川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型caspase-3和NF表达的影响

目的:观察川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和神经丝蛋白(NF)表达的影响.方法:SD大鼠88只,随机分为空白对照组,生理盐水组和川芎嗪组.采用改良ALLEN氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型.采用改良Rivlin斜板实验和BBB评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分.在建模后1h,3h,6h,1d,3d,7d,14d和21d获取损伤段脊髓标本,HE染色观察其组织病理变化;免疫组织化学染色检测caspase-3和NF-L,NF-H,NF-M表达,并进行相关分析.结果:随着时间推移,术后斜板临界度数和BBB评分均逐渐升高,且术后7,14和21d,川芎嗪组斜板临界度数和BBB评分均较对照组高(P＜0.05).术后3,7和14d,川芎嗪组caspase-3表达值较生理盐水组低(p＜0.05),NF表达值较生理盐水组高(P＜0.05).改良Rivlin斜板临界角度与NF的表达正相关:BBB评分值与NF的表达正相关,与caspase-3的表达负相关;Caspase-3的表达与NF的表达负相关.结论:川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段脊髓有保护作用,可能与川芎嗪增加NF表达,抑制caspase-3表达有关.     

Nogo受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

目的探讨Nogo受体拮抗剂NEP1-40对大鼠脊髓损伤后脊髓功能恢复的影响,为临床治疗急性脊髓损伤提供实验依据。方法健康Wistar大鼠48只随机分为创伤对照组、NEP1-40治疗组。建立大鼠中段胸部脊髓后半部横切模型。对照组注入生理盐水,实验组采用NEP1-40治疗。分别在术后取材行苏木精-伊红染色、免疫荧光染色检测。术后第1、3天及1、2、3、4周对动物进行运动功能评分。结果脊髓损伤3周后,NEP1-40组行为学评分高于对照组,同时NeuN/NF-200阳性染色亦明显高于对照组,差异有统计学意义。结论NEP1-40治疗脊髓损伤能促进神经元的再生,恢复脊髓功能。     

损伤散对急性脊髓损伤大鼠肢体运动功能及Fas,FasL表达的影响

目的 观察损伤散对急性脊髓损伤大鼠运动功能和受损脊髓组织中凋亡相关因子(Fas)及其配体(FasL)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 使用改良Allen's法制作大鼠急性脊髓损伤模型,将96只大鼠随机分为空白组、模型组和损伤散组3组,致大鼠脊髓T12—L1节段中度撞击伤,伤后分别于2,8,24 h及7d,比较各组脊髓损伤大鼠的Tarlov评分和损伤脊髓组织中Fas,FasL免疫阳性细胞表达.结果 造模后24 h及7d,损伤散组Tarlov评分显著高于模型组,差异有统计意义(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,损伤散组造模后8,24 h及7 d Fas,FasL免疫阳性细胞表达差异有统计意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 损伤散能促进急性脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,使受损脊髓组织中Fas及FasL免疫阳性物质表达降低,对受损脊髓组织有保护和修复的作用.     

川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤后巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的:观察川芎嗪(tetramethylpyrazine, TMP) 对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF) 表达的影响。方法:SD 大鼠110 只, 随机分为假手术组, 对照组和实验组。应用改良Allen 氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型。应用改良Rivlin 斜板实验、联合行为评分(combinebehavior score, CBS) 和BBB(Basso, Beattie, Bresnahan, BBB) 评分对术前和术后1, 3, 5, 7, 14, 21 d 大鼠脊髓功能进行行为学评分。在建模后1, 3, 6, 12 h 及1, 3, 5, 7, 14, 21 d 获取损伤段脊髓标本, HE 染色观察其组织病理变化;免疫组织化学染色检测MIF 表达。结果:术后7, 14, 21 d 实验组斜板临界角度数均较对照组高(P<0.05);术后5, 7, 14, 21 d 实验组BBB 评分值均较对照组高(P<0.05);, 而术后5, 7, 14, 21 d 实验组CBS 评分值均较对照组低(P<0.05), 术后12 h 及1, 3, 5, 7 d, 实验组MIF 阳性细胞表达数较对照组低(P<0.05)。且随着时间推移, 改良Rivlin 斜板实验临界角度和BBB 评分与MIF 阳性细胞表达数呈负相关, CBS 评分与MIF阳性细胞表达数呈正相关。结论:TMP 对大鼠急性继发性损伤的脊髓有保护和促进其功能恢复的作用, 这种作用在损伤后1~2 周最为显著;TMP 能够抑制大鼠急性继发性损伤后脊髓组织中MIF 的表达。     

