血液肿瘤患者血浆EB病毒和巨细胞病毒定量检测的临床价值

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定血液肿瘤患者血浆中EB病毒(EBV)和巨细胞病毒(CMV)DNA水平,探讨血浆EBV DNA和CMV DNA定量测定的临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测280例血液肿瘤患者血液中EBV DNA和CMV DNA载量。结果 280例血液患者中EBV DNA检测阳性率为17.1%,CMV检测阳性率为18.9%,动态监测病毒DNA拷贝数为10~2~10~7 copy/mL。接受外周造血干细胞移植的患者126例,其中EBV检测阳性率为28.6%,CMV检测阳性率为40.5%。血液肿瘤患者进行抗病毒治疗后,均在7~14d后转阴。结论实时荧光定量PCR动态检测血液肿瘤患者EBV DNA和CMV DNA水平对于EBV和CMV感染患者的疗效判断具有重要临床意义。     

实时荧光定量PCR技术在肾移植术后巨细胞病毒性肺炎诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR检测巨细胞病毒在肾移植术后肺部感染诊断中的应用价值。方法应用实时荧光定量PCR检测2002年1月至2006年1月在本院行肾移植术后肺部感染患者39例,健康自愿者50人的血清CMV DNA载量,应用SPSS10 0软件对检测结果进行统计学分析。结果肺部感染患者组39份样本中,19份可以检测到数值(阳性率为49%),其病毒拷贝数值介于1.05×103~4.26×105之间,平均为2.23×104;对照组中仅一份检测到数值(阳性率为2%),且CMV DNA小于104,其余49份均低于检测下限,实时荧光定量PCR检测CMV结果对病情发展有预测价值。结论实时荧光定量PCR技术为肾移植术后巨细胞病毒性肺炎的早期诊断提供了有效的试验手段,从而大大提高了肾移植术后巨细胞病毒性肺炎的治愈率。     

造血干细胞移植患者人巨细胞病毒监测的临床意义

目的探讨荧光定量聚合酶链反应对造血干细胞移植患者人巨细胞病毒活动性感染的早期诊断价值。方法收集40例造血干细胞移植患者共416份血标本,应用实时荧光定量PCR方法动态监测血浆HCMV—DNA载量,并与60例健康体检者血浆HCMV—DNA载量对比分析。结果416份血标本中96份阳性,阳性率23．1％,病毒载量介于5．0x10^2-1．0x10,拷贝／ml之间。结论实时荧光定量PCR方法检测HCMV—DNA适用于造血干细胞移植后巨细胞病毒活动性感染的早期诊断。     

实时荧光定量PCR在EB病毒DNA检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR技术在检测患者外周血单个核细胞(PBMC)中EB病毒(EBV)DNA定量的临床应用,比较实时荧光定量PCR在检测血浆和PBMC中EBV DNA含量的差别,并研究EBV阳性患者的病种分布特点。方法应用罗氏Light Cycler荧光定量PCR仪检测375例患者PBMC中EBV DNA含量,所有阳性患者均用血浆进行复查,比较其差别,并回顾性分析患者临床特点。结果检测PBMC中EB阳性标本35例,阳性率为9.3%。阳性患者中鼻炎13例,鼻咽癌4例,鼻息肉4例,肺炎7例,急性淋巴细胞性白血病1例,传染性单核细胞增多症6例。取阳性标本检测其血浆游离EB DNA,33例阳性,其拷贝数低于相应标本中PBMC中的拷贝数。结论实时荧光定量PCR技术检测PBMC和血浆中EB DNA准确,快速,在确诊EBV感染相关性疾病中具有重要的作用,且检测PBMC中EB DNA可能更优于检测血浆中EB DNA。     

