大肠埃希菌对氟喹诺酮类的质粒介导耐药机制研究

目的了解近年来发现的质粒介导耐药机制在临床分离大肠埃希菌中对氟喹诺酮类耐药所起的作用。方法用MIC琼脂稀释法筛选耐左氧氟沙星大肠埃希菌;采用聚合酶链反应对qnrA、qnrS、qnrB、aac(6′)-Ib基因进行扩增,并进行PCR扩增产物直接双向测序。用接合实验了解是否存在水平传播的氟喹诺酮耐药性传播机制。结果 90株耐氟喹诺酮类大肠埃希菌中7株检出aac(6′)-Ib-cr基因,未检出qnrA、qnrS、qnrB基因。78株符合供体菌标准的大肠埃希菌中有2株接合成功,接合率2.6%。结论该地区存在质粒介导的氟喹诺酮类耐药性的水平传播。     

肺炎克雷伯菌质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB和qnrS的研究

目的调查我院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中,质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB和qnrS的存在情况,为临床预防感染及合理使用抗菌药物提供依据。方法收集2007年7月至2008年12月间临床分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌57株,用PCR法检测qnrA、qnrB和qnrS基因,并对部分阳性菌株进行测序。采用E-test方法测定阳性菌株的药敏情况。结果 57株肺炎克雷伯菌中,25株(43.9%)检出qnr基因,其中3株(5.3%)含qnrA基因,21株(36.8%)含qnrB基因,20株(35.1%)含qnrS基因;3株(5.3%)qnrA、qnrB和qnrS同时阳性,13株(22.8%)qnrB和qnrS同时阳性。结论我院产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr携带率很高,临床上应加强喹诺酮类耐药基因的检测,以避免产qnr基因菌株的感染爆发流行。     

肺炎克雷伯菌中质粒介导耐喹诺酮类耐药基因qnr的流行现状及耐药特征

目的 了解肺炎克雷伯菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS基因的流行情况以及其耐药特征.方法 PCR法对37株肺炎克雷伯菌进行qnrA,qnrB,qnrS基因检测.K-B纸片法检测对15种抗菌药物的体外抗菌活性.琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的MIC值.结果 37株肺炎克雷伯菌中,共检测出含qnr基因阳性菌株7株(18.92%),均为qnrS基因.阳性株菌均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药.结论 湖北地区肺炎克雷伯菌中存在qnr基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,应加强对该类基因的监测.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中质粒介导的喹喏酮类耐药研究

目的:研究国内11家医院分离大肠埃希菌(ECO)和肺炎克雷伯菌(KPN)中质粒介导的喹喏酮类耐药。方法:收集北京大学第三医院无重复临床分离产超广谱β-内酰胺酶(ESBL s)的ECO和KPN共84株,另10家医院相应菌株共155株,北京协和医院对头孢西丁不敏感的ECO和KPN共25株。采用琼脂稀释法测定抗生素最低抑菌浓度M IC;接合实验判断该基因位置和移动性;聚和酶链反应(PCR)及其产物测序确定基因型。结果:北医三院84株菌中1株KPN(编号24)阳性,ECO的发生率是0;余10家医院155株产ESBL s菌株中没有阳性结果;协和医院25个临床株中3株KPN(编号P 3、P 6、P 10)阳性。这4株菌只有P 6接合试验阳性,相应接合子qnr-PCR阳性。环丙沙星C IP对该菌的M IC是0.5μg/m l,对该接合子的M IC是1μg/m l,而对受体菌EC 600的M IC是0.125μg/m l。对24号标本和P 6标本及其接合子进行测序证实:二者的qnr↑序列和AY 878718(qnrA)100%同源,并且qnr基因的上游都有ORF 513存在。结论:北医三院和北京协和医院分类株中存在质粒介导的喹喏酮类耐药基因qnr,其他医院分离株本次研究中未发现该基因。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因型及流行病学分析

