多重耐药产β-内酰胺酶铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的了解多重耐药产β-内酰胺酶铜绿假单胞菌（Pa）中β-内酰胺类抗生素耐药相关基因的存在状况。方法自临床分离20株多重耐药Pa，采用聚合酶链反应（PcR）检测耐药基因（TEM，SHV，OXA-10群，PER，VEB，GES，CARB，IPM，VIM，DHA,oprD2）。结果20株中oprD2基因均缺失，3株CARB阳性，其余基因均阴性。结论多重耐药Pa的耐药性可能与oprD2基因缺失有关，检出的CARB基因在国内少见报告。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子遗传标记及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的 了解临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPa)中Ⅰ类整合子及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因存在状况.方法 自临床分离28株IRPa,采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测Ⅰ类整合子遗传标记(intI1和qacE△1-sul1基因)及18种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因.结果 28株中,intI1、qacE△1-sul1、blaTEM、blaOXA-10群和blaCARB基因阳性株数(%)分别为21株(75.0%)、24株(85.7%)、20株(71.4%)、1株(3.6%)和1株(3.6%),经序列分析分别确认为blaOXA-10(GenBank注册号:AY841859)和blaCARB-3.25株(89.3%)oprD基因缺失,blaIMP、blaVIM、blaSHV、blaPER、blaVEB、blaGES、blaMIR、blaDHA、blaSPM、blaGIM、blaOXA-1群、blaOXA-2群、blaBEL-1、blaCTX-M-1群基因均阴性.结论 临床分离的IRPa中Ⅰ类整合子携带率很高,至少存在blaTEM、blaOXA-10和blaCARB-3种β-内酰胺酶基因,oprD基因缺失突变是其对亚胺培南耐药的主要原因.     

铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况。方法采用ATB PSE5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性．采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因。结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林／舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药．对哌拉西林／他唑巴坦的敏感率最高为64-3％，其余的耐药率在57．1％．92．9％之间。28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性．25株(89．3％)oprD基因缺失．24株(85．7％)qacE△1-sulⅠ基因阳性。结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重，oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因．qacE△1-sulⅠ基因携带率很高。     

铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况.方法采用ATB′PSE 5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因.结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药,对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率最高为64.3%,其余的耐药率在57.1%～92.9%之间.28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性,25株(89.3%)oprD基因缺失,24株(85.7%)qacE△1-sulI基因阳性.结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重,oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因,qacE△1-sulI基因携带率很高.     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类药敏表型及耐药基因的研究

目的了解该院铜绿假单胞菌对β-内酰胺类制剂的耐药情况以及相关耐药基因的携带现况。方法自临床分离的119株铜绿假单胞菌均采用PCR检测耐药基因(TEM、SHV、CTX-M、DHA-1、OXA、CARB、VEB-1、PER-1、GES-2、AmpC、VIM-1、VIM-2、IMP-1、SPM、OprD和IntⅠ)并对检出的耐药基因进行DNA测序。结果 119株铜绿假单胞菌中TEM阳性103株(86.6%),AmpC阳性77株(64.7%),IntⅠ阳性54株(45.4%),OprD缺失54株(45.4%),VIM-2阳性19株(16.0%),CARB阳性14株(11.8%),SHV阳性2株(1.7%),OXA阳性2株(1.7%),DHA-1阳性1株(0.8%),其余基因均为阴性。结论该院铜绿假单胞菌TEM、AmpC、IntⅠ、VIM-2等耐药基因的携带率及OprD缺失均较高,多重耐药严重。     

50株铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因分析

目的分析铜绿假单胞菌的耐药性及其耐药基因类型,指导临床合理应用抗生素。方法收集广州中医药大学第一附属医院临床送检标本中分离的50株铜绿假单胞菌,用K-B纸片扩散法进行抗生素敏感性试验;筛选出20株多重耐药铜绿假单胞菌,采用聚合酶链反应检测β-内酰胺酶基因类型。结果铜绿假单胞菌对临床常用抗生素存在不同程度的耐药现象,其中最常用的亚胺培南耐药率达96%,20株多重耐药铜绿假单胞菌中检出TEM(40%)、OXA-2群(5%)、OXA-10群(5%)、CARB(30%)4种β-内酰胺酶基因,未检出质粒型AmpC酶和金属β-内酰胺酶基因。膜孔蛋白编码基因oprD2均为缺失型。结论铜绿假单胞菌的耐药现象严重,其原因可能与铜绿假单胞菌多耐药基因表达有关。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子遗传标记及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的 了解临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPa）中Ⅰ类整合子及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因存在状况。方法 自临床分离28株IRPa，采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测Ⅰ类整合子遗传标记（intll和qacEace△I-sull基因）及18种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因。结果 28株中，intll、qacEΔ1-sull、blaTEM、blaoxA-30群和blaCARB基因阳性株数（％）分别为21株（75．0％）、24株（85．7％）、20株（71．4％）、1株（3．6％）和1株（3．6％），经序列分析分别确认为blaaxA-J0（GenBank注册号：AY841859）和blaCARB-3,25株（89．3％）oprD基因缺失，blaIDM、blaVIM、blaSHV、blaHR、blaVEB、blaCES、blaMIR、blaDHA、blaSPM、blaGIM、blaaxA，群、blaoxA-2群、blaBEL-1、blaCTX-M-1群基因均阴性。结论 临床分离的IRPa中Ⅰ类整合子携带率很高，至少存在blaTEM、boxA-10和blaCARB-3种β-内酰胺酶基因，oprD基因缺失突变是其对亚胺培南耐药的主要原因。     

