乌司他丁对急性肺损伤组织中水通道蛋白及Fas表达的研究

目的 探讨乌司他丁(UTI)对急性肺损伤组织中水通道蛋白-1、4(AQP-1、4)及Fas的表达及临床意义.方法 应用脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)模型,然后应用乌司他丁进行干预.实验分为3组:实验对照组、模型组、乌司他丁组.采用免疫组化染色,检测UTI 对急性肺损伤大鼠肺组织中AQP-1、4及Fas的表达,利用HPIAS-2000图像分析系统测定水通道蛋白-1、4和Fas在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率.结果 实验对照组肺组织高水平表达AQP-1、4,Fas呈低表达;模型组肺组织呈浅黄色染色,AQP-1、4表达较低,Fas呈高表达;乌司他丁组肺组织高水平表达AQP-1、4,Fas呈低表达.经q检验,实验对照组与模型组之间,AQP-1、4及Fas的平均光密度及阳性面积率差异有统计学意义(P＜0.01﹚,实验对照组与乌司他丁组之间,AQP-1、4及Fas的平均光密度及阳性面积率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乌司他丁能使急性肺损伤组织中AQP-1、4呈高表达,Fas呈低表达,乌司他丁对急性肺损伤组织有重要的保护作用.     

水通道蛋白与急性肺损伤

长期以来,人们普遍认为细胞内外的水分子是以简单的跨膜扩散方式来通过脂质双层膜。后来由于在生物物理学研究中发现红细胞及近端肾小管对渗透压改变引起的水的通透性很高,很难单纯以弥散来解释。因此,认为水的跨膜转运除了简单扩散外,还存在某种特殊的机制,并提出水通道的概念。水通道蛋白是一组与水通透性有关的细胞膜转运蛋白,它的发现在分子水平揭示了水跨膜转运调节的基本机制。     

前列腺素E1对急性肺损伤小鼠水通道蛋白1、5基因表达的影响

目的研究急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白5(AQP5)基因的表达变化,探讨前列腺素E(PGE1)治疗ALI的机制,为临床治疗ALI提供新的选择靶点和方法。方法 32只昆明小鼠随机分成4组(每组8只),即空白对照组(NS组)、造模组(ALI组)、前列腺素E1治疗组(PGE1组)、地塞米松治疗对照组(Dex组),观察6h后测定肺湿干重比值(W/D),并采用HE染色观察炎症变化,RTPCR检测AQP1mRNA、AQP5 mRNA、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA的表达变化。结果 ALI组小鼠的肺部炎症反应显著,以中性粒细胞浸润为主,伴明显的肺泡充血、水肿。前列腺素E及地塞米松治疗后,肺组织炎症、充血明显改善,ALI组的W/D的比值与其他3组比较,差异有统计学意义(P均<0.05);与NS组相比,ALI组AQP1mRNA的表达显著降低(P<0.05),而PGE1组、Dex组的AQP1 mRNA的表达显著高于ALI组(P<0.05)。AQP5 mRNA表达的变化与AQP1mRNA的变化相似。与NS组相比,ALI组TNF-αmRNA的表达显著升高(P<0.05),而PGE1组、Dex组的TNF-αmRNA的表达显著低于ALI组(P<0.05)。IL-1βmRNA表达的变化与TNF-αmRNA的变化相似,肺损伤炎症减轻。结论PGE1可通过上调AQP1、AQP5的表达减轻肺损伤时肺水肿。可能是通过抑制炎症因子TNF-α、IL-1β的表达实现的。     

乌司他丁对急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达的影响

目的 乌司他丁对内毒素诱导大鼠急性肺损伤(acute lung jury,ALI)时血红素氧合酶(hemeoxygenase,HO)-1表达,从而为探讨乌司他丁在ALI中的应用提供理论依据.方法 将48只健康雄性SD大鼠随机分为阴性对照组、ALI模型组、乌司他丁干预组和乌司他丁+氯血红素(Hm)组,每组各12只.模型组用5mg/kg LPS诱发ALI模型,乌司他丁组按50000u/kg体重给予乌司他丁静脉注射.各组给药后2h、6h、12h观察丙二醛(MDA)的含量以及HO-1的活性;RT-PCR和Western blot检测HO-1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 用LPS成功复制出ALI模型,同时,肺组织中MDA含量、HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA以及蛋白水平均高于阴性对照组(P均<0.05);乌司他丁+LPS组、乌司他丁+LPS+Hm组肺MDA含量低于LPS模型组,但HO-1活性、mRNA和蛋白水平高于相应LPS组(P均<0.05).结论 乌司他丁对ALI的保护作用可能是通过增强HO-1活性、上调mRNA和蛋白表达水平而实现的.     

