血清铁蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 血清铁蛋白(sFER)时间分辨荧光免疫(TRFIA)分析试剂盒的研制.方法 采用双抗体夹心法建立sFER-TRFIA试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价.结果 试剂盒的线性测量范围为2.2～1 070 ng/mL,灵敏度为0.22 ng/mL,批内、批间的精密度分别为4.6%～7.2%、5.4%～8.9%,与癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)和人白蛋白无交叉反应.86份血清样本用本试剂盒与国外其他试剂盒同时检测,其相关系数为0.994.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.     

人血清PCT直接化学发光免疫分析方法的建立及性能评价北大核心CSCD

目的:建立人血清PCT直接化学发光免疫分析方法并进行性能评价。方法:根据双抗夹心法原理制备磁微粒试剂、吖啶酯-抗体试剂与生物素化抗体试剂,3种试剂与血清PCT抗原反应后形成双抗夹心免疫复合物。利用磁场清洗复合物后,加入预激发液与激发液,化学发光免疫分析仪检测反应的发光强度,方程拟合后计算出样本中PCT浓度,并对线性范围、准确度、精密度、特异性及与干式免疫法试剂盒相关性进行性能评估。结果:本方法空白限为0.01 ng/ml,线性范围为0.02~100.00 ng/ml,准确度为95.65%,批内精密度为5.06%~5.35%,批间精密度为5.44%~5.69%,特异性均在可接受范围内,与干式免疫法试剂盒具有良好的相关性。结论:本方法各项性能指标均达到临床检验质量要求,与临床使用的干式免疫法试剂盒具有良好的相关性,有望实现临床转化应用。     

化学发光免疫分析血清C肽方法建立

双抗体夹心一步法建立人C肽(C-peptide) 化学发光免疫分析(CLIA)方法.方法可测范围0.15～15ng/mL,灵敏度0.02ng/mL,批内、批间变异系数(CV)分别为4.2%～6.5%和6.8%～9.3%,与胰岛素无交叉反应,与胰岛素原的交叉反应率为7.3%.本方法与国外同类试剂盒同时检测40份C-肽释放试验血清,相关系数为0.9709.本方法各项指标均满足临床检测要求,达到国外同类产品水平.     

人肌酸激酶同工酶MB(质量法)化学发光免疫分析定量检测方法的建立及性能评价

利用化学发光免疫分析技术,建立一种人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)定量检测方法。采用基于化学发光免疫分析的双抗体夹心法(以纳米磁微粒为固相载体包被抗人CK-MB抗体,以另一抗体交联碱性磷酸酶为标记物)研制CK-MB化学发光免疫定量检测试剂盒。并进行一系列性能评估及临床相关性试验。该检测方法的线性范围为(0.1~300)ng/ml;空白限为0.1 ng/ml;批内精密度和批间精密度均小于5%;准确度:添加回收率在(100±5)%以内;在正常人血清中添加100 ng/ml的CK-BB及10000 ng/ml的CK-MM,对测定结果没有产生影响;当样本中存在高浓度的甘油三酯、血红蛋白、胆红素以及RF和HAMA时测试偏差在±15%范围以内;试剂在37℃放置72h后。稳定性良好,各性能指标均达到要求;相关性试验结果r0.98,一致性结果良好。参考值范围为:(0.42~6.34)ng/ml。本研究建立的CK-MB化学发光免疫分析定量检测方法的各项性能指标均达到了临床检测要求,可用于临床血清CK-MB检测。     

C肽光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的:研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清C肽(C peptide)的快速检测试剂盒.方法:采用夹心法建立C peptide AlphaLISA试剂盒.结果:自制C肽试剂盒灵敏度为0.06ng/ml.,可测范围为(0.06～22)ng/ml.批内与批间的精密度分别为4.0%～4.8%,5.6%～...     

AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制及其临床应用

目的:研制AFP时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)试剂盒。方法:采用双抗体夹心法建立AFP-Tr-FIA试剂盒,对反应条件进行优化,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果:抗体包被浓度确定为5μg/m l,铕标抗体最佳稀释比为1 50。试剂盒的线性范围为1ng/m l~1210ng/m l,灵敏度为0.41ng/m l,准确度高,批内和批间变异系数分别5.1%~8.8%,6.7%~11.9%。与CA199、CA125、CEA和白蛋白无交叉反应。破坏试验表明试剂在37℃可稳定7d。收集50例肝癌患者和370例健康人血清,用本试剂盒测得肝癌患者血清AFP浓度(557.3ng/m l±322.1ng/m l)显著高于健康人(6.5ng/m l±5.4ng/m l)(P<0.001)。370例正常人血清标本测试该试剂盒的正常参考范围为(0~12.0)ng/m l。本试剂盒检测结果与商用W allac AFP试剂盒检测结果相关系数为0.9988。结论:试剂盒各项指标达到规定的要求,可用于临床血清AFP检测。     

