低温下皮肤力学信号相关蛋白表达与活力关系研究

目的:探讨皮肤力学信号相关蛋白整合素(integrin)、踝蛋白(talin)在不同低温条件下的表达与皮肤活力改变的关系,进一步揭示皮肤低温损伤的机制。方法:从同一个体取标本后用5种不同的温度保存,分为新鲜组、4℃组、-20℃组、-80℃组和-196℃组,并在保存48 h后进行实验观察,用integrinβ1、talin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,图像分析方法定量,同时采用氧耗量的方法对不同低温保存后皮肤活力进行检测。结果:新鲜组、-196℃组、-80℃组、-20℃组、4℃组活力依次下降,同时-80℃组、-20℃组、4℃组两种蛋白表达亦有明显下降。结论:低温保存后活力的改变与皮肤力学信号相关蛋白的表达下降关系密切。     

低温保存皮肤组织中纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)在不同温度保存皮肤组织中的分布及表达，探讨其与皮肤冷冻保存的关系．方法：用FN，LN抗体对新鲜皮肤以及4℃，-20℃，-80℃或-196℃保存的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定并比较它们在表皮组织中的含量，并通过HE染色比较观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮肤组相比，-196℃，H抗冻液中皮肤组织结构保存较好，FN，LN含量变化不明显，而4℃，-20℃，-80℃保存皮肤的组织结构均有明显破坏，FN，LN含量亦明显下降。结论：皮肤低温冷冻保存时细胞外基质中FN，LN发生丢失。     

低温冷冻对皮肤α-tubulin、β-tubulin和cytoskeratin表达的影响

目的:探讨低温冷冻对皮肤骨架蛋白中α-微管蛋白(α-tubu lin)、β-微管蛋白(β-tubu lin)和高分子量角蛋白(cytoskeratin)表达的影响,从而进一步揭示皮肤低温损伤的机制。方法:用-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,采用计算机图像分析技术进行定量分析。并进一步采用透射电镜观察-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin的超微结构的变化。结果:α-tubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin在4℃组、-20℃组、-80℃组均表达显著下降,且超微形态结构及分布改变明显。在-196℃组储存时三种成分含量下降较少,形态改变亦不显著。结论:皮肤的低温损伤与骨架蛋白-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin的破坏有关。     

皮肤低温储存后纤维连接蛋白和层黏连蛋白表达的研究

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用FN、LN抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量，并用H．E染色观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，FN、LN含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存后冷冻损伤与细胞外基质中FN、LN破坏有关。     

低温储存对皮肤组织E-钙黏素和β-连接素表达的影响

目的：观察黏附分子E-钙黏素(E-cadherin)、β-连接素(β-catenin)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用E-cadherin、β-catenin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃ H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，E-cadherin、β-catenin含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存冷冻损伤与黏附分子破坏有关。     

低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白2表达的影响

目的:观察桥粒芯糖蛋白2(desmoglein2,Dsg2)在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用Dsg2抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃温度条件下保存皮肤组织结构保存较好,Dsg2含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤可能与Dsg2破坏有关。     

两种低温保护剂对皮肤储存后α-辅肌动蛋白表达及活力的影响

目的比较两种不同低温保护剂对皮肤组织α-辅肌动蛋白（α-actinin）低温保存后表达的影响,为寻求皮肤组织低温保护剂的最佳配方提供实验依据。方法新鲜成人皮肤组织分为3组,新鲜对照组和海藻糖-二甲基亚砜（T—D）组、二甲基亚砜-丙二醇（D-P）低温保护剂保存组,-196％液氮冻存7d、14d复温,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。同时对各组皮片进行氧耗量测定。结果0．5mol／L海藻糖-二甲基亚砜能够很好保护皮肤组织,α-actinin的表达量与新鲜皮肤组相似。结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用对皮肤组织α-actinin的保护作用优于传统组。     

海藻糖对低温储存皮肤β-actin的mRNA转录水平及其蛋白表达的影响

目的:观察新型低温保护剂(cryoprotectant,CPA)海藻糖(trehalose)对皮肤骨架蛋白β-肌动蛋白(β-actin)表达及mRNA转录水平的调节作用,以了解在传统低温保护剂中添加海藻糖后是否优于单纯传统低温保护剂的作用。方法:实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)、二甲基亚砜-去血清角质细胞培养液(D-K)、DMEM作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜皮肤为对照组。采用免疫组织化学染色及W estern b lot方法观察β-actin蛋白表达、采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行深入的研究。结果:T-D组β-actin蛋白表达及基因转录与新鲜组相似(P>0.05),D-P作用其次,其余两组与新鲜组对比均降低明显(P<0.05)。结论:传统低温保护剂中添加海藻糖后对低温储存皮肤β-actin表达的保护作用优于单纯传统低温保护剂。     