参芎葡萄糖注射液对脊髓损伤后运动功能恢复及GAP-43和NF200表达的影响

目的探讨参芎葡萄糖注射液对急性脊髓损伤后运动功能恢复的影响和可能机制。方法应用改良的Allen’s法复制大鼠脊髓损伤模型60只,随机分为对照组(30只)和治疗组(30只),在建模后1、7、14、21和28 d用BBB评分和斜板试验评定脊髓损伤后后肢运动功能恢复并获取损伤段脊髓标本,用免疫组织化学方法和免疫印迹法检测两组脊髓在损伤后不同时段生长相关蛋白(GAP-43)和神经丝蛋白(NF200)的表达,对BBB评分、GAP-43、NF200进行相关分析。结果 BBB评分和斜板试验结果提示,治疗组大鼠7、14、21、28 d时的神经功能恢复较对照组明显提高(P<0.05);免疫组织化学方法和免疫印迹法提示,与对照组相比治疗组在一定时间段能上调损伤脊髓区GAP-43和NF200的表达(P<0.05);在术后7 d和14 d,BBB评分与GAP-43、NF200的表达正相关,在术后7、14、21、28 d GAP-43与NF200的表达正相关。结论参芎葡萄糖注射液能促进损伤脊髓的功能恢复,其机制可能与参芎葡萄糖注射液上调损伤区脊髓GAP-43、NF200的表达有关。     

环孢素A对大鼠急性脊髓损伤后炎症反应的影响

目的 探讨环孢素A(CsA)在大鼠急性脊髓损伤后神经炎症反应中的作用,为CsA合理地用于脊髓损伤的临床治疗提供理论依据。 方法 成年雄性SD大鼠75 只,随机分为假手术组(sham组)、环孢素A治疗组(CsA组)、生理盐水治疗组(NS组)。采用行为学评估、H-E染色、qRT-PCR及免疫组织化学技术检测脊髓损伤大鼠的后肢运动功能恢复、组织损伤面积、促炎因子[白细胞介素(IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]的表达。 结果 行为学评估显示,随着观察时间点推移,CsA组和NS组大鼠的BBB评分逐渐升高,后肢运动功能逐渐恢复,但CsA组大鼠的BBB评分自脊髓损伤后14 d起均显著高于NS组(P<0.01)。H-E染色显示,脊髓损伤后28 d CsA组的损伤面积百分比显著低于NS组(P<0.01)。qRT-PCR显示,脊髓损伤后6 h和1 d CsA组脊髓的IL-1β,IL-6及TNF-α的mRNA水平显著低于NS组(P<0.01)。免疫组织化学显示,CsA组脊髓损伤后6 h和1 d的IL-1β,IL-6及TNF-α在脊髓灰质神经元及神经胶质细胞的胞质表达的相对蛋白水平显著低于NS组(P<0.01)。 结论 CsA可能通过减轻脊髓损伤后局部炎症反应而减缓继发性脊髓损伤的进展。     

Caspase-1及其激活的IL-18在大鼠急性脊髓组织损伤后的表达及意义

目的 探讨Caspase-1及其激活的细胞因子白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)在大鼠急性脊髓组织损伤(SCI)后的表达及意义.方法 成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只随机分为对照组和脊髓损伤组,每组24只.两组依据损伤后取材时间各再分4个亚组.脊髓损伤组应用改良的Allen's重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型,对照组只做T9全椎板切除术.分别于术后6h、1d、3d、7d处死各组大鼠,以损伤部位为中心取材,HE染色观察脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-1、IL-18的表达情况.结果 对照组大鼠脊髓组织中少量细胞Caspase-1、IL-18表达阳性.脊髓损伤后6h,损伤组Caspase-1、IL-18的表达高于对照组,1d继续增高,3d表达最多,7d略有降低,但仍高于对照组.脊髓损伤组各时间点脊髓组织中Caspase-1和IL-18表达阳性的细胞数较对照组显著增高(P＜0.01).结论 正常大鼠脊髓组织内存在少量Caspase-1、IL-18的表达.大鼠脊髓损伤后,Caspase-1和IL-18的表达迅速增强.Caspase-1和IL-18的表达增强表明其可能参与了脊髓继发性损伤,并可能是损伤性因素之一.     

