阿尔茨海默病与极低密度脂蛋白受体基因多态性的关联分析

目的：探讨上海地区汉族人群中极低密度脂蛋白受体（ＶＬＤＬ－Ｒ）基因多态性与阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ, ＡＤ）的相互关系及其在ＡＤ 中与载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因的相互作用。方法：应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）的扩增片段长度多态性（Ａｍ ｐ－ＦＬＰ）方法,在１０３ 例ＡＤ患者和８０ 例健康老人及７６ 例ＶＤ患者中观察了ＶＬＤＬ－Ｒ基因、ＡｐｏＥ基因多态性的分布。结果：（１）ＶＬＤＬ－Ｒ基因多态性与ＡＤ 之间不存在任何关联（Ｐ＞ ０．０５）;（２）在进行ＡｐｏＥε４ 基因分型后,ＶＬＤＬ－Ｒ 基因各等位基因仍与ＡＤ无关。结论：ＶＬＤＬ－Ｒ 基因微卫星多态性可能并不构成ＡＤ患者的风险因子,这种关系不受ａｐｏＥε４ 基因的影响     

聚合酶链反应检测载脂蛋白E表型及其临床应用的研究

用人工合成的寡核苷酸引物，进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），体外扩增合成载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因的特异性ＤＮＡ片段，用此引物检测１０４例健康成人和３５例冠心病人（ＣＨＤ）载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）的表型，共检出５种常见的ＡｐｏＥ表型，健康成人与ＣＨＤ患者比较，ＣＨＤ患者的ＡｐｏＥ３／３型频率明显降低，而含Ｅ２或Ｅ４异构体的频率增加．等位基因频率分布，ＣＨＤ患考与健康成人比较，其ε明显减少，而ε２和ε４有升高趋势，故对人群进行ＡｐｏＥ表型普查，确定不同ＡｐｏＥ表型个体，并寻找其与脂类代谢之间的关系，在动脉粥样硬化（ＡＳ）和ＣＨＤ的防治中有重要意义．     

冠心病42例血浆载脂蛋白E基因型及脂类、内皮素、一氧化氮水平检测

目的：为了观察血浆载脂蛋白Ｅ（ＡＯＰＥ）基因多态性与冠心病（ＣＨＤ）患者血浆脂类水平及动脉粥样硬化病变进程的关系。方法：测定４２例ＣＨＤ患者的血浆ＡｐｏＥ基因型,分别测定,１：Ｅ２／２＋Ｅ２／３＋Ｅ３／３和１：Ｅ２／４＋Ｅ３／４＋Ｅ４／４两组患者血浆甘油三酯（ＴＧ）,胆固醇（ＴＣ）,高密度脂蛋白－胆固高脂蛋白－胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）,低密度脂蛋白－胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）,ＡｐｏＥ,载脂蛋白Ａ１（Ａｐｏ     

脑血管性痴呆载脂蛋白Eε4等位基因及血脂的关联分析

为探讨载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）外显子４基因多态性与血管性痴呆（ＶＤ）的关系,采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）检测４９例ＶＤ患者和１０８例同龄对照,同时检测血脂水平。结果发现ＶＤ组ＡｐｏＥε４等位基因频率（０．２１４）明显高于对照（Ｐ〈０．０１）。ＶＤ组血清总胆固醇（ＴＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）和ａｐｏＢ高于对照组（Ｐ〈０．０１）。提示ＡｐｏＥε４等位基因     

长沙地区小儿载脂蛋白E基因多态性及其对血脂的影响

采用改良的ＰＣＲＲＦＬＰ方法测定长沙地区２９１名儿童载脂蛋白（Ａｐｏ）Ｅ基因型。结果发现ε２,ε３,ε４等位基因的频率分别是００８１,０８５７和００６２。ＡｐｏＥ等位基因频率分布无明显的性别差异（Ｐ＞０．０５）。Ａｐｏε２等位基因携带者与其它ＡｐｏＥ基因携带者相比,血高密度脂蛋白胆固醇、ＡｐｏＥ和ＡｐｏＡ１浓度较高,而总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、ＡｐｏＢ１００水平较低（Ｐ＜０．０５）。ε４等位基因携带者的血脂、脂蛋白、Ａｐｏ改变则相反（Ｐ＜０．０５）。结果还显示ＡｐｏＥ等位基因对血甘油三酯、脂蛋白（ａ）浓度的影响不明显（Ｐ＞０．０５）。ε２,ε３,ε４等位基因与血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、ＡｐｏＢ１００浓度呈等级正相关,与高密度脂蛋白胆固醇、ＡｐｏＡ１及ＡｐｏＥ水平呈等级负相关（Ｐ＜０．０５）。ＡｐｏＥ基因对血清脂类的影响存在性别差异。ＡｐｏＥ基因多态性影响小儿血清脂类代谢。     