低温储存对皮肤组织α辅肌动蛋白和纽蛋白表达的影响

目的:观察α辅肌动蛋白和纽蛋白在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用α-actinin、vinculin抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,用图像分析仪测定表皮组织中的含量,并用HE染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃H抗冻液中保存皮肤组织结构保存较好,α-actinin、vinculin含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤与黏附分子α-actinin、vinculin破坏有关。     

低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白1表达影响的实验研究

目的观察桥粒芯糖蛋白1（Desmogleinl,Dsg1）在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法用Dsg1抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H．E染色观察皮肤的组织结构变化。结果与新鲜皮片组相比,-196℃条件下皮肤组织结构保存较好,Dsg1含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论皮肤低温保存冷冻损伤可能与桥粒跨膜蛋白Dsg1破坏有关。     

﹣80°C冰箱长期冻存外周血造血干细胞研究

目的对外周血造血干细胞活性在深低温（-80℃）下保存3年的效果进行评价。方法对30例经MCS＋血细胞分离机采集所得的外周血造血干细胞加入细胞冻存保护剂分别予以-196℃液氮冻存和-80℃冰箱深低温冻存,并检测和比较冻存前后单个核细胞（mononuclear cells,MNC）、CD34＋细胞的计数及细胞回收率,细胞活性。结果 -80℃冰箱冻存组MNC、CD34＋细胞冻存3年与冻存前比较差异均无统计学意义冻存3年后MNC回收率与冻存1年后比较差异无统计学意义。3年后-80℃冰箱冻存组干细胞与-196℃液氮冻存组比较,差异无统计学意义。结论 -80℃冰箱深低温保存法快速、简便、安全、费用低廉,可有效用于外周血造血干细胞长期保存。     

蜕皮甾酮对人表皮干细胞体外增殖的影响

目的观察蜕皮甾酮(EDS)对人表皮干细胞(hESCs)体外增殖的影响。方法采用中性蛋白酶-Ⅳ型胶原黏附法分离正常人包皮表皮干细胞,免疫细胞化学法检测第3代细胞β1整合素、角蛋白19(CK19)、角蛋白14(CK14)及角蛋白10(CK10)的表达以鉴定hESCs。分别用含0 mg.L-1(对照组)、10 mg.L-1(10 mg.L-1组)、20 mg.L-1(20 mg.L-1组)、40 mg.L-1(40 mg.L-1组)、80 mg.L-1(80 mg.L-1组)及160 mg.L-1(160 mg.L-1组)EDS的Ep ilife培养基作用第3代hESCs 3 d,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测酶标仪490 nm下的吸光度值,评价EDS对hESCs体外增殖的影响。结果免疫细胞化学法检测提示第3代表皮干细胞β1整合素、CK 19、CK 14的表达阳性,CK 10表达阴性。EDS作用3 d后,10 mg.L-1组、20 mg.L-1组、40 mg.L-1组、80 mg.L-1组及160 mg.L-1组吸光度均高于对照组(P<0.05);40 mg.L-1组、80 mg.L-1组和160 mg.L-1组吸光度均高于10 mg.L-1组和20 mg.L-1组(P<0.05);80 mg.L-1组吸光度高于40 mg.L-1组和160 mg.L-1组(P<0.05);其余各组间两两比较无统计学差异(P>0.05)。结论体外培养条件下EDS能促进hESCs增殖,该作用在EDS浓度为80 mg.L-1时最为显著。     

