经Nurr1基因转染的骨髓间充质干细胞移植对帕金森病大鼠旋转行为及纹状体多种神经因子的影响

目的:观察对中脑腹侧多巴胺能神经元分化、成熟及存活起重要作用的Nurr1基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞脑内移植后,对帕金森病大鼠旋转行为及纹状体多巴胺、二羟苯乙酸及高香草酸含量比值的影响。方法:实验于2003-08/2004-12在中山大学附属第一医院神经病学国家重点实验室进行。取SD雄性大鼠,右侧中脑黑质致密区注入6-羟基多巴(2g/L)3μL制备帕金森病模型,4周后将69只成功帕金森病模型随机分为3组:①对照组24只:右侧纹状体尾状核头部注入生理盐水4.5μL。②骨髓间充质干细胞组24只:相同部位注入培养纯化的骨髓间充质干细胞4.5μL。③转Nurr1基因骨髓间充质干细胞组21只:用脂质体转染法转染PcDNA3.1(+)-Nurr1入大鼠骨髓间充质干细胞并稳定表达,然后移植入模型大鼠脑内,部位和剂量与其他两组相同。观察各组大鼠旋转行为学变化,并用免疫组化、反转录-聚合酶链反应等方法检测移植细胞的Nurr1,DAT和酪氨酸羟化酶表达;利用高效液相色谱检测大鼠脑内多巴胺、二羟苯乙酸和高香草酸含量。结果:59只大鼠进入结果分析。①旋转行为学变化:与对照组相比,移植前1周无明显差异(P>0.05),移植后2～8周,另2组大鼠旋转行为明显改善(P<0.05);转Nurr1基因骨髓间充质干细胞组在移植后2～4周较骨髓间充质干细胞组轻(P<0.05),但至8周时两组无差异(P>0.05)。②Nurr1及DAT和酪氨酸羟化酶阳性表达:免疫组化结果显示转Nurr1基因骨髓间充质干细胞组移植区能够稳定表达Nurr1且少量细胞表达DAT,但未发现酪氨酸羟化酶阳性细胞,其他两组移植区未发现阳性细胞。③Nurr1及DAT和酪氨酸羟化酶mRNA表达:移植后2～8周,聚合酶链反应产物经电泳、3组大鼠术侧纹状体染色后均可见1030bp片段(DAT),241bp片段(Nurr1),438bp片段(β-actin),但未发现酪氨酸羟化酶条带(647bp)。④脑内纹状体多巴胺、二羟苯乙酸、高香草酸术侧与健侧比值:移植后2,8周,两治疗组均较对照组增高(P<0.05),但8周时两治疗组比较无差异(P>0.05)。结论:转Nurr1基因大鼠骨髓间充质干细胞在帕金森病大鼠模型纹状体内可以存活(8周以上),在该环境中Nurr1基因的过表达可以促进大鼠骨髓间充质干细胞的DAT基因表达,能显著改善帕金森病大鼠的旋转行为,并在一定时期内维持纹状体内相对较高的多巴胺、二羟苯乙酸、高香草酸水平。     

骨髓间充质干细胞、过表达Nurr1蛋白的骨髓间充质干细胞与胎脑细胞移植治疗帕金森病大鼠的比较

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)和过表达Nurr1蛋白的MSC移植治疗帕金森病(Parkinson disease,PD)的效果。方法携带Nurr1基因的真核表达质粒pcDNA3.1/Nurr1转染大鼠MSC,构建稳定高表达Nurr1蛋白的MSC克隆(Nurr1-MSC);分别将Nurr1-MSC(Nurr1-MSC组)、MSC(MSC组)、胎鼠中脑腹侧细胞(VMC组)及生理盐水(对照组)植入PD大鼠纹状体,检测移植区Nurr1蛋白表达,观察移植前、后PD大鼠旋转行为变化,评估不同细胞移植治疗PD大鼠效果。结果移植术后8周内,Nurr1-MSC持续高表达Nurr1蛋白,3种移植细胞均明显改善PD大鼠症状(P<0.01),VMC组疗效最佳且持久;Nurr1-MSC组4周内效果优于MSC组(P<0.05),随时间延长其疗效逐渐减弱,至术后8周时与MSC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MSC及Nurr1-MSC移植PD大鼠纹状体后均可改善PD症状,Nurr1-MSC治疗PD大鼠模型效果短期内优于MSC,长期效果与MSC接近,胎鼠中脑腹侧细胞治疗效果最佳。     