EBV—DNA检测在儿童EB病毒感染中的临床意义

目的探讨荧光定量PCR检测EB病毒（EBV）对诊断和治疗EBV感染的临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应病毒核酸扩增方法,对儿科2010—06～2012—06以发热为主诉的患儿205例,检测外周血EB病毒DNA栽量,结合常规外周血及异型淋巴细胞检查,对照首发临床表现,分析荧光定量PCR检测发热患儿感染EBV的临床价值。结果205例发热患儿中,外周血EBV—DNA阳性42例,阳性率20．5％。荧光定量PCR检测EB病毒能早期反映EBV感染。结论荧先定量PCR检测EBv—DNA有助于早期诊断EBV感染,能减少诊疗的盲目性,对临床有一定指导意义。     

咽拭子和外周血EB病毒核酸检测结果分析

目的：用荧光定量PCR法分别检测咽拭子和外周血标本EB病毒核酸,将结果进行统计对比,探讨其结果是否一致。方法采用实时荧光PCR法同时检测疑似感染患者和正常人的外周血和咽拭子EB病毒DNA拷贝数,将结果进行对比。结果疑似感染患者咽拭子EB病毒阳性率49.4%远高于正常人咽拭子13.3%阳性率,差异有统计学意义(P<0.05);疑似感染患者外周血EB病毒阳性率19.1%高于正常人外周血阳性率7.2%,差异有统计学意义(P<0.05);同一个患者同时取咽拭子检测EB病毒阳性率51.6%高于外周血阳性率18.3%,差异有统计学意义(P<0.05),且同一患者的咽拭子检测病毒载量(1.0×102～3.17×107)也高于外周血检测病毒载量(4.5×102～2.84×105),差异有统计学意义(P<0.05)。结论用荧光定量PCR法检测咽拭子标本阳性率较外周血阳性率更高,更能及时准确的监测EB病毒在体内的实际复制情况,且标本采集方便,值得在临床推广应用。     

核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量的性能评价

目的评价核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量的方法学性能。方法分析该检测系统的灵敏度、线性范围、精密度、与其他商品化的PCR检测系统相关性,并对132份临床标本进行检测分析。结果检测灵敏度为2.0×102Copies/ml;最低检测界限5.00×102Copies/ml。结果在5×102～5×106Copies/ml范围内呈线性,回归方程为y=0.245+0.945 x,r=0.998。批内CV 4.3%～7.6%,批间CV 8.9%～11.8%,总CV 9.9%～14.0%。与其他商品试剂对比检测,两者相关性良好(y=0.332+0.941x,r=0.952),结果相差在0.5 log以内。2组病例中,EB病毒急性感染组的血浆EBV DNA平均载量为8.2×104Copies/ml,EB病毒急性感染组与EB病毒既往感染组的血浆EBV DNA阳性率存在显著差异(P0.01),健康对照组未检测出血浆EBV DNA。结论核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量,具有准确、快速、简便的优点,适合临床实验室常规开展。     

两种方法检测EB病毒的结果比较

目的比较酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测EB病毒(EBV)的特点。方法采集930例上呼吸道感染患者血液标本和咽拭子标本,分别用ELISA和荧光定量PCR检测抗EBV-IgM和EBV DNA。结果ELISA检测IgM阳性标本116例,阳性率为12.47%;PCR检测DNA阳性标本421例,阳性率为42.27%,二者比较差异有统计学意义(P0.01)。不同年龄阶段两种检测方法比较,1岁时两种检测方法差异无统计学意义(P0.05),其他年龄阶段两种检测方法差异均有统计学意义(P0.05)。结论荧光定量PCR检测EBV有较高的灵敏度,适用于检测大于或等于1岁患者,ELISA适用于检测小于1岁患者。     

宁夏某医院儿童患者EB病毒感染特点分析

目的了解宁夏某医院儿童患者EB病毒(EBV)感染现状及其临床特点。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法对626例住院患儿进行EBV DNA定量检测。结果 EBV总阳性率为7.99%,男性和女性阳性率分别为7.37%和9.13%;8~11岁年龄组患者占13.43%;2009、2010年阳性检出率分别为6.09%和9.46%,有上升趋势;临床诊断主要以呼吸道感染为主。结论加强儿童患者EB病毒的检测,对其防治有重要意义。     