PCR-SSCP法检测小儿原发性肾病综合征载脂蛋白E基因多态性

目的探讨小儿原发性肾病综合征（ＮＳ）脂质代谢紊乱机制。方法测定了６８例小儿ＮＳ及 １２０例健康对照组 ７项血脂指标,采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ ＰＣＲ－ ＳＳＣＰ）技术检测其载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性。并采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＮＳ组尿蛋白类型。结果所有７项指标在携不同 ＡｐｏＥ等位基因（Ａｐｏε２、Ａ ｐｏε３及 Ａｐｏε４）的患儿之间均无显著性差异（ Ｐ＞０． ０５）,而携Ａｐｏε３等位基因型的选择性蛋白尿（ＳＰＵ）组血总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）显著高于同型的非选择性蛋白尿组（ＮＳＰＵ）（ Ｐ＜ ０． ０５）。 ＮＳＰＵ组的 Ａｐｏε２等位基因频率显著高于健康儿童组（ １２．９６％ ｖｓ ５． ００％, Ｐ＜ ０． ０５）。结论小儿原发性 ＮＳ的脂质紊乱主要与其蛋白代谢异常有关而与ＡｐｏＥ基因多态性无明显关系。但携 Ａｐｏε２等位基因的 ＮＳＰＵ患儿有进行性肾脏损害的可能。     

吉林地区正常汉族人群载脂蛋白E基因多态性分布状态的研究

目的：研究载脂蛋白（Ａｐｏ）Ｅ基因多态性在吉林地区正常汉族人群中的分布状态。方法：应用聚合酶链反应－－限制性片段和蔗多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法先扩增出ＡｐｏＥ基因第４外显子内的２２７ｂｐ片段，继以限制性切酶Ｃｆｏｌ酶解消化，８％聚丙烯酰胺凝胶电泳，最后银染显带判定基因型，度计算等位基因频率。结果；本实验共检测分析了２０６例吉林地区正常汉族人的ＡｐｏＥ基因型及等位基因频率。结果表明合子ε３／３基     

2型糖尿病合并冠心病患者载脂蛋白E基因多态性研究

研究载脂蛋白Ｅ基因多态性与２型糖尿病患者合并冠心病的关系。方法：用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）,研究了１２５例２ 病（ＤＭ）患者和７１例健康检者ＡｐｅＥ基因型,分析了ＡｐｏＥ基因多态性与２型糖尿及其合并冠心病的关系。结果（１）糖尿病缄（ＤＭ）糖尿病合并冠心病组（ＤＣ）及对照组等位基因频率分别为５．５％、８９．７％、４．８％,４．１％、８５．３％、１０．６％和５．６％、８     

脑梗死患者血脂水平与载脂蛋白B基因多态性和性别关系的研究

目的研究动脉粥样硬化性脑梗死（ＡＣＩ）患者血脂水平与载脂蛋白Ｂ（ＡｐｏＢ）基因多态性及性别之间的相关性。方法运用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对８６例ＡＣＩ患者和５５例正常对照（ＮＣ）进行ＡｐｏＢ的基因分析。结果①两组间等位基因频率分布无差异（Ｐ＞０．０５）;②两组间存在总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ）、载脂蛋白Ａ（ＡｐｏＡ）、载脂蛋白Ｂ（ＡｐｏＢ）、脂蛋白（ａ）［Ｌｐ（ａ）］水平的差异（Ｐ＜０．０５）;③ＡＣＩ组血脂水平异常与性别有关（Ｐ＜０．０５）。结论ＡｐｏＢ基因多态性对ＡＣＩ患者血脂水平无明显影响;性别对脂质代谢有一定影响。     

载脂蛋白E基因对血脂代谢的调节及其与冠心病的关系

应用改良的聚合酶链反应－限制性片断长度多态性的方法，测定１０２例正常人和１１８例冠心病患者的载脂蛋白（Ａｐｏ）Ｅ基因型；并分析该基因对两组受试者的血脂、脂蛋白和Ａｐｏ水平的影响。结果显示，ＡｐｏＥ４等位基因具有升高血浆总胆固醇（ＴＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）和ＡｐｏＢ１００的作用；而ＡｐｏＥ２等位基因则有相反的作用。冠心病组ＡｐｏＥ４等位基因频率显著高于对照组。提示ＡｐｏＥ基因对血脂水平     

