β淀粉样肽前体蛋白N端319～335肽段APP17肽 对糖尿病大鼠外周神经损伤的防治作用

目的　研究β淀粉样肽前体蛋白中的319～335肽段(APP17肽)对糖尿病大鼠神经病变的保护作用。方法　链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病,皮下注射APP17肽4周,测定痛阈及大鼠坐骨神经肌电图,并取脊髓组织冰冻切片做NT3和NF免疫组化染色。结果　用APP17肽的糖尿病大鼠组的潜伏期及传导速度较糖尿病组显著加快,其痛阈较糖尿病组有提高(P<0.05)。免疫组化染色脊髓前角区大多角细胞神经元NT3和NF表达接近正常大鼠,阳性细胞计数及色素数值(反应染色强度)与糖尿病组比较P<0.05。结论　糖尿病大鼠坐骨神经的传导速度减慢,潜伏期延长,痛阈降低,其脊髓前角区运动神经元NT3与NF的表达明显减少。而给予APP17肽的大鼠组,在所观察的指标均接近正常组,提示APP17肽具有防治糖尿病神经元病变的功效。     

APP17肽对糖尿病大鼠脑枕叶视区皮层神经元退行性变的影响

目的 探讨APP17肽对糖尿病(DM)大鼠脑内视觉传导通路枕叶视区皮层神经元退行性变的影响。方法 用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱发DM模型，10周后取脑组织行免疫组化染色观察神经元内凋亡因子Bax、Bcl-2、Cyto C的表达。同时取枕叶视区皮层处脑组织作电镜观察。结果 DM组枕叶视区皮层17区内Bax、CytoC阳性反应神经元数目多、染色深，Bcl-2较正常组神经元数目少，APP17肽组Bax、Bcl-2、CytoC的表达均接近正常组。DM组大鼠枕叶视区皮层神经元超微结构出现明显损害，给予APPl7肽后病变有改善。结论 APP17肽可改善DM大鼠枕叶视区皮层神经元的退行性改变。     

APP17肽对DM大鼠海马神经元胰岛素和凋亡信号传导通路相关蛋白的影响

目的 观察糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些相关蛋白的表达及APP17肽对其表达的影响。方法 链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型，并用APP17肽治疗。用免疫沉淀和Western-blot法分析海马中信号传导及部分凋亡相关蛋白；电镜观察大鼠脑组织超微结构。结果 DM大鼠IGF－IRα、Akt/PKB、CREB表明明显降低，APP17肽治疗后明显上调（P＜0．05），GSK－3β、PP－1及凋亡相关蛋白Bax、AIF表达增加，治疗后则明显降低（P＜0．05）；超微结构表明APP17肽治疗后兴奋性突触小泡明显减少。结论 糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些重要蛋白表达异常，APP17肽部分纠正这些蛋白的异常表达，这可能是其保护DM大鼠海马神经元的机制。     

APP17肽对卵巢去势大鼠学习、记忆功能和海马神经NT-3、NF表达的影响

目的　探讨APP1 7肽是否能提高去卵巢大鼠学习、记忆功能及作用机制。方法　雌性大鼠分三组 :①正常组 ,②去卵巢组 ,③用APP1 7肽保护去卵巢组。通过水迷宫测试 ,观察行为学的改变。而后灌注固定 ,取大脑组织冰冻切片 ,做NT 3、NF免疫组化染色。结果　 (1 )行为学检查 :给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠游完全程的时间及错误反应次数均较未给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠少 (P<0 0 5)。 (2 )用APP1 7肽保护的卵巢去势大鼠海马区神经元神经营养素 3(NT 3)、神经丝蛋白 (NF)的表达与正常大鼠相似 ,阳性细胞计数及平均灰度 (反映染色强度 )与卵巢去势大鼠比较差异显著 (P <0 0 5)。结论　卵巢去势大鼠存在学习、记忆障碍 ,APP1 7肽具有防治因雌激素缺乏而致神经元退变的功效     