通督活血汤对大鼠急性脊髓损伤后炎症反应影响

目的观察通督活血汤对急性脊髓损伤后炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的影响,探讨通督活血汤对急性脊髓损伤后炎症反应的影响。方法 56只SPF级SD大鼠随机分为3组:假手术组(n=8)、模型组(n=24)、通督活血汤组(n=24)。模型组、通督活血汤组均采用改良Allen's打击法建立脊髓损伤模型,假手术组不打击脊髓,其他步骤同模型组,造模后通督活血汤组给予通督活血汤灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃。术后第1、3、7天对各大鼠进行BBB功能评分,评分后取脊髓组织,HE染色观察脊髓组织形态变化,Elisa法检测脊髓组织TNF-α、IL-1β含量,实时荧光定量PCR检测脊髓组织TNF-α、IL-1βmRNA的表达情况。结果与假手术组相比,术后第1、3、7天模型组、通督活血汤组BBB评分显著降低(P0.05),与模型组相比,术后第3、7天通督活血汤组BBB评分显著增高(P0.05);与假手术组相比,术后第1、3、7天模型组、通督活血汤组TNF-α、IL-1β及其mRNA表达量显著升高(P0.05),与模型组相比,通督活血汤组TNF-α、IL-1β及其mRNA表达量显著降低(P0.05)。结论通督活血汤可以降低炎症因子TNF-α、IL-1β的表达,抑制急性脊髓损伤的炎症反应,促进急性脊髓损伤后大鼠下肢功能的恢复。     

三七总皂苷对脊髓损伤大鼠斜板实验评分的影响

目的探讨三七总皂苷对脊髓损伤大鼠行为学变化的影响。方法采用改良的Allen’s法将80只成年雌性Wistar大鼠造成脊髓中度损伤模型,随机分为两组：脊髓损伤＋生理盐水组（对照组）、脊髓损伤＋i七总皂苷组（实验组）,每组40只。以损伤后1、3、5、7、14d作为观察时间点,在每个时间点各组随机选择8只大鼠行斜板实验评分。结果实验组大鼠斜板实验评分均明显优于对照组,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论三七总皂苷可减轻脊髓损伤后继发性损害。     

脂肪间充质干细胞来源外泌体对脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化及胶质瘢痕形成的影响

目的 探讨脂肪间充质干细胞（ADMSC）来源外泌体对脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化及胶质瘢痕形成的影响。方法 提取ADMSC来源外泌体并鉴定。选取36只大鼠,分为假手术组（仅切除T9椎板+注射等量生理盐水）、脊髓损伤组（建模+注射等量生理盐水）、外泌体组（建模+注射100μg/kg外泌体）,每组各12只,采用钳夹脊髓法建立脊髓损伤大鼠模型。使用BBB评分评估大鼠后肢运动功能,酶联免疫（ELISA）法检测血清白细胞介素（IL）-1β、IL-4、IL-6、IL-10水平,对脊髓组织行尼氏染色,Western Blot法检测脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1(Arg-1)、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、波形蛋白（vimentin）蛋白表达。结果 经透射电镜观察及CD63、Alix蛋白检测鉴定,成功提取到ADMSC来源外泌体。与假手术组相比,脊髓损伤组大鼠BBB评分显著降低（P <0.05）,血清IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10水平及脊髓组织中iNOS、Arg-1、GFAP、vimentin蛋白水平均显著升高（P <0.05）,脊髓组织中神经细胞严重损伤,可见大量胶质瘢痕组织堆积;与脊髓损伤组相比,外泌体组大鼠BBB评分、血清IL-4、IL-10水平及脊髓组织中Arg-1蛋白水平显著升高（P <0.05）,血清IL-1β、IL-6水平及脊髓组织中iNOS、GFAP、vimentin蛋白水平显著降低（P <0.05）,脊髓组织中神经细胞损伤及胶质瘢痕组织堆积减轻。结论 ADMSC来源外泌体可改变脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化方向,并抑制胶质瘢痕形成。     

