NMM抗肿瘤DNA疫苗原液大肠杆菌菌体蛋白质残留量检测方法的建立与验证

目的 建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法 使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证通过对5批样品进行检测。结果 采用双抗体夹心ELISA试验方法进行大肠杆菌蛋白质残留量检测时,DNA疫苗原液无需进行稀释。NMM抗肿瘤DNA疫苗原液对大肠杆菌菌体蛋白质的检测无干扰及抑制作用,方法的专属性良好;本法检测限为0.41 ng/ml;定量限为0.98 ng/ml;该方法测定宿主菌蛋白质残留量在0～100 ng/ml范围内线性良好,R2≥0.9999;本方法重复性试验中宿主菌蛋白质含量RSD值均低于15%,中间精密度实验中样品吸光值RSD值低于10%,精密度结果良好。在检测线性范围内加入高、中、低3种浓度的大肠杆菌菌体蛋白,回收率均值为100.35%(n=9,RSD=3.58%);本方法检测实验条件发生微小变动时（不同人员、不同批次试剂盒）,对测定结果的影响...     

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗中庆大霉素残留量检测方法的验证

目的  验证口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）中庆大霉素残留量的检测方法。方法  应用庆大霉素ELISA试剂盒建立庆大霉素残留量的检测方法。对该方法标准曲线的线性、线性范围内的准确度、精密度、专属性、耐用性、检测限及定量限进行验证。结果  验证的标准曲线线性良好,相关系数>0.98。该法检测高、中、低浓度的庆大霉素标准品的回收率为92.7%～123.6%;检测同一批次的供试品的相对标准偏差为8%;不同试验人员检测同一批次供试品和不同批次试剂盒检测同一批次供试品,相对标准偏差均<15%;庆大霉素加样回收率为95.9%～121.3%;该法在（37±1） ℃温度范围内耐用性良好;该法测定庆大霉素的检测限为0.040 ng/ml,定量限为0.135 ng/ml。结论  用于检测口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）中庆大霉素残留量的方法是有效的。     

高效液相色谱-示差折光法测定NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇含量

目的 建立测定NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇含量的高效液相色谱-示差折光法。方法 检测器为示差折光检测器,色谱柱为SUGAR SC1011阳离子钙型交换柱(300 mm×8 mm,6μm),流动相为纯化水,流速为1.0 mL/min,柱温为80℃,检测池温度为37℃,进样量为10μL。结果 甘露醇的质量浓度在0.02～5.00 mg/mL(R²=1.000 0,n=6)范围内与峰面积线性关系良好;定量限为13.37μg/mL;精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于2.0%;加样回收率为97.76%,RSD为0.97%(n=9)。3批小试样品和中试样品中甘露醇的含量分别为20.02,19.95 mg/mL。结论 该方法操作简便、重复性好、结果准确,可用于NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇的含量测定。     

结核DNA疫苗宿主蛋白残留检测方法的建立

目的 建立结核DNA疫苗中大肠杆菌宿主蛋白残留量检测的方法。方法 采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)建立结核DNA疫苗中宿主蛋白残留量检测的方法,对方法的准确度、专属性、线性范围和耐用性等进行验证,并采用建立的方法对结核DNA疫苗原液进行测定。结果 大肠杆菌宿主蛋白含量在2～24ng·L^-1范围内,相关系数R²>0.990,线性关系良好;该法宿主蛋白含量在高中低浓度范围内,回收率在70%～120%之内,准确度良好;该法不易受辅料、核酸、孵育温度和孵育时间影响,专属性和耐用性较好;三批原液的宿主蛋白残留量(HCP)均<1μg·mg^-1。结论 此方法有较好的准确度、专属性、重复性、中间精密度和耐用性,可用于结核DNA疫苗的宿主蛋白残留量的检测。     