脐血干细胞移植对帕金森病大鼠旋转行为的影响

背景：目前帕金森病的临床治疗还是以药物为主,细胞移植实验也多见于骨髓间充质干细胞,脐血来源干细胞移植能否改善帕金森病的旋转行为报道较少。目的：观察脐血间充质干细胞移植对帕金森病大鼠旋转行为的影响。方法：帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组。实验组大鼠纹状体内植入用Hoechst33258标记的第4代脐血间充质干细胞,对照组注射PBS。此后每周腹腔注射阿扑吗啡以观察大鼠的旋转行为;并在移植后3,6,9周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移情况以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达。结果与结论：移植脐血间充质干细胞后大鼠的旋转行为与对照组相比有明显改善（P〈0.05）;间充质干细胞可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达。结果可见移植脐血间充质干细胞后能明显改善帕金森病大鼠旋转行为,有望成为治疗帕金森病的种子细胞。     

神经干细胞移植对帕金森病鼠纹状体多巴胺含量的影响

目的 观察神经干细胞定向移植后对帕金森鼠纹状体多巴胺含量的影响，证实神经干细胞移植治疗的可行性。方法 建立帕金森病模型大鼠以及体外培养神经干细胞，然后将神经干细胞悬液立体定向移植到帕金森病模型鼠黑质纹状体区，测定纹状体的多巴胺含量，并与生理盐水组和非移植组相比。结果 神经干细胞移植后帕金森病模型鼠纹状体多巴胺含量(346&;#177;26)μg／g与生理盐水组(58&;#177;56)μg／g和非移植组(72&;#177;60)μg／g比较明显增多，经t检验差异有显著性意义(t=13．99，12．57，P&;lt;0．05)。结论 神经干细胞移植能减轻6-羟基多巴胺对黑质纹状体多巴胺能神经元的损伤。     

骨髓间充质干细胞、过表达Nurrl蛋白的骨髓间充质干细胞与胎细胞移植治疗帕金森病大鼠的比较

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）和过表达Nurr1蛋白的MSC移植治疗帕金森病（Parkinson disease,PD）的效果。方法携带Nurr1基因的真核表达质粒pcDNA3．1／Nurr1转染大鼠MSC,构建稳定高表达Nurr1蛋白的MSC克隆（Nurr1—MSC）;分别将Nurr1—MSC（Nurr1—MSC组）、MSC（MSC组）、胎鼠中脑腹侧细胞（VMC组）及生理盐水（对照组）植入PD大鼠纹状体,检测移植区Nurr1蛋白表达,观察移植前、后PD大鼠旋转行为变化,评估不同细胞移植治疗PD大鼠效果。结果移植术后8周内,Nurr1—MSC持续高表达Nurr1蛋白,3种移植细胞均明显改善PD大鼠症状（P〈0．01）,VMC组疗效最佳且持久;Nurr1—MSC组4周内效果优于MSC组（P〈0．05）,随时间延长其疗效逐渐减弱,至术后8周时与MSC组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MSC及Nurr1—MSC移植PD大鼠纹状体后均可改善PD症状,Nurr1—MSC治疗PD大鼠模型效果短期内优于MSC,长期效果与MSC接近,胎鼠中脑腹侧细胞治疗效果最佳。     

