骨髓间充质干细胞表达神经营养因子及治疗脊髓损伤的研究

目的　研究大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSC)表达脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经生长因子 (NGF)以及BMSC移植对脊髓损伤的治疗作用。方法　取大鼠骨髓培养BMSC并传代 ,进行CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色鉴定。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测BM SC中BDNF和NGFmRNA的表达。用NYU方法建立大鼠脊髓损伤模型 ,将 15 0 0 0个BMSC注射到损伤脊髓中。 1～ 5周后进行BBB运动功能评分 ,观察BMSC在脊髓中的迁移 ,进行NF、GFAP和Gal C免疫荧光检测。结果　BMSC贴壁生长 ,免疫细胞染色CD44 (+ )、CD45 (-)和CD71(+ ) ,表达BDNF和NGFmRNA。移植BMSC后脊髓损伤的大鼠运动功能改善 ,5周后BBB评分从对照组的 (11.6± 1.7)分提高到 (15 .4± 2 .2 )分。BMSC在脊髓内向头、尾两侧迁移约 5mm ,未检测出向神经细胞诱导转化。结论　BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF ,移植后能促进大鼠脊髓损伤的运动功能恢复。     

Stem cells modified by brain-derived neurotrophic fac-tor to promote stem cells differentiation into neurons and enhance neuromotor function after brain injury

Objective: To promote stem cells differentiation into neurons and enhance neuromotor function after brain in-jury through brain-derived neurotrophic factor (BDNF) induction.Methods: Recombinant adenovirus vector was ap-plied to the transfection of BDNF into human-derived um-bilical cord mesenchymal stem cells (UCMSCs). Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to deter-mine the secretion phase of BDNF. The brain injury model of athymic mice induced by hydraulic pressure percussion was established for transplantation of stem cells into the edge of injury site. Nerve function scores were obtained, and the expression level of transfected and non-transfected BDNF, proportion of neuron specific enolase (NSE) andglial fibrillary acidic protein (GFAP), and the number of apoptosis cells were compared respectively. Results: The BDNF expression achieved its stabiliza-tion at a high level 72 hours after gene transfection. The mouse obtained a better score of nerve function, and the proportion of the NSE-positive cells increased significantly (P<0.05), but GFAP-positive cells decreased in BDNF-UCMSCs group compared with the other two groups (P<0.05). At the site of high expression of BDNF, the number of apoptosis cells decreased markedly.Conclusion: BDNF gene can promote the differentia-tion of the stem cells into neurons rather than gliai cells, and enhance neuromotor function after brain injury.     

异氟醚麻醉对大鼠血皮质醇及海马脑源性神经营养因子和神经生长因子的影响

目的 探讨异氟醚麻醉对大鼠血皮质醇及海马脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)的影响.方法 成年SD雄性大鼠36只,10周龄,体重250～280 g,采用随机数字表法,将其随机分为6组:正常对照组(C组,n=6)、O2组(O组,n=6)和异氟醚组(I组,n=24).I组通入2％异氟醚2h,纯氧流量3 L/min,O组仅通入纯氧.O组于停止通入纯氧后进行水迷宫实验,Ⅰ组分别于停止给药后2h、1、7、14 d取6只大鼠、进行水迷宫实验,定位航行实验中记录逃避潜伏期和游泳总路程,空间探索实验中记录穿越平台次数和游泳总路程.每个时点水迷宫实验结束后,取眼眶血,测定血浆皮质醇浓度;取海马组织,测定BDNF和NGF的含量.结果 与C组比较,O组空间探索实验中穿越平台次数减少,游泳总路程缩短,血浆皮质醇浓度降低,Ⅰ组于停止给药后1d时定位航行实验中逃避潜伏期和游泳总路程均延长,空间探索实验中穿越平台次数减少,游泳总路程缩短、海马BDNF含量降低(p＜0.05或0.01).结论 异氟醚麻醉对大鼠认知功能短期内有一过性抑制作用,其机制与促进皮质醇释放与海马BDNF合成有关,而与海马NGF合成无关.     

