应用实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的探讨一种快速、准确诊断唐氏综合征的方法。方法采用实时荧光定量PCR技术，对25例唐氏患者、50名正常人外周血标本，扩增21号及1号、19号染色体上的多态位点，定量分析比较正常组及唐氏患者组的4对△Ct值。结果唐氏患者组△Ct值明显低于正常组，两组比较差异有统计学意义（P〈0．001）。初步建立了临床应用的参考值范围，可以有效区分出唐氏样本和正常样本。结论应用实时荧光定量PCR技术可快速、准确诊断唐氏综合征，为唐氏综合征的快速产前诊断开辟了新的途径。     

应用FQ-PCR方法快速产前诊断Down综合征

目的为探讨FQ-PCR方法快速、准确的应用于产前诊断Down综合征。方法分别提取46例外周血(包括16例确诊为Down综合征患儿和30例正常对照)和40例唐氏筛查高风险羊水细胞基因组DNA,FQ-PCR方法扩增基因D21S11、S100β(位于21号染色体)及基因UFD1L(位于22号染色体)。结果正常人羊水基因定量R1(D21S11/UFD1L)=1.095±0.213,R2(S100β/UFD1L)=1.087±0.146,Down综合征R1、R2分别为1.597±0.156、1.604±0.235,经t检验两组差异都有统计学意义。结论该方法无须细胞培养、操作简单,是一种快速准确产前诊断Down综合征的良好方法。     

利用双色实时荧光定量PCR法快速进行产前诊断

目的利用双色实时荧光定量PCR法进行21-三体与18-三体的快速产前诊断。方法分别以21号的APP基因与18号染色体的TYMS基因为目的基因设计引物和不同荧光标记的Taqman探针,以相对定量指标△CT值判断21号与18号染色体的数目;并将其检测结果与传统染色体核型分析方法进行对比。结果60例羊水细胞区分出了4例21-三体,3例18三体标本,正常人的△CT值为-0．89±0．22,21-三体患者及18-三体患者的ACT值分别-0．04±0．17和-1．55±0．24,患者与正常人标本组之间无交叉重叠,均有明显差异（P〈0．001）。结论实验建立的双重实时荧光定量PCR能用于快速诊断羊水细胞的21-三体和18-三体等非整倍体。     

实时荧光定量PCR法筛查唐氏综合征的实验研究

目的建立一种无创性、高特异性的快速筛查唐氏综合征（Down’s syndrome，DS）的检测方法。方法采用实时荧光定量PCR技术对正常人和DS患者外周血样本的有核细胞进行检测，根据△Ct值的差异建立检测方法。结果正常组和唐氏组△Ct值有显著性差异（P〈0．001），初步建立了实时荧光定量PCR筛查唐氏综合征的快速检测方法。结论实时荧光定量PCR具有无创性、特异性高且简单、快速等优点，适用于唐氏综合征产前筛查。     

应用短串联重复序列快速诊断唐氏综合征

目的在实时荧光定量PCR技术的基础上建立一种诊断效果较好、简便、经济的快速诊断唐氏综合征的技术。方法以D21s1411,D21s1259为检测位点,D19s222为参照位点,用SYBR GreenI作为荧光染料,采用荧光定量PCR技术检测37例唐氏综合征及13l例非唐氏综合征胎儿羊水标本的STR片段,分析唐氏综合征组及非唐氏综合征组的4对△Ct值。结果1．非唐氏征组的△Ct1411。及△Ct1259的均数、标准差及95％置信区间均为正值,唐氏征组的△Ct1411及△Ct1259的均数及95％置信区间均为负值;两组间95％置信区间互不重叠。2．非唐氏征组与唐氏征组位点D21s141l及D21s1259△Ct值差异均有统计学意义,分别为t=12．088,P=0．000及t=13．884,P=0．000.3．用D21s1411进行诊断时,ROC曲线下的面积为0．9291,将△Ct1411 0．1327为截止值时的灵敏度与特异度之和最大;用D21s1259进行诊断时,ROC曲线下的面积为0．985,将△Ct1259=-0．2016作为截止值时的灵敏度与特异度之和最大。结论1．以D21s141l和D21s1259为检测位点,应用荧光定量PCR方法检测羊水标本的STR片段,可有效判断胎儿是否为唐氏综合征,检出率达91％以上。2．用SYBR GreenI作为染料进行荧光定量PCR检测,操作步骤简单,成本较低,效果良好。     

应用STR-荧光定量PCR行产前唐氏综合征诊断的初步研究

目的建立快速高效的产前诊断唐氏综合征的方法。方法选取21号染色体上唐氏综合征关键区域内的4个串联重复序列（STR）（D21S1413,D21S1414,D21S1446,D21S1437）作为遗传标记,采用荧光定量PCR扩增技术（QF—PCR）及片段分析技术来检测178例羊水标本,并与羊水标本的染色体核型分析结果相比对,评价QF—PCR方法的特异性和灵敏度。结果所有178例羊水标本中经核型分析证实有19例为21三体,另有2例为性染色体数目异常,19例唐氏综合征样本均可由QF—PCR法扩增检出。19例唐氏综合症样本,采用4对STR引物同时检测,阳性诊断率达100％。结论基于STR的QF—PCR技术具有简单、快速及准确等优点,对唐氏综合征大规模的产前基因诊断具有很好的临床价值。     