人脐血间充质干细胞脑内移植改善帕金森病大鼠行为缺陷的研究

背景：已有较多的研究证明脐血细胞能向神经元样细胞分化，且成功的运用脐血治疗脑卒中及其他神经系统疾病的研究已有报道，能否应用脐血干细胞治疗神经变性疾病尚未可知。目的：探讨应用人脐血间充质干细胞治疗大鼠帕金森病的可行性及其机制。设计：随机对照实验研究。地点和对象：健康Sprague-Dawley大鼠18只，清洁级，体质量220～260g。脐血标本取自郑州大学第三附属医院妇产科，每个标本60～120mL。干预：制备6-羟多巴胺帕金森病偏侧大鼠模型，随机分为3组：①对照组（n=6)。②PBS组(n=6)：在每只大鼠右侧纹状体移植10μL的PBS。③间充质干细胞组(n=6)：将3&;#215;10^6个用BrdU标记的脐血间充质干细胞植入大鼠右侧纹状体，4周后用阿朴吗啡诱发旋转试验并用免疫组织化学检测植入细胞的存活情况及纹状体酪氨酸羟化酶阳性细胞。主要观察指标：①移植前后各组大鼠旋转圈数。②免疫组织化学染色结果。结果：脐血间充质干细胞在体内存活，与对照组相比，间充质干细胞移植组阿朴吗啡诱发的旋转行为[每30钟大鼠旋转圈数为212&;#177;60比340&;#177;30]显著改善(P&;lt;0．05)，但右侧纹状体酪氨酸羟化酶阳性细胞数与对照组相比无显著性差异(P&;gt;0．05)。结论：人脐血间充质干细胞脑内移植能改善帕金森大鼠的行为缺陷，可作为治疗神经变性疾病的一种潜在细胞资源。     

骨髓间充质干细胞的基因转染

1人血管内皮生长因子165基因转染兔骨髓间充质干细胞的蛋白表达,2011年15卷10期1769页。2体外培养条件下人骨髓间充质干细胞碱性成纤维细胞生长因子基因的转染与鉴定,见2010年14卷19期3507页。3碱性成纤维细胞生长因子基因转染兔骨髓间充质干细胞,见2009年13卷49期9687页。     

骨髓间充质干细胞的基因转染

1人血管内皮生长因子165基因转染兔骨髓间充质干细胞的蛋白表达,2011年15卷10期1769页。2体外培养条件下人骨髓间充质干细胞碱性成纤维细胞生长因子基因的转染与鉴定,见2010年14卷19期3507页。3碱性成纤维细胞生长因子基因转染兔骨髓间充质干细胞,见2009年13卷49期9687页。     

转染AKT1基因的自体骨髓间充质干细胞移植治疗猪缺血性心肌病

背景:干细胞移植早期出现的大量细胞缺失可明显影响移植效果,目前已证实AKT1基因的过表达能明显抑制细胞凋亡.目的:探讨过表达AKT1基因的猪自体骨髓间充质干细胞移植能否在体内缺氧状态下抑制干细胞凋亡,及其修复受损心肌的效果.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-08/2007-02在苏州大学完成.材料:健康雄性梅山猪24只,由苏州大学动物实验中心提供.方法:扩增AKT1 cDNA基因,并构建表达载体.扩增后,使用慢病毒转染系统进行基因重组,以其为载体转染建立稳定过表达AKT1基因的猪自体骨髓间充质干细胞,并行BrdU标记.24只猪均应用明胶海绵栓塞冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,造模后4周,随机均分为4组:模型对照组不做任何治疗性处理;DMEM组行冠脉内注射DMEM液5 mL;单纯细胞移植组行冠咏内注射骨髓间充质干细胞悬液5 mL(1×10~7个细胞):AKT转染细胞移植组同法注射等量转染AKT1基因的骨髓间充质干细胞悬液.主要观察指标:载体酶切鉴定和测序验证结果,心脏磁共振检查评估心功能,免疫组化染色观察心肌组织学变化,ELISA法测定血清中血管内皮生长因子及转化生长因子β1的水平.结果:①双酶切鉴定和测序结果均表明所获取的cDNA为AKT1的CDS功能区基因;转染入293T细胞和骨髓间充质干细胞24,48 h后,均可检测到强荧光出现;其蛋白表达产物的分子量与已知分子量相符,实时荧光定量检测结果表明转染2周后的骨髓间充质干细胞能稳定转录AKT1,其AKT1-mRNA的转录水平是原代细胞的120倍.②细胞移植前,梗死心脏的左室舒张末径增加,每搏量明显下降.与移植前比较,移植后单纯细胞移植组、AKT转染细胞移植组心功能明显改善,梗死区的收缩功能和血流灌注均有所改善,左室腔缩小,梗死区的毛细血管密度明显增加,且AKT转染细胞移植组上述各指标改善更为显著(P<0.05).③苏木精-伊红染色结果显示,模型对照组、DMEM组梗死区纤维化明显:单纯细胞移植组、AKT转染细胞移植组梗死区均可见岛样心肌组织,且后者含有较丰富的小血管样结构.免疫组化染色结果显示,移值4周后单纯细胞移植组、AKT转染细胞移植组心肌切片中均发现有VWF及Cx-43阳性表达,且后组Brdu和Cx-43双阳性细胞占所有Brdu阳性细胞的比例明显高于前组(P<0.05).④细胞移植后,血管内皮生长因子水平呈逐渐升高的趋势,1周后达峰值,后逐渐下降,至4周后接近正常水平;而转化生长因子β1水平呈逐渐下降的趋势,至4周后明显低于同期模型对照组、DMEM组(P<0.05),且明显低于移植前水平(P<0.05).结论:使用携带目的基因AKT1的慢病毒系统转染猪骨髓间充质干细胞可使其长期稳定过表达AKT1,移植体内后可能通过防止梗死区变薄、抑制收缩功能异常而改善左室功能,同时AKT1的过表达可显著改善梗死后心脏功能.     