神经干细胞移植促进脊髓损伤后脑源性神经营养因子的表达

目的：探讨神经干细胞（NSCs）移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响及其意义。方法：NSCs提取自新生Wistar大鼠的海马区，经培养、鉴定。制作大鼠脊髓损伤（SCI）模型，于伤后第7天移植NSCs。实验分为3组：NSCs移植组（A组），DMEM填充组（B组），正常对照组（C组）。应用RT—PCR法和免疫组化法观察细胞移植后BDNF基因表达的变化。结果：RT—PCR结果分析，移植术后第1、3、5天，A组BDNF mRNA的表达量明显高于B组，差异有统计学意义（P〈0．05）。组化结果分析，移植术后第7、14、28天BDNF的表达量A组明显高于B组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：NSCs在移植后可上调脑源性神经营养因子BDNF基因的表达，是其修复脊髓损伤的机制之一。     

Sciatic nerve regeneration by microporous nerve conduits seeded with glial cell line-derived neurotrophic factor or brain-derived neurotrophic factor gene transfected neural stem cells

Neurotrophic factors such as the glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) promote nerve cell survival and regeneration, but their efficacy in repairing a longer gap defect of rat sciatic nerve (15 mm) has not been established. In this study, two recombinant mammalian vectors containing either rat GDNF gene or BDNF gene were constructed and each was transfected into neural stem cells (NSCs). It was found that the transfection of GDNF or BDNF gene into NSCs led to significantly enhanced expression of GDNF or BDNF mRNA. The amount of GDNF or BDNF protein secreted from the transfected NSCs showed a 3.3-fold or 2.5-fold increase than that from nontransfected NSCs, respectively. The regeneration capacity of rat sciatic nerve in a poly(D,L-lactide) conduit seeded with GDNF or BDNF-transfected NSCs was evaluated by the histology, functional gait, and electrophysiology after 8 weeks of implantation. It was observed that the degree of myelination and the size of regenerated tissue in the conduits seeded with GDNF- and BDNF-transfected NSCs were higher than those seeded with the nontransfected NSCs. Conduits seeded with GDNF-transfected NSCs had the greatest number of blood vessels. The functional recovery assessed by the functional gait and electrophysiology was significantly improved for conduits seeded with GDNF or BDNF-transfected NSCs. It was concluded that the genetically modified NSCs may have potential applications in promoting nerve regeneration and functional recovery.     

NGF和BDNF在炎性痛大鼠背根神经节和脊髓背角的表达

目的 观察神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)在福尔马林致痛大鼠外周、背根神经节(DRG)和脊髓背角的表达变化及相互关系，探讨神经营养因子在疼痛发生机制中的作用。方法 采用大鼠后足掌皮下注射福尔马林溶液的外周炎性痛模型。成年SD大鼠24只随机分为四组(每组6只)：对照组(A组)；致痛组根据取材时间不同分为，致痛后2h取材(B组)、致痛后24h取材(C组)、致痛后48h取材(D组)。观察致痛1h内疼痛行为变化，应用免疫组织化学方法结合计算机图像分析技术检测致炎足底皮肤、DRG和脊髓背角浅层内NGF的表达，及DRG和脊髓背角浅层表达BDNF的变化。结果 所有致痛组大鼠都表现出明显的两期伤害性反应。在致痛后2h患侧足底皮肤、DRG和24h时脊髓背角浅层表达的NGF开始增加，致痛24h后BDNF在患侧DRG表达开始增加，且与NGF在患侧DRG神经元的表达变化成正相关。48h时BDNF在患侧脊髓背角浅层表达开始增加。结论 NGF不仅是产生炎性痛外周机制的重要介质之一，还可通过促进BDNF在脊髓背角的表达，共同参与中枢敏感化的产生。     

Adenovirus vector-mediated ex vivo gene transfer of brain-derived neurotrophic factor to bone marrow stromal cells promotes axonal regeneration after transplantation in completely transected adult rat spinal cord

