食管癌发生发展过程中TRAIL和Survivin蛋白的表达研究

目的探讨食管癌发生发展过程中TRAILS、urvivin蛋白的表达及与食管癌病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法对60例食管癌手术后大体标本中食管正常黏膜、单纯增生、不典型增生及浸润癌组织进行检测及分析。结果TRAIL蛋白从正常黏膜→单纯增生→不典型增生→浸润癌呈渐进性低表达,而Survivin蛋白则呈渐进性高表达。食管浸润癌组织中TRAIL蛋白的低表达与Survivin蛋白的高表达呈负相关(r=-0.480,P<0.01)。结论TRAIL和Survivin 2种蛋白参与了食管癌的发生发展,两者的表达失调导致了食管癌的发生。     

Survivin,TRAIL在胶质瘤中的表达及其相关性

目的:探讨survivin,TRAIL在正常脑组织和不同级别胶质瘤中的表达情况及其相关性。方法:收集脑外伤后内减压正常脑组织8例,胶质瘤组织40例,免疫组化方法检测survivin及TRAIL的表达情况。结果:Survivin,TRAIL蛋白在正常脑组织和胶质瘤组织中阳性表达率比较差异都有统计学意义(P<0.05)。Survivin在胶质瘤低级别组(I、II级)与高级别组(III、IV级)之间的阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05)。TRAIL在胶质瘤低级别与高级别之间的阳性表达率比较差异没有统计学意义(P>0.05)。Spearman相关分析显示survivin表达强度与胶质瘤的恶性程度呈正相关(r=0.502,P<0.05)。Survivin蛋白和TRAIL蛋白在胶质瘤组织中的表达呈显著负相关(r=-0.553,P<0.05)。结论:胶质瘤细胞的增殖与凋亡可能与survivin和TRAIL的表达有关。     

TRAIL联合低剂量顺铂对食管癌EC9706细胞增殖的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合低剂量顺铂(DDP)对食管癌EC9706细胞增殖的影响.方法 单用DDP和单用TRAIL作用于EC9706细胞24、48、72 h后,利用MTT法检测各处理因素对EC9706细胞增殖的影响;TRAIL联合低剂量DDP作用48 h后,利用MTT法检测各处理因素对EC9706细胞增殖的影响.结果 随着单用DDP和单用TRAIL浓度的提高,作用时间的延长,其对EC9706细胞的抑制作用增强.TRAIL与低剂量DDP联用可明显抑制EC9706细胞的增殖,与单用DDP或单用TRAIL相比,细胞存活率显著降低;联合DDP组和DDP+TRAIL组细胞增殖率均随着DDP浓度的增加而下降.结论 TRAIL与低剂量DDP联合应用,可以抑制食管癌EC9706细胞的增殖,TRAIL能增强食管癌细胞对DDP的敏感性.     

TRAIL及其受体与肿瘤

TRAIL是新近发现的TNF家族的新成员,能选择性诱导肿瘤细胞凋亡,且与传统的放疗、化疗有协同作用,有可能成为一种新型抗肿瘤制剂.本文就TRAIL及其受体TRAILR的研究进展作一综述.     

TRAIL在乳腺癌组织中的表达

目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在乳腺癌组织中的表达。方法:免疫组化法检测TRAIL在乳腺癌组织中的表达。结果:TRAIL在乳腺不典型增生和腺癌中的表达无统计学差异。TRAIL的阳性表达水平与乳腺癌组织的分化程度呈正相关,即分化程度愈高,TRAIL表达水平愈高。TRAIL在不同临床分期乳腺癌组织中的表达无统计学差异,与有无淋巴结转移无统计学差异。结论:本实验从凋亡调节因子方面支持了不典型增生为癌前病变的观点,TRAIL蛋白的表达可能与乳腺癌组织的恶性程度有关,与肿瘤的生物学行为无关。     

TRAIL基因原核表达载体的构建、表达与抗体制备

目的:获取抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抗体.方法:利用PCR技术和基因重组技术将TRAIL基因构建于原核表达载体pPreTMH-Tb中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌DH-5α中获得表达,并将TRAIL蛋白免疫家兔,通过Dot blot及Western blot检测抗TRAIL抗体的产生.结果:成功构建TRAIL基因原核表达载体,并在大肠杆菌DH-5α中获得表达,TRAIL蛋白表达量占菌体蛋白质总量的11.8%,Dot blot及Western blot检测证实获得了抗TRAIL抗体.结论:成功制备抗TRAIL抗体,这为TRAIL在真核细胞水平研究奠定了实验基础.     