自体骨髓间充质神经干细胞移植治疗帕金森病的疗效观察

目的探讨自体骨髓间充质神经干细胞移植治疗帕金森病的疗效及安全性。 方法选取2010年12月至2013年12月期间在我院治疗的帕金森病患者42例，采用随机数字表法将其分为移植组及对照组，每组21例。2组患者均给予常规药物治疗及康复干预，移植组在此基础上辅以自体骨髓间充质神经干细胞移植治疗，首先抽取患者骨髓并分离、培养骨髓间充质神经干细胞，待培养细胞达到治疗要求后进行神经干细胞移植，共进行4次细胞移植治疗，每次细胞移植间隔5~10d。于治疗前、治疗4周、治疗后3个月时分别采用帕金森病综合评分量表(UPDRS)对2组患者进行疗效评定；同时观察上述时间点2组患者外周血液中血管内皮生长因子（VEGF）及脑脊液中白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达情况。 结果经治疗4周及治疗后3个月时，发现移植组及对照组患者UPDRS评分［治疗4周时分别为（41.26±17.92）分、（47.13±18.35）分，治疗后3个月时分别为（33.67±17.77）分、（39.03±16.50）分］均较治疗前有一定程度下降，并且上述时间点移植组患者UPDRS评分均显著低于对照组水平，组间差异均具有统计学意义（P<0.05）；在整个治疗过程中未观察到移植组患者出现严重不良反应。另外移植组患者在治疗4周及治疗后3个月时，其外周血液中VEGF及脑脊液中IL-10表达均较治疗前明显增强，脑脊液中TNF-α表达则较治疗前明显降低。 结论自体骨髓间充质神经干细胞移植可促进帕金森病患者神经功能恢复，且治疗过程中未发生明显不良反应，安全性较好，该疗法值得临床进一步研究、推广。     

人脐血间充质干细胞脑内移植改善帕金森病大鼠行为缺陷的研究

背景已有较多的研究证明脐血细胞能向神经元样细胞分化,且成功的运用脐血治疗脑卒中及其他神经系统疾病的研究已有报道,能否应用脐血干细胞治疗神经变性疾病尚未可知.目的探讨应用人脐血间充质干细胞治疗大鼠帕金森病的可行性及其机制.设计随机对照实验研究.地点和对象健康Sprague-Dawley大鼠18只,清洁级,体质量220～260 g.脐血标本取自郑州大学第三附属医院妇产科,每个标本60～120 mL.干预制备6-羟多巴胺帕金森病偏侧大鼠模型,随机分为3组①对照组(n=6).②PBS组(n=6)在每只大鼠右侧纹状体移植10 μL的PBS.③间充质干细胞组(n=6)将3×106个用BrdU标记的脐血间充质干细胞植入大鼠右侧纹状体,4周后用阿朴吗啡诱发旋转试验并用免疫组织化学检测植入细胞的存活情况及纹状体酪氨酸羟化酶阳性细胞.主要观察指标①移植前后各组大鼠旋转圈数.②免疫组织化学染色结果.结果脐血间充质干细胞在体内存活,与对照组相比,间充质干细胞移植组阿朴吗啡诱发的旋转行为[每30钟大鼠旋转圈数为212±60比340±30]显著改善(P＜0.05),但右侧纹状体酪氨酸羟化酶阳性细胞数与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论人脐血间充质干细胞脑内移植能改善帕金森大鼠的行为缺陷,可作为治疗神经变性疾病的一种潜在细胞资源.     