The aim of this study was to evaluate the efficacy in adult rat completely transected spinal cord of adenovirus vector-mediated brain-derived neurotrophic factor (BDNF) ex vivo gene transfer to bone marrow stromal cells (BMSC). BMSC were infected with adenovirus vectors carrying β-galactosidase (AxCALacZ) or BDNF (AxCABDNF) genes. The T8 segment of spinal cord was removed and replaced by graft containing Matrigel alone (MG group) or Matrigel and BMSC infected by AxCALacZ (BMSC-LacZ group) or AxCABDNF (BMSC-BDNF group). Axons in the graft were evaluated by immunohistochemistry and functional recovery was assessed with BBB locomotor scale. In the BMSC-BDNF group, the number of fibers positive for growth associated protein-43, tyrosine hydroxylase, and calcitonin gene-related peptide was significantly larger than numbers found for the MG and BMSC-LacZ groups. Rats from BMSC-BDNF and BMSC-LacZ groups showed significant recovery of hind limb function compared with MG rats; however, there was no significant difference between groups in degree of functional recovery. These findings demonstrate that adenovirus vector-mediated ex vivo gene transfer of BDNF enhances the capacity of BMSC to promote axonal regeneration in this completely transected spinal cord model; however, BDNF failed to enhance hind limb functional recovery. Further investigation is needed to establish an optimal combination of cell therapy and neurotrophin gene transfer for cases of spinal cord injury.     

骨髓基质干细胞和神经生长因子悬液移植对脊髓损伤修复的影响

目的研究骨髓基质干细胞(BMSCs)移植联用神经生长因子(NGF)对脊髓损伤修复的治疗作用。方法用改良Allen法制成SD大鼠脊髓损伤动物模型(共32只),1周后分别将DMEM、BMSCs、NGF和BMSCs NGF移植入脊髓损伤部位即制成四组(每组8只),移植1、2个月后分别采用神经核蛋白(NeuN)抗体、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体和神经丝蛋白(NF)抗体进行免疫荧光染色观察移植的BMSCs的存活及分化情况、损伤部位神经纤维的再生情况。HE染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况。同时采用BBB运动评分观察大鼠运动功能恢复情况。结果移植1、2个月后,部分移植细胞呈NeuN和GFAP阳性,同时实验组可见明显的神经纤维再生。脊髓损伤处的空洞面积明显减小,差异有显著性意义(P＜0．05),BBB评分结果比对照组均有明显增高,差异有显著性意义(P＜0．05)。在BMSCs NGF组上述改变更加显著。结论BMSCs可在脊髓损伤处分化为神经元和神经胶质细胞,BMSCs和NGF能够减小脊髓损伤处的空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复,两者联合应用在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

神经生长因子与睫状神经营养因子促进大鼠坐骨神经再生的协同作用研究

目的:利用新型神经再生小室探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)促进周围神经再生的协同性作用。方法:36只大鼠随机分为A、B、C3组,每组12只,用自行研制的梭形双通道桥接管桥接坐骨神经10mm缺损。A组,2支管内均注入几丁糖凝胶(100μl);B组,一侧支管内注入几丁糖(100μl) NGF(5μl) 生理盐水(5μl),另一侧支管内注入几丁糖(100μl) NGF(5μl) CNTF(5μl);C组,一侧支管内注入几丁糖(100μl) CNTF(5μl) 生理盐水(5μl),另一侧支管内注入几丁糖(100μl) NGF(5μl) CNTF(5μl)。术后8、16周对再生神经的大体形态、常规病理及超微结构进行观察,并用核黄逆行示踪评估再生神经的轴浆运输功能。结果:NGF CNTF侧再生神经呈淡黄色,质韧,弹性佳,优于对照侧,形态学观察见再生神经纤维数目多,粗细均匀,排列整齐,有髓纤维髓鞘厚,轴突直径大。其轴浆运输功能也明显优于对照侧。结论:NGF与CNTF对促进周围神经形态结构和功能的恢复均具有明显的协同作用。     

