缺血再灌注损伤大鼠肾脏凝血纤溶相关蛋白的表达

目的 观察缺血再灌注(IR)大鼠肾组织凝血纤溶相关物质的蛋白表达并探讨其意义.方法 雄性Wistar大鼠48只被随机分为6组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注0、2、6、12、24 h组(IR0h组、IR2h组、IR6h组、IR 12h组、IR 24 h组),每组8只.用无创动脉夹夹闭双肾动脉45 min建立IR模型.HE染色观察肾组织病理改变;免疫组织化学法检测肾组织内皮素(ET-1)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤维蛋白原样蛋白2(Fgl-2)凝血酶原酶蛋白的表达.结果 与Sham组相比,IR 24 h组大鼠血BUN及Scr升高,差异有统计学意义(P＜0.05).IR各组肾组织病理改变程度随再灌注时间延长而逐渐加重;与Sham组相比,IR各组肾小管损伤半定量评分明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).IR各组肾ET-1蛋白表达增加,6h达高峰,与Sham组相比差异有统计学意义(P＜0.05).IR各组肾Fgl-2凝血酶原酶表达增加,12h达高峰,24 h基本恢复正常,与Sham组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).肾组织t-PA表达增加,12h达高峰,与Sham组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肾脏IR损伤后存在肾组织凝血纤溶相关物质的异常表达,推测后者可能参与了肾脏IR损伤.     

可注射型骨修复材料对兔MSC增殖及分化的影响

目的：观察以纤维蛋白胶为载体的骨修复材料对兔骨髓基质细胞（marrow stromal cell,MSC)增殖及分化的影响。方法；采用细胞培养及组织化学等方法对各材料组兔MSC的增殖、碱性磷酸酶（alkaline phosphase,ALP)的活性和染色、细胞贴壁率及I型胶原表达进行研究。结果：（1）各组材料对细胞贴壁率及促增殖作用的影响总体上由强到弱依次是：对照组2→实验组→对照组1[纤维蛋白胶（fibrin sealant,FS)]→对照组3→单纯对照组，差异有显著性（P＜0．05）。（2）各组细胞的I型胶原表达水平和ALP活性由强到弱依次是：实验组→对照组3→对照组1→对照组2→单纯对照组，差异有显著性（P＜0．05）。结论：以纤维蛋白胶为载体的注射型骨修复材料可显著保进MSC贴壁率和向成骨细胞方向的分化水平。     

同种异体间充质干细胞复合纤维蛋白修复骨缺损

[目的]探讨骨髓间充质干细胞(m esenchym al stem cells,MSCs)的体外培养,以及同种异体MSCs复合纤维蛋白修复兔股骨髁松质骨缺损的效果。[方法]在日本大耳兔双侧股骨髁制作0.6 cm×1.0 cm松质骨缺损,左侧植入同种异体MSCs纤维蛋白复合物,右侧单纯植入纤维蛋白。分别于术后2、5、8周行放射学、组织学检查,以了解骨缺损修复情况。[结果]单纯植入纤维蛋白的一侧不能自行愈合。植入复合物的一侧术后2周可见少量骨组织生成,5周可见大量模糊骨痂,术后8周骨缺损基本愈合。除少量炎性细胞浸润外,各期均未见明显免疫排斥反应。[结论]同种异体MSCs复合纤维蛋白可有效修复兔股骨髁松质骨缺损,8周内机体的免疫排斥反应较弱。     

TNF-α和IL-2在肝移植急性排斥反应中的表达及意义

目的 检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)在肝移植术后急性排斥反应中的表达情况,以评价其作为肝移植术后急性排斥反应早期诊断指标的价值.方法 建立大鼠原位肝移植模型,应用荧光定量PCR法检测大鼠肝移植术后肝组织中TNF-α和IL-2基因的表达,以组织病理学作为急性排斥反应的诊断标准,研究其表达与急性排斥反应的关系.结果 术后3,5,7d异基因肝移植大鼠移植肝均有急性排斥反应发生.其肝组织TNF-α及IL-2表达水平均显著高于同期同基因肝移植大鼠肝组织的TNF-α,IL-2表达水平.结论 TNF-α和IL-2参与肝移植后排斥反应的发生,其表达可作为术后急性排斥反应的辅助诊断指标.     