柴胡皂苷a影响大鼠急性脊髓损伤后机体炎症水平表达的实验研究

Objective: To investigate the effect of saikosaponina on the expression of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) in the early stage of acute spinal cord injury in rats. Methods: Thirty SD rats were randomly divided into sham operation group, simple injury group, saikosaponin a 5 mg / kg group, 10 mg / kg group, 20 mg / kg group, respectively. The acute spinal cord injury model was made by modified ^,Allen^,s heavy blow method. The rats in the injury group were injected with normal saline only, and the drug groups were intraperitoneally injected with the different dosages. All the animals were sacrificed at 24 h after the operation. The spinal cord and the vena cava sera of the injured segment were taken for 10 minutes and 2 minutes, respectively. The levels of TNF-αand IL-6 in the spinal cord tissue and serum were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. Results: TNF-αand IL-6 in the spinal cord tissue and serum of the rats in the pure injury group were higher than those in the sham group (P <0.05). The levels of TNF-αand IL-6 in spinal cord tissue and serum of rats treated with saikosaponin a 5 mg / kg, 10 mg / kg and 20 mg / kg were lower than those of the injury group, and the difference was statistically significant (P < 0.05). The expressions of TNF-α and IL-6 in the spinal cord tissue of rats treated with 10 mg / group and 20 mg / kg group the difference were not statistically significant (P> 0.05). The levels of TNF-α and IL-6 in serum of rats treated with 10mg / kg and 20 mg/kg were lower than those of 5mg/kg group (P> 0.05). Conclusion: Saikosaponina could reduce the secondary immune inflammatory response by affecting the early expression of inflammatory factors to improve the body’s immune function in acute spinal cord injury. The10mg/kg group is superior to the other groups, and the drug may partially pass through the spinal blood barrier.     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素(minocycline)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响.方法成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组),损伤后不同时间点取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化;用免疫组化染色检测iN-OS的表达变化;原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞;采用开放场地试验BBB评分和斜板试验,评价神经功能.结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组.A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达,神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0.05).治疗组神经功能改善优于B组.结论二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡.     

PAF受体拮抗剂对脊髓损伤后花生四烯酸代谢的影响

目的：为了探讨ＰＡＦ受体阻断对脊髓损伤后脊髓组织花生四烯酸代谢的作用及ＰＡＦ受体拮抗剂对脊髓损伤的治疗作用机制。方法：应用ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１造成猫体内脊髓损伤前、后ＰＡＦ受体部分阻断，分别采用微量滴定法、＾１２５Ｉ放射免疫分析法测定脊髓损伤后６ｈ脊髓组织ＰＬＡ２活性及花生四烯酸代谢产物（ＴＸＢ２、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）含量。结果：伤后脊髓组织ＰＬＡ２活性、ＴＸＢ２、６－ｋｅｔｏ－Ｐ     

醒髓汤治疗脊髓损伤大鼠的实验研究

目的观察醒髓汤对脊髓损伤大鼠后肢运动功能和受损脊髓组织形态学的影响。方法60只SD大鼠随机分为空白组、模型组和醒髓汤组，采用改良Allen＇s的WD法对模型组和醒髓汤组进行脊髓损伤造模，空白组仅打开椎板不损伤脊髓。造模成功后，空白组和模型组用生理盐水灌胃，醒髓汤组用醒髓汤灌胃，分别于术后3h、6h、24h、72h、168h对每一组实验动物进行Tarlov法评分、斜板试验功能测定和受损脊髓组织形态学观察。结朵醒髓汤组大鼠后肢功能恢复明星优于模型组，脊髓组织神经细胞坏死、液化、溶解较模型组轻。结论醒髓汤能有效减轻脊髓损伤大鼠脊髓组织坏死，有利于大鼠运动功能恢复。     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和神经元一氧化氮生成的影响