同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的时效性分析

目的：观察脊髓损伤后不同时间点骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）移植治疗后大鼠行为学变化、脊髓的病理改变及脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor,BDNF）和神经生长因子（nervegrowthfactor,NGF）表达变化,探讨BMSCs的最佳移植时间。方法：80只健康成年SD大鼠随机分为8组,每组10只。A组为假损伤组,暴露胸10段脊髓但不造成冲击伤,B、C、D、E、F、G、H组以改良Allen法建立脊髓损伤模型。造模成功后,C、D、E、F、G、H组分别于损伤后0h、6h、24h、3d、5d和7d,将lxl0。体外培养的BMSCs用微量注射器注入于脊髓损伤局部,B组为单纯造模组,用等量细胞培养液代替。各组分别于损伤后1、2、4周进行脊髓运动功能BBB（Basso,Beattie,Bresnahan）运动学评分;分别取各组脊髓损伤组织0．5cm,制作HE染色病理切片,观察其形态学改变;Elisa法检测各组大鼠脊髓BDNF和NGF表达情况。结果：假手术组1、2、4周大鼠脊髓功能BBB评分均明显高于其余7组（P〈0．01）;术后l周细胞移植各组评分与单纯造模组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;术后2周和4周细胞移植各组评分高于单纯造模组（P〈0．05）;损伤后2周BBB评分从高到低依次为F、E、G、D、H、C组,但6组组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）;损伤后4周BBB评分,F组与其余5组（C,D,E,G,H组）比较差异有统计学意义（P〈0．05）,但其余5组组间差异无统计学意义（P〉O．05）。EUSA检测结果显示,F组BDNF和NGF含量均高于其他7组（P〈0．05）。大鼠脊髓标本切片HE染色,假手术组脊髓组织结构完整清楚,无中性粒细胞浸润;其余7组局部组织水肿明显,灰白质交界处模糊,周围可见不同程度胶质细胞增生及炎细胞浸润。结论：大鼠脊髓损伤后同种异体BMSCs移植对脊髓功能恢复有一定疗效,损伤后3d可能是BMSCs最佳移植时间。     

脑源性神经营养因子前体抑制少突胶质细胞前体细胞活性的研究

目的 观察脑源性神经营养因子前体(progenitor of Brain-derive neurotrophic factor,proBDNF)对少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precusor cells,OPCs)增殖、分裂及迁移的影响,探讨proBDNF与p75神经营养因子受体(p75 neurotrophic receptor,p75NTR)信号转导通路的关系.方法 体外实验应用大鼠少突胶质细胞系OLN-93作为研究对象,测定不同浓度proBDNF对OLN-93细胞分裂、增殖活性的影响;应用免疫荧光染色方法观察OLN-93细胞表面p75NTR 、sortilin和内源性proBDNF 的表达;观察proBDNF抗体治疗对OPCs增殖活性的影响.体内实验应用proBDNF抗体对SD大鼠T9脊髓损伤模型进行治疗,观察BBB评分的改善情况;应用免疫荧光染色观察BrdU+/NG2+细胞在脊髓损伤后的数量及聚集部位,评估proBDNF及其抗体对OPCs生物学活性的影响,并观察p75NTR及sortilin 在治疗前后的表达水平变化.结果 proBDNF对OPCs的分裂、增殖具有明显的抑制作用,且可被proBDNF抗体所拮抗.p75NTR的表达水平可被proBDNF抗体下调.结论 内源性proBDNF对OPCs的分裂、增殖具有明显的抑制作用,极有可能通过p75NTR-sortilin通路介导.proBDNF抗体治疗可以拮抗proBDNF的作用,提高OPCs的活性并促进损伤后的功能恢复,具有重要的研究与应用价值.     