维生素K1对小儿心内直视手术围术期凝血机制的影响

目的 小儿心内直视手术中应用维生素K1（Vitamin K1,Vit K1)，观察其对凝血因子的作用。方法 30例心脏手术患者分为3组，A组：动脉导管未闭患者；B组：使用VitK1治疗；C组：未使用VitK1治疗。每组各10例，分别检测A组术前、术后、B组、C组术前24小时、麻醉后开胸前、鱼精蛋白中和后10分钟、术毕、术后6小时、1天、3天和5天的血浆凝血酶原时间（PT）、激活部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、X因子活性，纤维蛋白原含量和红细胞压积。结果 鱼精蛋白中和后10分钟血浆凝血酶原时间、激活部分凝血活酶时间、凝血酶时间最长，X因子活性、纤维蛋白原含量最低。与C组相比，B组术后24小时内血浆凝血酶原时间明显缩短，X因子活性明显升高。结论 术前应用Vit K1可明显提高术后早期凝血因子水平，有利于减少术后出血的发生。     

克隆并构建人骨形成蛋白2真核表达载体

目的探讨构建人骨形成蛋白2(human bone morphgenetic protein 2,hBMP 2)真核表达载体的方法.方法由人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用RT PCR方法扩增获得hBMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM T hBMP-2重组质粒载体,转化到大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,利用限制性酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒.分别用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切pGEM-T-hBMP-2质粒和pcDNA3.1( )真核表达载体,将克隆载体中hBMP基因重组到pcDNA3.1( )真核表达载体,提取质粒作酶切电泳、PCR鉴定及DNA测序.结果人骨肉瘤细胞中经RT-PCR得到1.2kbp的hBMP 2扩增条带,重组质粒pGEM T-hBMP 2经酶切电泳可见1.2 kbp的hBMP 2条带和4.0 kbp的载体片断;pcDNA3.1 hBMP-2质粒经酶切电泳可见1.2 kbp的hBMP-2条带和5.0kbp的载体片断,重组质粒酶谱分析与预期一致;DNA序列分析测序结果校对后经BLAST分析,表明核酸序列与Gene Bank中和hBMP-2的mRNA序列完全吻合.结论通过此方法能成功克隆获得hBMP-2基因,并构建其真核表达载体.     

D-二聚体

D-二聚体（D-Dimer）来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块,是纤维蛋白单体经活化因子XⅢ交联后,再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物,是一个特异性的纤溶过程标记物。D-二聚体主要反映纤维蛋白溶解功能。D-二聚体血浆中水平增高说明存在继发性纤溶过程。纤溶蛋白降解产物中,只有D-二聚体交联碎片可以反映血栓形成后的溶栓活性。因此,D-二聚体的定量检测可定量反映药物的溶栓效果以及可用于诊断、筛选新形成的血栓。     

骨髓间充质干细胞复合骨形态发生蛋白和纤维蛋白修复节段性骨缺损

目的　用自体骨髓间充质干细胞 (MSCs)、骨形态发生蛋白 (BMP)和纤维蛋白的复合物修复骨缺损。方法　抽取兔自体骨髓并分离和大量培养MSCs。在 12只MSCs供体兔的两侧桡骨中段造成 1 5cm缺损 ,一侧植入自体MSCs、 15mgBMP和纤维蛋白的复合物 (B +M +F) ,另一侧植入自体MSCs与纤维蛋白的复合物 (M +F)。另一组等数量实验兔造成相同缺损后 ,一侧植入 15mgBMP与纤维蛋白的复合物 (B +M ) ,另一侧留作空白对照。术后第 2 ,4 ,8周做放射学、组织学和ECT检查。结果　B +M +F组在术后 2周即产生填满缺损区的骨痂影 ,8周时骨缺损得到良好修复。B +M组所产生骨痂量和修复效果均不如B +M +F组 ,但优于M +F组。结论　用自体骨髓间充质干细胞复合骨形态发生蛋白和纤维蛋白修复骨缺损是一种切实可行和有效的方法。     

