人肺癌细胞株中hnRNP A2/B1表达的研究

目的 研究人肺癌细胞株中核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)A2/B1及hnRNP B1的表达。方法 采用特异性hnRNP A2／B2及hnRNP B1引物,应用RT-PCR方法研究肺癌细胞株hnRNP A2／B1 mRNA的表达,以抗hnRNP B1单克隆抗体免疫细胞化学染色方法研究肺癌细胞hnRNP A2/B1蛋白的亚细胞定位。结果 RT—PCR显示人肺腺癌细胞株SPC-A1及Y-90,小细胞肺癌细胞株NCI-H446及鳞癌细胞株A431均表达hnRNP A2／B1及hnRNP B1,其PCR产物分子量分别在661及1039bp左右,与预期大小的hnRNP A2/B1 cDNA片断相符。免疫细胞化学研究发现,肺腺癌细胞株SPC—A1及Y-90．小细胞肺癌细胞株NCI—H446及鳞癌A431的细胞浆及细胞核内均可见特异的hnRNP B1染色,鳞癌A43l及小细胞肺癌NCI—H446 hnRNP B1染色较肺腺癌细胞株SPC—A1及Y-90明显。结论 肺癌细胞株hnRNP A2／B1及hnRNP B1表达明显增高。     

克隆肺腺癌亲代细胞A549与耐顺铂细胞A549^DDP耐药相关基因的差异表达片段

目的：克隆肺腺癌耐药相关基因。方法以mRNA差异显示法技术检测耐顺铂肺腺癌细胞A549^DDP及其亲代细胞A549基因表达的差异。差异表达基因片段段被克隆并经Northern blot证实。结果获得4个基因表达的差异cDNA片段,经测序,同源性分析,其中2个片段（A1、D1）在GeneBank中未发现同源序列,一个片段（A2）与白介素－1β转化酶（Interleukin 1 β怀脲,ICE）89％同源性,一个片段（D2）与MM45s rRNA(Mouse musculus 45s pre-rRNA)基因100％同源。A1、A2cDNA片段仅表达于A549细胞,D1、D2cDNA片段仅表达于A549^DDP细胞。结论应用mRNA差异显示技术获得4个肺腺癌A549与A549^DDP间的基因差异3表达片段。2个新的差异表达片段以及与ICE、、MM45sRNA高度同源的基因片段是否与耐药相关尚需进一步研究。     

hnRNP A2/B1在胃癌中的表达及其临床意义

目的：在既往的胃癌蛋白质组研究中我们已发现hnRNP A2/B1具有较高表达,本试验进一步探讨hnRNPA2/B1在胃癌中的表达情况及其与胃癌临床病理特征的关系。方法：用免疫组织化学方法检测122例胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常胃粘膜中hnRNP A2/B1蛋白的表达。结果：hnRNP A2/B1在胃癌组织中核表达的阳性率为92.6%（113/122）,其中伴有胞浆表达的阳性率为7.3%（9/122）。在癌旁非瘤组织中核表达阳性率为87.7%（107/122）,未见胞浆表达。hnRNP A2/B1的表达状态与胃癌临床病理特征无关联。结论：在胃癌及癌旁非瘤组织中均可发现hnRNP A2/B1核表达,hnRNP A2/B1不能作为肿瘤相关的分子标志物。     

核内不均一核糖核蛋白 A2/B1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨核内不均一核糖核蛋白 A2/B1(hnRNP A2/B1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达特征及其临床意义.方法应用免疫组织化学S-P法检测hnRNP A2/B1在58例NSCLC及癌旁组织、支气管切缘和30例肺良性病变肺组织中的表达,并分析该蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系.结果 NSCLC组织中hnRNP A2/B1阳性表达率(63.79%)显著高于癌旁肺组织(43.10%)和肺良性病变肺组织(20.00%)(P＝0.000),癌旁肺组织中hnRNP A2/B1阳性率亦显著高于肺良性病变肺组织(P＜0.05).肺癌患者支气管切缘上皮增生组织阳性表达率(40.00%)显著高于正常支气管上皮(15.15%)(P＝0.032).低分化肺癌hnRNP A2/B1阳性表达率(78.13%)显著高于中-高分化肺癌(46.15%)(P＜0.05),伴有淋巴结转移肺癌阳性表达率(75.00%)显著高于无淋巴结转移肺癌(50.00%)(P＜0.05),Ⅲ+Ⅳ期肺癌阳性表达率(78.57%)显著高于Ⅰ+Ⅱ期(50.00%)(P＜0.05),T3+T4肺癌阳性表达率(77.42%)显著高于T1+T2(48.15%)(P＜0.05).不同组织学类型肺癌组织中hnRNP A2/B1表达水平无显著性差异(P＞0.05).结论 hnRNP A2/B1的异常表达在肺癌的发生、发展和转移中可能发挥着重要作用.检测hnRNP A2/B1对NSCLC的早期诊断和预测预后可能具有重要的临床意义.     

