剔毒护肝方对慢乙肝中度患者Th1、Th2类细胞因子水平的影响

目的：观察剔毒护肝方对慢性乙型肝炎（CHB）中度患者Th1／Th2类细胞因子表达的影响。方法：用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测慢性乙型肝炎中度患者Th1类细胞因子1-干扰素（IFN-1）和Th2类细胞因子白介素-4（IL-4）,并比较治疗前后变化。结果：治疗后患者IFN-1水平明显增高（P〈0．05）,IL-4水平无明显变化（P〉0．05）。结论：剔毒护肝方能明显提高慢性乙型肝炎中度患者的Th1类细胞因子中IFN-1表达水平,改善患者Th1／Th2细胞功能失衡状态。有利于病毒的清除．     

扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞Ⅰ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨扶正化瘀３１９方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用扶正化瘀３１９方给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,ＥＬＩＳＡ法测定培养上清的Ⅰ型胶原含量,免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）蛋白表达,ＲＴＰＣＲ法分析Ⅰ型前胶原、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达量。结果：扶正化瘀３１９方药物血清能明显抑制肝星状细胞的细胞内外胶原生成率,抑制细胞的Ⅰ型前胶原基因表达及其胶原分泌,抑制肝星状细胞ＴＧＦβ１与蛋白表达。结论：扶正化瘀３１９方能明显抑制肝星状细胞的活化,对肝星状细胞Ⅰ型前胶原及ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机理。     

肝力克对肝纤维化大鼠肝组织ET-1mRNA、iNOSmRNA表达的影响

目的:观察肝纤维化大鼠肝组织中ET-1mRNA、iNOSmRNA的表达及中药肝力克对其的影响,探讨肝力克治疗肝纤维化的可能作用机制.方法:以40% CCl4 3ml/Kg体重皮下注射,连续9周,建立大鼠肝纤维化模型;将肝纤维化大鼠随机分为肝纤维化模型组、肝力克大、中和小剂量组,另设正常对照组.采用原位杂交法检测大鼠肝组织中ET-1和iNOS的mRNA表达情况.结果:肝纤维化模型组大鼠肝组织ET-1mRNA、iNOSmRNA阳性表达均较正常对照组明显升高(P＜0.01);应用肝力克能明显改善大鼠肝组织炎症活动度和纤维化程度,能明显下调肝纤维化大鼠肝组织iNOSmRNA表达,但对ET-1mRNA的表达无明显影响.结论:ET-1、iNOS参与肝纤维化的发生发展,肝力克下调肝组织iNOSmRNA的表达可能是其抗肝纤维化作用的机理之一.     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠TGF-β1表达的影响

目的：观察银杏叶提取物（GbE）的抗大鼠肝纤维化作用及其作用机理。方法：采用CCl4诱导大鼠肝纤维化，同时分别以3个剂量的GbE进行干预，并设复方鳖甲软肝片为对照组，6周后取肝组织进行HE及Masson染色，观察肝组织炎症活动度及肝纤维化程度，采用免疫组化法测定肝组织α-SMA、TGF-β1蛋白表达，采用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果：GbE各剂量组及复方鳖甲软肝片组肝组织炎症活动度及肝纤维化程度较模型组明显改善，α-SMA蛋白表达及TGF-β1 mRNA和蛋白表达也较模型组显著下降。结论：GbE可能通过抑制肝星状细胞的激活和转化，降低α-SMA蛋白表达及TGF-β1的转录及表达，抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生及发展。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

降脂护肝方对高脂饮食诱导脂肪肝大鼠的影响

目的探讨降脂护肝方对非酒精性脂肪肝(NAFL)大鼠的药效作用。方法采用高脂饮食复制NAFL大鼠。造模2周后随机分为模型组、降脂护肝方(大、中、小剂量)组、血脂康组。用药后,观察一般情况及肝功能、血脂,并进行肝脏病理检查。结果模型组肝组织出现严重的大疱样脂肪变性,肝脏炎症表现明显;降脂护肝方组的上述改变显著减轻,同时可显著降低体质量、肝指数以及血清ALT、AST、TG、TC,与模型组比较均有显著性差异(P均<0.05)。结论降脂护肝方对高脂饮食诱导的NAFL及其炎症有较理想的防治作用。     