目的研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产质粒型AmpC酶株的比率、酶的基因型及其流行病学状况。方法收集本院、福建省立医院两家医院2004年9月至2005年3月的67株耐头孢西丁不重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，用酶提取物三维试验检测高产AmpC酶；抽提高产AmpC酶株质粒，用PCR及产物序列分析确定质粒AmpC酶和13内酰胺酶的基因型；质粒转化试验定位耐药基因；ERIC-PCR指纹图确定产酶株间的同源关系。结果福州两家医院耐头孢西丁菌中产质粒型AmpC酶的发生率，大肠埃希菌分别为16．7％和10．5％，肺炎克雷伯菌则分别为8．0％和0。2株肺炎克雷伯菌产DHA-1型、4株大肠埃希菌产CMY-2型、1株大肠埃希菌产CMY-22型质粒AmpC酶；5株产CMY型AmpC酶的大肠埃希菌还分别同时产CTX—M-14、CTX—M-27、TEM-144和TEM-1型13内酰胺酶。7株菌中，1株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌可将头孢西丁耐药性转移给受体菌。7株产酶菌ERIC—PCR指纹图显示，2株肺炎克雷伯菌来自相同克隆，其余菌株来自不同克隆。结论福州地区发现产DHA-1型AmpC酶肺炎克雷伯菌和产CMY-2型及CMY-22型AmpC酶大肠埃希菌。CMY-22型AmpC酶和TEM-144型13内酰胺酶是国内外首次报道，GenBank登录号为DQ256079和DQ2560S0。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布和耐药分析

[目的]探讨本院产广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布和耐药情况,为临床科室抗生素使用提供依据.[方法]将本院2009年2月至2010年2月门诊和住院患者送检的标本进行细菌常规方法培养后采用梅里埃VITEK2系统作菌种鉴定和药敏试验,采用头孢噻肟和头孢噻肟+克拉维酸双纸片法进行产ESBLs菌株的鉴别.[结果]①1257份送检标本中共检测出致病菌742株,检出阳性率为59.0％;产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率分别为73.9％和77.6％,为主要检出菌.②在742株致病菌中,其中革兰阳性球菌247株,占33.3％,革兰阴性杆菌458株,占61.7％;③革兰阴性杆菌中前五位的依次是大肠埃希菌(30.1％)、肺炎克雷伯菌(23.4％)、铜绿假单胞菌(18.8％)、鲍曼不动杆菌(15.1％)、阴沟肠杆菌(12.7％).④在16种抗菌素耐药试验中,仅亚胺培南、美罗培南在检出的5种革兰阴性杆均大部分显示出敏感或低度耐药性.⑤大肠埃希菌产ESBLs菌与非产ESBLs菌对头孢类、氨苄西林完全耐药性几近一致;肺炎克雷伯菌中非ESBLs菌对药物敏感大多高于产ESBLs菌.[结论]产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为本院主要致病菌种,医院应加强对病原菌检测、分析病原菌感染趋势,具体借鉴药敏试验,合理使用抗生素.     

头孢哌酮和哌拉西林与β内酰胺酶抑制剂对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的后效应研究

目的测定头孢哌酮和哌拉西林与克拉维酸、舒巴坦、三唑巴坦3种β内酰胺酶抑制剂的不同复方的最低抑菌浓度（MIC）、抗生素后效应（PAE）、β内酰胺酶抑制剂后效应（PLIE）和亚抑菌浓度后效应（PASME）。方法以肉汤稀释法测定MIC；以菌落计数法测定菌落形成单位（CFU），根据CFU做生长曲线，计算PAE、PLIE、PASME。结果不同比例复方对产β内酰胺酶菌株的MIC较单方呈2—256倍的降低。无论单方还是复方均无长PAE。3种β酰胺酶抑制剂的PLIE对于大肠埃希菌有正有负（－2．25h～〉5h），而对于肺炎克雷伯菌均为正值（0．34h～5．37h）。对于肺炎克雷伯菌，0．2MIC的头孢哌酮／舒巴坦（1／1）的PASME为0．32h，0．1MIC、0．2MIC的哌拉西林／克拉维酸（8／1）的PASME分别为2．96h、4．41h。结论同时具有长PLIE及PASME的复方，PLIE、PASME较其半衰期在给药方案的设计中更为重要；PAE、PLIE、PASME作为重要的药效动力学参数，可应用于评价新抗菌药物的药效学和优化给药方案。     

改良头孢西丁平板试验检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶

目的依据EDTA可渗透菌细胞内并促进β-内酰胺酶释放至外环境的原理,建立并评价检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶的改良头孢西丁平板试验（MCAM）。方法于含有2、4、6、8μg/ml的头孢西丁平板上接种过夜培养的大肠埃希菌ATCC25922,然后用直径5mm的打孔器在琼脂表面均匀间隔打孔,于孔中分别加入0.5mol/LEDTA0、3、5、7、10μl（使孔中约含EDTA分别为0、450、750、1000、1500μg）,各孔加待检菌悬液（〉1011CFU/ml）25μl,35℃过夜培养。以孔周有细菌生长环为AmpCs阳性。以阴沟肠杆菌029M和大肠埃希菌ATCC25922作质控,用MCAM和酶粗提物三维试验（TDEM）同时检测临床分离的头孢西丁不敏感大肠埃希菌（14株）和肺炎克雷伯菌（13株）的AmpC酶,对两种方法进行比较。结果MCAM试验应用6μg/ml头孢西丁平板和750μgEDTA进行检测,其结果与TDEM试验完全一致。结论该方法操作简便、结果易于判读,在一块平板上可同时进行多株菌的检测,适于各级临床微生物实验室应用。     