银翘解毒口服液中山银花鉴别方法研究

目的 建立鉴别银翘解毒口服液中山银花投料的高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）法。方法 色谱柱为Thermo C18柱（150 mm×2.1 mm,1.7μm）,流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液（梯度洗脱）,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为5μL;电喷雾离子源（ESI）,质谱多反应监测模式检测。结果 灰毡毛忍冬皂苷乙的质量浓度在5.299 86～211.994 29 ng/mL(r≥0.999 9)范围内与峰面积对数值线性关系良好,检测限为1.50 ng/mL,定量限为5.00 ng/mL;精密度、稳定性及重复性试验结果 RSD均小于3.50%,平均加样回收率为93.66%,RSD为2.41%(n=6)。HPLC-MS法可从29批次样品中检出山银花投料7批次,多于现有高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法检出的5批次。结论 相对于HPLC-ELSD法,HPLC-MS法更适用于银翘解毒口服液中山银花投料的鉴别。     

毛细管气相色谱法测定阿莫曲坦原料药中8种有机溶剂残留量

目的:建立测定阿莫曲坦原料药中8种有机溶剂即乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇与甲苯残留量的方法。方法:采用毛细管气相色谱法。色谱柱为Agilent DB-5毛细管柱,柱温采取程序升温,氢火焰离子化检测器,检测器温度为250℃,载气为高纯N2,进样口温度为200℃,顶空进样,平衡条件为100℃、30 min。结果:8种有机溶剂在各自的检测质量浓度范围内线性关系良好(r为0.999 6⁰.999 9),平均回收率为99.8%0.999 9),平均回收率为99.8%¹00.8%(RSD为0.87%100.8%(RSD为0.87%².11%,n=3),定量限为0.092.11%,n=3),定量限为0.09⁰.54 ng,检测限为0.030.54 ng,检测限为0.03⁰.18 ng。3批样品中只检出异丙醇。结论:建立的方法操作简便,可对阿莫曲坦原料药中残留的8种有机溶剂进行有效控制。     

高效液相色谱-串联质谱法检测替格瑞洛原料药中的盐酸羟胺

目的:建立替格瑞洛原料药中的基因毒性杂质盐酸羟胺的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。方法:采用反相色谱,以水-乙腈(0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,以ESI正离子多反应监测(MRM)模式进行检测。结果:盐酸羟胺的检测限和定量限可分别达到0.2和0.4 ng·mL^-1,在线性范围内有良好的线性关系(r=0.998 7),准确度实验低、中、高浓度回收率均在95.1%～109.2%,RSD为2.2%～6.4%,重复性实验6份加标样品溶液回收率的RSD为5.7%。在3批次替格瑞洛原料药中均未检出盐酸羟胺。结论:该方法可用于检测替格瑞洛中的盐酸羟胺。     

四价流感病毒裂解疫苗(MDCK细胞)中Triton X-100残留量高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立并验证四价流感病毒裂解疫苗(MDCK细胞)中Triton X-100残留量高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)检测方法。方法应用HPLC法检测四价流感病毒裂解疫苗中Triton X-100残留量, 并对该方法的系统适用性、专属性、线性、准确度、精密度、耐用性、定量限及检测限进行验证。结果 HPLC法检测Triton X-100的理论塔板数在1 560～1 599之间, 峰面积和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)分别为1.93%和0.30%, 且Triton X-100色谱峰与杂质分离良好;空白溶液无干扰峰出现;Triton X-100的浓度在5～160 μg/ml范围内时, 浓度与峰面积呈良好的线性关系, 回归曲线决定系数为0.999;检测Triton X-100样品的加标回收率均在95%～105%之间, RSD均不超过2%;同一实验人员重复进样6次检测峰面积的RSD为0.58%, 同一实验人员在不同工作日和不同检测人员在同一工作日检测峰面积的RSD也均小...     

UPLC-MS/MS测定人血浆中长春西汀和阿朴长春胺酸的含量及其应用

目的 建立和验证UPLC-MS/MS测定人血浆中长春西汀和阿朴长春胺酸的方法，并用于临床样品检测。方法 以长春西汀-d5、阿朴长春胺酸-d4为内标，人血浆样品经蛋白沉淀法沉淀处理，色谱柱为Waters ACQUITY UPLC^?BEH C₁₈(2.1 mm×50 mm,1.7μm)，流动相为乙腈-水(含0.05%甲酸)，梯度洗脱，流速0.35 mL·min^-1；电喷雾离子化源正离子监测模式。结果 长春西汀和阿朴长春胺酸线性范围分别为0.04～20.0 ng·mL^-1(r=0.999 7)、0.50～250 ng·mL^-1(r=0.999 6)，检测限分别为0.01,0.10 ng·mL^-1，待测物与内标提取回收率均为94.81%～105.0%，基质效应为94.51%～105.0%,RSD均<5%；批内、批间精密度RSD均<10%。结论 本法特异性强、快速、准确，重复性好，适用于长春西汀临床生物样品检测及生物等效性研究。     