铜绿假单胞菌的耐药性及β-内酰胺酶基因的研究

目的了解铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因的存在类型。方法用API鉴定系统鉴定细菌,K-B法做药敏试验,从175株铜绿假单胞菌中筛选出20株多重耐药且产ESBLs的菌株,用PCR检测ESBLs基因。结果175株铜绿假单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率为18.9%,而对其余10种抗生素耐药率为30.3%~88.6%;20株多重耐药的菌株中,CARB基因阳性3株(15%),20株OprD2基因均缺失(100%),其余基因阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌对11种常用抗生素耐药率高,可能与OprD2基因缺失有关。CARB基因国内罕见报道。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺酶和膜孔蛋白基因研究

目的了解多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因存在状况，为临床合理使用抗菌药物提供理论依据。方法收集本院临床分离的铜绿假单胞菌共30株，采用纸片扩散法进行药敏试验；用聚合酶链反应（PCR）及序列分析方法，分析20种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、OXA-1群、OXA-2群、OXA—10群、PER、GES、VEB、CARB、IMI、VIM、SPM、GIM、SIM、DHA）和膜孔蛋白基因（OprD2）。结果30株多重耐药铜绿假单胞菌中TEM基因阳性28株，阳性率93．3％。CARB基因阳性1株，阳性率3．3％；膜孔蛋白编码基因OprD2缺失29株，阳性率96．7％。未检出其他β-内酰胺酶基因。结论烟台地区铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因（TEM）和膜孔蛋白编码基因OprD2缺失株检出率均在90％以上。     

乌海地区铜绿假单胞菌耐药基因研究分析

目的分析我地区引起临床感染的多重耐药、泛耐药铜绿假单胞菌(PDRPA)耐药基因检出分布特点,为临床治疗提供科学依据。方法对2018年1月-2019年12月临床送检标本中检出该菌的耐药性进行调查分析。共分离出62株,所有符合条件的菌株均来自我院住院患者及社区门诊不同感染部位培养检测标本,剔除同一患者相同标本检出的重复菌。方法采用聚合酶链反应(PCR)法对该菌进β2内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)、VIM基因、外膜通道蛋白oprD2基因、磺胺类耐药基因和质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因进行测序。结果62株该菌经PCR检测显示oprD2扩增检测呈缺失型、aac(6')-Ⅰb型、aac(6')-Ⅱ型AMEs、qacE△1-sul1型耐消毒剂、TEM型β2内酰胺酶等基因扩增阳性。结论临床分离铜绿假单胞菌毒力基因携带率较高,以β-内酰胺类耐药基因(膜孔蛋oprD2基因为主)对亚胺培南和氨基糖苷类明显高于其他菌株、6种氨基糖苷类修饰酶(AMEs)与2种16SRNA甲基化酶基因型为主。多重耐药与非多重耐药菌基因表达存在显著差异,同时携带两种毒力基因菌株耐药性更强。     

一株多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的研究

目的：研究铜绿假单胞菌多重耐药情况和相关机制。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）法对一株多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、氯霉素类基因、耐消毒剂和磺胺类基因检测。结果：PCR结果显示该株PA的TEM,MIR,CTX-M1群,OXA-1群,OXA-10群,aac（6′）-b,aac（6′）-,aac（3）-,ant（2″）-,catB,qacE△1-sul1基因均为阳性,GES,DHA,VEB,cmlA基因均阴性,Opr D2未缺失。结论：该株铜绿假单胞菌存在多重耐药基因,而且对胺类、胍类消毒剂耐受。     