实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的　探讨快速诊断唐氏综合征的检测方法 .方法　采用实时荧光定量PCR技术 ,检测唐氏患者 2 3例、正常人 33例 ,定量分析比较ΔCt值 .结果　正常组和唐氏组ΔCt值有显著性差异 (p <0 .0 0 1) ,并建立了相应的参考值范围 .结论　实时荧光定量PCR具有简单、快速、特异性高等优点 ,可用于快速诊断唐氏综合征     

单细胞实时荧光定量PCR结合比较阈值法在诊断唐氏综合征中的应用

目的探讨单细胞水平实时荧光定量PCR技术对于诊断唐氏综合征的应用价值。方法22例唐氏综合征患者及胎儿、40名正常对照外周血或脐血经梯度离心、显微操作分离单个淋巴细胞，应用引物延伸预扩增及实时荧光定量PER技术扩增基因组12号染色体上GAPDH基因、21号染色体上S100B基因和DSCR1基因。比较病例组与对照组ACT值有无差异，计算病例组S100B／GAPDH、DSCR1／GAPDH的值。结果两组间ACT值差异有统计学意义（P〈0．01），病例组低于对照组。病例组S100B／GAPDH、DSCR1／GAPDH值分别为1．891（1．563～2．287）、1．840（I．562～2．168）。结论实时荧光定量PCR是一种可信的诊断方法，为唐氏综合征的无创性产前诊断及植入前遗传学诊断等提供了新的思路。     

实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的探讨快速诊断唐氏综合征的检测方法.方法采用实时荧光定量PCR技术,检测唐氏患者23例、正常人33例,定量分析比较ΔCt值.结果正常组和唐氏组ΔCt值有显著性差异(p<0.001),并建立了相应的参考值范围.结论实时荧光定量PCR具有简单、快速、特异性高等优点,可用于快速诊断唐氏综合征.     

应用STR判断唐氏综合征额外21号染色体来源

目的用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)的多态性诊断唐氏综合征(Down syndrome,DS)患者中额外21号染色体来源.方法选择21号染色体上6个具有高度多态性的STR位点,应用PCR技术,对10个DS家系个体进行基因的检测、分析,判断DS患儿额外21号染色体来源.结果在10个已知的DS家系的分析中,未发现这6个STR位点有突变基因出现,遗传方式符合孟德尔常染色体共显性遗传规律;分析10例唐氏综合征患者体内额外的21号染色体的双亲来源,其中9例为母源性不分离,77.8%发生于减数分裂I,22.2%发生于减数分裂Ⅱ;1例来自父源性第1次减数分裂不分离.结论应用PCR技术检测这6个STR位点的基因状况可以确定DS患儿中额外21号染色体来源.该项技术对于唐氏综合征发生的病因学研究具有一定的实用价值.     

杂合型单核苷酸多态性定量焦测序测定法用于唐氏综合征快速诊断的探索

目的 通过筛查人21号染色体上的杂合型单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,初步建立基于定量焦磷酸测序反应的唐氏综合征分子诊断方法.方法 基于改进引物设计的等位基因特异性扩增法,在21号染色体上选取7个SNP位点进行杂合子筛选,通过焦测序法检测SNP中两个等位基因型的比值,并作为诊断唐氏综合征的依据.结果 通过对84名正常中国人基因组样本进行筛查,得到6个杂合率较高的SNP位点.6个SNP位点的杂合子覆盖率为92.9%.应用这6个SNP位点对10例唐氏综合征患者的样本进行了焦测序定量检测,结果表明10例患者样本中有9例样本的两个基因型比值为2:1或1:2,1例未检出杂合子,检出率为90%.结论 初步建立了一种唐氏综合征辅助诊断方法,具有成本低、操作简单、快速和结果明了的优点,可以有效地快速诊断唐氏综合征,为今后进一步完善该方法,并将其用于临床诊断奠定了基础.     