中国献血人群感染巨细胞病毒CMV的分子流行病学调查

目的 了解中国献血人群中巨细胞病毒(CMV)的感染情况,应用Q-PCR方法对中国部分地区健康献血人群CMV感染情况进行分子流行病学调查,并检测病毒载量及抗体。方法 构建荧光定量PCR检测体系,调查在2014年1月-2015年2月来自乌鲁木齐、柳州、洛阳、重庆、绵阳5个地区,3 794人份献血者血浆标本中CMV的DNA流行率,并测定CMV阳性标本的病毒载量;同时随机抽取5个地区标本292(人)份,用ELISA法检测抗-IgG和-IgM的流行情况。结果 本研究建立的Q-PCR方法对CMV的检测下限为5×10~1 copies/mL。在5个地区的健康献血人群中,共发现6份标本为CMV核酸阳性,DNA阳性率占0.16%(6/3794)。CMV的抗-IgG阳性率37.3%(109/292),抗-IgM阳性率为8.9%(26/292),抗-IgG和-IgM双阳性率为1.711%(5/292)。结论 在本次研究中,巨细胞病毒CMV在我国5个地区献血人群中的核酸流行率处于一个较低的水平,检出的CMV病毒载量均在103 copies/mL以下,由于CMV在免疫正常的个体中为无症状感染,是否需要对免疫力较低下的受血者输血前进行血液中CMV的检测值得进一步探讨。     

实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒应用研究

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)的应用价值。方法随机选择2015年2月至2016年2月于本院就诊的宫颈病变患者203例,采用实时荧光定量PCR和第二代杂交捕获法(HCⅡ)对宫颈组织标本进行HPV DNA检测,对检测结果进行分析。结果 77例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为93.51%和85.71%,二者比较差异无统计学意义(P0.05);和72例慢性宫颈炎及鳞状上皮病变患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为59.72%和36.11%,二者比较差异有统计学意义(P0.05)。203例患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为71.43%和57.64%,二者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论实时荧光定量PCR和HCⅡ都可用于HPV DNA检测,二者对某些类型宫颈疾病的检测阳性率存在差异。实时荧光定量PCR检测对HPV感染具有一定的辅助诊断意义,有利于宫颈类疾病的早期诊治,值得推广应用。     

实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用

目的探讨实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用。方法采用病毒分离、荧光定量PCR及ELISA法对临床标本进行检测。结果 20例临床标本病毒分离率为45%,DNA检测阳性率为100%,患者发病5 d内IgM抗体阳性率为65%、10~12 d内为100%。结论荧光定量PCR法适合用于疾病的早期诊断和鉴别诊断。     

血清与尿液标本巨细胞病毒DNA联合检测在肾移植受者中的应用价值

目的探讨血清和尿液标本中巨细胞病毒(CMV)DNA的检测对肾移植受者的临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测174例临床肾移植受者血清与尿液中巨细胞病毒DNA载量并对其进行统计分析。结果 174例受者中尿液标本CMV-DNA阳性率(16.1%)明显高于血清(5.2%),差异具有统计学意义(P0.05)。通过对实验结果进行比较分析发现,尿液标本灵敏度明显高于血清标本。结论临床选择CMV的送检样本类型对提高其检出率具有重要意义,同时检测能较大地提高肾移植受者CMV的检出率。     

