rhGM-CSF联合rhIL-4诱导慢性粒细胞白血病细胞来源的树突状细胞

目的 用rhGM-CSF联合rhIL－4将慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞诱导成树突状细胞（DC），探索白血病免疫治疗的新途径。方法 分离初诊CML患者外周血单个核细胞（PBMNC），用rhGM-CSF联合rhIL－4共同培养7d；流式细胞仪（FACS）检测细胞因子诱导前后细胞表面HLA－DR、CD1a、CD80和D86的表达，电镜观察细胞形态。结果 经7d的诱导，HLA－DR、CD1a、CD80和CD86的表达明显上调；电镜观察到典型的DC 形态特征。结论 rhGM-CSF联合rhIL－4可成功将CML原代细胞诱导成CML－DC，可望用于CML的免疫治疗。     

树突状细胞免疫治疗慢性髓性白血病研究进展

树突状细胞是体内抗原提呈功能最强的细胞，在肿瘤的免疫治疗中占有重要的地位，是当今肿瘤学领域研究的热点。慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia．CML)是一种起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病。迄今为止治愈的措施仍然有限。近10年来，人们发现CML患者体内存在识别自身肿瘤的T淋巴细胞，但是由于抗原提呈细胞的数量及功能异常等原因，造成了肿瘤特异性T细胞无应答。     

慢性髓性白血病来源的树突状细胞的体外扩增培养

目的 :探讨慢性髓性白血病 (CML)来源的树突状细胞 (DC)的体外扩增及其功能 .方法 :采用两步法 ,首先将慢性髓性白血病骨髓或外周血CD34+ 细胞与rhFlt3 L和rhTPO共育 7d,再用rhGM CSF ,rhTNF α及rhIL 4诱导培养1 4d ;同时以rhGM CSF ,rhTNF α及rhIL 4直接诱导体系作对照 .获得的DC通过免疫表型检测、电镜分析及染色体鉴定 ,并用MTT法检测其刺激T细胞增殖能力及T细胞对CML细胞的杀伤作用 .结果 :两步法培养 2 1d ,CML的CD34+ 细胞扩增 (76 . 5 6± 5 . 1 7)倍 ,DC产率 (39. 1 0± 8. 0 3) % ,直接诱导产生DC扩增倍数及比例均低于两步法 (P <0 . 0 1 ) ,且此DC能刺激自体或异体T细胞增殖进而杀伤CML细胞 .结论 :两步法体外扩增培养可明显提高DC前体总数及产率 ,优于直接诱导培养 ;CML细胞来源的DC可诱导抗白血病免疫应答的产生     

A23187诱导慢性髓性白血病患者外周血单核细胞转化为树突状细胞的实验研究

目的　探讨钙离子载体A2 3187在体外能否诱导慢性髓性白血病 (CML)患者的外周血单核细胞 (pe ripheralbloodmonocytes,PBMC)向树突状细胞 (dendriticcells,DC)分化及细胞分化后的免疫活性研究。方法　分离初诊CML患者的PBMC ,用含rhGM -CSF和 (或 )A2 3187的培养液培养 4 0h ;高倍显微镜下观察细胞形态 ,流式细胞仪检测诱导前后细胞表面HLA -DR ,CD80 ,CD86和CD83分子的表达 ,MTT比色法检测其对混合T淋巴细胞的刺激增殖作用 ,ELISA试剂盒检测上述方法培养的细胞刺激T淋巴细胞前后 ,上清液中IL - 2及γ -INF水平的变化。结果　CML患者的PBMC经A2 3187联合rhGM -CSF共同培养 4 0h ,具有典型的树突状突起 ,高表达HLA -DR ,CD80 ,CD86和CD83分子 ,具有较强刺激混合T淋巴细胞增殖的能力 ,刺激前后的T淋巴细胞培养液上清中 ,IL - 2及γ -INF的水平有明显差别。结论　体外利用A2 3187联合rhGM -CSF在 4 0h内 ,可将CML患者的PBMC诱导成成熟的DC。     

树突状细胞与髓性白血病的免疫治疗

化疗方法的改进和造血干细胞移植在临床的应用使髓性白血病病人5年生存率明显提高。而治疗失败的主要原因是疾病的复发，根源是白血病微小残留病灶的存在。采用特异性免疫治疗清除白血病微小残留病灶已日益引起人们的重视。树突状细胞(DCs)是免疫系统功能最强的专职抗原提呈细胞(APCs)，惟一能够致敏初始型T细胞，在体内     

CD40配体诱导急性髓系白血病源性树突状细胞及其功能研究

树突状细胞(DC)是目前已知体内功能最强的抗原递呈细胞.它通过摄取、加工处理和递呈内外源性抗原以及上调共刺激分子而有效激活初始型T细胞,促进CD 8细胞毒性T细胞及CD 4助性T细胞的生成,从而产生特异性抗肿瘤效应[1,2],被称为肿瘤疫苗.     