APP17肽对链佐星-大鼠海马胰岛素信号转导相关蛋白表达的影响

目的　通过免疫组化的方法 ,研究APP1 7肽对链佐星 (STZ)诱发的糖尿病大鼠海马神经元Akt PKB ,CREB ,GSK 3β以及Bax ,Bcl 2等蛋白表达的影响。方法　用STZ腹腔注射诱发糖尿病模型 ,并皮下注射APP1 7肽对糖尿病组进行治疗。 1 0周后行通道水迷宫测定 ,取脑组织进行Akt PKB ,GSK 3β以及Bax ,CREB ,Bcl 2的免疫组化染色。结果　糖尿病组海马内Akt PKB ,CREB的阳性反应神经元数目减少 ,染色淡。GSK 3β,Bax阳性神经元较对照组明显增多 (P <0 .0 1 )。Bcl 2阳性神经元数目 3组间相比无明显差异。糖尿病APP1 7肽治疗组与对照组相近。结论　糖尿病脑病大鼠海马存在胰岛素信号转导途径相关和凋亡级联反应相关蛋白的表达异常 ;APP1 7肽能改善这些蛋白表达 ,使之接近正常     

APP17肽对APP转基因小鼠Aβ相关蛋白表达的影响

目的研究淀粉样前体蛋白（APP）17肽对APP转基因小鼠（APPV717I）海马神经元β淀粉样肽（Aβ）相关蛋白表达的影响。方法将3月龄的APP转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组（隔日皮下注射0.16mg&#183;kg^-1,3次/w）,并以相同年龄未经转基因处理的C57BL/6J小鼠做正常对照组。8个月后行Morris水迷宫测定,小鼠脑组织灌注固定后进行Aβ1～42、Aβ1～16、APP-N端（52～80）、早老蛋白-1（PS-1）C端、APP的β位点剪切酶（BACE）等蛋白的免疫组化染色。结果模型组小鼠水迷宫实验的逃避潜伏期明显长于APP17肽治疗组和正常对照组（P〈0.05）,且模型组小鼠海马中Aβ1～42、Aβ1～16、APP-N端（52～80）、PS-1C端、BACE阳性反应神经元明显增加,染色深（P〈0.05）;APP17肽治疗组与正常对照组相近。结论APP转基因小鼠大脑中存在Aβ相关蛋白的高表达,由此引起记忆、学习能力的改变;而APP17肽能通过抑制β-分泌酶和PS-1的表达而减少Aβ生成,使之接近正常,并能改善小鼠的记忆、学习能力。     

APP17肽对D-半乳糖脑老化模型小鼠神经元凋亡的影响

目的观察D-半乳糖脑老化小鼠(DGAM)海马内凋亡相关蛋白Fas、Fas配体(Fas-L)、核因子κB(NFκB)、C-Fos、C-Jun的表达及其脑神经元是否发生凋亡,并观察APP17肽的作用. 方法用D-半乳糖(D-gal)制造脑老化小鼠模型,给模型小鼠皮下注射APP17肽进行预防或治疗.D-gal皮下注射8周后,小鼠灌注取脑,行脑切片,一部分切片做免疫组织化学染色,观察各组小鼠海马内凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、NFκB、C-Fos、C-Jun的表达;另一部分切片用凋亡试剂盒检测神经元是否发生凋亡. 结果对照组小鼠海马内Fas、Fas-L、C-Fos、C-Jun阳性染色神经元的数目分别为20.60±4.60、20.00±4.24、9.93±3.79、13.44±4.18,DGAM组小鼠上述各种抗体的阳性染色神经元数目分别为42.80±15.83、38.53±8.13、23.25±5.18、23.47±8.49,DGAM组比对照组明显增加(P＜0.05).DGAM组海马内NFκB的阳性染色神经元数目为13.93±5.31,比对照组小鼠的23.93±3.69明显减少(P＜0.05).用APP17肽预防或治疗后小鼠上述各种蛋白质的表达恢复到接近对照组小鼠的水平.对照组小鼠未发现凋亡的神经元;DGAM组小鼠脑神经元出现大量凋亡,用APP17肽预防或治疗后,神经元凋亡的数目与对照组小鼠接近. 结论 DGAM海马内凋亡相关蛋白表达异常,脑神经元发生凋亡.APP17肽可恢复各种凋亡相关蛋白的表达,阻止神经元凋亡,维持神经元的正常功能.     