4种不同方法学对可溶性生长刺激基因2蛋白试剂盒性能的初步评价

目的 4种不同方法学对可溶性生长刺激基因2蛋白(sST2)检测试剂盒的性能进行评价,并以ELISA为参比方法进行方法学比对。方法 收集2021年1月至3月首都医科大学附属北京安贞医院42名不同疾病的住院患者和健康体检中心20名表观健康人临床检测剩余血清。参考美国临床和CLSI文件和行业标准要求,对POCT免疫层析方法试剂盒(简称A)、增强免疫荧光方法试剂盒(简称B)、乳胶免疫比浊方法试剂盒(简称C)和磁微粒化学发光方法试剂盒(简称D)进行精密度、正确度、线性范围、参考区间、抗干扰能力、可报告范围方面的性能评价,以ELISA经典试剂盒作为参比方法(简称P),进行方法学比对和医学决定水平处偏差的计算。结果 A试剂的批间CV>15%,A和C试剂的平均回收率>20%,类风湿因子(RF)对C试剂干扰CV>10%;A试剂与参比方法试剂检测结果决定系数R²<0.90;4种试剂的可报告范围均>8 000.00ng/mL;4种试剂和参比试剂在医学决定水平处偏差均>10%。结论 A试剂(POCT免疫层析方法)和C试剂(乳胶免疫比浊方法试剂盒)性能评...     

Lp- PLA2酶法测定试剂盒的临床应用评价

目的 验证北京九强金斯尔脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)酶法测定试剂盒的性能指标，评价其是否符合临床需求。方法 根据WS/T492-2016《临床检测定量测定项目精密度与正确度性能验证》、CNAS-GL037:2019《临床化学定量检验程序性能验证指南》及WST402-2012《临床实验室检验项目参考区间的制定》等文件要求，对北京九强金斯尔Lp-PLA2酶法测定试剂盒的正确度、精密度、线性范围、可报告范围和生物参考区间等性能进行验证，并与上海润鸿Lp-PLA2测定试剂盒进行方法学比对。结果 正确度验证中，金斯尔Lp-PLA2酶法测定试剂盒测定厂家工作标准品偏差均小于8%;检测配套高低两水平质控品，每个水平检测的重复性和实验室内精密度的变异系数(CV)均在±2%范围内；在线性区间评价试验中，得到线性回归方程Y=1.0054X-3.3466,R²=0.9998。验证线性区间为58.53～1 181.07U/L,最大可稀释倍数为64倍，临床可报告上限水平为75 588.48U/L。厂家提供的生物参考区间男性：230～728U/L,女性：194～640U/L(18～...     

肝活素酶联免疫吸附分析方法的建立及应用

目的 建立肝活素(Hepassocin)酶联免疫吸附分析方法(ELISA).方法 使用两株抗体,一株包被微孔板,另外一株用HRP标记.显色系统使用TMB显色.结果 测定范围在20 ～ 1000ng/mL,最低检测限在10ng/mL,回收率在93.9％～ 103.1％之间,批内和批间变异为9.7％和7.8％,正常参考值为＜20ng/mL.结论 用1000份临床样本考核本试剂盒,与参比试剂盒有很好的临床符合性,与参比试剂盒具有同等的临床使用价值.     

前列腺特异抗原化学发光免疫分析方法的建立及初步应用

建立的前列腺特异抗原(PSA)化学发光免疫分析(CLIA)使用2株抗PSAMcAb,一株McAb包被微孔板,另一株McAb与HRP连接。底物是鲁米诺/H2O2/对碘苯酚系统的双抗体夹心一步法,测定范围0.5～64ng/mL,最低检出值为0.13ng/mL,平均回收率为100.6%,批内和批间CV分别小于8.3%和11.5%,正常参考值小于3.5ng/mL。1000份血清临床考核,与参比试剂盒临床符合率一致,具有同等的临床诊断价值。     