超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性

目的 了解超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）肺炎克雷伯菌、大肠埃杀菌的耐药性、药特点,指导用药。方法 对应用双纸片 试验法检测６２株产ＥＳＢＬＳ的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌的体外抗生素耐药性作了初步研究。结果 ＥＳＢＬＳ总阳性率为４０．３５,以重症监护病房为最高（７５．０％）。产ＦＳＢＬＳ菌对头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松的耐药性高达８２．９￣１００．０％,较不产ＥＳＢＬＳ菌高７７．０％￣９４．０％。对     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的药敏分析

目的 总结2006年7月至2008年6月间该院细菌室所分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的药敏数据,为临床合理应用抗生素提供参考.方法 参照美国临床实验室标准化委员会（CLSI）药敏标准,血液及胸、腹水标本采用法国生物梅里埃公司BacT/Alert3D血培养仪培养,细菌鉴定及药敏测定采用法国生物梅里埃公司Vitek32微生物分析仪完成,细菌鉴定采用革兰阴性菌鉴定卡进行,细菌药敏试验及ESBL检测采用革兰阴性菌药敏卡GNS-130完成.结果大肠埃希菌对亚胺培南最为敏感,敏感率达到99.07%,其次是头孢西丁和呋喃妥因,敏感率分别为94.05%和88.12%,此外,敏感率较高的还有丁胺卡那霉素、奈替米星和头孢噻肟,均在70.00%以上;肺炎克雷伯菌敏感率居前3位的分别是亚胺培南、奈替米星和丁胺卡那霉素,其中亚胺培南和奈替米星的敏感率达到了100.00%,丁胺卡那霉素的敏感率为98.08%.此外,肺炎克雷伯菌敏感率在90.00%以上的抗生素从高到低依次为阿莫西林/棒酸、头孢西丁、萘啶酸、培氟沙星、环丙沙星、左旋氧氟沙星和头孢吡肟.大肠埃希菌的超广谱β-内酰胺酶（ESBL）阳性菌株为42株,阳性率为41.58%;肺炎克雷伯菌的ESBL阳性菌株为10株,阳性率为9.62%.结论 临床要依据药敏报告选药,同时注重耐药性监测,以期能够较好地控制院内感染的发生.     

Characterization of plasmid-mediated quinolone resistance determinants in Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli from Tokai,Japan

The spread of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants was evaluated in 150 ceftazidime or cefotaxime-resistant clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli from Tokai, Japan between 2008 and 2011. In this study, qnrB, qnrS, and aac(6′)-Ib-cr genes were detected in 12 (50.0%), 4 (16.7%), and 1 (4.2%) of 24 K. pneumoniae isolates, respectively, while qnrA, aac(6′)-Ib-cr, and qepA genes were detected in 1 (0.8%), 11 (8.7%), and 2 (1.6%) of 126 E. coli isolates, respectively. qnr genes were mainly found in K. pneumoniae (66.7%) and to a lesser extent in E. coli (0.8%). We determined the genetic environment of the qnrB4 gene in 24.6 kb class 1 integron structure, including aar-2, cmlA, blaOXA-10, aadA1, qacEdelta1, sul1, and blaDHA-1. In a time-kill assay, introduction of the qnrB4 or qnrS1 plasmid to the recipient E. coli strain decreased the bactericidal activities of fluoroquinolones such as ciprofloxacin, levofloxacin, and pazufloxacin.     