荧光定量PCR在检测儿童EB病毒感染中的应用

目的探讨荧光定量PCR方法检测Epstein-Barr Virus DNA(EBV-DNA)在儿童临床EB病毒感染诊断中的价值。方法对376例表现为不明原因发热、咽炎、肝脾肿大等患儿采用实时荧光定量PCR方法检测血浆EBV-DNA。结果检测出174例患儿血浆EBV-DNA阳性,阳性率46%,其中男性100例,女性74例,年龄≤1岁36例,1岁～8岁108例,>8岁30例。结论荧光定量PCR方法检测对儿童EB病毒(EBV)感染的检测具有早期、快速等优点。     

白血病异基因造血干细胞移植受者巨细胞病毒感染的检测及临床意义

目的探讨检测巨细胞病毒(CMV)DNA及其抗体在白血病异基因造血干细胞移植受者移植后,CMV感染的临床意义。方法应用荧光定量PCR技术和ELISA方法检测白血病患者移植后CMV感染情况,并观察CMV感染治疗后的DNA及其抗体变化。结果 23例白血病异基因造血干细胞移植受者尿液、外周血DNA定量和IgM抗体的阳性检出率分别为40.48%(51/126)、30.95%(39/126)和14.29%(18/126),CMV-IgM抗体阳性检出率明显低于CMV DNA定量,其差异有统计学意义(P0.05);FQ-PCR尿液检测的阳性率高于外周血,CMV阳性患者经更昔洛韦治疗,一般2周后转阴性。结论荧光定量PCR检测造血干细胞移植受者CMV早期感染可靠、简便、快速;同时,可以作为CMV感染治疗后疗效观察、预后判断的可靠指标,值得临床推广使用。     

基于ddPCR技术分析EB病毒载量特征及与qPCR技术的比较研究

目的解决临床工作中应用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测EB病毒(EBV)载量与临床诊断不符的问题,探讨微滴式数字PCR(ddPCR)和qPCR方法检测EBV载量的能力并为临床提供可能的解决方案。方法收集510例疑似EBV感染相关疾病患者血浆标本,采用ddPCR和qPCR两种方法测定同一血浆标本的EBV-DNA载量。结果 EBV感染人群中,EBV-DNA载量较其他地区低,载量中位数仅360copies/mL,其中初诊未治鼻咽癌患者中位病毒载量为4 590copies/mL,治疗后鼻咽癌患者中位病毒载量下降为430copies/mL,免疫力低下者中位病毒载量为130copies/mL,而淋巴瘤患者中位病毒载量为840copies/mL;qPCR检测EBV感染以400copies/mL为界值,高于400copies/mL时,ddPCR与qPCR的EBV-DNA测定水平值呈中度相关(r=0.533,P<0.05),低于400copies/mL时,ddPCR与qPCR的EBV-DNA测定水平值呈弱相关(r=0.299 5,P<0.05);以ddPCR为标准,qPCR检测EBV-DNA的灵敏度仅为0.317,以ddPCR检测结果为标准,构建qPCR的受试者工作特征曲线下面积为0.871,此时临界值(qPCR)为10copies/mL,灵敏度为0.824,特异度为0.780。结论采用ddPCR方法或优化qPCR的临界值去检测EBV-DNA载量更能为临床诊断EBV感染提供有利支持。     

血液病患者外周血白细胞、血浆和血清中EB病毒DNA定量分析

目的 比较血液病患者外周血白细胞、血浆和血清的EB病毒载量,探讨应用患者血清或者血浆检测EB病毒载量的可行性。方法 采集125例血液病患者的静脉血,分别进行外周血白细胞、血浆和血清的分离,应用荧光定量PCR技术检测三种标本中病毒载量,以外周血白细胞EB病毒载量为金标准,血浆和血清检测结果与之比较,进行分析。结果 血浆和血清的EB病毒载量与外周血白细胞病毒载量相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 应用患者血浆或血清进行血液EBV DNA定量检测,将成为代替外周血白细胞的一种可靠方法。     