骨髓腔输注异基因间充质干细胞对移植后大鼠骨髓间充质干细胞重建的作用

为了研究骨髓腔内注射（IBM）异基因间充质干细胞（MSC）对造血干细胞移植后大鼠骨髓MSC重建的作用，研究供体MSC植入状态以探讨MSCs的作用机制，将雌性F344胎鼠及新生鼠外周血（FNPB）及雄性F344大鼠BrdU标记骨髓MSC共移植入经致死量^60Coγ射线预处理的雌性Wistar大鼠，其中FNPB均由IBM输注，MSC则通过IBM或尾静脉注射。观察受鼠存活状况、供体HSC植入水平及骨髓MSC恢复情况，并以PCR检测Y染色体和免疫荧光法检测受鼠骨髓MSC的来源。结果显示：两个FNPB＋MSCs共移植组大鼠移植后60天均100％存活，两组比较生存率和供体HSC植入水平无统计学差异，但明显优于单纯FNPB移植组；移植后30天时各移植组受鼠骨髓MSC的增殖能力均未达正常水平，但MSC骨髓腔共移植组集落数（66．0±10．6）明显优于MSC骨髓腔和静脉共移植组及单纯FNPB移植组（P〈0．01）；移植后60天时，免疫荧光法检测供体BrdU标记的MSC显示仅在少部分受体发现供、受体源性MSCs嵌合，但两个共移植组存活受鼠均检测到供体MSC来源Y染色体。结论：异基因MSC输注可促进造血干细胞移植受者骨髓MSC恢复，尤以IBM输注为佳。     

脐血间充质干细胞移植后帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的变化

背景:目前干细胞移植对帕金森病动物模型的研究多集中在骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞方面,关于脐血间充质干细胞移植对帕金森病动物模型的研究相对较少,且未见测量脐血间充质干细胞移植前后多巴胺含量变化的报道.目的:观察脐血干细胞移植对帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的影响.方法:帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组.将第3代脐血间充质干细胞用Hoechst33258标记后植入实验组大鼠纹状体内,对照组注射磷酸盐缓冲溶液.移植后2,4,8周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达.移植后8周利用高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺含量.结果与结论:脐血间充质干细胞移植后可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达.多巴胺水平与对照组相比有明显提高 (P < 0.05).     

神经干细胞移植对帕金森病鼠纹状体多巴胺含量的影响

目的观察神经干细胞定向移植后对帕金森鼠纹状体多巴胺含量的影响,证实神经干细胞移植治疗的可行性。方法建立帕金森病模型大鼠以及体外培养神经干细胞,然后将神经干细胞悬液立体定向移植到帕金森病模型鼠黑质纹状体区,测定纹状体的多巴胺含量,并与生理盐水组和非移植组相比。结果神经干细胞移植后帕金森病模型鼠纹状体多巴胺含量(346±26)μg/g与生理盐水组(58±56)μg/g和非移植组(72±60)μg/g比较明显增多,经t检验差异有显著性意义(t=13.99,12.57,P<0.05)。结论神经干细胞移植能减轻6-羟基多巴胺对黑质纹状体多巴胺能神经元的损伤。     