高灵敏电化学发光法特异性测定人血清抗甲状腺球蛋白抗体

目的 通过竞争法一步法原理,建立一种检测人血清抗甲状腺球蛋白抗体(anti-TgAb)的电化学发光免疫分析(ELICA)方法.方法 将样本、三联吡啶钌标记抗体和生物素标记甲状腺结合球蛋白(thyroglobulin,Tg)抗原三者共同孵育形成抗体-抗原复合体,再加入链霉亲和素包被的磁微粒与该复合物共同孵育形成钌标记抗体-生物素抗原-链霉亲和素磁颗粒复合物,通过磁场固定洗涤去除游离物质;然后加入三丙胺得到相对光子强度(relative light units,RLU).检测该方法的灵敏度、线性范围、精密度、准确度及稳定性,并与罗氏公司的anti-TgAb检测试剂盒进行对比.结果 anti-TgAb的最低检测限为5 IU/mL,线性范围为10～1000 IU/mL,准确度为0.900～1.100,批内变异和批间变异均小于5％.与罗氏公司anti-TgAb检测试剂盒的相关系数r=0.996(n=50),稳定性测试(37℃,8d)中,各项性能指标变异程度均符合标准[线性相关系数r=0.9998,准确度低值0.94,准确度高值0.93,批内精密度(CV)高值3.77％,低值4.34％].结论 该方法各项性能指标(灵敏度、精密度、准确度、稳定性等)均能达到临床检测要求,可供临床检测使用.     

LiCA500全自动化学发光仪检测甲状腺项目的性能验证

目的 对LiCA500全自动光激化学发光免疫分析系统及配套甲状腺项目检测试剂盒(化学发光法)进行临床分析性能验证。方法 依据国家卫生行业标准(WS/T492-2016)和美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP系列文件的要求,对LiCA500全自动光激化学发光免疫分析系统检测抗甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody, TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody, TGAb)和甲状腺球蛋白(thyroglobulin, TG)的精密度、准确度、线性范围和参考区间进行验证,并与厂商声明的性能标准进行比较。对40份血清进行检测,并与传统的放射免疫法检测结果进行比对。结果LiCA500全自动光激化学发光免疫分析系统检测TPOAb、TGAb和TG的批内不精密度变异系数(CV)均≤8%,总不精密度均≤1/3 TEa;校准品检测均值与靶值的偏倚均≤1/2 TEa;线性回归方程斜率在0.992～1.010之间,R²均≥0.975;正常人血清样本的检测结果均在参考区间内;与放射免疫法检测结果进行线性回归分析,...     

动物组织中盐酸克伦特罗残留ELISA检测试剂盒的研制

目的本研究采用直接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)对动物组织中盐酸克伦特罗(CBL)残留量进行快速筛选检测。方法将CBL与蛋白质载体偶联制备了CBL-BSA和HRP-CBL结合物,以CBL-BSA免疫实验兔获得特异性抗体,并成功建立了CBL残留直接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。结果检测线性范围0.1-62.5 ng/mL,检测低限为0.10 ng/mL;尿、肝、肉和饲料的加标回收率为60.3%-115.0%;与英国Randox试剂盒对比测试结果无显著差异;重现试验变异系数为3.4%-7.2%;试剂盒贮藏在2-8℃5个月和30℃7 d质量稳定。结论本试剂盒具有操作简便、快速、灵敏等特点。     

双标记AFP及Free-β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的：研制能同时检测人血清AFP和Free-β-HCG的双标记时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）试剂盒。方法：铕（Eu3＋）标记抗AFP单克隆抗体,用钐（Sm3＋）标记抗Free-β-HCG单克隆抗体,采用双抗体夹心法建立AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂,对试剂的各项性能指标进行评价。结果：AFP分析灵敏度为0.1U/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.2%～5.9%和2.8%～6.3%,检测试剂的测量范围为（0.1～500）U/ml;Free-β-HCG分析灵敏度为0.25ng/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.5%～6.2%和3.5%～5.6%,检测试剂的测量范围为（0.25～200）ng/ml。孕妇血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,AFP和Free-β-HCG的相关系数分别为0.987、0.968,具有较好的一致性。结论：自制AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可替代国外同类产品。     

荧光免疫层析定量检测髓过氧化物酶方法的建立

目的：通过荧光免疫层析技术初步建立MPO荧光免疫层析定量检测方法。方法：采用羧基荧光微球，利用EDC一步法偶联标记抗体，对过程中EDC量、标记蛋白量与标记时间、保护液进行研究，选出最佳条件，并对线性范围、灵敏度、精密性等进行性能评价。结果：确定偶联过程中EDC 160 μg，标记蛋白125 μg、标记1.5 h；线性范围3.125~600 ng/ml，最低检出限0.9 ng/ml；精密性质控品(高、中、低)批内、批间变异系数均小于10%；通过与国外试剂盒（ELISA法）检测比对45份临床血清，相关性良好，R2=0.979 5。结论：成功建立荧光免疫层析快速定量检测MPO的方法，为冠心病的辅助诊断提供一种技术手段。     