TRAIL与卡铂联合诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与卡铂（CBP）联合应用对体外培养的卵巢A2780细胞的生物学效应及其作用机制。方法采用MTT法、流式细胞术，检测体外培养的A2780细胞在卡铂和TRAIL共同作用下的细胞增殖抑制效应以及细胞凋亡程度，应用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测TRAIL受体的mRNA表达水平。结果A2780细胞对TRAIL敏感，TRAIL与卡铂联合用药对细胞的增殖抑制呈现高效协同作用，与单独用药组比较有显著性差异（P〈0．05）；流式细胞术分析协同性杀伤作用主要由于TRAIL和CBP联合诱导细胞凋亡引起；RT—PCR法检测结果显示A2780细胞在TRAIL与卡铂联合用药后均表现死亡受体DR4、DR5表达水平上调和诱骗受体DcR1、DcR2表达水平下调。结论在体外TRAIL与化疗药物联用能明显抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，卡铂能明显增强TRAIL对肿瘤细胞的敏感性，其诱导机制可能与死亡受体DR4、DR5表达水平上调和诱骗受体DcR1、DcR2表达水平下调相关。     

干扰素与TRAIL在诱导肿瘤细胞凋亡中的相互作用

干扰素（IFN）和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）均可诱导肿瘤细胞凋亡，但两者作用机制不同，而且并不是所有肿瘤细胞都对它们诱导的凋亡作用敏感。已有研究发现二者共同作用具有协同诱导细胞凋亡的作用，并可使原先对单一物质抵抗的肿瘤细胞变得敏感，从而达到治疗的目的。     

融合蛋白Kininogen D560-148 TRAIL114-281的表达及其抑制血管新生和诱导细胞凋亡的作用

目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究.方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL114-281(pMAL-TRAIL)和pMAL-Kininogen D560-148-TRAIL114-281(pMAL-KT),重组质粒分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT,并经亲和层析纯化.MTT法检测细胞的增殖,管状形成实验检测内皮细胞血管形成,流式细胞仪和电镜检测细胞凋亡.结果:成功构建原核表达载体pMAL-KD5、pMAL-TRAIL和pMAL-KT,并获得纯化的融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT.融合蛋白MBP-KT与MBP-KD5、MBP-TRAIL相比可显著抑制内皮细胞ECV304和胰腺癌细胞SW 1990的增殖、明显抑制ECV304细胞体外管腔的形成,同时,MBP-KT剂量依赖性地诱导SW1990细胞凋亡.结论:融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281既能诱导肿瘤细胞凋亡又能抑制血管生成,为进一步开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础.     

重组人TRAIL促卵巢癌细胞凋亡作用的研究

目的:分析重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)分子诱导卵巢癌细胞的凋亡。方法:观察重组人可溶性TRAIL对卵巢癌细胞直接细胞毒作用,MTT法分析不同浓度TRAIL对卵巢癌细胞3AO、HO-8910的生长抑制率,采用流式细胞技术观察TRAIL作用于3AO后的凋亡率的变化。结果:重组人可溶性TRAIL蛋白可抑制卵巢癌细胞生长,诱导卵巢癌细胞发生凋亡;倒置显微镜下观察细胞呈现圆形固缩形态,细胞凋亡之后存活细胞减少。结论:重组人可溶性TRAIL具有明显诱导卵巢癌细胞凋亡的活性,并具有量效性及时效性。其抑制卵巢癌细胞机制可能与其促凋亡作用有关。     

PTEN、Survivin在食管癌发生发展中的作用

目的　检测PTEN、Survivin蛋白在食管正常黏膜、单纯增生、不典型增生、原位癌及浸润癌中的表达情况 ,分析这两种蛋白在食管癌不同病变区域中的表达及与食管癌病理特征的关系。方法　采用免疫组化方法检测PTEN、Survivin蛋白在 60例食管癌大体标本中的不同病变区域的表达。结果　PTEN蛋白从正常黏膜→单纯增生→不典型增生→原位癌→浸润癌呈渐进性低表达 ,而Sur vivin蛋白则呈渐进性高表达。PTEN、Survivin蛋白在正常黏膜与浸润癌中的表达有显著性差异 (P <0 .0 1) ;PTEN蛋白表达与淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 )。PTEN蛋白在食管浸润癌中的低表达与Survivin蛋白在其中的高表达呈负相关 (r =-0 3 90 ,P <0 .0 1)。结论PTEN、Survivin二种基因与食管癌的发生发展密切相关 ,可以作为肿瘤诊断的标志物     

