儿童肺炎链球菌分离株红霉素耐药性与相关耐药基因研究

目的检测儿童肺炎链球菌(SP)红霉素耐药性和相关耐药基因。方法对肺炎儿童进行痰培养,分离、鉴定SP菌株,经红霉素药敏试验检测SP药敏,通过PCR检测红霉素核糖体甲基化酶基因(ermB、ermA/B)、主动外排转运基因(mefA)3种基因表达。结果临床分离的31株SP,29株对红霉素耐药(93.5%),ermB基因阳性12株(38.7%),ermA/B基因阳性19株(61.3%),mefA基因阳性7株(22.6%),24株检出erm或和mef基因(77.4%),其中1株ermA/B、mefA基因表达均为阳性,1株ermB、ermA/B、mefA基因表达均为阳性。结论erm基因在SP有高表达,mef基因也有相当的表达,SP对红霉素具有高度耐药。     

B族链球菌的红霉素耐药基因研究

目的 比较不同地区B族链球菌（GBS）对红霉素耐药性的差异及耐药基因谱特点。方法 用琼脂稀释法，测定红霉素、克林霉素对不同地区（北京，广州，俄罗斯圣彼得堡）的113株GBS的最低抑菌浓度（MIC），同时用PCR和核酸杂交的方法，检测红霉素耐药基因mreA、mefA、ermA、ermB、ermC在该批菌株中的出现规律及其与红霉素耐药性的关系。结果 （1）北京、广州两地GBS菌株总耐药率为46％，与克林霉素耐药性的一致率为93．8％；所有ermA基因均来自北京菌株，而广州菌株不含该基因。（2）含ermA和（或）ermB基因的GBS占所有菌株的30．09％，其耐药率高达97．06％，在已检测的GBS菌株中未发现ermC基因。（3）分别有53株和18株含mreA和mefA的GBS以及1株含ermA的菌株仍对红霉素敏感。2株GBS不含上述任何一种基因，但仍对红霉素耐药。结论 （1）北京、广州两地GBS对红霉素普遍具有较高的耐药率，且与大环内酯－林可霉素－链阳性霉素B类抗生素之间存在较严重的交叉耐药，临床使用抗生素时应尽量避免重复选择此类抗生素；（2）ermA和ermB是决定我国北京、广州GBS对红霉素耐药的重要基因；（3）GBS的耐药性还有其他分子生物学机制参与。     

儿童呼吸道感染肺炎链球菌耐药性及pbp2B与TEM基因的研究

目的：了解广州地区儿童呼吸道感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)的耐药情况以及SP中青霉素耐药相关基因TEM与pbp2B的流行分布及突变情况。方法：采用E-test和K-B纸片法对44株SP分离株进行药敏试验;PCR扩增SP中的TEM基因及pbp2B,并对pbp2B基因进行测序,结果与SP青霉素敏感株R6进行序列比对分析。结果：①44株SP对青霉素的敏感率仅为11.4％,不敏感率高达88.6％。对红霉素耐药率已达100％,对克林霉素、复方新诺明的耐药性也在90％以上。但对头孢曲松、阿莫西林、亚胺培南仍敏感,耐药率分别为0,2.6%和3.9%。未发现对氧氟沙星、万古霉素耐药菌株。②44株SP的pbp2B基因扩增序列与R6敏感株相比较,5株青霉素敏感株99%以上的核苷酸序列相同,未发生氨基酸的替换。39株青霉素不敏感株均发生核苷酸序列的改变,核苷酸序列突变率为13.2％～23.1%,约6.5％～10.9%的氨基酸发生了替换。根据氨基酸在Ser391-Thr492片段之间的突变情况,可将39株青霉素不敏感株分为四型,其中Ⅰ型突变30株,Ⅱ型突变7株,Ⅲ型和Ⅳ型各1株。44株SP均未检出TEM型β-内酰胺酶耐药基因。结论：广州地区儿童呼吸道感染SP多重耐药情况较严重,青霉素、红霉素已不适宜作为SP感染的临床一线用药,阿莫西林及第三代头孢菌素可作为SP感染的经验用药。pbp2B基因突变是广州地区儿童SP对青霉素耐药的主要机制之一。［中国当代儿科杂志,2009,11（8）：623-626］     