测定癌胚抗原的吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种定量测定血清中癌胚抗原（CEA）含量的检测方法。方法根据双抗体夹心法实验原理,利用吖啶酯化学发光免疫分析技术-结合生物素-亲和素磁颗粒分离技术。结果方法的最低检测限为0.2ng/mL,线性范围为2.2~360ng/mL,批内变异为1.9%~2.2%,总变异为6.5%~8.1%,与ROCHE公司的癌胚抗原检测试剂盒（电化学发光法）测定结果的拟合方程为Y=0.9969X＋0.6168,相关系数为r=0.9921。结论本方法的各项指标均满足临床检测的要求,适合临床推广应用。     

普门电化学发光仪检测降钙素原的性能分析

目的分析普门(Lifotronic)eCL8000电化学发光仪检测降钙素原(procalcitonin,PCT)的性能。方法以降钙素原(PCT)作为检测指标,根据临床和实验室标准协会(CLSI)文件要求从精密度、正确度(方法学比对)、线性范围、生物参考区间等方面评价普门eCL8000电化学发光仪的性能。结果普门eCL8000电化学发光仪检测PCT的批内精密度变异系数CV高低值分别为2.60%和2.11%,批间精密度CV值分别为3.92%和2.22%。PCT检测结果最大偏倚为14.29%(≤1/2TEa),且与参考方法拟合相关系数R^2=0.9977。线性范围相关系数R2=0.9993,生物参考区间为≤0.05ng/mL。结论普门eCL8000电化学发光仪检测PCT整体性能良好,能满足实验室的工作要求,可用于临床标本的检测。     

罗氏Cobas8000 e602检测促甲状腺激素的性能验证

目的 对Cobas8000 e602电化学发光免疫分析仪模块检测促甲状腺激素(TSH)的性能进行验证和评估.方法 参考美国临床和实验室标准协会(CLSI)的有关文件和相关文献,对Cobas8000免疫检测系统测定TSH的精密度、准确性、线性范围、参考区间及不同模块间检测结果的相关性进行验证分析.结果 TSH低值、高值批内精密度的结果分别为1.9%、1.3%,均≤1/4 CLIA′88 TEa,批间精密度为2.2%、1.5%,≤1/3 CLIA′88 TEa;能力验证实验成绩80%,准确度合格;线性范围为0.446~89.76μIU/mL,与试剂盒线性范围相符;参考区间符合实验室要求;模块间结果比对R2≥0.95符合要求.结论 Cobas8000检测系统的主要性能均达到相关标准的要求,能够满足临床需求.     

全自动生化分析仪检测肌酸激酶同工酶质量分析性能验证

目的验证全自动生化分析仪定量检测系统检测肌酸激酶同工酶质量(CKMB mass)的分析性能,确保检验结果的准确。方法参照CLSI系列相关文件、国家相关卫生行业标准、并结合实际情况,对定量检测系统的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间等分析性能进行验证、评价,将实验室验证结果与质量允许范围进行比较;并对CKMB/CK活性升高或倒置现象进行验证。结果贝克曼AU5400全自动生化分析仪测定CKMB mass浓度在14.185、36.467 ng/mL时,实验室批内不精密度(CVr)分别为2.778%、2.172%,总不精密度(CVl)分别为4.507%、2.255%;与罗氏E602全自动电化学发光分析仪测定CKMB mass进行患者样本比对,回归方程Y=1.0277 X-0.5778,R2=0.9846,相关性良好,5、10、15、90 ng/mL浓度水平处的预期偏倚分别为-8.8%、-3.0%、-1.1%、2.1%,可接受;线性范围为1.865~186.34 ng/mL;临床可报告范围为1.865~1490.72 ng/mL;生物参考区间0~5 ng/mL适用于本实验室;能够很好的纠正实验室CKMB/CK活性假性升高或倒置的现象。结论贝克曼AU5400全自动生化分析仪测定CKMB mass的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围、参考区间等性能良好,能够规范检测、确保检测质量,满足临床需求。     

人血清抵抗素ELISA方法的研究及其临床初步应用

用兔抗人抵抗素(resistin)片断(22～34氨基酸残基)的多克隆抗体(PcAb)包被固相板,用辣根过氧化物酶(HRP)标记PcAb得HRP-PcAb.在包被PcAb的孔中加入抵抗素标准品(或待测样品),加入HRP-PcAb,形成PcAb-resistin-HRP-PcAb复合物,加酶底物邻苯二胺(OPD)显色,用酶标仪在492nm波长处测定OD值,绘制标准曲线.从标准曲线读出样本中抵抗素含量.本方法特异性强,灵敏度高,精密度好.该法测定范围0.5～100ng/mL,最低检出量0.5ng/mL,批内和批间CV%分别为3.4%和7.2%.50例2型糖尿病患者血清抵抗素含量为23.2±3.9 ng/mL,明显高于正常值16.0±2.5ng/mL.结果表明该法稳定,灵敏度适于检测人血清抵抗素水平.