慢性髓系白血病来源的树突状细胞生物学特性的研究

目的:体外诱导慢性髓系白血病(CML)原代细胞分化生成树突状细胞(Dendritic cells DCs),并研究其生物学特性和功能.方法: 分离初诊13例CML患者的骨髓单个核细胞和5例正常人外周血的单个核细胞,用rhGM -CSF 1 000 U/ml、rhIL-4 500 U/ml和TNF-α50 U/ml联合培养10 d;形态学(Wright染色、倒置显微镜、透射电镜),免疫学(CD80、CD86、CD83、CD 1a、HLA-DR)鉴定,荧光原位杂交(FISH)进行细胞遗传学分析,ELISA检测分泌IL- 12的能力和混合淋巴细胞反应(MLR)检测抗原递呈功能.结果:慢性白血病细胞体外诱导后,大部分细胞呈现树突状细胞的典型形态,而且有免疫标记的明显上调(CD 86 24.49±25.87 vs 61.73±28.54;CD1a 10.41±9.52 vs 47.26±3 5.60,P<0.05);FISH证实这类DC还携带有白血病克隆,并且具有分泌IL-12和刺激T淋巴细胞增殖的能力.结论:在体外可成功地将CML细胞诱导分化成树突状细胞 ,这类DC与正常DC无论在形态学和免疫学表达方面均相似,但是功能较弱.     

慢性淋巴细胞性白血病合并慢性髓细胞性白血病一例报告

1临床资料患者,男性,48岁,因“确诊慢性淋巴细胞性白血病(CLL)8年余,确诊慢性髓细胞性白血病(CML)2年余“入院.……     

人慢性髓性白血病细胞系来源的树突状细胞免疫功能的体外研究

目的：探讨人慢性髓系白血病K-562来源的树突状细胞的免疫功能。方法：用细胞因子粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及IL4在体外诱导培养K-562细胞，获得树突状细胞(DC)检测其细胞表型，并观察其诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外抗肿瘤效应。用ELISA法测定DC培养及DC与外周血单个核细胞共培养上清液中IL-12及IFN-γ的量。结果：联合GM-CSF及IL-4可诱导K-562细胞分化为树突状细胞，K-562DC体外激活的CTL对K-562细胞具有特异性细胞毒活性；诱导DC培养上清及DC与外周血单个核细胞共培养上清测出一定量IL-12及IFN-β。结论：人慢性髓系白血病K-562来源的树突状细胞表达抗原提呈细胞表型，具有诱导CTL反应和分泌IL—12以及促进T细胞分泌IFN-γ的作用。     

慢性粒细胞白血病树突状细胞的体外定向诱导扩增及鉴定

目的：W本外定向诱导扩增慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血单个核细胞（PBMNC）来源的树突状细胞（CML－DC）并测定其表型。方法：取CML患者新鲜抗凝血,用淋巴细胞分离液分离PBMNC,经细胞因子rhGM-CSF,rhIL-4,rhTNF-α联合刺激培养9－12d,收集培养细胞,光镜形态学分析并细胞计数,结合PE－CD1a单抗、FITC－CD14居流式细胞 （FCM）上进行CML－DC比例及表型分析。结果CML患者PBMNC经以上细胞因子联合培养,CML－DC含是可达3．5％－23．5％,而新鲜分离的CML患者PBMNC中CML－DC含量仅为0．1％－1％,结论CML患PBMNC 体外定向诱导扩增培养可以生成较多的CML－DC,从而为CML的免疫治疗应用于临床提供了基础。     

rhGM—CSF联合rhIL—4对髓性白血病细胞B7分子表达的上调作用

目的 探讨GM－CSF联合IL－4对髓性白血病细胞表面B7分子表达的上调作用。方法 从初诊急性或慢性髓性白血病患者的外周血中分离出单个核细胞（PBMNC）,用rhGM-CSF联合rhIL-4共同孵育7－10d;通过流式细胞仪检测细胞因子诱导前后细胞表面B7分子的表达。结果 未经细胞因子诱导的白血病细胞表面B7分子低表达或缺如,经过GM－CSF联合IL－4 7－10d的诱导,可显著上调B7分子的表达。结论 髓性白血病细胞表面存在B7分子表达缺陷;用GM－CSF联合IL－4进行诱导是纠正这种缺陷的一条途径。     