纤维蛋白用作BMP载体的研究

目的：将纤维蛋白用作ＢＭＰ（骨形态发生蛋白）的载体材料。方法：用５ｍｇ ＢＭＰ分别与３种不同浓度的纤维蛋白制成复合物，植入小鼠肌囊后不同时间进行组织学观察、测定碱性磷酸酶活性和钙含量等。结果：纤维蛋白浓度为１２０ｍｇ／ｍｌ的复合物具有良好的骨诱导活性，成骨量是单纯５ｍｇ ＢＭＰ的两倍。结论：纤维蛋白是理想的ＢＭＰ载体材料，复合物可望应用于临床骨缺损的修复。     

疏血通注射液预防肾病综合征下肢静脉血栓形成的临床观察

目的 观察疏血通注射液预防肾病综合征并发下肢深静脉血栓形成的临床疗效和安全性.方法 30例肾病综合征患者按随机数字表法分为试验组和对照组,每组15例.对照组给予常规治疗,试验组在常规治疗的基础上加用疏血通注射液并缓慢静脉滴注,疗程均为2周.分别观察治疗前、后下肢静脉血栓形成情况,治疗前、后凝血酶原时间、部分凝血活酶时间、国际标准化比值及纤维蛋白原的检验结果以及尿蛋白定量.结果 试验组患者无下肢静脉血栓形成,凝血酶原时间和部分凝血活酶时间延长,纤维蛋白原含量降低(P＜0.05),尿蛋白明显减少(P＜0.05).对照组下肢静脉血栓形成4例.结论 疏血通注射液预防肾病综合征下肢深静脉血栓形成是安全、有效的,其作用机制可能是通过抑制凝血功能和降低纤维蛋白原来实现的.     

纤维蛋白对肾小球内皮细胞表达纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制物的作用

目的：观察体外培养人肾小球内皮细胞（GEC）表面原位形成的纤维蛋白对GEC表达纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制物（PA／PAI）的影响。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）,酶谱分析法与反向酶谱法分别在基因转录水平与蛋白质活性水平上检测纤维蛋白对GEC表达tPA,uPA gn PAI-1r 作用,纤维蛋白平板法检测纤维蛋白对GEC PA／PAI系统的综合效应,结果：纤维蛋白能够明显促进tPA,uPA与PAI－1的mRNA表达上调,无血清RPMI 1640培养下的GEC几乎检测不到PAI知性,但可检测到PAI－1的活性。纤维蛋白能够浓度依赖性刺激GEC tPA与uPA活性增加以及PAI01的活性增加,呈浓度依赖性与时间依赖性,相同剂量的纤维蛋白原与纤维蛋白的作用相似,放线菌酮与放线菌素D均可抑制纤维蛋白上调GEC表达tPA,uPA与PAI的作用,纤维蛋白平板法显示,纤维蛋白对GEC PA／PAI系统的综合效应是以升高PA活性为主,其活性能够被抑肽酶完全阻断。结论：肾脏局部毛细血[管内沉积的纤维蛋白可能通过对GEC PA／PAI系统的调节发挥其病理作用。     

CD44在大鼠肾移植急性排斥反应中的表达

目的:探讨移植肾组织CD44的表达及血清中可溶性CD44的含量与急性排斥反应的关系。方法:雄性Wistar大鼠和SD大鼠分别作为供体和受体,共分为四组,采用改进的Blom法大鼠原位肾移植模型。免疫组织化学染色法检测移植肾组织CD44分子的表达;酶联免疫吸附试验测定术后血清中可溶性CD44水平的变化。结果:移植肾组织CD44分子的表达在同种异体移植组显著高于同品系移植组、手术对照组及药物治疗组(均P<0.05);移植肾组织CD44分子的表达与急性排斥反应呈正相关(皮质:r=0.734,髓质:r=0.670,均P<0.01);发生急性排斥反应的移植肾组织CD44分子的表达与Banff急性排斥反应指数无相关性(P>0.05);血清中可溶性CD44分子各组间差异无统计学意义,与急性排斥反应及Banff指数均无相关性(均P>0.05)。结论:CD44分子在肾移植急性排斥反应的发病机制中起着重要作用,为进一步提高移植排斥反应防治水平提供理论依据。     