创面愈合过程中创缘表皮干细胞的再分布

目的：研究皮肤干细胞在全层皮肤创面愈合过程中的分布与增殖分化特征,以及该特征在创面愈合过程中的作用。方法：20只Wistar大鼠背部各制备4个面积为2．54cm^2的全层皮肤缺损创面,将创面随机分为2组,即银锌霜治疗组（40个创面）,空白对照组（40个创面）。分别于伤后3天、1周、2周和3周以组织学检查动态观察各组治疗效果,并以β1整合素、角蛋白19（K19）免疫组化法检测表皮干细胞在创面愈合过程中的分布情况。结果：两组创面愈合率在银锌霜组为80％（32／40）,对照组为60％（24／40）。两组创面肉芽组织于各时相点均未见β1整合素、K19阳性细胞出现,但于创缘表皮的棘层或颗粒层出现了散在的β1整合素和K19同时染色阳性细胞,且越接近创面这些阳性细胞更加密集,组织学上与基底层的阳性细胞无直接联系。其数量随着创面的缩小渐渐增加,直至创面愈合。创面上皮化后,这些阳性细胞逐渐减少,并随着愈合创面表皮脚的出现而消失;而感染创面的阳性细胞数量明显少于未感染创面。结论：表皮干细胞能动的参与创面的修复,创缘表皮干细胞再分布的主要功能可能是促进创面再上皮化。     

全血贮存条件对离子交换高效液相色谱法检测HbA1c的影响

目的探讨不同温度、不同时段的贮存条件对全血HbA1c测定结果的影响。方法用离子交换高效液相色谱法检测全血HbA1c。取60例全血新鲜样本,每样本分装成15份,1份作为新鲜样本标准当天检测;5份4℃贮存,分别于3d、1周、2周、3周、4周后取出检测;3份-20℃、3份-40℃、3份-80％贮存,分别于1、3、6个月后取出检测,比较各个贮存条件下结果的平均值。结果4℃样本2周内的结果略高于当日结果2．5％左右,从第3周开始逐渐下降,第4周低于当日结果7．2％。-20℃、-40℃、3和6个月的结果都比当日结果低,且随时间延长有逐渐降低的趋势;除-80％冻存1个月的结果与当日结果差异无统计学意义（P〉0．05）外,其余各组结果与当日结果比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。-80℃冻存1、3和6个月的结果都比当日结果略高,且随时间的延长结果略有升高,偏离当日结果的程度要比-20℃、-40℃偏离程度小。结论在相同温度条件下贮存时间越短贮存温度越低HbA1c越接近当日结果;贮存温度对结果的影响要比贮存时间更大。-80℃贮存1个月是本实验显示的最佳贮存条件。     

复合壳多糖人工皮肤的初步实验研究

目的探讨复合壳多糖人工皮肤移植家兔后表皮层角蛋白的表达以了解移植后皮肤表皮的分化情况.方法分别将复合壳多糖人工皮肤移植前、移植后1个月、移植后2个月、正常人皮肤、正常兔皮肤石蜡块切片,用抗广谱角蛋白多抗、抗角蛋白K5和K10单抗进行免疫组化染色,观察表皮层角蛋白的表达和表皮分化情况.结果复合壳多糖人工皮肤移植后1个月及2个月表皮层均有较强的角蛋白表达,与正常皮肤相似;基底层以上细胞有角蛋白K10表达,且越接近表皮表面表达越强,与正常人皮肤相似,基底层细胞有角蛋白K5表达,但明显弱于正常人皮肤.结论复合壳多糖人工皮肤移植家兔后表皮层均有角蛋白表达,有增生性细胞和分化细胞,表皮分化良好、层次清楚,与正常皮肤相近.     

低温微创冷冻减脂动物模型的构建

目的：探讨建立大鼠皮下脂肪微创冷冻减脂实验的动物模型。方法：将大鼠随机分为低温组（0℃组、-20℃组、-40℃组、-60℃组、-80℃组）以及室温对照组（Control组）,利用不同低温干预造成大鼠皮下脂肪局部冷损伤,观察脂肪厚度及病理学改变。结果：超声示各低温组均有不同程度脂肪厚度减少,在无皮肤损伤情况下低温-60℃干预60 s时脂肪厚度减少最为明显（P<0.01）。病理学显示局部冷冻后随着温度的降低,炎症细胞浸润与脂肪细胞破坏愈加明显,在低温-60℃干预60 s 3 d后脂肪组织炎症细胞浸润达到峰值（P<0.01）。与Control组比,-60℃组脂肪组织内NF-κB-p65在第2周时表达明显上升,TGF-β1在第4周时阳性表达明显上升（P<0.01）。-20℃组TUNEL染色细胞凋亡逐渐增多,-60℃组干预60 s3 d后细胞凋亡最明显（P<0.01）。结论：采用低温探针技术在低温-60℃干预60 s条件下,可建立稳定的SD大鼠皮下脂肪微创冷冻减脂模型。     