肺炎链球菌临床分离株耐药性与耐药机制研究

目的 探讨肺炎链球菌(SP)临床分离株的耐药性及对大环内酯类抗生素的耐药机制,为临床用药提供依据.方法 回顾性分析2002年7月至2005年7月年重庆医科大学附属儿童医院964株SP临床分离株的耐药性;采用聚合酶链式反应扩增30株耐药SP基因组DNA,琼脂糖电泳分析SP大环内酯类抗生素耐药基因表达.结果 共分离获得964株SP,对红霉素、阿奇霉素和青霉素(实为苯唑西林)耐药率分别为91.8%、90.0%和61.0%,多重耐药率十分严重,占93.2%,主要是对红霉素、阿奇霉素、复方新诺明、四环素和青霉素(实为苯唑西林)耐药;其中绝大多数SP临床分离株对氧氟沙星、利福平和万古霉素敏感.分析30株对红霉素和阿奇霉素均耐药的SP临床分离株的耐药机制,24株同时具有erm基因和mef基因,4株只有erm基因,1株只有mef基因,1株未检测到erm或mef基因.结论 该研究结果提示重庆地区小儿SP临床分离株对大环内酯类抗生素耐药率较国内其他地区高,耐药模式以红霉素、阿奇霉素、复方新诺明、四环素和青霉素(实为苯唑西林)为主.erm基因介导的靶修饰作用和mef基因介导的外流排出机制的共同作用是重庆地区SP临床分离株时大环内酯类抗生素主要的耐药机制.     

B组链球菌的耐药性及红霉素耐药基因检测研究

目的探讨北京和广州地区B组链球菌（GBS）抗生素耐药菌谱及对红霉素耐药机制。方法GBS菌193株,其中140株和47株GBS分别来自北京和广州地区正常妇女阴道拭子标本,6株GBS菌株来自北京地区新生儿感染性肺炎和脑膜炎患儿体液标本中培养分离。应用标准的KB纸片法对临床常用7种抗生素耐药性检测。应用PCR法对102株（包括57株敏感株及45株耐药株）GBS进行红霉素耐药基因ermB、mefA检测。结果193株GBS菌均对青霉素类、头孢菌素类抗生素敏感;但青霉素和氨苄青霉素中介率均为17％;北京地区GBS的红霉素和林可霉素耐药率从1998年到1999年分别从8％增加到16％和从20％增加到28％;广州地区1999年分离的GBS菌株对红霉素和林可霉素耐药率分别为45％和26％,与北京地区1998、1999年分离的GBS菌株的红霉素耐药率比较,差异有统计学意义（P=0．000）。在45株红霉素耐药GBS菌中有40株同时对林可霉素耐药,5株表现为红霉素耐药而林可霉素敏感。20株GBS红霉素耐药仅含有ermB基因;13株红霉素耐药株仅含有mefA基因;同时含有ermB和mefA基因有6株。6株耐药株未能检测到ermB和mefA基因。结论青霉素、氨苄青霉素可作为治疗GBS感染首选药物;头孢菌素类抗生素可作为二线的选择药物。而红霉素和林可霉素作为预防和治疗GBS感染的药物应用价值应重新给予评价。在我国ermB基因介导的核糖体靶位点改变在GBS耐药机制中可能起主要作用。     