乌司他丁对脓毒症急性肺损伤大鼠热休克蛋白70表达的影响

目的研究热休克蛋白(HSP)70在脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠中的表达变化及应用乌司他丁(UTI)进行干预,并探讨作用机制。方法 39只Wistar大鼠分为假手术(sham)组(9只)、ALI组(15只)和UTI组(15只)。大鼠盲肠结扎穿孔术后6、12、24 h分别处死大鼠。检测血气分析、肺组织湿/干重比(W/D),光镜下观察肺组织形态学变化,应用实时荧光定量-聚合酶链反应(realtime-PCR)测定肺组织HSP70 mRNA的表达。结果与ALI组比较,UTI组PaO2显著改善(P<0.05),肺W/D比值降低(P<0.05),苏木精-伊红染色显示肺组织损伤减轻。各时间点肺组织HSP70 mRNA表达明显上升(P<0.05)。结论 HSP70在脓毒症ALI大鼠中的表达上调,UTI可能通过上调HSP70的表达改善脓毒症肺组织的损伤。     

胆红素对内毒素致急性肺损伤大鼠水通道蛋白1、5表达的影响

目的探讨胆红素对脂多糖所致急性肺损伤大鼠的水通道蛋白1、5是否存在调节作用,探讨其保护作用机制。方法雄性Wistar大鼠18只,随机分为生理盐水对照组（C组）、脂多糖模型组（L组）和胆红素预处理组（B组）,每组各6只。每组于造模后4h处死大鼠。测定每组肺湿／干重比值,ELISA法测血清中IL-8含量,肺组织中cAMP含量,免疫组化法测定每组水通道蛋白1、5的表达变化。观察各组肺组织病理改变。结果与模型组（L组）比较,胆红素干预组（B组）的W／D值下降,IL-8含量明显降低,cAMP含量表达上升（P〈0．05）,水通道蛋白1、5表达增强（P〈0．05）,肺水肿病理改变明显减轻。结论胆红素可能是通过cAMP信号途径调节水通道蛋白1、5表达改善水代谢,减轻肺水肿状态,从而对急性肺损伤具有保护作用。     

乌司他丁对急性肺损伤组织中Fas表达的研究

目的探讨乌司他丁对急性肺损伤组织中Fas的表达及临床意义。方法应用脂多糖（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（ALI）模型,然后应用乌司他丁进行干预。实验设对照组、模型组、乌司他丁组。采用免疫组化染色,检测乌司他丁（ulinastatin,UTI）对急性肺损伤大鼠肺组织中Fas的表达,利用HPIAS-2000图像分析系统测定Fas在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果实验对照组肺组织表达低水平Fas;模型组肺组织呈密集棕黄色染色,Fas高表达;乌司他丁组肺组织表达低水平Fas。经q检验,实验对照组与模型组之间,Fas的平均光密度及阳性面积率有显著性差异（P〈0.01）,实验对照组与乌司他丁组之间,Fas的平均光密度及阳性面积率差异无显著性（P〉0.05）。结论乌司他丁能使急性肺损伤组织中Fas呈低表达,对急性肺损伤组织有重要的保护作用。     

