肿瘤免疫功能     

抗原肽致敏白介素12基因修饰的树突状细胞免疫治疗转移性肺癌

目的　探讨肿瘤多肽致敏的白介素 12 (IL 12 )基因修饰的树突状细胞 (DC)对自发性肺转移癌的治疗作用。方法　小鼠足垫注射 3LLLewis肺癌细胞建立自发性肺转移癌模型 ,经骨髓来源的IL 12基因修饰、3LL特异抗原多肽Mut1体外致敏DC(DC IL 12 Mut1)皮下免疫 2次 ,观察荷瘤鼠肺脏质量、肺表面转移结节、存活期的变化及相应免疫指标等变化 ,实验分8组 ,组间差异行t检验 ,生存期行时序检验。结果　与对照病毒组 (DC LacZ Mut1)及未处理DC组相比 ,DC IL 12 Mut1组肺脏质量最轻 (P <0 .0 1)、肺表面转移结节最少 (P <0 .0 1)、存活期最长 (P <0 .0 1) ,其诱导CTL活性 (P <0 .0 1)和NK活性 (P <0 .0 1)最显著。结论　MHCⅠ类限制性肿瘤抗原多肽致敏的IL 12基因修饰的DC能通过诱导显著的抗肿瘤免疫反应而对自发性肺转移癌有明显的治疗作用     

联合应用IL-2及IL-4基因转染瘤苗对实验性肺转移肿瘤的治疗作用

将IL—2基因转染的高分泌IL—2的B16黑色素瘤细胞株(B2)及IL—4基因转染的高分泌IL—4的B16黑色素瘤细胞株(B4)制备成新型瘤苗,用以治疗实验性肺转移荷瘤小鼠,并辅以低剂量环磷酰胺,结果表明,荷瘤小鼠存活期明显延长;肺部转移结节数明显减少;两种瘤苗联合治疗后的疗效较单独使用明显,当辅以低剂量环磷酰胺时治疗效果更加明显。体内免疫功能检测表明,经两种瘤苗联合治疗的荷瘤小鼠脾细胞NK及CTL杀伤活性升高得更加明显,但对LAK活性及腹腔巨噬细胞杀伤活性无明显协同增强作用;脾细胞经诱导后产生的细胞因子中,IL—2含量有所升高。     

肿瘤抗原触发M-CSF和IFN-γ联合基因转染的巨噬细胞抗肿瘤转移作用的研究

目的本研究探讨了肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ基因联合转染的巨噬细胞对黑色素瘤实验性肺转移的治疗作用及其免疫机理。方法将联合基因转染的巨噬细胞经尾静脉回输治疗黑色素瘤实验性肺转移小鼠，经治疗后于荷瘤后第１７天处死小鼠，计数荷瘤小鼠的肺部转移结节数并观察其长期存活期，用５１Ｃｒ４小时释放法检测体外诱导的ＣＴＬ活性，采用未配对计量资料的ｔ检验处理数据。结果联合基因转染后治疗组的小鼠长期存活率为１６％，加用肿瘤抗原触发后的治疗组有３３％的小鼠长期存活。小鼠脾细胞经体外诱导的ＣＴＬ对野生型Ｂ１６．Ｆ１０细胞的杀伤活性，在经肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ联合基因转染巨噬细胞治疗的荷瘤小鼠最高，与用未经抗原触发的联合基因转染巨噬细胞治疗组差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论体外经肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ联合基因转染的巨噬细胞过继回输疗法是肿瘤特别是转移性肿瘤的一种有效免疫治疗手段，机体的ＣＴＬ在该疗法的抗肿瘤作用中可能发挥了重要的作用。     

人IL-4基因修饰增强瘤细胞特异性CTL杀伤活性机制初探

目的 探讨IL－4基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性的机制。方法 通过逆转录病毒载体pL-IL-4-SN将人IL－4基因导入肝癌细胞系HepG2细胞,以IL－4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应,通过流式细胞仪检查肿瘤细胞表面分子表达。结果 IL－4基因修饰诱导瘤细胞表达MHCⅡ类抗原、B7－1及ICAM－1等细胞表面分子,对MHCⅠ类抗原表达无影响,其瘤苗诱导的CTL杀伤活性为罢生型瘤细胞的7倍（P＜0.01）,加入抗IL－4单克隆抗体（McAb）可完全阻断IL－4诱导的细胞表面分子表达,IL－4基因修饰瘤苗诱导CTL反应时培养上清可测及大量IL－2产生,抗IL－4或抗细胞表面分子的McAb可降低IL－2产生及抑制CTL反应。结论 IL－4基因修饰可能是通过诱导MHCⅡ类抗原等表达分子表达,促进IL－2产生而增强CTL杀伤活性。     

IL-2基因修饰的肿瘤细胞对小鼠体内巨噬细胞数量和功能的影响

目的　探讨IL - 2基因修饰的肿瘤细胞对小鼠体内巨噬细胞 (M)数量和功能的影响 .方法　应用腺病毒载体介导的小鼠IL - 2基因 (Ad -mIL - 2 )修饰CT2 6小鼠结肠腺癌细胞 (CT2 6 -mIL - 2 )后皮下接种小鼠 ,计数小鼠腹腔M的数量 ,观察其吞噬功能 ,混合淋巴细胞反应法 (MLR)测定其抗原提呈能力 ,MTT法检测其杀伤活性 .结果　mIL - 2基因修饰的CT2 6细胞 (CT2 6 -mIL - 2细胞 )皮下接种后 ,小鼠腹腔M数量显著增加 ,吞噬能力明显增强 ,抗原提呈能力提高 ,并具有较强的杀伤活性 .结论　CT2 6 -mIL - 2细胞分泌的IL - 2能有效地激活M ,这可能是CT2 6 -mIL - 2细胞体内致瘤性下降的原因之一 .     

小鼠IL-18基因修饰瘤苗的抗白血病作用研究

我们在前期工作中成功制备了IL-18基因修饰的白血病疫苗,为了探讨IL-18基因修饰瘤苗的体内抗白血病作用,实验采用L1210小鼠淋巴细胞白血病模型,在小鼠体内接种IL-18基因修饰瘤苗,观察瘤苗对L1210细胞致瘤性的影响及免疫保护作用,并进一步对其抗白血病作用机制进行了探索。结果显示,IL-18基因修饰瘤苗能够明显延长荷瘤小鼠存活时间,大部分小鼠达到长期生存,且长生存小鼠用野生型L1210细胞二次攻击后大多数仍能长期生存,表明IL-18基因修饰瘤苗有显著的抗白血病作用,并可诱导小鼠产生免疫记忆和免疫保护。机制探讨发现,接种IL-18基因修饰瘤苗后,小鼠脾脏淋巴细胞对L1210肿瘤细胞的CTL及NK细胞杀伤活性明显高于对照组(P<0.05),提示IL-18基因修饰瘤苗能够显著增强抗肿瘤CTL和NK细胞反应。接种瘤苗可使小鼠IFN-γ水平升高,但与对照相比无统计学意义,提示IFN-γ可能在IL-18基因修饰瘤苗诱导的抗肿瘤免疫应答中作用不大。     

树突状细胞介导的肿瘤免疫治疗研究

树突状细胞是抗原递呈能力最强的抗原递呈细胞。树突状细胞可通过交叉致敏途径呈递外源性抗原如肿瘤抗原,诱导CD8+的CTL应答。应用不同形式的肿瘤抗原负载DC,将致敏DC作为疫苗回输体内可诱导机体产生有效的抗肿瘤免疫应答。