川芎嗪对纤维蛋白原基因的作用

目的:研究川芎嗪对大鼠缺血再灌注肾纤维蛋白原基因活性影响,探讨川芎嗪对大鼠缺血再灌注肾的保护机理.方法:将24只大鼠随机分为对照组和川芎嗪组,在川芎嗪组大鼠尾静脉注射川芎嗪注射液1周后,两组同时建立肾缺血再灌注模型,检测血纤维蛋白原浓度及肾纤维蛋白原基因活性.结果:缺血前对照组和川芎嗪组血液纤维蛋白原分别为(3.48±0.64)g/L和(3.90±0.68)g/L;缺血再灌注16 h后血液纤维蛋白原分别为(6.40±0.87)g/L和(5.28±0.76)g/L.纤维蛋白原基因活性基因芯片检测结果:川芎嗪组cy 5:377;对照组cv 3:3 049.川芎嗪组PCR扩增图谱比对照组的条带亮度暗.病理结果显示川芎嗪组肾损害较轻.结论:川芎嗪使纤维蛋白原基因活性表达下调,导致纤维蛋白原生成减少,减轻血瘀证对肾脏的危害,从而保护肾功能.     

纤维蛋白粘合剂在心脏手术止血中应用的初步研究

纤维蛋白粘合剂(fibrin sealant，FS)也称为纤维蛋白胶，其主要成分是已纯化、经病毒灭活处理的人纤维蛋白原和人凝血酶，有时还加入经病毒灭活处理的人XⅢ因子和牛抑肽酶。该制剂在欧洲、加拿大、日本等地应用广泛．尤其在心脏外科领域。本实验观察莱士公司生产的纤维蛋白胶在心脏外科手术中的止血效果及安全性，仅为初步研究。     

Bax和Bcl-2在增生性瘢痕中表达及其对瘢痕形成的影响

目的观察Bax和Bcl-2在增生性瘢痕和正常皮肤组织内的表达特征及其对增生性瘢痕形成的影响.方法用免疫组化方法和常规病理技术确定这两种蛋白在8例增生性瘢痕和8例正常皮肤中的表达变化规律.结果在正常皮肤内,Bax主要存在于表皮基底层细胞和部分成纤维细胞的胞浆中;Bcl-2蛋白则分布于表皮基底层细胞的胞浆内.在增生性瘢痕中,Bax主要定位于表皮基底层细胞内,阳性细胞率明显低于正常皮肤水平(P<0.05);含有Bcl-2的阳性细胞主要为表皮细胞和部分成纤维细胞,阳性细胞率显著升高(P<0.05).结论增生性瘢痕的发生可能与Bcl-2蛋白过度表达,抑制细胞凋亡相关,而Bax表达降低,其介导的细胞凋亡受阻亦可能是增生性瘢痕形成的原因之一.     

瘢痕疙瘩分泌性卷曲相关蛋白2与骨母细胞特异性因子2的相互作用

目的 验证分泌性卷曲相关蛋白2(SFRP2)与骨母细胞特异性因子2(OSF-2)的相互作用.方法 构建能在哺乳动物细胞中表达带人膜联蛋白(HA)标签的OSF-2融合蛋白重组载体pCMV-HA-OSF-2,经酶切鉴定确认后,与Myc-SFRP2重组真核表达载体pCMV-HA-SFRP2单独或共转染人HK293细胞,利用免疫共沉淀技术及蛋白质印迹法验证OSF-2与SFRP2的相互作用.结果 重组载体经酶切电泳后,显示近800 bp处的条带为酶切后的目的 片段SFRP2编码基因,近2500 bp处的条带为酶切后目的 基因OSF-2.表明pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA-OSF-2均构建成功.HK293细胞单独转染pCMV-Myc-SFRP2或pCMV-HA-OSF-2后,未检测到HA-OSF-2的表达;当pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA-OSF-2共转染后,经Myc抗体进行免疫沉淀可见HA-OSF-2表达.结论 HA-OSF-2的重组载体能在哺乳动物细胞中表达,HA-OSF-2与SFRP2间存在相互作用.     