丝胶对糖尿病大鼠脊髓及脊神经节细胞神经生长因子表达的作用

目的 探讨丝胶对2型糖尿病大鼠脊髓及脊神经节细胞神经生长因子(NGF)表达的作用.方法 36只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组(n=12).采用SP法观察坐骨神经对应脊髓节段(L4～6)和脊神经节细胞NGF蛋白的表达.结果 NGF蛋白免疫阳性产物为棕黄色细腻颗粒状,位于脊神经节细胞和脊髓前角细胞的胞质和胞核,以胞质为主.与正常对照组大鼠比较,糖尿病模型组大鼠脊髓前角细胞和脊神经节细胞NGF蛋白的表达明显降低(P＜0.01);与糖尿病模型组大鼠比较,丝胶治疗组大鼠脊髓前角细胞、脊神经节细胞NGF蛋白的表达明显升高(P＜0.01).结论 丝胶上调脊髓前角细胞和脊神经节细胞NGF的表达,保护糖尿病坐骨神经相关神经元胞体.     

丝胶对糖尿病大鼠脊髓及脊神经节细胞神经肽Y表达的作用

目的探讨2型糖尿病大鼠脊髓及脊神经节细胞神经肽Y(NPY)蛋白表达的变化及丝胶的保护作用。方法选用雄性SD大鼠36只,随机分为正常对照组、2型糖尿病模型组和丝胶治疗组(n=12)。采用免疫组化SP法观察坐骨神经对应的脊髓节段(L4-6)和脊神经节神经细胞NPY蛋白的表达。结果 NPY蛋白免疫阳性产物为棕褐色,呈颗粒状,主要分布于脊髓前角细胞和脊神经节细胞的胞浆和胞核,以胞浆为主。模型组大鼠脊髓前角细胞和脊神经节细胞NPY蛋白的表达明显高于正常对照组,丝胶治疗组大鼠脊髓前角细胞和脊神经节细胞NPY蛋白的表达明显低于模型组(P<0.01)。结论糖尿病模型大鼠脊髓前角细胞和脊神经节细胞NPY蛋白的表达明显上调;丝胶可通过下调NPY蛋白的表达,保护糖尿病坐骨神经相关神经元胞体。     

外周神经损伤大鼠的脊髓运动神经元组织形态学观察

将25只健康成年SD大鼠随机分为两组。对照组（5只）不作任何处理，统一处死，切取腰膨大之脊髓。实验组（20只）切断左侧坐骨神经后双重结扎，术后3、7、14和21d各处死5只，取腰膨大之脊髓。HE染色观察脊髓前角运动神经元形态变化，TUNEL标记观察脊髓前角运动神经元细胞凋亡情况，透射电镜下观察凋亡神经元细胞的超微结构。实验组坐骨神经切断后3～21d在相应的腰膨大脊髓前角可见到神经元数量减少和处于不同阶段的凋亡神经元。表明外周神经损伤能诱发脊髓前角运动神经元凋亡。     