目的 :探讨神经生长因子 (NGF)对脊髓损伤保护作用的机制 ,为其临床应用提供理论依据。方法 :采用Allen s法以 1 0g× 2 5cm力致伤大鼠T8脊髓 ,插蛛网膜下腔导管于术后 2h、4h、8h、1 2h、2 4h注入NGF溶液 (60 μg/ 2 0 μl)或生理盐水组。采用原位杂交法检测N 甲基 D 天门冬氨酸受体 1 (NMDAR1 )和神经元型一氧化氮合成酶 (nNOS)在脊髓中的表达。结果 :与正常组比较 ,大鼠伤后脊髓前角运动神经元出现NMDAR1和nNOSmRNA的异常表达 ,NGF组与生理盐水组相比较 ,NMDAR1和nNOSmRNA异常表达减少 (P <0 0 1 )。结论 :NGF能通过抑制脊髓损伤后NMDAR1和一氧化氮 (NO)的产生 ,从而保护了损伤的神经组织。     

地塞米松对脊髓损伤后TNF-α和IL-6表达的影响

目的：探讨实验性大鼠脊髓挫伤后,急性期炎症因子：肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）在脊髓内的表达变化以及地塞米松对其表达的影响。方法：采用改良Allen’s法建立大鼠脊髓（T12）损伤模型,90只SD大鼠随机分成正常组（n=6）、SCI组（n=42）和DEX组（n=42,于SCI后15min尾静脉注射DEX30mg/kg）,分别于损伤后1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h取材,做常规HE染色和用抗TNF-α和抗IL-6行免疫组织化学方法染色。结果：TNF-α和IL-6在正常大鼠脊髓组织不表达;TNF-α、IL-6在脊髓损伤后1h均有表达,于48小时回落到正常。TNF-α在24h达高峰;IL-6在12h达高峰。地塞米松干预后二者均受到明显抑制。结论：大剂量地塞米松对TNF-α、IL-6有明显的抑制作用。     

rHuEPO与MP干预对急性脊髓损伤大鼠影响的对比研究

目的:对比性观察甲基强的松龙(MP)与重组人红细胞生成素(rHuEPO)对急性脊髓损伤(ASCI)大鼠的神经保护作用以及对损伤后脊髓组织中IL-10表达的影响。方法:以改良Allen’s撞击法制作ASCI大鼠模型后随机分为实验对照组、rHuEPO干预组、MP干预组,28d后测量大鼠斜板试验临界角度与运动诱发电位(MEP),并进行脊髓组织病理形态学观察与IL-10的免疫组织化学染色观察。结果:与实验对照组相比,rHuE-PO干预组、MP干预组大鼠斜板试验临界角度出现明显增加,MEP波幅变化率明显增加,脊髓组织病理损伤减轻、IL-10表达明显上调,结果均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用rHuEPO干预实验性大鼠脊髓损伤可上调脊髓组织中抗炎性细胞因子IL-10的表达,但与MP干预相比其结果仍有一定差距;二者对ASCI后大鼠的神经功能损伤均有一定的保护作用。     

Effects of Nerve Growth Factor on\= Excitatory Amino Acid Content in\= Spinal Cord Neuron after Spinal Cord Injury

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷｅｅｖａｌｕａｔｅｄｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆＮＧＦｆｏｌｏｗｉｎｇｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ（ＳＣＩ）ｂｙｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｅｘｃｉｔａｔｏｒｙａｍｉｎｏａｃｉｄｓ（ＥＡＡ）,ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒ...     

血小板活化因子对颈髓损伤后血脊髓屏障的影响

探讨血小板活化因子对颈髓损伤后血脊髓屏障的影响。采用蛛钢膜下腔注射ＰＡＦ及静脉注射ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１，观察其对颈髓损伤后伤区信邻近脊髓组织ＰＡＦ含量，血脊髓屏障，颈髓水肿的影响。颈髓损伤后颈髓伤区及邻近脊髓组织ＰＡＦ含量，伊文思蓝含量，水含量均明显增加，蛛网膜下腔注射ＰＡＦ可使伤后ＰＡＦ含量，伊文思蓝含量，水含量增加更为显著。