北京地区儿童鼻咽部肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药的检测

目的 研究北京地区儿童携带肺炎链球菌(SP)对大环内酯类抗生素的耐药特点。方法 对2002～2003年上呼吸道感染儿童鼻咽部200株SP分离株对4种大环内酯类抗生素、青霉素和克林霉素的最低抑菌浓度进行检测;耐药诱导试验分析部分耐药菌株大环内酯类耐药表型;PCR检测红霉素耐药基因ermB和mefA。结果 200株SP中179株对红霉素耐药。红霉素和青霉素的药敏结果无明显关连性。耐红霉素的147株SP中,阿奇霉素、克拉霉素、乙酰螺旋霉素和克林霉素的耐药率分别是100％,100％,95．2％,95．9％。耐药表型以结构型大环内酯类、林可酰胺类和链阳性菌素B耐药表型(cMLS)为主,占红霉素耐药株的95．9％。耐药基因检测中,仅携带ermB基因的菌株为79．6％,同时携带ermB和mefA基因菌株为17．7％,仅携带mefA基因的菌株为2．7％。结论 2002～2003年北京上呼吸道感染患儿携带的SP对红霉素耐药率达89．5％,分离株在对红霉素耐药同时也对其他大环内酯类药物和克林霉素耐药。耐大环内酯SP表型以cMLS为主,基因型以ermB为主。     

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目的研究北京儿童医院脓疱疮患儿临床分离A组β溶血性链球菌(GAS)及其对抗菌药物的敏感性情况。方法收集北京儿童医院2003—2008年收治的1735例脓疱疮儿童皮损部位分离出的52株GAS菌株,采用琼脂稀释法测定9种抗菌药物的最低抑菌质量浓度(MIC)值;用聚合酶链反应方法对上述菌株进行大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermA和mefA检测以及emm分型情况。结果分离株对四环素及大环内酯类抗生素耐药率均为100%,MIC>256mg/L;对青霉素、头孢拉啶及氧氟沙星的敏感率高达100%。大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermA和mefA和阳性率分别为92.30%、7.70%和0;分离株的emm分型最常见的为emm12.0(53.85%),emm1.0(36.54%)。结论北京儿童医院收治的脓疱疮儿童GAS感染流行菌株对大环内酯类抗生素耐药率很高,主要耐药机制为ermB编码的23SrRNA甲基化酶导致靶位改变,在北京地区青霉素类和头孢菌素类抗生素仍是治疗GAS感染首选药物。     

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目的了解广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌中ermB及mefE基因的分布,比较ermB基因与mefE基因对红霉素耐药的肺炎链球菌的耐药性。方法2001—2004于广州市儿童医院用克林霉素纸片法检测239株对红霉素耐药的肺炎链球菌,并用浓度梯度法检测其耐药性。结果239株对红霉素耐药的肺炎链球菌中,ermB、mefE基因介导的耐药率分别为70·3%(168/239)和29·7%(71/239)。168株ermB基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌,对青霉素(MIC500·19μg/mL、MIC901·5μg/mL)、阿莫西林/克拉维酸(MIC500·19μg/mL、MIC901·0μg/mL)、头孢曲松(MIC500·19μg/mL、MIC900·75μg/mL)、头孢呋辛(MIC500·38μg/mL、MIC902·0μg/mL)、头孢克洛(MIC502·0μg/mL、MIC9032·0μg/mL)的不敏感率分别为58·4%、1·2%、20·8%、46·5%和51·7%。71株mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌,对青霉素(MIC500·5μg/mL、MIC901·5μg/mL)、阿莫西林/克拉维酸(MIC500·38μg/mL、MIC901·0μg/mL)、头孢曲松(MIC500·38μg/mL、MIC900·75μg/mL)、头孢呋辛(MIC501·0μg/mL、MIC903·0μg/mL)、头孢克洛(MIC506·0μg/mL、MIC9048·0μg/mL)的不敏感率分别为67·6%、0、19·7%、59·2%和61·9%。结论广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌其耐药机制以ermB基因介导为主;ermB基因介导的红霉素耐药性高于mefE基因介导的耐药性;ermB和mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌对β-内酰胺类药物存在不同程度的耐药。     