APP17肽对糖尿病KK小鼠肾脏的保护作用

目的：观察App17肽对2型糖尿病小鼠尿白蛋白、总蛋白排泄量和肾脏超微结构的影响。方法：KKAy小鼠，根据血糖水平分为：血糖正常组（C组），糖尿病组（D组）和17肽治疗组（D＋17P组），17肽治疗组给予APP17肽皮下注射。12周后将3组小鼠处死。处死前1d，用代谢笼收集小鼠24h尿量，测总蛋白、白蛋白值；处死时心脏取血测血糖及血胰岛素水平；取肾皮质送电镜检查。结果：（1）D组小鼠肾小球基底膜明显增厚，近曲小管出现大量空泡和退变钙化的线粒体，而线和D＿17P组小鼠无此改变。（2）三组小鼠尿总蛋白和尿白蛋白排泄量由低到高依次为C≤D＋17P≤D（P＜0．05）。（3）D组和D＋17P组小鼠的血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平比C组明显升高（P＜0．05），D组和D＋17P组之间差异无显著性（P＞0．05）。结论：App17肽对KKAy糖尿病小鼠肾脏病变具有保护作用，但不是通过影响血胰岛素和血糖水平实现的。     

糖尿病大鼠海马神经元存活和凋亡相关蛋白的表达及APP17肽的作用

目的　探讨糖尿病 (DM )大鼠海马神经元存活和凋亡相关蛋白神经生长因子α(NGF)、I抗磷脂酰肌醇 3激酶 (PI 3K)、有丝分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)、凋亡诱导因子 (AIF)、细胞色素C和磷酸化 MAPK的表达以及APP17肽的作用。　方法　用链脲佐菌素腹腔注射诱发DM模型 ,并皮下注射APP17肽对DM大鼠进行治疗。 12周后 ,6只大鼠取脑组织行NGF、PI 3K、MAPK和AIF、细胞色素C抗体的免疫组化染色 ;6只取新鲜海马组织匀浆 ,以免疫沉淀并Western印迹方法检测PI 3K及磷酸化MAPK抗体的表达。　结果　DM组大鼠海马CA1区NGF、PI 3K、MAPK表达减少(P <0 0 1) ,AIF、细胞色素C阳性神经细胞增多 (P <0 0 1) ;APP17肽治疗 (DP)组与DM组比较 ,AIF(P <0 0 5 ) ,NGF、PI 3K、MAPK和细胞色素C的表达差异有显著意义 (P <0 0 1) ,接近正常对照(NC)组。Western印迹法显示DM组PI 3K比NC组降低 ,p MAPK的表达 3组无明显区别 ;DP组与DM组比较PI3 K表达增高。　结论　DM大鼠海马神经细胞存在功能异常 ,神经存活和凋亡蛋白的异常改变可能参与DM脑病的发生发展 ;APP17肽具有改善这一病理过程的作用     

弥可保对糖尿病周围神经病变治疗作用的实验研究

目的　为探讨弥可保（ 甲钴酰胺） 对糖尿病周围神经病变的治疗作用。方法　对链脲佐菌素（ Ｓ Ｔ Ｚ） 诱导的糖尿病周围神经病变大鼠早期给予弥可保５００μｇ／ｋｇ 肌肉注射，每天１ 次，２ 个月后行摇尾试验，测定坐骨神经运动传导速度和局部血流量，并分离腓肠神经，光镜下行腓肠神经形态学定量分析。结果弥可保治疗后大鼠热痛阈值显著低于糖尿病组（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，但坐骨神经运动传导速度和血流量差异不显著（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。大鼠腓肠神经有髓鞘神经纤维数量和密度显著高于糖尿病组，神经轴索和髓鞘显著大于糖尿病组（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。结论　弥可保对实验性糖尿病鼠周围神经损害有一定的防治作用。     

核转录因子κB在糖尿病大鼠坐骨神经中的表达及其与传导速度的关系

目的研究核转录因子出（NF-κB）在糖尿病大鼠坐骨神经中的表达动态变化及其意义。方法建立糖尿病大鼠模型后，分别在实验1个月、3个月、6个月时测定坐骨神经的传导速度和NF-κB的表达量。结果（1）坐骨神经传导速度：与正常对照（NC）组相比，糖尿病模型1个月组大鼠坐骨神经传导速度未见明显下降，3个月、6个月组则明显下降（P〈0．05）；（2）EMSA电泳条带灰度分析：与NC相比，NF-κB表达在糖尿病各组均明显增强（P〈0．05）。结论NF-κB在糖尿病大鼠坐骨神经中持续活化，推断NF-κB在糖尿病周围神经病变的发病机制中起重要作用。     