丹酚酸A对实验性大鼠肝纤维化Ⅰ型胶原及其基因表达的影响

目的:研究丹酚酸A(SA-A)抗肝损伤、肝纤维化作用及其对Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法:采用CCl_4诱导大鼠肝损伤及肝纤维化,期间予SA-A灌胃治疗,另设秋水仙碱组、丹参组作对照,6w后进行肝组织病理学和Ⅰ型胶原免疫组化观察,肝组织羟脯氨酸(Hyp)、血清ALT、AST和白蛋白含量测定,并以RT-PCR法检测肝组织Ⅰ型胶原mRNA。结果:SA-A可降低血清ALT、AST水平及肝组织Hyp含量,减轻肝纤维化程度与秋水仙碱、丹参一致。此外,SA-A组肝组织Ⅰ型胶原mRNA表达明显轻于模型组。结论:丹酚酸A有显著的抗肝损伤、肝纤维化作用,对损伤肝组织Ⅰ型胶原mRNA表达有明显抑制作用。     

人参鳖甲刃对癌前大鼠肝组织TGF—β1,TGF—βⅡR表达的影响

目的：研究人参鳖甲丸对癌前大鼠肝组织ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－βⅡＲ表达的影响。方法：以ＤＭＮ诱导大鼠肝硬化、肝癌前病变的动物模型,检测用药后血清及肝组织指标的变化。结果：ＤＭＮ可诱导大鼠肝硬化、肝癌的发生,表现为ＡＬＴ、ＡＫＰ、α－ＧＴ、ＡＦＰ的增加,Ａｌｂ含量下降,肝细胞异常增生,肝癌结节形成,肝癌组织ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－βⅡＲ的表达减少;人参鳖甲丸具有保护肝细胞、抗肝纤维化、抑制肝细胞异常增生     

熏洗方对大鼠骨折后期僵硬关节滑膜Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1表达的影响

为探讨熏洗方治疗大鼠骨折后期关节僵硬的作用机理.以Wistar大鼠制作骨折后期关节僵硬模型,用dot blot杂交法和ELISA法分别测定踝关节滑膜Ⅲ型胶原mRNA表达水平及TGF-β1含量.结果显示模型组Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平明显升高,与正常对照组比较差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05);功能组和中药组Ⅲ型胶原mRNA、TGFβ1水平明显降低,与模型组比较差异有显著性(P＜0.01);中药组Ⅲ型胶原mRNA、TGFβ1水平显著低于功能组(P＜0.05).表明大鼠骨折后期关节僵硬滑膜Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平异常改变;降低Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平可能是熏洗方治疗骨折后期关节僵硬的重要机制之一.     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1及其I、II受体(TβRI、TβRII)和I、III型胶原(Col-I、Col-III)mRNA的表达。结果姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞Ⅰ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨扶正化瘀３１９方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞，并伟代培养。用扶正化阏９方给 正常大鼠灌胃，药物血清，温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率，ＥＬＩＳＡ 培养上清的Ｉ型胶原含量，免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）蛋白表达，ＲＴ－ＰＣＲ法分析Ｉ型前胶原、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达量。结果：扶正化瘀３１９方药物血清能明显抑制肝星状细     

清脂护肝方对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织病理及纤维化指标的影响

目的探讨清脂护肝方对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织病理变化及纤维化指标的影响。方法76只SD大鼠除正常组10只外,其余大鼠以高脂饲料（88％普通饲料＋2％胆固醇＋10％猪油）喂养造模,12周后验证非酒精性脂肪肝大鼠造模成功。将造模成功的大鼠再随机分为模型组、阳性对照组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组,各组给予相应干预措施共6周。实验结束后进行大鼠肝组织半定量分析和光电镜下病理学观察,并检测大鼠肝纤维化指标,包括血清Ⅳ型胶原（CIV）、层粘连蛋白（LN）及肝组织匀浆CIV。结果与模型组比较,清脂护肝方各剂量组肝组织匀浆CIV、血清LN明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。与模型组比较,清脂护肝方各剂量组脂肪变性程度明显减轻,差异有统计学意义（P〈0．01）。清脂护肝方中剂量组、高剂量组脂肪变性积分较阳性治疗组明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论清脂护肝方具有良好的抗纤维化及脂肪变性作用,能改善实验性脂肪肝大鼠肝组织病理变化。     