神经生长因子和脑源性神经营养因子基因修饰的雪旺细胞和胚胎脊髓细胞悬液植入促进大鼠脊髓损伤修复的研究

目的从转基因角度探讨治疗脊髓损伤的有效性。方法用改良Allen打击法制作脊髓损伤动物模型,1周后将神经生长因子nervegrowthfactorNGF和脑源性神经营养因子brainderivedneurotrophicfactorBDNF基因修饰的雪旺细胞(Schwanncells,SCs)和胚胎脊髓细胞悬液(fetalspinalcordcellsuspension,FSCS)移植联合植入脊髓损伤部位,1个月和3个月后用免疫组化方法观察神经丝蛋白NF、胶质纤维酸性蛋白GFAP、髓基质蛋白MBP、5-羟色胺5HT、NGF和BDNF的变化,并根据图像分析各实验组的免疫阳性反应变化;通过光电镜观察脊髓组织形态学改变。结果将转NGF和BDNF基因的SCs与FSCS联合植入脊髓损伤部位有以下优点:1移植物能很好地与宿主融合和存活,2能发挥FSCS的“桥接”、“中介”作用,3SCs可以起到神经轴突的“导管”、“导向”作用,4神经营养因子(neurotrophicfactors,NTFs)NGF和BDNF可以刺激轴突的生长和挽救受损的神经元。结论将NGF和BDNF基因修饰的SCs和FSCS移植联合起来,让局部释放的NTFs不断刺激、引导宿主纤维和移植物的整合与联系,以促进脊髓损伤的修复。此方法为将来治疗脊髓损伤提供线索。     

脑源性神经营养因子在激活态雪旺细胞中表达的初步实验研究

目的 分析激活态雪旺细胞的脑源性神经营养因子(brain—derived neurotrophic factor，BDNF)表达及其对神经再生的作用。方法 选用20只SD大鼠，将大鼠右侧正中神经及尺神经在腋部切断进行激活(实验组)，左侧的正常神经为(对照组)。采用双酶消化法获取雪旺细胞并进行激活后提取-mRNA，应用RT-PCR的方法比较BDNFmRNA的变化。结果 激活态雪旺细胞BDNFmRNA表达比对照组明显增多。结论 激活态雪旺细胞分泌神经营养因子BDNF增多，具有促进神经再生的作用。     

Effects of nerve growth factor on N-methyI-D-asparate receptor 1 after spinal cord injury in rats

To explore the effects of the nerve growth factor ( NGF ) on N-methyI-D-asparate receptor 1(NMDAR 1 ) after spinal cord injury. Methods: Spinal cord injury of Wistar rats was performed with Allen's method by a 10 g x 2.5 cm impact on the posterior T8 spinal cord. NGF was given to the rats of the treatment group via subarachnoid space tube at once,2, 4, 8, 12 and 24 hours after spinal cord injury,respectively. The expression of NMDAR1 mRNA in spinal cord was detected by in situ hybridization. Results: Rare expression sequence of NMDAR1 mRNA was found in rat spinal cord of the normal group. A strong expression sequence of NMDAR1 mRNA was found in rat spinal cord of the normal saline group. The expression of NMDAR1 mRNA in the NGF group was significantly decreased as compared with that in the normal saline group ( P ＝ 0.01 ). Conclusions: NGF can relieve damage of injured spinal cord by prohibiting the expression of NMDAR1 mRNA.     

神经生长因子与睫状神经营养因子影响周围神经再生的比较研究

目的　比较神经生长因子 (nervegrowthfactor ,NEF)和睫状神经营养因子 (ciliaryneurotrophicfactor ,CNTF)促进大鼠坐骨神经再生作用的差异性。方法　用梭形双通道乳胶管桥接 3 2只SD大鼠坐骨神经缺损 (长 10mm)。按注入桥接管内物质的不同 ,将大鼠随机分为 2组。A组 :医用几丁糖凝胶组 (双侧 ) ,B组 :医用几丁糖凝胶 NGF(左侧 )和医用几丁糖凝胶 CNTF(右侧 )组。术后 12、16周对再生神经作肌电检测和形态学观察。结果　术后 16周 ,A组双支管内再生神经的形态无显著差异 (P >0 .0 5 )。B组NGF侧再生纤维排列欠整齐 ,以有髓纤维为主 ,且髓鞘厚 ,轴突直径大 ;CNTF侧再生神经纤维排列整齐 ,分布均匀 ,有髓纤维与无髓纤维均增加。NGF侧再生神经的运动传导速度慢于CNTF侧 ,但复合运动动作电位 (compoundmotoractionpotential,CMAP)和皮层体感诱发电位 (cortexsomatosesensoryevokedpotential,CSEP)的潜伏期较CNTF侧长 ,波幅较低 (P <0 .0 5 )。结论　NGF促进有髓纤维再生和髓鞘形成的作用较强 ,CNTF可同时促进有髓纤维和无髓纤维再生 ,且其促进神经功能恢复的作用优于NGF。     