APP5肽类似物P165对糖尿病脑病小鼠海马胰岛素受体、胰岛素受体底物-1的影响

糖尿病大鼠存在学习记忆功能障碍和神经元信号转导通路相关蛋白表达异常,APP17肽(amyloid protein precusor319-335peptide)能够使这些异常改变恢复或接近恢复至正常水平[1~3]。APP5肽是APP17肽的活性序列,其类似物P165具有抗酶解能力。本研究观察糖尿病小鼠海马神经元胰岛素受体(insulin receptor,IR)、胰岛素受体底物-1(insulin re-ceptor substrate-1,IRS-1)的变化及P165对上述变化的影响。1材料与方法1.1实验动物及动物模型建立昆明小鼠,雄性,体重28~32g,SPF级,购自中国医学科学院药物研究所。随机分为3组,正常对照组(C组),糖尿…     

淀粉样肽前体蛋白片段免疫改善糖尿病小鼠脑内β淀粉样肽类蛋白的表达

目的　探讨用 β淀粉样肽前体蛋白 (APP)中的某些肽段免疫小鼠可否减轻小鼠脑内 β淀粉样肽 (Aβ)及其前体蛋白 (APP)的表达。方法　分别用 APP中的 31 9- 335肽段 (APP1 7肽 )、597- 62 4肽段 (APP2 8肽即 Aβ1 - 2 8)免疫小鼠 ,APP1 7肽、Aβ1 - 2 8由我室合成并纯化。第 3次免疫后 ,诱发小鼠糖尿病模型。小鼠分 4组 :即用 APP1 7肽免疫的正常小鼠 (1 7PC) ;用 APP1 7肽免疫后诱发糖尿病的小鼠 (1 7PDM) ;用 Aβ1 - 2 8免疫的正常小鼠 (2 8PC) ;用 Aβ1 - 2 8免疫后诱发糖尿病的小鼠 (2 8PDM)。第 5次免疫后 ,对各组小鼠脑切片进行 Aβ类抗体的免疫组织化学染色。结果　 1 7PC组小鼠海马内表达 Aβ1 - 4 2、 Aβ1 - 1 6及 APP C端抗体的阳性染色神经元数目多 ,而 1 7PDM组小鼠海马内上述各种抗体的阳性染色数目比 1 7PC组明显减少 (P<0 .0 1 ) ;2 8PC组小鼠海马内表达 Aβ1 - 4 2、Aβ1 - 1 6及 APP N端抗体的阳性染色神经元数目多 ,而 2 8PDM组小鼠海马内上述各种抗体阳性染色的数目比 2 8PC组明显减少 (P<0 .0 1 )。结论　糖尿病小鼠血 -脑屏障破坏 ,抗体进入脑组织 ,与β淀粉样肽或其前体蛋白结合而使之易被清除。     

前体蛋白N端11肽对糖尿病小鼠脑海马神经元神经生长因子、神经元纤维蛋白及早老蛋白1表达的影响

目的 探讨前体蛋白N端11肽神经营养作用的机理。方法 用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型。小鼠分为：正常对照组（C组），糖尿病对照组（DM组），UPAN治疗组（UPAN DM组）。UPAN DM组于糖尿病造模后2周起至STZ给药后4周皮下注射UPAN，每次0.20μg，1次/d，造模成功4周后，将动物处死，行灌注固定取脑组织作冰冻切片，进行神经生长因子（NGF），神经元纤维蛋白（NF）及早老蛋白-1（PS-1）免疫组化染色。结果 UPAN可恢复或部分恢复糖尿病小鼠脑海马神经元NGF、NF及PS-1中的141（N端258-277）表达。结论 UPAN对糖尿病小鼠的神经元退行性变可能有改善作用，PS-1N端和C端增加的意义尚需进一步研究。     