56株B族链球菌血清型耐药性及多位点序列分型研究

目的研究B族链球菌(GBS)的血清型、耐药性和多位点序列分型,供防治GBS感染参考。方法 2012—2013年间共收集到56株GBS菌株,自就诊于北京市妇产医院和北京大兴医院的妊娠35~37周孕妇的阴道和直肠拭子的分离培养。采用乳胶凝集试验检测菌株的血清型,E-test法和纸片扩散法检测细菌对9种抗生素的敏感性,PCR方法检测红霉素耐药基因erm B和mef A,管家基因测序确定菌株的序列型(ST),e BURST软件分析菌株间亲缘性关系。结果 56株菌共鉴定出5种血清型,常见型为Ⅲ型(32.1%)、Ⅰa型(17.9%)、Ⅰb型(16.1%)和Ⅴ型(14.3%)。分离株对青霉素和头孢曲松均敏感,对左氧氟沙星、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、泰利霉素、克林霉素和四环素的不敏感率依次为39.3%、85.7%、92.9%、98.2%、30.4%、73.2%和91.0%。56株菌株共检测出14种STs,ST19(30.4%)最为常见。Ⅲ型菌株主要属于ST19(14/18),92.9%的Ⅲ/ST19型菌株对左氧氟沙星耐药,75%的左氧氟耐药菌株属于CC19。44株红霉素耐药菌株中,32株(72.7%)erm B阳性。结论北京GBS菌株以Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ型常见;GBS菌株对青霉素和头孢曲松敏感,对红霉素和克林霉素等耐药率高,超过90%的Ⅲ/ST19型菌株耐左氧氟沙星;红霉素耐药菌株多携带erm B。     

5岁以下健康儿童鼻咽部肺炎链球菌的流行病学研究

目的了解武汉地区儿童肺炎链球菌携带率、耐药性、耐药基因及血清型流行状况。方法采集鼻咽拭子,以琼脂稀释法测定肺炎链球菌对12种抗菌药物的最低抑菌浓度,聚合酶链式反应检测红霉素耐药基因,荚膜肿胀试验进行血清学分型。结果武汉地区儿童肺炎链球菌携带率为22．31％（135／605）。存活的133株细菌中,青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSSP）发生率为45．9％（61／133）;头孢菌素第一代（头孢氨苄）、二代（头孢克洛）、三代（头孢克肟、头孢泊肟、头孢曲松）敏感率依次为6．0％、45．1％、54．9％、56．4％、88．7％;除1株环丙沙星低耐株外,未发现氟喹诺酮类耐药株。大环内酯类敏感率仅为14．3％～15．8％。在114株红霉素耐药株中,检出ermB基因76株（66．7％）,2株（1．8％）低耐株含有mefA基因,46株（40．4％）同时具有ermB和mefA基因。血清分型涉及17个血清群,主要分布在19、23、6、15和14血清群,7株细菌未能分群。PNSSP分布在19、23、6和未分型血清群。结论武汉地区肺炎链球菌耐药严重,红霉素耐药主要为核糖体修饰（ermB介导）引起。流行血清群以19、23、6为主。     

肺炎链球菌对抗生素耐药性的研究

目的 研究８０年代中期的９０年代中期肺炎链球菌对抗生素耐药性的变化。方法 采用琼脂稀释法检测８０年代中期４９株和９０年代中期３３株Ｓｐ对１２种抗生素的敏感水平。结果 Ｓｐ对青霉素的耐药率由８０年代中期的６％升到９０年代中期的２１％，对头孢呋新，头孢噻肟和亚胺培南的耐药率由０分别升至１５％，９％和１２％。     