hnRNP K在肺癌组织中的表达

背景与目的 肺癌诊治中目前缺乏特异性指标,本研究旨在初步探讨hnRNP K蛋白在肺癌中的表达及意义.方法 采用SP免疫组织化学方法检测70例肺癌组织及27例对照肺组织中hnRNP K的表达.结果 免疫组化显示肺癌组织hnRNP K阳性率为64.9%(76/117),高于非肺癌组织33.3%(9/27)(P＜0.001),并且在胞浆、胞核均有表达.三种类型肺癌组织均有hnRNP K阳性染色.其中小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)阳性率73.7%(14/19)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)阳性率54.9%(28/51)相比,组间无统计学差异(P＞0.05).结论 证实hnRNP K在肺癌组织中呈高表达,但与肺癌组织类型无明显关系.     

克隆肺腺癌亲代细胞A_(549)与耐顺铂细胞A_(549)~(DDP)耐药相关基因的差异表达片段

目的　克隆肺腺癌耐药相关基因。方法　以mRNA差异显示技术检测耐顺铂肺腺癌细胞A54 9DDP及其亲代细胞A54 9基因表达的差异。差异表达基因片段被克隆并经Northernblot证实。结果获得 4个基因表达的差异cDNA片段 ,经测序、同源性分析 ,其中 2个片段 (A1、D1)在GeneBank中未发现同源序列 ,一个片段 (A2 )与白介素 1β转化酶 (Interleukin 1βconvertingenzyme ,ICE) 89%同源性 ,一个片段 (D2 )与MM45srRNA(Mousemusculus 45spre rRNA)基因 10 0 %同源。A1、A2 cDNA片段仅表达于A54 9细胞 ,D1、D2 cDNA片段仅表达于A54 9DDP细胞。结论　应用mRNA差异显示技术获得 4个肺腺癌A54 9与A54 9DDP间的基因差异表达片段。 2个新的差异表达片段以及与ICE、MM45sRNA高度同源的基因片段是否与耐药相关尚需进一步研究。     

抗hnRNP A2/B1多克隆抗体制备及其在非小细胞肺癌中的应用

目的:探讨自主制备抗hnRNP A2/B1多克隆抗体,对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的诊断、与病理特征的关系及其在预后中的价值。方法:IPTG诱导表达hnRNP A2/B1蛋白,制备兔抗人hnRNP A2/B1多克隆抗体,在45例NSCLC和16例肺炎性假瘤术后蜡块组织中,采用免疫组化的方法进行检测,并且与国外商品化的抗hnRNP A2/B1单克隆抗体进行比较,以观察自主制备的多抗在临床中的应用价值。结果:成功制备兔抗人hnRNP A2/B1多克隆抗体;应用该多抗在NSCLC组中免疫组化的表达阳性率为62.2%显著高于癌旁组织的40.0%(P=0.035)及炎性假瘤组的31.3%(P=0.033)。与临床病理特征的关系研究中发现,该蛋白高表达与年龄、吸烟呈正相关,与分化程度呈负相关;在预后中2组生存时间有差别,多抗阳性组的生存时间比阴性组的生存时间明显要短(P=0.048)。结论:获得抗hnRNP A2/B1的多克隆抗体,应用该多抗对NSCLC的诊断,病情预后具有一定的临床价值。     