周围神经减压术对糖尿病神经卡压大鼠细胞因子表达的影响

目的 探讨周围神经减压术对DPN大鼠模型脊髓背根神经节中细胞因子表达的影响.方法 50只SD大鼠以STZ诱导糖尿病模型.2周后,筛选造模成功的大鼠32只随机分为糖尿病对照组（DM组,n=8）、糖尿病神经卡压组（DPN组,n=12）及糖尿病神经卡压＋外周神经减压组（DPND组,n=12）.DM组不予任何干预,DPN及DPND组制作坐骨神经卡压模型.6周后,DPND组予神经减压术,DPN组予假神经减压手术.于神经卡压前后及减压手术前后不同时间（术前、术后2周、术后6周）分别以Von Frey单丝测定各组机械痛阈.术后6周,观察各组脊髓背根神经节病理,并通过酶联免疫法测定背根神经节中TNF-α、环氧酶2（COX-2）、VEGF及神经生长相关蛋白-43（GAP-43）的表达.结果 DPND组行神经减压术6周后机械痛阈较减压手术前及DPN组改善（P＜0.05）;脊髓背根神经节炎性反应及水肿现象轻于DPN组,且背根神经节中TNF-α及COX-2表达较DPN组降低,其中COX-2改变差异有统计学意义（P＜0.05）.DPND组VEGF及GAP-43的表达较DPN组有增高趋势,但差异无统计学意义. 结论 神经减压术可改善周围神经卡压造成的糖尿病大鼠机械痛阈升高现象,这可能与其调节脊髓背根神经节中相关细胞因子的表达有关.     

Schwann细胞对大鼠坐骨神经缺损后脊髓前角运动神经元保护作用观察

目的观察Schwann细胞（SC）脊髓内移植对大鼠坐骨神经缺损后脊髓前角运动神经元的保护作用并探讨机制。方法取2 d龄SD大鼠坐骨神经培养、纯化、传代SC,并行纯度鉴定。另取48只SD大鼠制作坐骨神经缺损模型,随机均分为实验组和对照组。实验组大鼠于脊髓腹角注射SC;对照组给予等量生理盐水。两组分别于术后1、4、8周各取8只大鼠,取L4～6段脊髓,观察运动神经元数目并计算存活百分率,电子显微镜下观察神经元的超微结构。结果 SC经培养纯化后纯度为95.6%±2.5%。实验组伤侧神经元数目较对照组明显增加,运动神经元存活率为87.2%±4.6%,高于对照组的58.4%±5.4%（P〈0.01）。实验组神经元细胞器及大部分神经纤维的髓鞘结构较对照组清晰完整。结论 SC对大鼠坐骨神经缺损后的脊髓前角运动神经元具有保护作用,其机制可能是促进脊髓运动神经元的存活和再生。     

大鼠自体激活雪旺细胞体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元细胞的观察

目的观察大鼠自体激活雪旺细胞（AASC）体外诱导骨髓间充质干细胞（BMSC）分化为神经元细胞的可行性。方法取出生8周的Wistar大鼠,结扎双侧坐骨神经,进行雪旺细胞（SC）的自体激活,1周后取出坐骨神经,采用组织块法分离培养纯化AASC。冲洗Wistar大鼠股骨髓腔,梯度密度离心贴壁培养法培养BMSC、并鉴定。将AASC与BMSC共培养（共培养组）,以单独培养的BMSC作对照组。培养10d后分别采用Nestin、NF免疫组化染色鉴定BMSC分化的神经元样细胞。结果共培养组培养7d后无论是BMSC的数目还是Nestin、NF表达阳性的BMSC的数目与对照组相比,P均〈0．01。结论大鼠AASC在体外可诱导BMSC向神经元样细胞分化。