右美托咪定对老龄大鼠术后海马脑源性神经营养因子及胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的评价右美托咪定对老龄大鼠术后海马脑源性神经营养因子(BDNF)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)的影响。方法老年雄性SD大鼠144只,18~20月龄,体重450~500g,随机分为三组:正常对照组(C组,n=48),骨折复位模型组(M组,n=48)和右美托咪定组(D组,n=48)。D组于骨折复位手术开始前20min输注右美托咪定负荷剂量3.0μg/kg,之后以3.0μg·kg-1·h-1持续输注至手术结束。术前1d、术后1、3、7d进行Morris水迷宫测试,记录逃避潜伏期和游泳总距离。各时点水迷宫实验结束后处死取海马组织,采用ELISA法检测海马BDNF和ChAT的含量,采用免疫组化法测定海马BDNF和ChAT的表达。结果与C组比较,M组术后1、3d和D组术后1d水迷宫测试的逃避潜伏期及游泳总距离明显延长,海马BDNF和ChAT的表达明显降低(P0.05)。与M组比较,D组术后1、3d水迷宫测试的逃避潜伏期及游泳总距离明显缩短,而海马BDNF和ChAT的表达明显增加(P0.05)。与术后1d比较,M组术后7d和D组术后3、7d水迷宫测试的逃避潜伏期及游泳总距离明显缩短,而海马BDNF和ChAT的表达明显增加(P0.05)。结论右美托咪定可改善老龄大鼠术后认知功能,其机制可能与其促进海马BDNF及ChAT的释放有关。     

右美托咪定复合小剂量氯胺酮对神经病理性痛大鼠痛觉过敏及脊髓背角BDNF mRNA表达的影响

目的 探讨右美托咪定复合小剂量氯胺酮对神经病理性痛大鼠痛觉过敏及脊髓背角脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA表达的影响.方法 SD雄性大鼠45只,8～ 12周龄,体重230 ～ 270g,采用随机数字表法,将其分为5组(n=9):假手术组(S组)、坐骨神经分支损伤组(SNI组)、右美托咪定组(D组)、氯胺酮组(K组)以及右美托咪定复合氯胺酮组(K+D组).除S组仅暴露坐骨神经外,其余各组均制备坐骨神经分支损伤模型.从术后24h开始,D组、K组和K+D组每天腹腔注射右美托咪定40μg/kg、氯胺酮10 mg/kg和右美托咪定20 μg/kg复合氯胺酮5 mg/kg,连续21 d,S组和SNI组给予等容量生理盐水.分别于术前ld、术后3、7、14、21 d时测定机械痛阈;机械痛阈测定结束后,分别于术前1d、术后7、21 d时处死3只大鼠,取L4-6脊髓背角,采用实时PCR法测定BDNF mRNA表达.结果 与S组比较,SNI组、K组、D组和K+D组术后机械痛阈均降低,脊髓背角BDNF mRNA表达上调(P＜0.05);与SNI组比较,K组、D组和K+D组术后机械痛阈升高,脊髓背角BDNF mRNA表达下调(P＜0.05);与K组和D组比较,K+D组术后机械痛阈升高,脊髓背角BDNF mRNA表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪定复合小剂量氯胺酮对大鼠神经病理性痛具有协同镇痛作用,其机制与直接或者间接抑制脊髓背角BDNF合成有关.     