CML自体树突状细胞对CML白血病细胞作用的研究

目的　研究慢性粒细胞白血病 (CML)自体树突状细胞 (DC)对费城 (Ph)染色体细胞的作用。方法　采用液体培养法从 4例 CML 慢性期患者外周血单个核细胞 (PBMNC)中培养出 DC及 T细胞 ,而后将 DC加 IL- 2或 IL- 2激活的 T细胞 ,分别与自体 PBMNC及 K5 6 2细胞共同孵育 6 h,行常规染色体测定 ,分析自体及 K5 6 2 Ph+染色体细胞残存率。结果　从 4例 CML 患者 PBMNC中培养出约 3× 10 5～ 2× 10 6 PBMNC的自体 DC;DC加 IL-2激活的 T细胞比单用 IL- 2激活的 T细胞对自体 Ph+染色体细胞的杀伤作用强 (P<0 .0 0 1) ;DC激活的自体 T细胞对自体 Ph+染色体细胞的杀伤作用强于对 K5 6 2 Ph+染色体细胞的杀伤作用 (P<0 .0 0 1)。结论　 DC激活的 T细胞能有效抑制 Ph+染色体细胞 ;CML 患者 DC激活的自体 T细胞对自体 Ph+染色体细胞特异性的杀伤作用可能受到主要组织相容性 (MHC)的限制     

自体树突状细胞用于慢性粒细胞白血病骨髓净化的初步研究

目的 考察慢性粒细胞白血病（CML）树突状细胞（DC）刺激自体骨髓T细胞,清除白血病细胞的作用。方法 采用3例CML病人（2例慢性期和1例急变期）外周血,分离单个核细胞（PBMNC）,经塑料贴壁后在含自体血浆、重组人白介素4（rhIL－4)、重组人粒－单集落刺激因子（rhGM－CSF）和重组人肿瘤坏死因子（rhTNFα）的RPMI－1640培养液。37℃CO2孵箱培养10天,或用免疫磁珠从PBMNC分离DC,在含自体血浆、rhGMCSF和rhTNFα的RPMI1640培养液培养3天,收获的细胞即DC加到含rhIL－2的Dexter骨髓长期培养体系,置37℃,5％CO2孵箱培养7天,观察前后骨髓细胞的免疫表型和P210阳性细胞比例。结果 从CML病人外周血获得的DC大多数表达P210。在含rhIL－2的Dexter体系加入DC能进一步增加体系中的T细胞数。在2例慢性期病人体系中的P210。在含rhIL－2的Dexter体系加入DC能进一步增加体系中的T细胞数。在2例慢性期病人体系中的P210阳性细胞减少,但在急性期病例,体系中P210细胞明显增加。结论 CML病人的DC表达P210,能刺激自体骨髓中T细胞增生,在慢性期病人,这些自体DC活化的骨髓T细胞有清除白血病细胞的作用。     

细胞因子诱导不同来源的贴壁细胞分化为树突状细胞的研究

目的：探讨寻树突状态细胞（DC）体外培养的理想来源。方法：通过贴壁的方法分离脐带血、造血动员后的外周血及正常人外周血中DC的前体细胞，体外采用细胞因子诱导，并对其进行形态学的观察和细胞表型检测；同时比较了不同来源的DC的增殖、分泌IL－12的能力及激发同种异体T细胞和脐带血幼雅T细胞（naive Tcells)的作用，结果：经过造血动员后的外周血产生的DC数量和纯度均较高，而且能经体外细胞因子诱导为功能性DC。结论：造血动员后的外周血是较理想的DC来源。     

基质金属蛋白酶在慢性粒细胞白血病患者中的表达及其临床意义

目的 检测慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓单个核细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9、MMP-14)及其抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)基因表达情况.方法 收集CML患者及正常成人的骨髓,分离单个核细胞,抽提RNA后进行RT-PCR得到cDNA,利用所合成的引物进行相应基因的扩增.结果 在12例正常成人骨髓单个核细胞基因中皆有MMP-9、TIMP-1的表达,6例表达TIMP-2,而MMP-2和MMP-14的表达皆为阴性;30例CML患者皆有MMP-9、TIMP-I的表达,其中26例有TIMP-2的表达,11例表达MMP-2和MMP-14;而11例表达MMP-2的患者中,3例已发生急变,6例处于加速期.结论 MMP-2与MMP-14的表达在骨髓单个核细胞中具有一致性,两者的出现与慢性粒细胞白血病进展相关.     