清脂护肝方对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织中Hck、Lyn、Fgr、SSeCKS表达的影响

目的观察不同剂量清脂护肝方对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝组织中Src家族相关激酶(Hck、Lyn、Fgr)和Src抑制的蛋白激酶C底物(SSe CKS)表达的影响,探讨其治疗NAFLD的作用机制。方法 2月龄SD大鼠58只,除正常组12只大鼠外,其余大鼠均喂养高脂饲料(80.5%普通饲料、2%胆固醇、12%猪油、5%蛋黄粉、0.5%胆酸钠),8周后随机抽取6只验证非酒精性脂肪肝大鼠造模是否成功;将造模成功的大鼠再随机分为模型组,清脂护肝方高、中、低剂量组,每组10只。清脂护肝方高、中、低剂量组予相应清脂护肝方药液灌胃6周,模型组和正常组以0.9%Na Cl溶液灌胃6周。实验结束后用免疫组织化学(IHC)法检测大鼠肝组织中Hck、Lyn、Fgr、SSe CKS的表达及其相关关系。结果与正常组比较,模型组SSe CKS、Hck、Lyn表达差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,清脂护肝高、中、低剂量组Hck、Lyn表达差异均有统计学意义(P<0.01),清脂护肝低、中剂量组SSe CKS表达差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。清脂护肝方对Fgr的表达无明显影响(P>0.05)。结论清脂护肝方能够调控SSe CKS、Lyn、Hck的表达从而减轻肝脏的炎症反应,是清脂护肝方治疗非酒精性脂肪肝的机制之一。     

补肾方对成骨细胞生长因子TGF—β1mRNA表达的影响

为探讨补肾方对成骨细胞转化生长因子－β（TGF-β1）mRNA表达的影响，将体外分离培养的新生SD大鼠的颅骨成骨细胞加入不同浓度的7能中药密骨片药液（100－10000μg.ml^-1）及阳性对照药物重组碱性成纤维细胞生长因子（rbFGF）。24小时后，利用自行制备的地高辛标记的鼠TGF－β1cDNA探针进行成骨细胞的核酸分子原位杂交分析，以其细胞内杂交阳性颗粒的平均光密度值代表TGF－β1mRNA的表达水平。结果显示随着密骨片药液浓度的增加，成骨细胞内TGF－β1mRNA表达明显高于阴性对照组；但500和1000μg.ml^-1的密骨片药液组的TGF－β1光密度值与5ng.ml^-1的bFGF组比较无明显差异9P＞0．05）。表明补肾中药密骨片可刺激成骨细胞TGF－β1的分泌和合成，从而促进骨形成和抑制骨吸收。这可能是该方能有效地防治骨质疏松的疗效机理之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的影响

目的 :探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法 :分离正常大鼠肝星状细胞 ,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 72h ,提取细胞总RNA ,RT PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF β1mRNA的表达。结果 :抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达。结论 :抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达     

生肌化瘀方及拆方对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达影响

目的 :观察生肌化瘀方及拆方对创面成纤维细胞的α1(Ⅰ )mRNA和α1(Ⅲ )mRNA表达的影响 ,探讨其促进创面修复呈皮肤修复的作用机理。方法 :采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞 ,以乳鼠皮肤成纤维细胞作对照 ,分别加入生肌方、化瘀方及生肌化瘀方大、小剂量药物血清 ,运用NthernBlot分子杂交法检测成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA的表达。结果 :生肌方能够加强创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,高于模型组 ;化瘀方能够降低创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,低于模型组 ;生肌化瘀方各剂量组Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达与正常组相比差异均无显著性。结论 :生肌化瘀方通过调控创面成纤维细胞的α1(Ⅰ )mRNA和α1(Ⅲ )mRNA表达使创面修复呈皮肤修复     