淮北地区多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类、β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的 调查淮北地区临床分离多重耐药铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa PA)的氨基糖昔类、β-内酰胺类耐药相关基因流行状况.方法 采用K-B法和MIC法检测36株多重耐药铜绿假单胞菌对14种临床常用抗生素的耐药性:聚合酶链反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶基因、β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因.结果 36株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的耐药率为38.9%～100.0%;氨基糖苷类修饰酶基因ant(3")-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、aac(6')-I、aac(3)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ检出率分别为63.9%、58.3%、50.0%、38.9%和36.1%,未检出aac(3)-Ⅰ基因;β-内酰胺酶编码基因TEM、DHA、CTX-Ge和CARB的检出率分别为77.8%、69.2%、27.8%和25.0%,OXA-1、OXA-10的检出率均为16.7%,VIM-2的检出率为13.9%,IMP-1的检出率为2.8%.未检出VEB、SHV、GES、PER、GIM和SPM-2基冈,有58.3%的菌株存在外膜通道蛋白OprD2基因缺失.结论 淮北地区多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与氨基糖苷类修饰酶基因ant(3")-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、龃c(6')-Ⅰ有关;对β-内酰胺类抗生素耐药主要与TEM、DHA、CTX-Ge、CARB及外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关.     

CARB-8型β内酰胺酶基因在多重耐药铜绿假单胞菌中的分布

目的了解淮北地区分离的多重耐药铜绿假单胞菌中羧苄西林酶(CARB)基因携带情况及其基因检测。方法用法国生物梅里埃公司VITEK-32全自动微生物分析仪鉴定临床分离的铜绿假单胞菌并作药敏试验;采用PCR法筛检出铜绿假单胞菌CARB基因,用DNA测序法对阳性扩增产物测序分型。结果通过药敏试验筛检出36株多重耐药铜绿假单胞菌,其中9株携带CARB基因,检出率为25.0%。经DNA测序并进行BLAST比对,确定基因型为CARB-8型。结论淮北地区临床样本中分离的多重耐药铜绿假单胞菌携带CARB-8型β内酰胺酶基因,携带率为25.0%,应引起临床重视。     

多重耐药铜绿假单胞菌整合子中发现2种新基因盒组合形式

目的研究多重耐药铜绿假单胞菌携带整合子的类型及耐药基因组合。方法 PCR检测多重耐药铜绿假单胞菌整合酶基因intI 1、intI 2、intI 3,Ⅰ类整合子恒定区基因qacEΔ1-sul1及可变区基因,扩增产物经胶回收、限制性片段长度多态性(RFLP)分析及基因测序分析。结果 30株临床分离铜绿假单胞菌中16株(53.3%)Ⅰ类整合酶基因及恒定区qacEΔ1-sul1基因扩增阳性,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因。Ⅰ类整合子可变区共检出5种不同的耐药基因组合形式,含有对氨基糖苷类、β-内酰胺类和喹诺酮类抗菌药耐药的基因,其中有2种为新型基因盒组合形式,包括aacA4-VIM2和aadA2-OXA10-aacA4-blaIMP-9-aatI1,GenBank登录号分别为GQ890658和GU122165,另外3种与GenBank登录号分别为FJ917747、FJ817423、GU367339的序列基本吻合。结论多重耐药铜绿假单胞菌携带的整合子主要为Ⅰ类整合子,在Ⅰ类整合子上首次发现2种新型基因盒组合形式。     

携带新型耐药基因盒组合形式Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌耐药特性分析

目的分析1株临床分离携有多重耐药基因盒整合子的铜绿假单胞菌的耐药特性。方法应用PCR-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）对整合子进行检测及分型，用长片段PCR（Long—PCR）扩增整合子的可变区并进行DNA测序，分析整合子可变区含有的耐药基因。同时应用PCR扩增金属酶基因和oprD2基因。结果该株铜绿假单胞菌PA27携带Ⅰ类整合子，其可变区大小为3.0kb，含有编码对氨基糖苷类、氯霉素和β内酰胺类抗生素耐药的基因，经与GenBank数据库进行同源性分析（BLAST），确定为一种新型基因盒组合形式：aac（6’）-Ⅱ-cm1A8-OXA-10，GenBank登录号为EU708817。oprD2基因检测阳性，未检出IMP-1、VIM-2和IMP-2型金属酶基因。结论该地区首次报道携带新型基因盒组合形式的Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌，并携有多重耐药基因，应引起临床高度重视。     

铜绿假单胞菌耐药基因的检测与分析

目的研究铜绿假单胞菌连续分离株的多种耐药基因的分布状况和耐药机制。方法采用PCR方法检测1株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基因、菌膜蛋白oprD2基因、Tn21／Tn501型转座子编码基因merA、Ⅰ类整合子编码基因qacE△1-SU11、16SRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因、氯霉素耐药相关基因catB、cm1A。四环素耐药相关基因tetA、tetB以及小多药外排泵基因star-2。采用PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果该株铜绿假单胞菌未检出TEM基因和OXA-10基因,检出OXA-2基因,且伴有OprD2缺失;转座子遗传标记MerA阳性,Ⅰ类整合子遗传标记qacE△1-Sul1阳性;耐氨基糖苷类基因aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ阳性。未检出氯霉素耐药相关基因catB、cm1A和四环素耐药相关基因tetA、tetB以及小多药外排泵基因smr-2。OXA-2阳性产物进行基因测序．将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的OXA氨基酸序列比较,与OXA-21型最为接近,但仍存在二个氨基酸序列差别。结论我院多药耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,介导了细菌的多药耐药。     

