间充质干细胞在致敏受者造血干细胞移植中的作用

【目的】 本实验拟研究骨髓间充质干细胞(MSC)在致敏受者造血干细胞移植中的作用?【方法】 体外分离BALB/c小鼠骨髓细胞,通过贴壁培养方法获得MSC,应用流式细胞仪检测细胞表面分子标记?通过异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型;绿色荧光染料标记骨髓MSC,分别移植到非致敏及致敏受者体内,并于移植后不同时间点检测MSC的归巢情况?致敏BALB/c小鼠经照射预处理,联合应用同基因MSC与异基因骨髓细胞移植,每日观察小鼠的生存情况?【结果】 体外培养第4代MSC表现为长梭形,阴性表达造血细胞表面分子而阳性表达粘附分子?动物体内实验发现移植后第48小时,MSC在非致敏受者体内主要归巢于骨髓,而在致敏受者体内主要归巢于脾脏?造血干细胞移植实验中,致敏小鼠接受同基因骨髓MSC与异基因骨髓细胞移植,结果发现致敏小鼠在移植后第12 ~ 16天全部死亡,生存中位数时间是14 d?【结论】 成功培养小鼠骨髓MSC;移植后MSC在致敏受者体内主要归巢于脾脏组织;联合应用MSC移植并不能有效促进异基因造血干/祖细胞在致敏受者体内植入?     

脾细胞输注致敏对异基因骨髓细胞损伤的机制

【目的】 探讨脾细胞输注致敏对异基因供者骨髓细胞损伤的作用机制&#65377;【方法】 应用异基因脾细胞输注的BALB/c小鼠作为致敏模型,未致敏(正常)BALB/c小鼠作为对照,异基因供者骨髓细胞来源于C57BL/6小鼠&#65377;通过补体依赖细胞毒性反应(CDC)&#65380;细胞毒性免疫细胞杀伤作用&#65380;抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)&#65380;粒-单核细胞集落培养(CFU-GM)等实验研究致敏血清及致敏免疫细胞对异基因骨髓细胞的影响&#65377;【结果】 与补体孵育30 min或1 hr后,致敏血清组死亡细胞百分比明显高于正常血清组,其差异有统计学意义(P < 0.001);细胞毒性免疫细胞杀伤作用及ADCC实验中致敏组的细胞毒性指数均高于正常组,其差异亦有统计学意义(P < 0.05);致敏血清与骨髓细胞孵育组的CFU-GM数量比单纯骨髓细胞组有所减少,但两者差异无统计学意义(P > 0.05)&#65377;【结论】 致敏受者通过体液免疫及细胞免疫途径损伤异基因骨髓细胞&#65377;     

异体骨髓细胞在不同基因型辐照受鼠中动态分布与迁移规律研究

目的 观察异体小鼠骨髓细胞在不同基因型辐照小鼠体内的分布迁移规律和归巢特点.方法 分离萤火虫荧光素酶转基因C57BL/6J小鼠的骨髓细胞,分别输入γ射线辐照的C57BL/6J小鼠、CB6F1小鼠和BALB/c小鼠体内;在不同时间点,以活体成像仪观察供体骨髓细胞在受体内的动态分布和迁移规律.结果 供体骨髓细胞输注1h后,BALB/c小鼠肺脏中出现荧光且强度最强,与C57BL/6J小鼠和CB6F1小鼠肺脏的荧光强度差异有统计学意义(P=0.000);24 h后肺脏中荧光信号消失;48 h后在肺脏中又检测到荧光信号并逐渐增强.供体骨髓细胞输注4h后,各组小鼠均可在脾脏中检测到微弱荧光,C57BL/6J和CB6F1小鼠脾脏中荧光信号强度的差异无统计学意义(p=0.4051),而BALB/c小鼠和C57BL/6J、CB6F1小鼠脾脏的荧光强度差异有统计学意义(P=0.0012,P=0.001);48 h后各组小鼠脾脏中荧光均有增强,BALB/c小鼠脾脏中的荧光信号强度显著强于C57BL/6J和CB6F1小鼠(P=0.000).供体骨髓细胞输注24 h后各组小鼠肠系膜中均可检测到较弱的荧光信号,48 h后肠系膜中的荧光强度逐渐增强,BALB/c小鼠肠系膜表达的荧光强度强于CB6F1、C57BL/6J小鼠,差异有统计学意义(P=0.000),72 h后肠系膜的荧光强度继续增强,BALB/c小鼠肠系膜的荧光强度强于CB6F1小鼠,差异有统计学意义(P=0.000),CB6F1小鼠肠系膜的荧光强度强于C57BL/6J小鼠,但是两者之间的差异无统计学意义.结论 异体骨髓细胞通过尾静脉输入基因型相合、半相合和全不相合辐照小鼠体内,细胞均首先分布到肺脏,然后依次向肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结迁移,最后定居于骨髓微环境后进行造血重建.异基因骨髓细胞输入基因型全不相合小鼠体内后,在脾脏和肠系膜中的分布要多于基因型相合和半相合的小鼠.     