Effects of Quercetin on Hedgehog Signaling in Chronic Myeloid Leukemia KBM7 Cells

Objective：To investigate the effects of quercetin on Hedgehog（Hh） signaling in chronic myeloid leukemia KBM7 cells.Methods：The KBM7 cells were treated with 50,100 and 200 μmol/L quercetin for48 h respectively.And then the trypan blue assay was used to examine the proliferative inhibition of quercetin.Apoptotic cells and cell cycle were measured by flow cytometry.The mRNA and protein expression were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction（PCR） and Western blot,respectively.Results：Quercetin significantly inhibited KBM7 cell proliferation,induced cell apoptosis,and blocked cell cycle at G1 phase,which were in dose-dependent manners.The mRNA and protein expression of Smoothened and Gliomal（Gli1）,the members of Hh pathway decreased after treatment with quercetin.The Bcl-2 and Cyclin D1,targets of Hh signaling,also decreased after treatment with quercetin,respectively.Quercetin also could increase p53 and Caspase-3 expression.Bcr-abl mRNA copies decreased,but no changes of phosphorylated Bcr-abl and Bcr-abl proteins were observed,after treatment with quercetin.Conclusion：Quercetin could inhibit Hh signaling and its downstream targets in the KBM7 cells.And it might be one of mechanisms of inducing apoptosis and inhibiting cell cycle by quercetin.     

血小板血管生成调节蛋白在慢性粒细胞白血病中的研究

目的：探讨血小板血管生成调节蛋白在慢性粒细胞白血病（CML）病程中的变化及其预后意义。方法：用ELSIA检测CML患者及正常对照组乏血小板血浆（PPP）和血小板提取液中血管生成调节蛋白血管内皮生长因子（VEGF）的浓度。结果：VEGF浓度在PPP和血小板提取液中均表现为CML组明显高于正常对照组（P〈0.05）;在CML组内则表现为急变期显著高于慢性期和加速期（P〈0.01）;VEGF水平在血小板提取液中明显高于PPP。结论：CML各期血小板提取液中VEGF水平较PPP内变化更敏感,且随病情发展而增高,其变化有助于监测CML的病情进展和预后判断。     

甲磺酸伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病的循征评价

4背景 甲磺酸伊马替尼（Imatinib Mesylate）是一种酪氨酸激酶的选择性抑制剂，Ⅰ和Ⅱ期临床研究表明甲磺酸伊马替尼对各期慢性粒细胞白血病（chronicmyeloid leukemia．CML）患者均具有较好的抗白血病效应，尤其是干扰素治疗失败的CML慢性期（chronic phase。CP）患者其疗效更是令人振奋，但是，标准剂量甲磺酸伊马替尼取代干扰素＋低剂量阿糖胞苷作为新诊断CML患者的一线治疗药物是否可获得满意的临床疗效尚无定论。     

慢性髓系白血病急变期与急性白血病免疫表型的比较研究

目的比较慢性髓系白血病急变期（CML-BC）与急性白血病（AL）的免疫表型特征。方法采用一组单克隆抗体和四色流式细胞术对58例成人CML-BC及同期420例AL患者骨髓标本进行免疫表型分析。结果58例CML-BC中。CML-AML占77．6％，CML-ALL占13．8％，CML-MAL（混合性白血病）占5．2％；AL中，AML占66．2％。ALL占32．9％，MAL占1．0％。CML-AML中，CD7及CD34表达高于AML；CML-BC和CML-AML中CD7与CD34共阳性表达分别高于AL和AML（P〈0．05）。276例AML中，纯型占62．3％，变异型占37．7％；130例ALL中，纯型占44．6％，变异型占55．4％；42例CML-AML中。纯型占59．5％，变异型占40．5％；8例CML-ALL中，纯型与变异型各占50．0％。结论CML-BC中干祖细胞阶段的抗原较AL高表达，变异型CML-BC与AL比例相当。