Activities of newer quinolones against Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae containing the plasmid-mediated quinolone resistance determinant qnr

Seventeen qnr-containing transconjugants were constructed with azide-resistant Escherichia coli J53 as the recipient, and the MICs of 12 quinolones were tested by agar dilution methods. Sitafloxacin, BAYy3118, and premafloxacin had higher activity in vitro than ciprofloxacin against transconjugants and donors containing qnr. The donors had higher quinolone MICs than the transconjugants.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性研究

目的:了解产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染的影响因素及细菌耐药情况。方法:根据我院实验室登记的各种标本中细菌培养的阳性报告,回顾调查了1999年2月至2000年12月在我院住院的201份病历。结果:201份病例送检的标本中,检出产ESBLs细菌76株(其中肺炎克雷伯菌25株,大肠埃希菌51株),检出率37.8％。非产ESBLs细菌为125株(其中肺炎克雷伯菌24株,大肠埃希菌101株)。多因素分析结果表明侵袭性操作、第三代及第四代头孢菌素及其他β内酰胺类药物的应用以及医院感染是产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染的危险因素;而基础疾病、免疫抑制剂、喹诺酮类药物的应用,与产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染无统计学意义(P>0.05)。产ESBLs细菌对氨苄西林、氨曲南、头孢唑林、头孢噻吩、头孢呋辛和头孢曲松100％耐药,对阿米卡星、环丙沙星、哌拉西林-三唑巴坦和头孢哌酮-舒巴坦等抗菌药物的耐药率较不产酶株都有不同程度增加。结论:影响产ESBLs菌感染的临床危险因素为第三代头孢菌素及其他β内酰胺类药物的应用、医院感染和侵袭性操作。产ESBLs细菌对常用抗菌药物的耐药性较高。     

Emergence of plasmid-mediated quinolone resistance in Escherichia coli in Europe

Although quinolone resistance results mostly from chromosomal mutations, it may also be mediated by a plasmid-encoded qnr gene in members of the family Enterobacteriaceae. Thus, 297 nalidixic-acid resistant strains of 2,700 Escherichia coli strains that had been isolated at the Bicetre Hospital (Le Kremlin-Bicetre, France) in 2003 were screened for qnr by PCR. A single E. coli isolate that carried a ca. 180-kb conjugative plasmid encoding a qnr determinant was identified. It conferred low-level resistance to quinolones and was associated with a chromosomal mutation in subunit A of the topoisomerase II gene. The qnr gene was located on a sul1-type class 1 integron just downstream of a conserved region (CR) element (CR1) comprising the Orf513 recombinase. Promoter sequences for qnr expression overlapped the extremity of CR1, indicating the role of CR1 in the expression of antibiotic resistance genes. This integron was different from other qnr-positive sul1-type integrons identified in American and Chinese enterobacterial isolates. In addition, plasmid pQR1 carried another class 1 integron that was identical to In53 from E. coli. The latter integron possessed a series of gene cassettes, including those coding for the extended-spectrum beta-lactamase VEB-1, the rifampin ADP ribosyltransferase ARR-2, and several aminoglycoside resistance markers. This is the first report of plasmid-mediated quinolone resistance in Europe associated with an unknown level of plasmid-mediated multidrug resistance in Enterobacteriaceae.     

从患者胆汁分离的大肠埃希菌中质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因的检测

目的 分析浙江省衢州市开化县第二人民医院消化内科胆汁分离的大肠埃希菌的耐药特点并调查质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布情况和流行特点。方法 收集该院消化内科患者2011年1月至2013年6月分离的大肠埃希菌724株,均为非重复性菌株,采用全自动微生物分析仪器VITEK 2 COMPACT进行细菌鉴定及药物敏感性分析,采用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)分析质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance genes, PMQR) 如qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr和qepA 基因的流行特点。结果 胆源性大肠埃希菌的构成比达18.65%(135/724),其对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率高达61.5%(83/135)和55.6%(75/135),未检出碳青霉烯类抗生素耐药菌株;PCR检测PMQR基因结果显示:135株胆源性大肠埃希菌中,121株 (89.63%) qnrA1 基因阳性,45株(33.33%) qnrB4 基因阳性,32株 (23.70%) qnrB6 基因阳性,43株(31.85%) qnrS1 基因阳性,34株(25.19%) aac(6')-Ib-cr 基因阳性菌株,未检出qepA基因;其中45株(33.33%)同时携带 qnrA1、qnrB4 基因,32株(23.70%)同时携带 qnrA1、qnrB6, 25株(18.52%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1, 21株(15.56%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 12株(100%)同时携带 qnrA1、qnrB6、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 且环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率随着PMQR基因组合种类的增多而增多。结论 消化内科胆汁分离的大肠埃希菌氟喹诺酮类抗生素耐药严重,耐药基因主要以 qnrA1为主,qnrB4和qnrB6 次之,且存在多种PMQR基因组合形式,这些潜在播散的氟喹诺酮耐药基因对于临床胆道感染的治疗有很大的挑战。     