不同传入神经损伤对大鼠神经病理性痛形成的影响及其与脊髓和背根神经节BDNF的关系

目的 探讨不同传入神经损伤对大鼠神经病理性痛形成的影响及其与脊髓和背根神经节(DRG)脑源性神经营养因子(BDNF)的关系.方法 雄性SD大鼠24只,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、腓肠神经损伤组(SUR组)和腓肠肌-比目鱼肌(GS)神经损伤组(GS组).SUR组和GS组分别暴露腓肠神经和GS神经并剪断,S组仅暴露腓肠神经和GS神经而不剪断.于术前1 d和术后3、7 d时测定大鼠机械痛阈.于术后7 d痛阈测定结束后,取术侧L5的DRG和脊髓节段,测定脊髓背角的BDNF表达,计算BDNF阳性神经元和受损神经元(ATF-3阳性神经元)占总DRG神经元的百分比和ATF-3阳性神经元中BDNF阳性神经元的百分比.结果 与术前1 d时比较,GS组术后各时点机械痛阈降低(P＜0.01).与S组和SUR组比较,GS组机械痛阈降低,脊髓背角BDNF表达上调,BDNF阳性神经元占总DRG神经元的百分比升高(P＜0.01);S组和SUR组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).与SUR组比较,GS组ATF-3阳性神经元占总DRG神经元的百分比差异无统计学意义(P＞0.05),而ATF-3阳性神经元中BDNF阳性神经元的百分比升高(P＜0.05).结论 切断来自大鼠骨骼肌的传入神经可形成神经病理性痛,其原因与上调DRG和脊髓背角中BDNF的表达有关;而切断来自皮肤的传入神经则不会形成神经病理性痛.     

大鼠骨髓间充质干细胞与神经生长因子的体外构建的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的体外构建表达神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的能力,同时使MSCs被绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)稳定标记,通过病毒载体将NGF和GFP基因高效转染到MSCs中。方法取2月龄100～150 g Wistar大鼠,全骨髓法分离培养纯化大鼠MSCs,利用携带人NGFβ基因的修复缺陷性重组腺病毒(Ad- hNGFβ)和携带GFP基因的复制缺陷性逆转录病毒(Rt-GFP)转染MSCs,荧光显微镜观察GFP阳性的MSCs,免疫细胞化学和Western-blot检测hNGFβ的表达。结果Rt-GFP转染后,80%～90%MSCs可激发出明亮的绿色荧光,且荧光不随培养时间延长和传代次数增加而衰减。Ad-hNGFβ的转染MSCs中hNGFβ阳性率(90．17±2．14)显著高于阴性对照组(2．17±0．75)和空白对照组(1．83±0．98,P＜0．01),转染后MSCs中NGFβ表达量(188．67±8．71)显著高于阴性对照组(25．67±4．08)和空白对照组(27．50±3．33,P＜0．01)。结论大鼠间充质干细胞的体外构建中Ad-hNGFβ可以高效转染MSCs,实现NGF在MSCs中高效表达,Rt-GFP可以使MSCs获得长效标记。     

种植转染VEGF165基因骨髓基质细胞的脱蛋白异体骨在裸鼠体内的成骨

目的:探讨脱蛋白骨支架种植转染血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)165基因的骨髓基质细胞体内的成骨作用.方法:从狗的髂骨穿刺骨髓分离骨髓基质细胞,应用脂质体转染VEGF165基因,以RT-PCR检测转染的基因表达.随机选取4周龄BALB/C裸鼠30只,随机分为3组,各组10只.实验组A为脱蛋白骨 转染pcDNA3-hVEGF165基因的骨髓基质细胞;实验组B为脱蛋白骨 骨髓基质细胞;对照组C为单纯植入脱蛋白骨 DMEM.在脊柱两侧分开肌间隙,每只裸鼠植入2块脱蛋白骨材料至肌腹内.术后4、8周处死取材,经大体观察、组织形态学与免疫组化方法检查细胞材料复合物植入后的成骨作用及VEGF表达.结果:组织学检查A、B组均有成骨,并随时间延长而新骨增多,但其中转基因的A组其成骨作用明显,并在植入4周后免疫组化可见VEGF表达呈阳性;对照组C无成骨现象.结论:转染VEGF165基因骨髓基质细胞复合脱蛋白骨在体内具有较好的成骨作用.