骨髓间充质干细胞移植大鼠脑梗死区的超微结构变化

背景：近来的研究发现骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)对缺血性脑血管病有治疗作用，接受细胞移植的脑梗死区超微结构的观察可进一步证实该作用。目的：观察接受MSCs局部注射移植的大鼠脑梗死区超微结构的变化，以了解MSCs移植对梗死区超微结构的影响。设计：随机对照实验研究。单位：解放军第三军医大学西南医院神经病学中心。材料：实验于2002-04／2002-09在解放军第三军医大学动物所及中心实验室完成。实验动物为健康幼年及成年Wistar大鼠12只，雌雄不限。随机分为移植组6只和对照组6只。干预：建立大鼠大脑中动脉栓塞模型，将体外分离培养的大鼠MSCs注射至大鼠脑梗死区，两组大鼠于移植后第4周电镜观察大鼠脑梗死区超微结构变化。主要观察指标：移植组及对照组大鼠脑梗死区超微结构变化。结果：接受移植的梗死区可见外形幼稚的细胞存活，并围绕在神经元周围，梗死区神经元胞浆中出现了丰富的游离核糖体，而对照组大鼠梗死区神经元胞核固缩，并有嗜神经细胞现象。结论：大鼠MSCs移植对缺血性脑损伤具有一定修复作用。     

转染血管内皮细胞生长因子基因骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死区血管新生的影响

背景:骨髓间充质干细胞作为基因载体,有利于外源基因保持良好的遗传稳定性,如能将血管内皮细胞生长因子基因转入间充质干细胞内移植到心肌梗死区,可望获得基因和细胞治疗相互协同促进的作用.目的:观察转染血管内皮细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植大鼠心肌梗死区血管新生及血管内皮细胞生长因子基因的体内表达.设计、时间及地点:实验于2004/2007年在湖南省儿童医院儿科研究所,中南大学湘雅二医院中心实验室完成的随机对照实验.材料:实验动物为雄性清洁级Wistar近交系大鼠.以冠脉结扎法制备人鼠心肌梗死模型.方法:以密度梯度离心与贴壁培养法获得大鼠骨髓间充质干细胞.当问充质干细胞生长汇合率为80%～90%时以脂转法转染pcDNA3.1-hVEGF165质粒.心肌梗死模型大鼠随机分4组进行干预:联合组于心肌梗死区移植转染血管内皮细胞生长因子基因的间充质干细胞,细胞组移植间充质干细胞、基因组注射脂质体-pcDNA3.1-VEGF165DNA复合物,对照组注射等容积培养液.主要观察指标:移植4周后,各组大鼠心肌梗死区毛细血管密度,血管内皮细胞生长因子基因表达.结果:火鼠心肌梗死区毛细血管密度以联合组和基因组最高,高于细胞组(P=0.001,0.029),细胞组高于对照组(P=0.028).RT-PCR显示血管内皮细胞生长因子基因体内的表达从高到低依次为联合组、基因组、细胞组和对照组.结论:①作为血管内皮细胞生长因子基因的载体,骨髓间充质干细胞有利于其的稳定表达.②转染血管内皮细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植有利于大鼠心肌梗死区的血管新生,其疗效优于单独应用基因或细胞治疗.     

共转染EGFP和hMnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力的影响

目的：人正义、反义MnSOD基因和EGFP共转染恒河猴骨髓源神经干细胞，观察MnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力和报告基因表达的影响。方法：应用NucleofectorTM核转染仪将人正义、反义MnSOD基因和荧光真核表达载体共转染体外培养的恒河猴骨髓源神经干细胞，荧光显微镜下观察荧光蛋白在细胞内的表达，并检测转染细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果：①转染24h后，共转染细胞可见荧光蛋白在骨髓源神经干细胞内有效表达，荧光显微镜下发强绿色荧光，其转染率约为80％。②转染人正义MnSOD基因的细胞的总SOD活性[(8．03&;#177;0.74)NU／mg]与转染人反义MnSOD基因细胞的总SOD活性[7．19&;#177;0．86)NU／mg]差异无显著性意义，但MnSOD活性前者明显高于后者1．89倍。结论：MnSOD基因与EGFP基因共转染骨髓源神经干细胞，均有效表达，提高了细胞内MnSOD活性，为多基因联合治疗帕金森病提供了可行的技术平台。     