高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定一次性静脉留置针中双酚A残留量

目的 建立测定一次性静脉留置针中双酚A残留量的高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法。方法 以乙腈为溶剂,超声提取静脉留置针样品中残留的双酚A。色谱柱为Waters Acquity Premier BEH C₁₈柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.05%氨水-甲醇(28∶72,V/V),流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为2μL;三重四极杆质谱,电喷雾电离离子源,负离子、多反应监测模式扫描,气帘气、喷雾气、辅助加热气气压分别为25,55,55 psi,离子化电压为4 500 V,定量离子对质荷比(m/z)为227.1/133.0。结果 双酚A的质量浓度在5.42～216.8 ng/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=6);检测限为0.108 4 ng/mL,定量限为1.084 ng/mL;精密度、重复性试验结果的RSD均小于4.0%;加样回收率为90.44%,RSD为1.27%(n=6)。市售静脉留置针样品中双酚A的残留量最高为9 213.34 ng/g。结论 该方法操作简便、灵敏度高、重复性好、结果准确,可用于...     

毛细管气相色谱法测定坎地沙坦酯原料药中8种有机溶剂残留量

目的:建立测定坎地沙坦酯原料药中8种有机溶剂甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯与四氢呋喃残留量的方法。方法:采用气相色谱法。色谱柱为Agilent HP-5毛细管柱,以(5%)苯基-(95%)甲基聚硅氧烷为固定液,柱温采用程序升温,氢火焰离子化检测器温度为250℃;载气为高纯N2;顶空进样,加热温度为100℃,加热时间为30 min。结果:8种有机溶剂在各自的检测质量浓度范围内线性关系良好(r=0.999 6⁰.999 9),平均回收率均为99.6%0.999 9),平均回收率均为99.6%¹00.3%(RSD=0.89%100.3%(RSD=0.89%¹.98%,n=3);定量限分别为0.09、0.15、0.12、0.3、0.6、0.18、0.45、0.21 ng;检测限分别为0.03、0.05、0.04、0.1、0.2、0.06、0.15、0.07 ng。样品中只检出了丙酮。结论:建立的方法操作简便、精密度高,可有效控制坎地沙坦酯原料药中残留的8种有机溶剂。     

药用复合膜中2,4-二氨基甲苯的检测

目的:建立药用复合膜中2,4-二氨基甲苯的HPLC-MS检测方法,对市场上不同厂家、不同材质的药用复合膜材料进行检测。方法:样品剪碎,用水浸泡经灭菌后过膜上机。色谱-质谱条件：采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.8μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温40℃,进样量5μL;离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子模式,加热温度500℃,DP电压80 V。结果:2,4-二氨基甲苯进样浓度在0.16～52.54 ng·mL^-1呈良好的线性关系(r=0.999 7),检测限和定量限分别为0.05 ng·mL^-1和0.16 ng·mL^-1,加标回收率在96.0%～103.5%。90批次样品中检测出2,4-二氨基甲苯的样品有64批次,占71.1%,结果为0.615～30.36μg·m^-2。结论:该方法降低了方法检测限,简化了样品的前处理过程,操作简单...     