铜绿假单胞菌氯已定—磺胺耐药基因型研究

目的探讨临床分离的铜绿假单胞菌耐药性和氯已定—磺胺耐药基因存在状况。方法测定临床分离的66株铜绿假单胞菌对6种抗菌药物的敏感性,采用PCR检测qacE△1-sulⅠ基因。结果66株PA菌对6种抗菌药物的不敏感率在12.5%~87.5%之间。qacE△1-sulⅠ基因阳性菌33株(阳性率50.0%)。结论铜绿假单胞菌具明显的多重耐药特征。qacE△1-sulⅠ基因携带率很高。     

广泛耐药铜绿假单胞菌耐药基因和oprD2基因检测及同源性分析

目的探讨本院短期内分离的广泛耐药铜绿假单胞菌药物耐药基因和外膜蛋白基因opr D2携带情况,并分析其分子流行病学特征。方法收集本院2012年10月分离的对临床常用7类抗菌药物耐药或中介的非重复铜绿假单胞菌,采用K-B法检测药物敏感性,选出广泛耐药株和泛耐药株。采用PCR法检测β-内酰胺酶基因(OXA、CTX-M、TEM、PER、GES、DHA、IMP、VIM、NDM、SPM、CARB和KPC)、16S rRNA甲基化酶基因(arm A、rmt A、rmt B)、氨基糖苷类修饰酶基因(aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ)及opr D2基因,PCR扩增阳性产物进行DNA测序,用Blast进行序列比对分析。应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对泛耐药铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果共筛选出23株广泛耐药铜绿假单胞菌,其中泛耐药菌10株。23株广泛耐药铜绿假单胞菌中,耐药基因检测阳性的有OXA-1群、OXA-10群、TEM、PER、CARB、VIM、arm A、rmt B、aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ,阳性率分别为21.7%、39.1%、47.8%、87.0%、26.1%、4.3%、8.7%、47.8%、60.9%、52.2%、47.8%。opr D2基因阳性8株,阴性15株,基因缺失率达65.2%(15/23)。阳性基因与Gen Bank中已知序列同源性均大于99%。10株泛耐药菌的PFGE图谱分为4个型,其中主流型A型有6株,B型2株,C型、D型各1株,且A型、B型均来自烧伤外科。结论我院2012年10月分离的广泛耐药铜绿假单胞菌携带多种耐药基因和外膜蛋白opr D2基因缺失是其耐药的主要原因之一,且存在多种耐药基因组合模式。同时我院发生了小规模的泛耐药铜绿假单胞菌克隆株的传播。     

铜绿假单胞菌ICU分离株耐药基因分析

为了解自我院ICU住院病人分离到的铜绿假单胞菌（Pseudornonas aoruginosa,Pa）对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素耐药的原因,我们用分子生物学技术检测了15种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因（TEM、SHV、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、DHA、FOX、MOX和oprD2）,6种氨基糖苷类修饰基因[aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅱ,结果如下。     

碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2的研究

目的 研究铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2与碳青霉烯类抗生素耐药的关系.方法 琼脂稀释法测定14种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC.PCR扩增oprD2编码基因并进行序列分析.十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2的变化,比较敏感株和耐药株外膜蛋白的差异,统计分析采用均数t检验.结果 141株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药(IMPRMEMR)为主,占66.7%;亚胺培南耐药和美罗培南敏感(IMPRMEMS)占32.6%;亚胺培南敏感和美罗培南耐药(IMPSMEMR)仅占0.7%.PCR扩增141株耐药株oprD2编码基因结果136株耐药株oprD2编码基因发生显著变异,变异位点呈现多样性.其中34株细菌的oprD2编码基因存在大片段缺失,6株的oprD2编码基因中有插入片段,96株有小片段缺失或不同位置的多个点突变.另4株产金属酶菌株及1株亚胺培南敏感(美罗培南耐药)株的oprD2编码基因未发现异常.对其中16株碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌进行SDS-PAGE分析,结果显示10株IPMRMEMR和5株IPMRMEMS铜绿假单胞菌外膜蛋白均存在分子量46 000 u处的OprD2蛋白减少,而1株IMPSMEMR株OprD2蛋白带未见异常.结论 oprD2编码基因的缺失或突变可能是导致外膜蛋白OprD2缺失或减少的分子基础,并是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素尤其是亚胺培南耐药的主要机制之一.