Survivin蛋白在鼻咽癌组织中表达及其临床意义

目的探讨Survivin表达与NPC临床分期、放疗敏感性、复发及预后的关系。方法应用免疫组化二步法,检测128例NPC组织中Survivin的表达情况。结果 Survivin在鼻咽癌组织中表达率为70.3%,survivin表达与肿瘤临床分期相关,Ⅰ～Ⅱ期其阳性率(38.1%)明显高于Ⅲ～Ⅳ期(81.8%),两者比较有统计学意义(P<0.01),且表达强度亦有统计学意义(P<0.01),而Ⅲ期与Ⅳ期比较无统计学意义(P>0.05);survivin表达与肿瘤淋巴结转移、远处转移及患者生存率均相关(P<0.05);survivin表达与患者放疗敏感性相关(P<0.01)。结论 Survivin在鼻咽癌组织中呈高表达,其异常表达与鼻咽癌临床分期、远处转移、放疗敏感性及预后有关,可能作为NPC诊断、疗效评估及预后判断的新辅助指标。     

Survivin mRNA和蛋白在大肠癌组织中表达及与细胞凋亡的关系

目的研究Survivin基因 mRNA拷贝数、蛋白表达在大肠癌诊断、预后等方面的意义及与细胞凋亡间的关系。方法分别采用分子信标荧光绝对定量PCR、S-P免疫组化和TUNEL法，检测Survivin mRNA拷贝数、蛋白表达及细胞凋亡指数。结果Survivin mRNA拷贝数和蛋白表达阳性率，肿瘤组织显著高于正常组织；凋亡指数AI，肿瘤组织显著低于正常组织（P〈0.05）。肿瘤组织中Survivin mRNA拷贝数与淋巴结转移和病理类型显著相关；蛋白表达阳性率与肿瘤部位和患者生存状况显著相关，蛋白表达阴性组AI显著高于阳性组（P〈0.05）。Survivin mRNA拷贝数与蛋白表达无相关性（P〉0.05）。结论Survivin mRNA和蛋白在大肠癌中表达上调，可作为判断预后的生物学指标。     

放疗前后食管鳞状细胞癌组织中Fas和Survivin蛋白的表达

目的:探讨食管鳞状细胞癌术前放疗前后,Fas和Survivin蛋白的表达变化及其与放疗敏感性的关系.方法:采用免疫组织化学SP法检测56例食管鳞状细胞癌放疗前胃镜活检标本及放疗后食管癌根治性切除术后标本Fas和Survivin蛋白的表达水平,分析二者放疗前后表达的差异及其与放疗后病理反应分级的关系.结果:放疗前胃镜活检标本中Fas蛋白表达为0.47±0.23,放疗后食管癌根治性切除术后标本中Fas蛋白表达为0.61±0.17,放疗前后阳性率相比较差异有统计学意义(P<0.01);放疗前胃镜活检标本中Survivin蛋白表达为0.43±0.23,放疗后食管癌根治性切除术后标本中Survivin蛋白表达为0.37±0.40,放疗前后阳性率比较差异不具有统计学意义(P=-0.49).放疗前Fas蛋白表达与放疗后病理反应呈正相关,并有统计学意义(P<0.01),放疗后Fas蛋白表达与放疗后病理反应的相关性无统计学意义(P>0.05),放疗前后标本中Survivin蛋白表达与放疗后病理反应的相关性均无统计学意义(P>0.05).结论:放疗前Fas蛋白表达与放疗后病理反应呈正相关,提示术前Fas蛋白表达可以代表肿瘤细胞的放射敏感性,Fas蛋白不但可以直接诱导肿瘤细胞的凋亡,而且可以预测肿瘤细胞的放射敏感性,Fas蛋白可作为中晚期食管鳞状细胞癌术前放疗的筛选指标之一.     

Survivin、TRAIL在血管瘤中的表达

目的　探讨存活素 (Survivin)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)在血管瘤组织中的表达。方法　应用免疫组化的方法检测血管瘤组织、血管畸形中Survivin和TRAIL的表达。结果　Survivin血管瘤增生期、退化期和血管畸形中阳性表达率分别为76.9% ( 2 0 /2 6)、3 5 .7% ( 5 /14 )和 2 5 % ( 4 /16) (P <0 .0 5 )。卡方检验 :χ2 =12 .62 ,三者之间差异存在显著性意义 (P <0 .0 1) ,两两之间比较 ,增生期与消退期之间有差异 (P <0 .0 5 ) ,消退期与血管畸形之间无差异 (P >0 .0 5 ) ,增生期与血管畸形之间有差异 (P <0 .0 5 ) ,血管瘤与血管畸形之间有差异 (P <0 .0 5 )。TRAIL在增生期和消退期血管瘤组织中阳性表达率分别为 2 3 .1% ( 6/2 6)、78.6% ( 11/14 ) ,血管畸形中全部为阴性 ,卡方检验 :χ2 =9.3 1,三者之间差异存在显著性意义 (P <0 .0 1) ,两两之间比较 ,增生期与消退期之间有差异 (P <0 .0 5 ) ,消退期与血管畸形之间有差异 (P <0 .0 5 ) ,增生期与血管畸形之间无差异 (P >0 .0 5 ) ,血管瘤与血管畸形之间有差异。结论　Survivin和TRAIL的表达水平与血管瘤的增生、消退有关 ,Survivin可抑制内皮细胞的凋亡 ,促进血管瘤组织增生 ;TRAIL可通过诱导内皮细胞凋亡发挥作用 ,促进血管瘤消退     