乌司他丁对小鼠全氟异丁烯吸入性肺损伤的作用

目的 观察乌司他丁对全氟异丁烯吸入性急性肺损伤的防治效果.方法 采用小鼠全氟异丁烯全身暴露动态染毒系统对实验小鼠进行染毒,观察不同剂量的乌司他丁于全氟异丁烯暴露后不同时间尾静脉注射给药的存活率、肺系数(湿肺体比、干肺体比、肺含水量、肺湿干比).结果 在全氟异丁烯暴露后不同时间(1、2、4、8h)经尾静脉注射给药不同剂量乌司他丁(40万、80万U/kg),除于暴露后4和8h乌司他丁40万U/kg组观察到湿肺体比和肺湿干比给药组较对照组明显下降(P均＜0.05)外,不论是肺系数还是中毒小鼠存活率观察,均未观察到乌司他丁对全氟异丁烯染毒小鼠明显的治疗作用(P均＞0.05).结论 在本项研究的实验条件下,未观察到乌司他丁对全氟异丁烯吸入性急性肺损伤具有治疗作用.     

乌司他丁对家兔急性肺损伤保护的实验研究

目的 探讨乌司他丁对急性肺损伤(ALI)家兔肺组织肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA表达的影响及其对肺损伤的治疗作用.方法 将30只家兔随机分为对照组(A组),肺损伤对照组(B组)和乌司他丁治疗组(C组),每组10只,B组和C组采用特制多功能撞击机制成急性肺损伤模型,B组经耳缘静脉给予生理盐水静滴,C组经耳缘静脉给予乌司他丁静滴(100 000u/kg),分别在损伤前,损伤后2、4、6h 采血测定TNF-α水平,6h后处死动物,取肺组织测定肺水含量、肺体质量比值及观察病理变化、肺组织TNF-α水平、TNF-α mRNA表达.结果 与A组相比,B组损伤后肺水含量及肺体质量比值显著增高(P<0.05),镜下见肺间质、肺泡水肿、大量炎细胞浸润.肺组织及血浆TNF-α水平、肺组织TNF-α mRNA表达显著升高(P<0.05),PaO2显著降低(P<0.05), C组经乌司他丁治疗后,与B组比较,肺水含量及肺体质量比值增加少,肺水肿,减轻肺组织及血浆TNF-α水平、肺组织TNF-α mRNA表达降低(P<0.05),PaO2明显升高(P<0.05).结论 乌司他丁能抑制ALI家兔肺组织肺水含量及肺体质量比值增加少,肺水肿,减轻肺组织及血浆TNF-α水平、肺组织TNF-α mRNA表达降低(P<0.05),PaO2明显升高(P<0.05),减轻肺组织的病理损害,治疗ALI.     

氢吗啡酮对急性肺损伤大鼠水通道蛋白1、5表达的影响

目的：研究氢吗啡酮对内毒素性急性肺损伤（ALI）大鼠水通道蛋白（AQP）-1和AQP-5表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠36只,体质量300～350 g,随机分为3组（n=12）：假手术组（Sham组）、急性肺损伤组（ALI组）和氢吗啡酮预先给药组（HYD组）。ALI组和HYD组采用静脉注射LPS 8 mg/kg建立ALI模型。HYD组于注射LPS前10 min静脉注射氢吗啡酮0.1 mg/kg。LPS注射后6 h处死大鼠,取肺组织,测定肺湿/干重（W/D）比值及肺通透指数（LPI）,HE染色观察肺组织病理学改变,ELISA法测定肺组织TNF-α、IL-1β含量,RT-PCR法和Western Blot法测定AQP-1、AQP-5 mRNA及蛋白表达。结果：与Sham组比较,ALI组和HYD组肺组织W/D比值、LPI及病理学损伤评分增高,TNF-α、IL-1β含量升高,AQP-1、AQP-5 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05),W/D比值及病理学损伤评分均增高(P<0.05);与ALI组比较,HYD组肺组织W/D比值、LPI及病理学损伤评分降低,TNF-α、IL-1β...     