儿童肺炎链球菌耐药性与pbp2b基因RFLP和PFGE图型分析

目的　监测肺炎链球菌对青霉素和其他抗生素的耐药情况 ;分析pbp2b基因扩增产物图谱与青霉素耐药性的相关性 ;对 3 1株青霉素耐药菌株进行血清分型 ;分析血清型 2 3F和血清型 6的青霉素耐药菌株的脉冲电场凝胶电泳 (PFGE)图型 ,初步了解北京地区耐药菌株分子流行病学上的特点。方法　 ( 1)抗生素药物敏感试验 ;( 2 )用聚合酶链反应 (PCR)和限制性内切酶片段长度多态性分析 (RFLP)方法 ,分析pbp2b基因扩增产物图谱与青霉素耐药性的相关性 ;( 3 )使用乳胶凝集的方法 ,对 3 1株青霉素耐药菌株进行血清分型 ;( 4 )使用PFGE图型方法分析 6株血清型 2 3F和 3株血清型 6的青霉素耐药菌株流行病学上的基本特性。结果　 ( 1)对青霉素的耐药性由 1997年 9 9%上升到 2 0 0 0年 14 6% (P >0 0 5)。对红霉素、复方磺胺甲基异唑和氯霉素耐药性分别由 1997年76 8%、74 7%和 2 2 6%上升到 2 0 0 0年的 87 4%、88 3 %和 40 8% (P <0 0 5) ;( 2 )通过PCR和RFLP方法分析青霉素耐药菌株和青霉素敏感菌株表明 ,pbp2b基因扩增图谱与青霉素耐药性之间有较好的相关性 ;( 3 )对 3 1株青霉素不敏感肺炎链球菌 (PRSP)做了血清型 2 3F和 6分型。前者为 6株 ( 19% ) ;后者为 3株 ( 9% )。 6株血清型 2 3F肺炎链球菌均为低水平     

2003-2004年广州地区儿童肺炎链球菌、流感嗜血杆菌抗生素敏感性调查

目的了解2003-2004年广州地区儿童呼吸道感染常见病原肺炎链球菌和流感嗜血杆菌对常用抗生素的敏感性,以便有效指导临床合理用药和预防.方法对2003-2004年在广州市儿童医院就诊的1565例上呼吸道感染儿童鼻咽分泌物进行培养,分离肺炎链球菌和流感嗜血杆菌;采用纸片扩散法及E-test方法对分离株进行常用抗生素敏感性检测.结果从1565例呼吸道感染儿童鼻咽部分离肺炎链菌球共172株,流感嗜血杆菌484株.172株肺炎链球菌对常用抗生素耐药株数（耐药率）分别为：青霉素55（32.0%）、阿莫西林/克拉维酸19（11.1%）、头孢曲松56（32.6%）、头孢呋辛31（18.1%）、头孢克洛68（39.5%）、红霉素142（82.6%）、四环素135（78.5%）、氯霉素42（24.4%）、复方磺胺甲基异噁唑150（87.2%）、克林霉素119（69.2%）、氧氟沙星5（3.1%）;肺炎链球菌的青霉素不敏感株对β-内酰胺类、红霉素、复方磺胺甲基异噁唑耐药率明显高于青霉素敏感株,且多重耐药率在90%以上.484株流感嗜血杆菌中,143株β-内酰胺酶阳性,产酶率为29.5%,484株流感嗜血杆菌的耐药株数（耐药率）分别为：氨苄西林194（40.1%）,阿莫西林/克拉维酸16（3.4%）、头孢曲松20（4.1%）、头孢呋辛9（1.9%）、头孢克洛27（5.6%）、复方磺胺甲基异噁唑272（56.2%）、四环素252（52.1%）、氯霉素84（17.4%）、阿奇霉素10（2.1%）、氧氟沙星3（0.6%）.结论广州地区儿童呼吸道肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药形势严峻,与该地区前3年资料比较,肺炎链球菌对青霉素敏感性有所增加,但对头孢曲松耐药性增加,青霉素不敏感株的多重耐药率较高,以红霉素、四环素、复方磺胺甲基异噁唑多重耐药为主要特点.流感嗜血杆菌的产酶率上升,导致菌株对氨苄西林耐药性明显增高,对头孢二、三代抗生素、阿莫西林/克拉维酸、阿奇霉素有较高的敏感性.