全血中直接抽提RNA方法的探讨

目的:对全血中直接抽提RNA的方法及标本的保存方式进行探讨。方法:采集人体外周血标本15例,分成三份,分别作为新鲜血组、-80℃冻存血组和-20℃冻存血组标本,用TRIReagent和TRIReagent BD两种不同的试剂提取RNA,以RT PCR方法扩增βActin基因,经1.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外透射仪下观察分析。结果:经TRIReagent BD抽提的15例新鲜血标本,均出现了303bp的目标带。而经TRIReagent抽提的新鲜血标本,只有11例出现了目标带,4例未见目标条带;新鲜血标本、-80℃冻存血标本和-20℃简易冻存血中抽提RNA,均出现了目标带。结论:全血中直接提取RNA的抽提液以TRI Reagent BD为宜;-20℃简易冻存的外周血标本中提取的RNA,可用于RT PCR实验。     

鲜芦荟汁预防及治疗放射性皮炎的效果观察

目的观察鲜芦荟汁外涂对放射性皮肤损伤的预防和治疗效果。方法选择放射治疗的160例肿瘤患者分为1预防处理组80例随机分为预防对照组40例和预防观察组40例,预防观察组放疗期间将鲜芦荟汁外涂在照射野皮肤上,预防对照组不使用任何方法预防处理照射野皮肤。放疗后评价两组放射性皮肤损伤的发生率及发生程度。2治疗处理组80例随机分为治疗对照组40例和治疗观察组40例,治疗观察组用鲜芦荟汁外涂于放射性皮炎创面,3~4次/d,连用7~10d,治疗对照组用烧伤油外涂于放射性皮炎创面,3~4次/d,连用7~10d,观察第3、5、7天两组创面缓解情况。结果1预防处理观察组放射性皮炎发生率和发生程度明显低于对照组,差异具有显著性意义(P<0.01)。2治疗处理观察组在外涂鲜芦荟汁第5天和第7天放射性皮炎创面缓解率明显高于对照组,差异具有显著性意义(P<0.01)。结论鲜芦荟汁外涂对肿瘤患者放疗时皮肤放射性损伤的预防及治疗均有显著效果。     

Moisture vapor transmission rates of various transparent dressings at different temperatures and humidities

Background Transparent dressings are commonly used to cover central venous catheter sites. However, it has been suggested that they might not allow adequate moisture vapor transmission, resulting in local moistness that promotes bacterial growth. We compared the moisture vapor transmission rates （MVTRs） of different, currently used transparent and traditional gauze dressings. We aimed to determine the MVTRs at different temperatures and humidities. Methods The dressings were used to seal 50-ml plastic centrifuge tubes containing 20 ml deionized water： Tubes in group 1 were covered with 12 layers of ordinary gauze, group 2 with IV3000, group 3 with OPSITE FLEXlGRID, group 4 with 3M HP Tegaderm, and group 5 with 3M Tegaderm. The tubes were placed upright in an artificial climate cabinet, so that the dressings were not touching the water, in order to simulate the conditions of medical dressings in contact with the skin. The average MVTRs were determined under different conditions. MVTRs were also determined with tubes from groups 2-5 laid on their sides, allowing the dressings to touch the water, so simulating contact of the dressings with sweating skin, or wounded skin with exudates. We also calculated the dressings＇ self-reactive abilities by comparing their MVTRs in contact with the water surface with those when not in contact with the water surface. Results Group 1 demonstrated the highest MVTR, followed by groups 2, 4, 3 and 5 under conditions simulating contact of the dressings with normal skin at the following temperatures and humidities： 20℃/30%, 20℃/60%, 20℃/90%, 37℃/30%, 37℃/60% and 37℃/90%. When the relative humidity （RH） increased, the MVTRs decreased. The MVTRs differed significantly among different dressings and RHs： At high temperature （37℃） and high humidity （90%）, the MVTR of the transparent dressings in group 2 was higher than that of group 1 （P 〈0.01）. The reactive MVTR was highest in group 2 （10.2-16.3 times 〉MVTR） while that of group 4 was second highest （2.6-9.6 times 〉MVTR）. Conclusions RH and temperature had significant effects on the MVTRs of different dressings. The IV3000 transparent dressing used in group 2 was as effective as ordinary gauze. These results suggest that increased infection rates due to low MVTRs might not be a problem. The clinical implications of these observations for catheter-related infections need to be further investigated in multicenter studies.