NANOPARTICLE AS A NEW GENE TRANSFERRING VECTOR IN SPECIFIC EXPRESSION GENE

To evaluate the possibility and efficiency of nanoparticle as a new vector in specific gene transference.Methods. Nanoparticle-DNA complex was prepared with Poly- eM-lactic-co-glycolic acid (PLGA) bearing anti-sense monocyte chemotactic protein-1 (A-MCP-1), a specific expression gene, and the package efficiency, release progress in vitro, and the size of the complex were determined. The possibility of the new vector was evaluated with genomic DNA PCR by transferring gene into cultured smooth muscle cells (SMC), cationic lipids as a control. For study in vivo, jugular vein-to-artery bypass grafting procedures were performed on 20 New Zealand white rabbits, of which 6 grafts were transferred with nanoparticle-A-MCP-1 (200 μg), 6 with A - MCP - 1 (200 μ g) by cationic liposome, 4 with LNCX plasmid, and 4 as control. Fourteen days after the grafts were harvested, the expression of A-MCP-1 and its effect on MCP-1 in vein grafts were detected by dot blot, and the morphologic evaluation of grafts was performe     

用变性高效液相色谱法检测遗传性因子XⅢA链基因突变

目的:观察变性高效液相色谱(DHPLC)法检测凝血因子XIIIA链基因突变的实用价值。方法:用聚合酶链反应(PCR)扩增正常样品和有XIIIA基因603-606delAAGA突变患者的XIIIA链基因外显子5;用单链构象多态性(SSCP)及DHPLC检测分析扩增的外显子5。结果:SSCP显示患者有异常的区带,患者的DHPLC结果出现异常洗脱峰,与SSCP的结果一致。结果表明DHPLC能检测FXIII因子A链基因突变。结论:DHPLC技术是一种筛查基因突变的快速、简单、可靠的方法。     

免疫核糖核酸基因文库构造——免疫核糖核酸基因cDNA合成

从大肠杆菌免疫的BALB/C鼠的脾脏中提取iRNA,经oligod(T)纤维素柱用亲合层析法分离poly A~+RNA,以此poly A~+RNA为模板合成了免疫核糖核酸基因的互补DNA(cDNA)。经碱性琼脂糖凝胶电泳和放射自显影分析表明,所获得的cDNA双链其分子量范围2.0～0.5kb,适合于用载体质粒构造基因文库。本文对逆转录反应和双链cDNA合成反应中的技术条件进行了讨论。     

用等位基因特异性PCR进行β-地中海贫血产前基因诊断

目的:对两对有重型β-地中海贫血患儿家族史的夫妇进行产前基因诊断。方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术检测两对夫妇及其高风险胎儿的5种β-地中海贫血突变类型:CD41-42(-CTTT)缺失突变、IVSII654(C→T)突变、CD17(A→T)无义突变、TATA盒nt-28(A→G)突变和CD71-72(+A)移码突变。结果:家系1的父亲为TATA盒nt-28(A→G)/N杂合子,母亲为CD41-42(-CTTT)/N杂合子,胎儿正常;家系2的父亲为CD41-42(-CTTT)/N杂合子,母亲为CD71-72(+A)/N杂合子,胎儿为CD41-42(-CTTT)/CD71-72(+A)双重杂合子;上述2例胎儿出生及引产后的基因分析验证结果与产前基因诊断完全一致。结论:等位基因特异性PCR能准确地对β-地中海贫血高风险胎儿进行产前基因诊断,对预防重型β-地中海贫血患儿的出生具有重要意义。     

胃癌组织ras和P53基因突变的检测

（１）目的 研究胃癌组织中Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变情况,（２）方法 采用ＰＣＲ ＲＦＬＰ技术,分析４１例胃癌标本中Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变。（３）结果 本组４１例中,１２例（２９．３％）发生Ｐ５３基因突变,１６例（３９．１％）发生ｒａｓ基因突变,１全负时发生Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变。（４）结论 Ｐ５３和ｒａｓ基因突变与胃癌的发生密切相关,在胃癌的发生中可能起重要作用。     