淋巴细胞及血浆EB病毒DNA在EBV感染相关疾病中表达的研究

目的探讨外周血淋巴细胞和血浆中EB病毒DNA(EBV DNA)在EB病毒感染相关疾病中表达的差异。方法收集112例疑似EB病毒感染相关疾病患者的全血样本,其中鼻咽癌14例,传染性单核细胞增多症(传单)16例,淋巴瘤22例,自身免疫性疾病23例,上呼吸道感染26例,肝功能异常11例,采用荧光定量PCR方法检测同一份样本淋巴细胞和血浆中EBV DNA的含量。结果检测112例患者外周血淋巴细胞和血浆中的EBV DNA,其总的阳性率分别为83.0%(93/112),27.7%(31/112),差异具有统计学意义(卡方值χ~2=60.02,P0.01);14例鼻咽癌患者外周血淋巴细胞和血浆EBV DNA的阳性率及其含量差异均无统计学意义(χ~2=2.25,t=-1.04,均P0.05);而传染性单核细胞增多症、淋巴瘤、自身免疫性疾病、上呼吸道感染和肝功能异常患者血浆EBV DNA阳性率及其含量均明显低于外周血淋巴细胞,差异具有统计学意义(χ~2=4.17~15.06,均P0.05;t=3.94~10.45,均P0.01)。结论荧光定量PCR检测非鼻咽癌患者的外周血淋巴细胞的EBV DNA可能优于检测血浆的EBV DNA;检测鼻咽癌患者外周血淋巴细胞和血浆EBV DNA无明显差异,可根据临床情况,选择合适的标本进行检测。     

获得性免疫缺乏综合征患者合并巨细胞病毒性肺炎情况分析

目的调查获得性免疫缺乏综合征(AIDS)患者中合并巨细胞病毒性肺炎的发生情况,比较血清标本与痰液标本的巨细胞病毒阳性检出率。方法采用酶联免疫法和实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分别检测AIDS患者中高度怀疑为巨细胞病毒肺炎的血清巨细胞IgM、血清和痰液的巨细胞病毒载量水平。结果 35例AIDS合并巨细胞病毒肺炎的患者中,入院时CD4~+T细胞水平均为(74.3±58.1)个/μL。其中血清中巨细胞IgM抗体阳性检出率为2.9%;血清中病毒载量阳性检出率为8.6%;痰液中巨细胞病毒载量阳性检出率为65.7%。CD4~+T细胞计数50个/μL患者中,巨细胞病毒检出率为70.6%;CD4~+T细胞计数在50~100个/μL患者阳性检出率为57.1%;CD4~+T细胞计数100个/μL患者的阳性检出率为63.6%。不同水平的CD4~+T细胞间巨细胞病毒的阳性检出率差异无统计学意义(P0.05)。结论在AIDS合并巨细胞病毒肺炎的感染初期,痰液标本的巨细胞病毒载量检测比血液的巨细胞病毒抗体及病毒载量检测阳性率更高,可作为临床早期快速的诊治病毒性肺炎的有效辅助诊断方法。     

EB病毒感染实验室诊断方法探讨

目的探讨EB病毒(EBV)感染的实验室诊断方法。方法设计针对EBV基因组的引物和荧光标记探针,利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测70例外周血标本。其中17例是确诊EBV感染及传染性单核细胞增多症患儿,27例是临床高度怀疑EBV感染患儿,26例是临床非EBV感染的患儿,并与检测EBV抗体VCA-IgM的酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较。结果确诊组、疑似组和对照组患儿FQ-PCR检测EBV的阳性率分别为100.00%、81.48%和0.00%。与此对应VCA-IgM的阳性率分别为100.00%、25.93%和0.00%。确诊组EBV DNA的平均拷贝数为1.15×105/m l,疑似组为4.38×104/m l,均明显高于对照组(P<0.05)。结论与VCA-IgM检测方法相比,FQ-PCR检测到EBV感染的阳性率更高,EBV DNA的定量检测可帮助诊断儿科活动性EBV感染,尤其是可疑患儿的临床诊断。