乌司它丁对油酸致急性肺损伤大鼠肺组织血红素氧化酶-1的影响

目的:探讨乌司他丁对油酸致急性肺损伤大鼠肺组织血红素氧化酶-1表达的影响.方法 30只成年SD大鼠,随机分为3组(n＝10).正常组(A组)经大鼠尾静脉注射0.2mL/kg生理盐水;急性肺损伤组(B组)、乌司他丁组(C组)经大鼠尾静脉注射油酸0.2mL/kg制成急性肺损伤模型,随后立即给予A组、B组腹腔注射生理盐水10mL/kg,C组100ku/kg的乌司他丁腹腔注射.测取动物4h时间点呼吸频率和左心室动脉血氧分压,并于4h后取右下肺组织行HE染色和HO-1免疫组织化学检查,观察光镜下病理改变以及血红素氧化酶-1的表达.结果: 乌司他丁能显著改善油酸所致急性肺损伤所致的呼吸窘迫;肺组织血红素氧化酶-1在对照组仅有少量表达,急性肺损伤组表达增多,乌司他丁干预组表达明显增强.结论:乌司他丁可通过增加肺组织中血红素氧化酶-1的表达而发挥保护作用.     

Decreased expression of AQP1 and AQP5 in acute injured lungs in rats

Objective To determine if aquaporin1 (AQP1) and aquaporin5 (AQP5) are expressed in the alveolar capillary membrane in rats. Moreover, to investigate the alteration of AQP1 and AQP5 in acute injured lungs. Methods The distribution of AQP1 and AQP5 in alveolar capillary membrane were investigated by immunohistochemistry and immunoelectron microscopy with affinity- purified antibodies to human AQP1 and AQP5. To study the possibility that alveolar capillary membrane AQP1 and AQP5 undergo altered regulation, we established a rat model using alveolar instillation of lipopolysaccharide (LPS). Results Immunolabelling showed AQP1 was stained primarily in the microvascular endothelia of normal lungs, while AQP5 was expressed in type Ⅰ pneumocytes. Immunohistochemical analysis showed a significant decrease in the expression of AQP1 and AQP5 in injured lungs at 4h-48h after LPS instillation. AQP1 protein was resumed partly at 24h after LPS instillation and steroid administration, whereas AQP5 was unchanged. Conclusion The decreased expressions of AQP1 and AQP5 in injured lungs suggest that both of them may play a role in abnormal fluid transportation.     

ANP对急性肺损伤大鼠AQP1表达的影响

目的 :研究急性肺损伤 (ALI)大鼠肺组织中水通道蛋白 1 (AQP1 )的表达变化 ,探讨心房利钠尿肽 (ANP)治疗急性肺损伤的可能机制 .方法 :复制ALI大鼠模型 ,将实验动物随机分为对照组 ,ALI模型组 ,ANP治疗组 .采用免疫组化方法检测各组大鼠肺组织中AQP1的表达变化 ,并测定各组大鼠动脉血气 ,肺湿 /干 (W/D)比值 ,同时进行肺组织病理染色 .结果 :与对照组相比ALI模型组AQP1的表达显著降低 (P <0 .0 5 ) ,而ANP治疗组AQP1的表达显著高于ALI模型组 (P <0 .0 5 ) ,同时ANP治疗组能使血气改善 (P <0 .0 5 ) ,W/D比值下降 (P<0 .0 5 ) ,肺组织损伤减轻 .结论 :ANP对急性肺损伤大鼠AQP1的表达调节可能是其治疗急性肺损伤的有效途径之一 .     

急性肾损伤小鼠肺组织损伤特点及水孔蛋白表达研究

目的研究急性肾损伤小鼠肺组织损伤特点及水孔蛋白(AQP)表达变化。方法 75只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(n=25)和急性肾损伤组(n=50),后者分别经缺血再灌注(I/R组,n=25)和双侧肾切除(BNx组,n=25)建立急性肾损伤模型。于造模后即刻(0 h)和2、4、6、24 h时点,分批处死动物留取肺脏组织。HE染色光学显微镜观察肺组织病理学改变,进行中性粒细胞浸润计数;计算肺湿质量与干质量比值(W/D);采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)技术和免疫组织化学方法检测肺组织AQP-1、AQP-5 mRNA和蛋白表达。结果 I/R组和BNx组小鼠分别从造模后2 h和4 h出现肺组织炎症细胞浸润、肺泡内出血和肺间质水肿;BNx组造模后4、6、24 h时点和I/R组造模后2、4、6、24 h时点小鼠肺脏组织中性粒细胞浸润计数均显著高于假手术组(P<0.05)。BNx组和I/R组小鼠造模后4、6、24 h时点的W/D均显著高于假手术组(P<0.05)。BNx组和I/R组小鼠造模后各时点肺组织AQP-1 mRNA和蛋白表达与假手术组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。BNx组...     