人参鳖甲丸对癌前大鼠肝组织TGF-β1、TGF-βⅡR表达的影响

目的：研究人参鳖甲丸对癌前大鼠肝组织ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－βⅡＲ表达的影响。方法：以ＤＭＮ诱导大鼠 肝硬化、肝癌前病变的动物模型,检测用药后血清及肝组织指标的变化。结果：ＤＭＮ可诱导大鼠肝硬化、肝癌 的发生,表现为 ＡＬＴ、ＡＫＰ、α－ＧＴ、ＡＦＰ的增加,Ａ１ｂ含量下降,肝细胞异常增生,肝癌结节形成,肝癌组织 ＴＣＦ－ β１、ＴＧＦ－βⅡＲ的表达减少;人参鳖甲丸具有保护肝细胞、抗肝纤维化、抑制肝细胞异常增生的作用,并能使癌 组织周围表达低下的ＴＧＦ－β１、ＴＣＦ－βⅡＲ 含量显著增加。结论：人参鳖甲丸的保护肝细胞、抗肝纤维化、抑制 肝细胞异常增生及提高ＴＧＦ－β１、ＴＣＦ－βⅡＲ表达可能是该方治疗慢性肝病、预防肝癌发生的主要机理。     

TGFβR1对肾阳虚不育大鼠睾丸精子及CYP19表达的影响

目的:观察转化生长因子-β1受体1对肾阳虚不育模型大鼠血清性激素水平、精子质量以及细胞色素P-19表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、正常+阻滞组及模型+阻滞剂组,每组10只。采用腺嘌呤诱导肾阳虚不育模型,在解剖显微镜下,对阻滞组大鼠睾丸间质内进行显微注射。采用放射免疫法检测各组大鼠性激素水平;精子自动检测仪检测精子的密度及活率;用免疫组织化学法检测大鼠睾丸中TGF-β1/CYP19表达。结果:与模型组相比,正常+阻滞组和模型+阻滞剂组睾酮(Testosterone,T)和雌二醇(Estradiol 2,E2)水平均显著升高(P<0.05),大鼠精子密度和精子活率以及快速前向运动精子率(A级)、满速前向运动精子率(B级)显著上升(P<0.05),睾丸CYP19水平均显著升高(P<0.05),正常+阻滞组升高最为明显,且模型+阻滞组与空白对照组无显著差异(P>0.05);与模型组相比,正常+阻滞组和模型+阻滞剂组TGF-β1均有降低(P<0.05),模型+阻滞组与空白对照组无显著差异(P>0.05)。结论:TGF-βR1在睾丸表达异常与肾阳虚不育模型大鼠精子质量提高和血清性激素水平改变有关。     

姜黄素对肝纤维化模型肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的:观察姜黄素对肝脏Ⅳ型胶原和转化生长因子β1mRNA的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:采用二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,姜黄素灌胃给药,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1mRNA的表达水平。结果:姜黄素能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1mRNA水平,与病理模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:姜黄素能够抑制肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1mRNA表达,从而发挥其抗肝纤维化的作用。     

壮骨止痛方对去势雌鼠转化生长因子β1mRNA及Ⅰ型胶原纤维mRNA表达的影响

目的:观察壮骨止痛方对去势雌鼠转化生长因子β1(Transforming growth factor-β,TGF-β1)m RNA及Ⅰ型胶原纤维mRNA表达的影响,并探究其治疗骨质疏松的具体机制。方法:将75只健康雌性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、壮骨止痛方组、无水乙醇提取A部位组,每组15只。除空白组、假手术组外,其余各组建立绝经后骨质疏松病理模型,假手术组去除卵巢周围相应体积脂肪。造模后5 d开始给药,13周后取股骨,原位杂交法检测分析骨组织中Ⅰ型胶原纤维mRNA和TGF-β_1mRNA的表达。结果:模型组TGF-β_1mRNA和Ⅰ型胶原mRNA表达明显低于空白组(P0.05),壮骨止痛方组、无水乙醇提取A部位组TGF-β_1m RNA和Ⅰ型胶原纤维mRNA表达明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:壮骨止痛方可能是通过提高TGF-β_1mRNA和Ⅰ型胶原纤维mRNA的表达,促进成骨细胞分化,发挥改善骨质疏松的效应。