Presence of plasmid-mediated quinolone resistance in Klebsiella pneumoniae isolates possessing blaKPC in the United States

The presence of plasmid-mediated quinolone resistance genes [i.e., qnrA, qnrB, qnrS, aac(6')-Ib-cr, and qepA] was evaluated among 42 bla(KPC)-containing Klebsiella pneumoniae isolates collected in the eastern United States. One isolate carried the bla(KPC-3) and qnrB19 genes on the same conjugative plasmid, whereas another carried the bla(KPC-3) and qnrA1 genes on separate plasmids.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的 了解我院2005-2008年产超广谱β内酰胺酶(ESBLs) 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率及耐药情况.方法 收集我院2005年1月-2008年12月临床分离到的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别2 557株和1 883株,采用纸片扩散法(K-B法)对分离株进行抗菌药物敏感试验和ESBLs筛选和确证试验.对其中60株产ESBLs菌用PCR和测序检测该类酶的基因型.结果 4年中大肠埃希菌ESBLs检出率分别为48.0%、63.0%、65.8%和59.8%,肺炎克雷伯菌ESBLs检出率分别为40.9%、53.9%、56.8%和47.3%.产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对氨苄西林、头孢克洛、头孢呋辛、头孢唑林、头孢丙烯和哌拉西林等耐药率超过90%,对美罗培南和亚胺培南的敏感率为97%～100%.29株大肠埃希菌TEM基因检出率为75.8 %(22/29),SHV基因检出率为0,CTX-M基因检出率为86.2%(25/29).31株肺炎克雷伯菌TEM基因检出率为41.9 %(13/31),SHV基因检出率为64.5%(20/31),CTX-M基因检出率为48.4%(15/31).35株(58.3%)菌同时检测到2种以上基因型.序列分析证实TEM 扩增产物均属于TEM-1基因,CTX-M 扩增产物均属于CTX-M-3基因,而SHV 扩增产物则分别属于SHV-1、SHV-5、SHV-11、SHV-12和SHV-28.结论 我院2005-2008年大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检出率较高.CTX-M-3、SHV-11和SHV-12是我院产ESBLs 菌株的主要基因型.     

Detection of the plasmid-mediated quinolone resistance determinant qnr among clinical isolates of Klebsiella pneumoniae producing AmpC-type beta-lactamase

OBJECTIVES: Plasmid pMG252 contains the qnr locus, which is responsible for low-level resistance to quinolones by protecting the DNA gyrase. pMG252 also encodes the AmpC-type beta-lactamase (pACBL), FOX-5. The aim of this study was to determine the prevalence of qnr in strains from different geographical locations in America and Europe. METHODS: Four hundred and twenty-five (159 Klebsiella pneumoniae and 266 Escherichia coli) clinical isolates were studied. The detection of qnr was by PCR using specific primers for an internal fragment of 543 bp. RESULTS: qnr was detected in three cefoxitin-resistant K. pneumoniae strains, which also produced a pACBL. None of the E. coli isolates tested contained qnr. The three qnr-positive K. pneumoniae came from the USA, and all transferred a conjugative plasmid coding for cefoxitin resistance to E. coli J53. qnr was also transferred by the same plasmid in two out of the three strains. The sequences of amplified qnr fragments from the three strains were identical to the qnr sequence from pMG252. CONCLUSIONS: The qnr determinant is uncommon among clinical isolates of K. pneumoniae and E. coli, but its identification in three pACBL+ K. pneumoniae from the USA indicates the emergence of this quinolone resistance mechanism.     

住院患者肠道大肠埃希菌质粒介导喹诺酮类耐药基因研究

大肠埃希菌是肠道内主要定植菌,是耐药基因的重要储存库~([1]),其耐药水平直接关系到临床感染株的耐药水平,另外,肠道正常定植的大肠埃希菌还可将所携带的耐药基因传递给致病性大肠埃希菌、沙门菌及志贺菌等不同菌属~[2].     

In vivo selection of fluoroquinolone-resistant Escherichia coli isolates expressing plasmid-mediated quinolone resistance and expanded-spectrum beta-lactamase

A ciprofloxacin-resistant Escherichia coli isolate, isolate 1B, was obtained from a urinary specimen of a Canadian patient treated with norfloxacin for infection due to a ciprofloxacin-susceptible isolate, isolate 1A. Both isolates harbored a plasmid-encoded sul1-type integron with qnrA1 and blaVEB-1 genes. Isolate 1B had amino acid substitutions in gyrase and topoisomerase.