人GDNF基因的克隆

目的：克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法：从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴＰＣＲ方法扩增出了一段约５５８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆于ｐＵＣ１８载体中，进行全序列分析。结果：证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的人ＧＤＮＦ基因。与发表于ＧｅｎｅＢａｎｋ上的序列相比，发现该研究克隆的基因有一段７８ｂｐ的核苷酸序列缺失，但不影响密码子的阅读框。结论：克隆到了编码正确的人ＧＤＮＦ的ｃＤＮＡ全序列，对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。     

Tet-On基因表达系统定量调节荧光素酶基因在CHO细胞中的表达

目的：应用ＴｅｔＯｎ基因表达系统建立ＣＨＯＴｅｔＯｎ细胞株，通过强力霉素（Ｄｏｘ）调节荧光素酶基因的表达。方法：ｐＴｅｔＯｎ质粒转染ＣＨＯ细胞株，经Ｇ４１８筛选，得到稳定表达株ＣＨＯＴｅｔＯｎ。ｐＴＲＥＬｕｃ质粒瞬时转染ＣＨＯＴｅｔＯｎ克隆１至３０，培养基中加入２ｍｇ·Ｌ－１Ｄｏｘ或不加Ｄｏｘ，培养７２ｈ后检测荧光素酶活性。结果：克隆１８、２８、２９当培养基中加入Ｄｏｘ（即“Ｏｎ”状态）时荧光素酶活性高，当培养基中不加Ｄｏｘ（即“Ｏｆ”状态）时荧光素酶活性低，故选择克隆１８、２８、２９作为高表达、低背景的ＣＨＯＴｅｔＯｎ细胞株。结论：ＣＨＯＴｅｔＯｎ细胞株的建立，可利用四环素及其衍生物调节多种外源基因的表达，有效调控基因表达的时间和水平，定量诱导毒性蛋白的表达，增加治疗的疗效和安全性，有望为基因治疗提供一条可控的安全途径。     

银屑病易感基因的研究进展

多数研究认为银屑病是一个多基因,主要涉及MHC（人类HLA）的遗传性皮肤病,并在八个染色体上确定了九个银屑病易感基因位点（PSORS1-9）。PSORS1（银屑病易感基因位点1）是一个主要的银屑病易感位点,大多数的研究显示HLA-Cw6是PSORS1候选区域主要的危险等位基因。本文主要介绍PSORS1及HLA中重点研究的银屑病相关等位基因的研究进展,并简要概括其他银屑病易感基因位点的研究发现。     

人IL-21cDNA的克隆及重组腺病毒表达载体的构建

目的：构建含人IL-21基因的重组腺病毒表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤研究奠定基础。方法：从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,将其连接到进入载体pENTR1A,然后经LR重组转入到腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST中,构建含IL-21基因的腺病毒载体（Ad-IL-21）,并进行测序鉴定和PCR鉴定。结果：Ad-IL-21表达载体测序结果与GenBank中IL-21基因序列一致,Ad-IL-21经PCR扩增出IL-21基因片段。结论：成功构建携带人IL-21基因的重组腺病毒表达载体。     

p53和ras基因突变及HPV感染与喉鳞癌的关系

①目的　探讨人乳头瘤病毒 16 ,18型 (HPV16 ,18)感染 ,抑癌基因p5 3和癌基因ras突变与喉鳞癌的关系 ,并初步分析 3种致癌因素的相互关系。②方法　应用聚合酶链反应 (PCR)和限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术 ,检测 40例喉鳞状细胞癌组织中 p5 3基因第 5 ,7外显子及ras基因 (N ras ,K ras,H ras)第 12密码子的突变情况 ,同时用PCR技术检测 40例标本中HPV16 ,18的感染情况。③结果　 40例标本检出HPV16阳性标本 14例 ,HPV18阳性标本 4例。 4例标本 p5 3基因第 5外显子第 143密码子发生突变 ,其中 1例HPV16阳性 ,p5 3基因第 7外显子未发现突变。 9例标本ras基因发生突变 (N ras 6例 ,K ras 2例 ,H ras 1例 ) ,其中 2例HPV16阳性 ,但未见 p5 3与ras基因同时发生突变者。HPV阳性和阴性标本中p5 3基因突变率、ras基因突变率的差异均无显著性(χ2 =0 .10 1,1.392 ,P >0 .0 5 )。④结论　HPV感染、p5 3和ras基因突变与喉鳞癌的发生密切相关 ,三者之间的关系尚待进一步探讨。