超顺磁氧化铁标记骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病大鼠模型的组织学研究

目的:研究应用超顺磁氧化铁(SPIO)和BrdU标记骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗帕金森病(PD)大鼠模型,观察移植的MSCs在PD模型鼠脑内的迁移及分化,探讨MSCs移植治疗PD的可能性。方法:分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,一组MSCs用脂质体转染法进行SPIO标记,另一组MSCs用BrdU标记;制作PD大鼠模型,将不同标记的MSCs分别移植到PD大鼠右侧纹状体区,利用阿朴吗啡观察PD鼠的行为学变化。应用透射电镜和免疫荧光双标法观察移植后的MSCs增殖、迁徙和分化。结果:电镜显示,SPIO标记的MSCs呈类神经元形态。免疫酶标显示移植后4周和12周BrdU-MSCs组和SPIO-MSCs组的注射侧黑质区TH免疫反应阳性细胞较对照组注射侧黑质区有增多趋势,但无统计学差异。免疫荧光组化结果表明,MSCs移植后4周,在移植区可见少量BrdU和Nestin双标为阳性的神经前体细胞,12周时可见少量双标的神经细胞,未发现明显的BrdU和TH双标为阳性的细胞。移植组与对照组相比行为学(旋转次数)有明显差异(P<0.05)。结论:MSCs移植治疗能改善PD模型大鼠的行为学。MSCs进入PD模型大鼠脑内可存活并处于增殖状态,有广泛迁移并在局部微环境的作用下能向神经前体细胞和神经细胞转化,但数目较少。故其改善PD大鼠神经功能的机理值得进一步探讨。     

异基因造血干细胞移植后受者骨髓的间充质干细胞来源研究

为了研究造血干细胞移植植活患者骨髓源间充质干细胞（MSC）的来源，选择临床上供受者性别不同的造血干细胞移植后临床植活的34例患者作为研究对象，抽取骨髓，进行间充质干细胞培养传代，利用流式细胞术（FCM）检测患者MSC的表面抗原表达特征，利用聚合酶链反应（PCR）分析患者MSC的釉基质基因表达情况以确定其性别来源，利用荧光原位杂交（FISH）技术进一步证实患者MSC的性别来源。结果表明：34例患者中有31例患者的MSC原代培养能达到融合，其中24例患者成功传代5代以上，且可进行PCR及FISH检测；FCM结果显示，第5代MSC的CD14^＋CD45^＋细胞表达低于0．04％；PCR结果显示，移植后患者的MSC源于患者本人；FISH结果显示，移植后患者的MSC 100％源于患者本人。结论：造血干细胞移植后患者骨髓中的MSC仍源于患者本人。     

脐血间充质干细胞移植治疗帕金森病30例

目的:观察脐血间充质干细胞移植治疗帕金森病患者神经功能的效果.方法:选择2008-01/12北京和众华信治疗中心收治的帕金森病患者30例,均经过英国皇家医师学会帕金森病诊断与管理指南的帕金森病诊断标准确诊,男19例,女11例,年龄45～66岁,平均年龄58岁,Hoehn-Yahr分级为Ⅱ～Ⅳ级,患者对治疗均签署知情同意书,治疗方案经医院医学伦理委员会批准.所有患者均住院治疗,第1周进行常规检查,30例患者血、尿、便常规、肝肾功能、多项肿瘤标记物、胸片等均正常.自第2周起患者应用脐带血间充质干细胞进行鞘内注射移植治疗,以第3,4腰椎间隙为穿刺点,缓慢注入地塞米松2 mg,取脐血间充质干细胞注射液5 mL(干细胞数500万),在10 min内缓慢注入蛛网膜下腔,1次/周,4次为1个疗程,共治疗1个疗程.采用帕金森病统一评分量表对患者移植前后神经功能进行评定,分值越高表示神经功能缺损越严重.结果:30例患者均进入结果分析,中途无脱落.与移植前比较,30例患者移植后3个月帕金森病统一评分量表分值均明显降低(P<0.01),患者震颤、强直、运动迟缓、姿势不稳等临床症状均得到明显改善,均未出现移植物抗宿主病.结论:脐血间充质干细胞移植可以一定程度地改善帕金森病患者的临床症状,提高患者生活质量.