骨形态发生蛋白-2基因的克隆及重组真核表达质粒的构建

目的 克隆骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因,并构建重组BMP-2基因真核表达质粒.方法 从兔骨髓细胞中分离提取BMP-2的mRNA,RT-PCR扩增后,克隆入pGEM-T载体,PCR鉴定重组子;酶切下目的 基因BMP-2,再亚克隆入载体pEGFP-C3质粒,酶切鉴定亚克隆重组子并进行DNA序列分析.结果 经过RT-PCR扩增得到BMP-2cDNA条带:PCR扩增鉴定得到pGEM-T-BMP-2.酶切鉴定得到亚克隆重组子pEGFP-C3-BMP-2,经测序鉴定证实插入DNA序列与设计完全一致.结论 成功克隆兔BMP-2基因,构建出重组真核表达载体BMP-2,为进一步采用BMP-2基因治疗关节软骨缺损奠定了实验基础.     

骨痿不同中医证型中血瘀与PPARγ、Runx2相关性研究

目的 探讨骨痿不同证型中血瘀与PPARγ、Runx2的相关性。方法 94例符合要求的患者经辨证后分组，于入院第二天采集晨起空腹外周静脉血，检测凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplatin time，APTT）、凝血酶时间（thrombin time，TT）、纤维蛋白原（fipinogen，Fbg）及D-二聚体（D-Dimer，D-D），留取并采用Western blot检测入院第三天行全髋关节置换术股骨颈髓腔开路的松质骨中PPARγ、Runx2的蛋白表达量。结果 共94例患者符合纳入标准，分别为39例肝肾阴虚型、30例脾肾阳虚型、25例气滞血瘀型。3种证型骨痿患者的血清PT、TT、Fbg水平相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。气滞血瘀型骨痿患者较肝肾阴虚型及脾肾阳虚型骨痿患者在血清APTT及D-D水平方面有较大差异，差异有统计学意义（P＜0.05）。气滞血瘀型骨痿患者松质骨PPARγ表达较肝肾阴虚型及脾肾阳虚型骨痿患者具有较高水平，差异有统计学意义（P＜0.05）。脾肾阳虚型及气滞血瘀型骨痿患者松质骨Runx2表达较肝肾阴虚型骨痿患者具有较高水平，差异有统计学意义（P＜0.05）。气滞血瘀型骨痿患者较脾肾阳虚型骨痿患者在松质骨Runx2表达方面有较大差异，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 气滞血瘀型骨痿患者的PPARγ及Runx2蛋白水平相比其他两种证型患者的PPARγ及Runx2蛋白水平差异有统计学意义。     

原发性肾病综合征患者血浆血栓前体蛋白检测的临床意义

血栓前体蛋白（thrombus precursor protein,TpP）是高分子量可溶性纤维蛋白多聚体,是不溶性纤维蛋白的直接前体,当聚合反应不断进行时,可溶性纤维蛋白多聚体转化为不溶性纤维蛋白而成为血栓的一部分,即TpP是血栓的直接前体,其升高是活动性血栓形成的重要标志之一。本文报告检测肾病综合征（NS）患者血浆TpP及血、尿蛋白水平,旨在探讨NS诊断与疗效监测的实验室敏感指标。     

肾小球纤维蛋白沉积对肾脏炎症反应的影响及机制研究

目的探讨调控纤维蛋白沉积水平对肾脏炎症反应的影响及其机制。方法实验分脂多糖诱导大鼠肾小球纤维蛋白沉积（LPS组）；氨甲环酸增加纤维蛋白沉积（TL组）：尿激酶减少纤维蛋白沉积（UT组）。肾组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）及血管内皮钙黏附蛋白（VE—Cad）mRNA和蛋白质表达分别用RT—PCR和免疫组织化学检测。结果（1）TL组与LPS．UT组纤维蛋白沉积、炎细胞数目差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）TL组与LPS，UT组的MCP-1、VE—Cad mRNA及蛋白质表达水平差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论肾小球纤维蛋白沉积具有促炎症作用；纤维蛋白沉积的促炎症作用与其调节MCP-1、VE-Cad表达有关。