Rapid prenatal diagnosis of trisomy 21 by real-time quantitative polymerase chain reaction with amplification of small tandem repeats and S100B in chromosome 21

Trisomy 21 (Down syndrome) is the most common congenital anomaly, and it occurs in one out of 700-1000 births. Current techniques such as amniocentesis and chorionic villi sampling (CVS) require lengthy laboratory culture procedures and high costs. This study was undertaken to establish a rapid prenatal diagnosis of trisomy 21 using real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) of fetal DNA from amniotic fluid. Real-time quantitative PCR was performed with DNA templates obtained from 14 normal blood samples, 10 normal amniotic fluid samples, 14 Down syndrome blood samples, and 7 Down syndrome amniotic fluid samples. Primers for D21S167 and S100B of chromosome 21 were used. Primers that direct the amplification of the 165-bp fragment of the insulin-like growth factor (IGF)-1 gene on chromosome 12 using a PCR primer were included to generate an internal standard for quantitation. The relative levels of D21S167 and S100B were 2.6 and 2.4 times higher in the blood of Down syndrome patients than those in the control group. The differences between these two groups were statistically significant (p-values were 0.0012 and 0.0016, respectively). The relative levels of D21S167 and S100B were 2.1 and 2.7 times higher in the amniotic fluid of Down syndrome fetuses than those in the control group. The difference between these two groups was statistically significant (p-values were 0.0379 and 0.0379, respectively). Prenatal diagnosis of trisomy 21 by real-time quantitative PCR using STR (small tandem repeats) amplification of D21S167 and S100B is a useful, accurate and rapid diagnostic method. Furthermore, it may also be useful for prenatal diagnosis with fetal DNA from maternal blood, and for preimplantation genetic diagnosis and prenatal counseling.     

杂合型单核苷酸多态性定量焦测序测定法用于唐氏综合征快速诊断的探索

目的 通过筛查人21号染色体上的杂合型单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,初步建立基于定量焦磷酸测序反应的唐氏综合征分子诊断方法.方法 基于改进引物设计的等位基因特异性扩增法,在21号染色体上选取7个SNP位点进行杂合子筛选,通过焦测序法检测SNP中两个等位基因型的比值,并作为诊断唐氏综合征的依据.结果 通过对84名正常中国人基因组样本进行筛查,得到6个杂合率较高的SNP位点.6个SNP位点的杂合子覆盖率为92.9%.应用这6个SNP位点对10例唐氏综合征患者的样本进行了焦测序定量检测,结果表明10例患者样本中有9例样本的两个基因型比值为2:1或1:2,1例未检出杂合子,检出率为90%.结论 初步建立了一种唐氏综合征辅助诊断方法,具有成本低、操作简单、快速和结果明了的优点,可以有效地快速诊断唐氏综合征,为今后进一步完善该方法,并将其用于临床诊断奠定了基础.     

应用生物素标记探针原位杂交法产前快速诊断21三体综合征

本文对２２例妊娠１６－２４周因母血α－胎甲蛋白（α－ＦＰ）浓度低于正常范围或Ｂ超检查发现胎儿解剖畸形的孕妇进行了羊水穿刺，对采取的羊水标本分别进行常规细胞培养核型分析及应用生物素标记的２１号染色体特异性探针对未经培养的羊水细胞进行原位杂交快速产前诊断。原位杂交结果发现３例２１三体综合征的患胎，与常规细胞遗传学分析结果符合。本文认为，生物素标记探针间期核原位杂交技术能快速而准确的诊断选择性胎儿染色体数目畸变。     

杂合型单核苷酸多态性定量焦测序测定法用于唐氏综合征快速诊断的探索

目的 通过筛查人21号染色体上的杂合型单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,初步建立基于定量焦磷酸测序反应的唐氏综合征分子诊断方法.方法 基于改进引物设计的等位基因特异性扩增法,在21号染色体上选取7个SNP位点进行杂合子筛选,通过焦测序法检测SNP中两个等位基因型的比值,并作为诊断唐氏综合征的依据.结果 通过对84名正常中国人基因组样本进行筛查,得到6个杂合率较高的SNP位点.6个SNP位点的杂合子覆盖率为92.9%.应用这6个SNP位点对10例唐氏综合征患者的样本进行了焦测序定量检测,结果表明10例患者样本中有9例样本的两个基因型比值为2:1或1:2,1例未检出杂合子,检出率为90%.结论 初步建立了一种唐氏综合征辅助诊断方法,具有成本低、操作简单、快速和结果明了的优点,可以有效地快速诊断唐氏综合征,为今后进一步完善该方法,并将其用于临床诊断奠定了基础.     

杂合型单核苷酸多态性定量焦测序测定法用于唐氏综合征快速诊断的探索

目的 通过筛查人21号染色体上的杂合型单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,初步建立基于定量焦磷酸测序反应的唐氏综合征分子诊断方法.方法 基于改进引物设计的等位基因特异性扩增法,在21号染色体上选取7个SNP位点进行杂合子筛选,通过焦测序法检测SNP中两个等位基因型的比值,并作为诊断唐氏综合征的依据.结果 通过对84名正常中国人基因组样本进行筛查,得到6个杂合率较高的SNP位点.6个SNP位点的杂合子覆盖率为92.9%.应用这6个SNP位点对10例唐氏综合征患者的样本进行了焦测序定量检测,结果表明10例患者样本中有9例样本的两个基因型比值为2:1或1:2,1例未检出杂合子,检出率为90%.结论 初步建立了一种唐氏综合征辅助诊断方法,具有成本低、操作简单、快速和结果明了的优点,可以有效地快速诊断唐氏综合征,为今后进一步完善该方法,并将其用于临床诊断奠定了基础.