顶空气相色谱法测定丙硫异烟胺中三氯甲烷残留量

目的建立丙硫异烟胺中三氯甲烷(CHCl3)残留量的测定方法。方法顶空进样色谱法,采用DM-1毛细管柱(60m×0.32mm,5μm)。结果空白溶剂无干扰,检测限为0.03μg/mL,0.006～0.018mg/mL的范围内线性关系良好(r=0.9992),平均回收率为99.7%(RSD=1.5%,n=9),3批样品三氯甲烷残留量均符合规定。结论经方法学试验,该方法灵敏、准确、可靠,适用于本品三氯甲烷残留量的测定。     

HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中的有关物质

目的:建立测定注射用泮托拉唑钠中有关物质的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil Hypersil ODS,流动相为0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液(调节pH为7.0)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为290 nm,柱温为40℃,进样量为20μL。结果:杂质A、B、C+E、D检测质量浓度线性范围分别为0.416 8~1.042 0μg/mL(r=0.999 8)、0.195 0~0.487 5μg/mL(r=0.999 9)、0.389 0~0.972 5μg/mL(r=0.999 8)、0.198 6~0.496 5μg/mL(r=0.999 8);定量限分别为0.834、0.780、1.556、0.794ng/mL,检测限分别为0.417、0.390、0.778、0.397 ng/mL;精密度试验的RSD<1.0%,重复性试验中总杂质峰面积的RSD<1.0%;回收率分别为98.81%~102.49%(RSD=1.18%,n=9)、95.31%~98.44%(RSD=0.91%,n=9)、96.88%~98.44%(RSD=0.52%,n=9)、97.87%~101.28%(RSD=1.05%,n=9)。结论:该方法简便、准确,可用于注射用泮托拉唑钠中有关物质的测定。     

ICP-MS法同时测定重组乙型肝炎疫苗中的12种元素杂质

目的 同时测定重组乙型肝炎疫苗中12种元素杂质的含量。方法 采用电感耦合等离子体质谱内标法。载气(氩气)流量1.02 L·min^-1,碰撞气(氦气)流量4.5 L·min^-1,等离子体气流量18 L·min^-1,射频功率1.35 kW,采样锥截取深度为65 mm,积分时间为1.5 s,数据采样为跳峰模式，样品重复测3次，取平均值。结果 0.05～100μg·L^-1镉、铅、砷、钴、钒、镍、铊、银、铜、铬、钡、钨与响应值呈良好的线性关系(r>0.9994),定量限0.4590～40 ng·L^-1,检测限0.1377～12 ng·L^-1。精密度试验RSD不超过2.50%,重复性试验RSD不超过8.90%,平均加样回收率78.5%～114.3%,RSD为0.10%～4.40%。结论 所用方法快速、简便、准确，线性、精密度、重复性良好，可用于同时测定重组乙型肝炎疫苗中的元素杂质。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定氯氮平中基因毒性杂质

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS),测定氯氮平中基因毒性杂质。方法 采用Inert Sil-ODS-3(75 mm×4.6 mm×3 mm)色谱柱;以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,流速为0.7 mL·min^-1;质谱采用ESI负离子模式,进行多反应监测。结果 通过外标法计算,邻氨基苯甲酸、环合物缩合物和环合物酸析物分别在20～100、0.16～3.2、0.48～3.2 ng·mL^-1范围内线性良好;低(80%)、中(100%)、高(120%)3个浓度的加样回收率为90.8%～117.2%,相对标准偏差(RSD)为3.9%～12.8%;检测限范围为0.08～10 ng·mL^-1,邻氨基苯甲酸、环合物缩合物和环合物酸析物的定量限分别是20、0.16、0.48 ng·mL^-1。不同批次样品检测结果均低于限度值。结论本方法操作简便,结果可靠,适用于氯氮平中基因毒性杂质检测。     

HPLC-MS/MS测定鱼腥草和复方鱼腥草合剂中马兜铃酸类化合物含量

目的 建立HPLC-MS/MS同时测定鱼腥草药材和复方鱼腥草合剂中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ和马兜铃内酰胺Ⅰ含量的方法。方法 采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm);流动相为乙腈和0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^-1,柱温为30℃;采用电喷雾离子源,以多反应离子监测模式进行质谱检测。结果 马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ和马兜铃内酰胺Ⅰ分别在11.91～1 985 ng·mL^-1(r=0.995 3)、 16.87～2 812 ng·mL^-1(r=0.995 7)和3.404～567.4 ng·mL^-1 (r=0.996 6)内有良好的线性关系。各化合物平均回收率为85%～111%,RSD为0.2%～6.7%。马兜铃酸Ⅰ检测限为2.395 ng·mL^-1、定量限为7.984 ng·mL^-1;马兜铃酸Ⅱ检测限为3.389 ng·mL^-1,定量限为10.50 ng·mL<...     