牛珀至宝微丸对内毒素急性肺损伤水通道蛋白表达的影响

目的：观察牛珀至宝微丸对内毒素急性肺损伤纤维化水通道蛋白表达的影响。方法：静脉注射内毒素1.5 mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖100 mg/kg造成内毒素休克模型,用牛珀至宝微丸干预处理,HE染色观察肺损伤,Van Gieson法染色检测肺胶原纤维表达,免疫组化染色观察AQP-1和AQP-5表达。结果：内毒素造成严重的急性肺损伤,肺组织胶原纤维染色显著增强,AQP-1和AQP-5表达减弱;牛珀至宝微丸能减轻急性肺损伤及肺组织胶原纤维表达,并能提高AQP-1和AQP-5表达。结论：牛珀至宝微丸能减轻内毒素急性肺损伤和纤维化的机理可能与调节AQP-1和AQP-5表达相关。     

半夏提取物对小鼠肺水通道蛋白5表达的影响

目的 了解急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中水通道蛋白5(AQP5)的表达变化,探讨半夏提取物(EP)治疗ALI的药理机制,为半夏的临床应用提供理论基础.方法 36只昆明种小鼠随机分成3组,即空白对照组(NS组)、肺损伤造模组(ALI组)和半夏提取物治疗组(EP组),6h后观察测定肺组织湿干重比值(W/D),HE染色光镜下观察肺炎症变化,ELISA法检测小鼠血清TNF-α浓度,RT-PCR检测肺组织匀浆AQP5 mRNA表达情况.结果 ALI组小鼠肺部炎症反应显著,中性粒细胞浸润为主,同时肺泡明显充血水肿.EP组肺组织炎症减轻、充血消退.与NS组和EP组比较,ALI组的W/D值差异有统计学意义(P＜0.05);ALI组肺组织AQP5mRNA的表达,较NS组显著降低,较EP组的表达显著升高(P＜0.05).ALI组血清TNF-α的表达,较NS组显著升高,较EP组的表达显著降低(P＜0.05).结论 半夏提取物可通过上调肺AQP5的表达减轻肺水肿,作用机制可能是通过抑制炎症因子TNF-α的表达实现的.     

水孔蛋白-5在机械通气致急性肺损伤大鼠肺组织中的表达研究

目的 探讨水孔蛋白-5(AQP-5)在不同机械通气时间致大鼠急性肺损伤(ALI)肺组织中的表达.方法 将30只SD大鼠,按照机械通气时间不同,完全随机分为对照组、0.5 h组、1.0 h组、1.5 h组和2.0 h组,每组6只.通过肺组织大体标本图、肺系数、HE染色,观察肺组织水肿及损伤程度;采用病理切片染色评分法评估...     

1-羟基-2，3，5-三甲氧基[口山]酮对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨1-羟基-2,3,5-三甲氧基■酮(QGS)对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法采用ipLPS的方法建立小鼠急性肺损伤模型。检测肺脏指数,酶法检测支气管及肺泡灌洗液(BALF)中NO水平,Western blotting法检测核转录因子κB抑制蛋白IκB-α,诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及环氧合酶Ⅱ(COX-2)等蛋白的表达,HE染色观察肺组织病理学改变。结果QGS500mg/kg组能显著降低LPS引起的小鼠的肺脏指数(P<0.05)。QGS250、500mg/kg组均能显著降低LPS致伤小鼠BALF中NO水平,抑制率分别达到了37%和48.1%。同时QGS500mg/kg组还能够明显增加肺组织中IκB-α蛋白表达量并下调iNOS及COX-2蛋白表达量。结论QGS对LPS引起的小鼠急性肺损伤有保护作用,该作用与其增加IκB-α蛋白表达而抑制iN-OS和COX-2蛋白的表达有关。