核不均一核糖核蛋白A2/B1在非小细胞肺癌发病机制中作用的探讨

目的 观察核不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)、氧化还原因子1(Ref-1)、DNA依赖性蛋白激酶复合物DNA-PKcs和Ku mRNA之间的相互作用,并进一步探讨其在NSCLC发病机制中的作用.方法 采用免疫组化、Western blot及荧光实时定量PCR方法,检测NSCLC患者癌组织及正常肺组织hnRNP A2/B1的表达.采用免疫共沉淀结合逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,研究人肺鳞癌细胞株中hnRNP A2/B1蛋白是否与上述5种DNA修复酶的mRNA直接结合,然后采用免疫组化及荧光实时定量PCR方法,检测NSCLC患者癌组织及正常肺组织MGMT的表达情况.结果 免疫组化染色显示,hnRNP A2/B1定位于细胞核,hnRNPA2/B1在NSCLC癌组织中的表达阳性率(100%)和蛋白表达评分[(5.3±0.9)分]均显著高于正常肺组织[32%和(2.2±0.7)分,P＜0.01],在Ⅲ～Ⅳ期NSCLC组织中的表达略高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05),而与年龄、性别、组织学类型及吸烟状况无关(均P＞0.05).通过RT-PCR方法可以从人肺鳞癌细胞株免疫共沉淀产物中扩增出MGMT mRNA,提示hnRNP A2/B1与MGMT mRNA相结合.进一步的免疫组化染色结果显示,在NSCLC组织中,MGMT的表达阳性率为32.0%,明显低于正常肺组织(78.0%),蛋白表达评分[(2.2±0.8)分]也显著低于正常肺组织[(4.1±1.2)分,P＜0.01].荧光实时定量PCR结果显示,NSCLC组织中MGMT mRNA的表达量为1.8(0.6～3.1),明显低于正常肺组织[9.8(6.8～18.3),P＜0.01].结论 HnRNP A2/B1蛋白及mRNA在NSCLC组织中的表达均升高,hnRNP A2/B1与MGMT mRNA相结合,可能通过对MGMT mRNA的转录后调控参与NSCLC的发生.

Abstract：

Objective To study the expression of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1 (hnRNP A2/B1) in non-small cell lung cancer(NSCLC),and the interaction between hnRNP A2/B1 protein and mRNA of DNA repair enzymes O6-methylguanine DNA-methyltransferase(MGMT),8-oxoguanine DNA glycosylase(OGG1),redox factor 1(Ref-1),DNA-dependent protein kinase(including DNA-PKcs and ku). Methods The expression and distribution of hnRNP A2/B1 were detected by immunohistochemistry and Western blot on 50 NSCLC samples from patients who underwent resection in Zhongshan Hospital.The hnRNP A2/B1 mRNA expression was tested by real-time PCR.Coimmunoprecipitation(co-IP) combined RT-PCR was used to investigate whether hnRNP A2/B1 could be bound with the mRNA of the above mentioned 5 DNA repair enzymes in human lung cancer cell line(HTB-182).Then immunohistochemistry and real-time PCR were used to detect the expression of MGMT in the same group of patients. Results HnRNP A2/B1 protein and mRNA expressions were increased in the NSCLC tissues than that in the corresponding normal lung tissues.HnRNP A2/B1 was expressed predominantly in the nuclei of tumor cells.The positive rate and immunohistochemistry score of hnRNP A2/B1 in tumor tissue were significantly higher than that in normal tissue(P ＜0.01).In stage Ⅲ-Ⅳ NSCLC,hnRNP A2/B1 expression was higher than that in stage Ⅰ-Ⅱ.There was no significant differences of hnRNP A2/B1 expression among patients of different age,sex,histological type,and smoking history.The results of co-IP combined RT-PCR suggested that hnRNP A2/B1 is bound with MGMT mRNA,and MGMT expression is decreased in tumor tissue of NSCLC. Conclusions The results of this study show that hnRNP A2/B1 protein and mRNA are highly expressed in NSCLC,and hnRNP A2/B1 is bound with MGMT mRNA,which indicate that it might be one of the mechanisms of hnRNP A2/B1 participating in the pathogenesis of NSCLC.     

不均一核糖核蛋白 A2/ B1与肺癌

不均一核糖蛋白(hnRNP)A2/B1是一种RNA结合蛋白 ,在某些肿瘤组织如肺癌、乳腺癌中的表达增加 ,可能与癌症的发生相关。全文就hnRNPA2/B1的生物学特性,与肺癌关系 ,hnRNPA2/B1与微卫星不稳定性及端粒关系的研究进展作一综述。     

榄香烯乳对肺腺癌A549细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达的影响

目的：观察榄香烯乳对人肺腺癌细胞株A549细胞hnRNP A2／B1 mRNA及蛋白表达的影响。方法：选用A549细胞株，应用MTT法检测细胞增殖，显微镜下观察细胞形态变化，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测hnRNPA2／B1mRNA表达，蛋白印迹法检测hnRNP A2／B1蛋白表达。结果：榄香烯乳对A549细胞体外增殖有显著抑制作用，且呈时间和剂量依赖性，其IC50值为15μg／ml，hnRNPA2／B1mRNA及蛋白表达水平均有下降。结论：榄香烯乳可抑制肺腺癌A549细胞增殖，致其hnRNPA2／B1的mRNA和蛋白表达水平均有下降。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。