高效液相色谱法测定羟丙甲纤维素中亚硝酸盐含量

目的 建立测定羟丙甲纤维素中亚硝酸盐含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法 优化羟丙甲纤维素的前处理方法。色谱柱为Agela Venusil HILIC亲水色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)，流动相为磷酸盐缓冲液(pH 3.8)-乙腈(50∶50,V/V)，流速为1.0 mL/min，检测波长为205 nm，柱温为25℃，进样量为20μL。结果 采用水和乙腈为溶剂，交替递加使羟丙甲纤维素均匀溶胀，再用过量乙腈消溶胀并析出沉淀，制成亚硝酸盐溶液，多余乙腈经甲苯萃取浓缩。亚硝酸根离子质量浓度在25～1 000 ng/mL范围内与峰面积线性关系良好(R²=0.999 9)；检测限为10 ng/mL，定量限为25 ng/mL；精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于1.0%；平均加样回收率为99.16%,RSD为0.41%(n=9)。结论 优化的前处理方法可较好地避免羟丙甲纤维素在水中强烈的溶胀作用，有助于样品的充分提取。建立的HPLC法专属性强，结果准确可靠，可用于羟丙甲纤维素中亚硝酸盐的含量测定。     

顶空毛细管气相色谱法测定腺嘌呤原料药中5种有机溶剂残留量

目的:建立测定腺嘌呤原料药中二氯甲烷、三氯甲烷、苯、三氯乙烯和二氧六环等5种有机溶剂残留量的分析方法。方法:采用顶空毛细管气相色谱法。以1 mol/L氢氧化钠溶液溶解样品,DB-624石英毛细管为色谱柱;程序升温;进样口温度200℃;氢火焰离子化检测器检测口温度250℃;载气为高纯氮气;分流进样,分流比1∶1;顶空加热温度85℃,平衡时间15 min。结果:二氯甲烷、三氯甲烷、三氯乙烯和二氧六环4种溶剂检测质量浓度范围内线性范围为0.002⁰.5 mg/ml(r=0.997 10.5 mg/ml(r=0.997 1⁰.999 9),苯为0.000 20.999 9),苯为0.000 2⁰.05 mg/ml(r=0.999 3)。5种有机溶剂平均加样回收率为89.1%0.05 mg/ml(r=0.999 3)。5种有机溶剂平均加样回收率为89.1%⁹3.4%,RSD为1.91%93.4%,RSD为1.91%².89%(n=3);检测限为0.012.89%(n=3);检测限为0.01⁰.3μg/ml,定量限为0.030.3μg/ml,定量限为0.03².0μg/ml。结论:本法简便、灵敏、快速、准确,适用于腺嘌呤原料药中有机溶剂残留量的测定。     

用二维高效液相色谱法测定人血浆中奥希替尼浓度

目的 建立二维高效液相色谱测定人血浆中的奥希替尼，为其血药浓度检测提供分析方法。方法 在二维高效液相色谱法中，一维色谱柱：SX1-SCX(25.0 mm×3.5 mm, 5μm),流速：0.7 mL·min^-1;二维色谱柱：SCB-C₁₈(125.0 mm×4.6 mm, 5μm),流速：1.2 mL·min^-1。柱温：40℃;紫外检测波长：330 nm,进样量：500μL。考察该方法的专属性、标准曲线与最低定量限、精密度与回收率、稳定性。结果 血浆中奥希替尼在10.51～1 051.23 ng·mL^-1呈良好线性关系，标准曲线方程为y=725.25x-3 026.02(R²=0.999 8),最低定量限为5.25 ng·mL^-1,低、中、高3个质控样品的提取回收率在95.87%～98.12%,日内和日精密度均低于5.22%,说明该方法检测性能良好。结论 该方法具有灵敏度高、抗干扰能力强、稳定性好，适用于奥希替尼的血药浓度监测。