大肠癌组织中Survivin的表达与微血管密度的关系

目的探讨Survivin在大肠癌发病机制中的作用与微血管密度(MVD)的关系及其临床意义。方法对48例大肠癌组织用免疫组织化学技术分别检测Survivin的表达及MVD。结果大肠癌组织Survivin表达阳性率为52.1%(25/48),癌旁正常组织均无表达。Survivin表达与大肠癌分化程度、淋巴结转移明显相关(P<0.05,P<0.01)。MVD表达与大肠癌淋巴结转移显著相关(P<0.01)。Survivin与MVD的表达具有一致性,两者同时表达的大肠癌更容易发生淋巴结转移。结论Survivin基因表达与大肠癌生物学行为有密切关系,检测Survivin的表达水平对于大肠癌的诊断、恶性程度及预后的判断均有一定价值。     

Survivin在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的研究子宫内膜癌中survivin基因的表达及其临床意义。方法采用半定量RT-PCR方法检测26例人子宫内膜恶性肿瘤、17例正常内膜、3例癌前病变(子宫内膜不典型增生),3例良性病变(子宫内膜单纯或复杂型增生)组织样品中survivinmRNA的表达。结果26例子宫内膜癌组织中,Survivin mRNA相对表达量为0.7660±0.0447,明显高于正常组织0.4577±0.0345,P<0.05。并且晚期子宫内膜癌组织的Survivin mRNA表达量高于早期子宫内膜癌,而Survivin mRNA表达量与患者年龄、是否绝经、肌层有无侵犯无明显相关。结论Survivin mRNA在子宫内膜癌组织的表达量高于正常内膜组织,并且其表达水平与子宫内膜癌疾病进展有相关性,提示Survivin基因转录水平异常可能在子宫内膜癌的发生发展中起重要作用。     

食管癌变过程中p53表达及其与细胞凋亡水平的关系

[目的]探讨食管癌变过程中食管鳞状上皮p53表达情况及其与凋亡水平的关系。[方法]824例食管黏膜活检组织（包括正常黏膜、异型增生和鳞癌）,行DNA末端标记（TUNEL法）检测及p53免疫组化检查。[结果]①轻—中度不典型增生组p53表达阳性率高于正常及炎症组和良性增生组（P=0.003）,低于重度不典型增生/鳞癌组（P=0.036）;良性增生组与轻—中度不典型增生组间无明显差异（P=0.192）;②正常及炎症组和良性增生组随年龄增长p53表达呈上升趋势（P〈0.01）;轻中—度不典型增生组及重度不典型增生组各年龄组间差异不明显;③随着p53表达的增加,上皮颗粒层细胞凋亡指数（AI）逐步下降（χ2=87.266,P=0.000）,基底层AI呈轻度增加趋势（χ2=34.253,P=0.000）。[结论]食管癌变过程中伴有p53基因的突变和颗粒层细胞凋亡水平的下降,且两者关系密切。     

食管癌中AKT和PTEN蛋白表达及其临床相关性研究

目的探讨食管癌组织中AKT和PTEN的表达及其临床相关性.方法应用Western blot和免疫组织化学方法检测42例食管癌组织及其癌旁组织中AKT,PTEN蛋白的表达情况.结果食管癌组织中,AKT蛋白水平高于癌旁组织(P＜0.01),PTEN蛋白水平低于癌旁组织(P＜0.01),二者呈负线形相关(r=-0.583,P＜0.01).AKT蛋白表达在Ⅲb-Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的食管癌中的表达高于Ⅱ-Ⅲa期、高分化、元淋巴结转移的食管癌(P＜0.01),而PTEN则完全相反(P＜0.01).二者的表达均与年龄、性别、肿瘤大小无关(P＞0.05).结论AKT蛋白的高表达在食管癌的发生、发展起重要作用,而PTEN则抑制这一作用过程.