供者NK细胞诱导小鼠MHC半相合骨髓移植的免疫耐受

目的：探讨纯化的供鼠NK细胞加入预处理方案与MHC半相合骨髓移植后免疫耐受的关系。 方法：制备（BALB/c^H-2d×C57BL／6^H-2b）CB6F₁^H-2d/b小鼠为受者,C57BL／6^H-2b的小鼠为供者。70只受者小鼠经致死剂量（9.0 Gy）照射后随机分为7组,每组10只。对照组：分别为单纯照射组、MHC半相合GVHD对照组、MHC半相合骨髓细胞移植组、同基因骨髓细胞移植组。实验组：CB6F₁^H-2d/b小鼠在完成照射后1 h内首先经静脉输注纯化后的MHC半相合供者NK细胞,分为1×106、5×105和2×105／只3个组,在照射后4 h移植MHC半相合骨髓细胞。以血像、体重、生存期和病理组织学等变化为观察指标并做组间比较。结果：①生存期：单纯照射对照组为(5.15±0.66)d,GVHD对照组为(15.80±1.93)d,其他组小鼠生存期均大于30 d。②病理学结果,MHC半相合GVHD对照组出现典型的GVHD病理表现,其他各组均无GVHD病理表现。 结论：在MHC半相合骨髓移植模型上证实,移植前将供鼠的纯化NK细胞加入移植预处理方案,能诱导免疫耐受。     

剔除CCR5基因供者小鼠细胞加重急性移植物抗宿主疾病

目的评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。方法经过致死剂量照射的BALB/C小鼠接受异基因C57BL/6小鼠骨髓移植。根据回输的细胞不同分为4组:1)B6 CCR5 KO组,受者接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;2)B6 WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓和脾脏细胞;3)B6 CCR5 KO BMC组,受者只接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓细胞;4)B6 WT BMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞。结果与B6 WT组比较,B6 CCR5 KO组小鼠以更快的速度死于急性移植物抗宿主疾病(GVHD);其受者体内的CD8+T细胞大量增生;T细胞恢复后产生更多的干扰素-γ(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平,进一步促进T细胞增生。组织学检测提示移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现病理损伤,肝脏存在更为严重的病理变化。结论剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率增加,供者CD8+T细胞在受者体内增生加重肝肾损害。提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。     

间充质干细胞联合NK细胞输注抑制DC减轻aGVHD

【目的】 观察骨髓MSC联合NK细胞输注对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的影响,初步探讨其作用机制?【方法】 分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,体外培养MSC;取C57BL/6小鼠脾脏细胞,磁珠分选NK细胞;建立C57BL/6→BALB/c小鼠异基因骨髓移植模型,接受移植小鼠随机分为4组,每组10只小鼠,MSC和NK细胞移植组,MSC移植组,NK细胞移植组和培养基对照组?根据aGVHD分值,肝?脾?小肠aGVHD病理损害和平均存活时间,评价aGVHD的程度?ELISA法检测小鼠血清中IFNγ和IL-12的含量?流式细胞术检测受鼠脾脏细胞CD11c和CD86的表达情况?【结果】 根据GVHD分值,肝?脾?小肠aGVHD病理损害和平均存活时间综合评价,与培养基对照组比较,MSC联合NK细胞移植组,MSC移植组和NK细胞移植组,发生aGVHD的程度均减轻,以MSC联合NK细胞移植组减轻最为明显?IFNγ的含量,NK细胞组明显高于MSC联合NK细胞移植组,MSC移植组和培养基对照组?IL-12的含量,MSC联合NK细胞移植组低于NK细胞移植组和培养基对照组,MSC移植组低于培养基对照组?脾脏DC细胞的含量,MSC联合NK细胞移植组未成熟DC(CD11c+CD86-)和成熟DC(CD11c+CD86+)均低于MSC移植组,NK细胞组和培养基对照组?【结论】 MSC联合NK细胞输注降低DC细胞数量,减轻aGVHD,延长小鼠生存时间?     

早发精神分裂症全脑灰质体积的变化

【目的】 研究早发精神分裂症患者全脑灰质结构的变化。【方法】 对2009 年6月至2010 年11月共21例发病年龄小于18岁的精神分裂症患者和22例在年龄、性别、受教育年限与患者组相均衡的健康对照纳入研究。对所有受试者首先以1.5T磁共振系统以冠状自旋回波序列进行全脑T2加权和质子密度加权图像,排除全脑器质性病变。然后以矢度梯度回波序列得到T1加权成像。T1加权图像经MRIcro软件转化为统计参数图-V(SPM5)软件可以处理的图像。以SPM5软件对转化后图像进行基于体素形态学分析(VBM),完成标准化、分割、调整和平滑等步骤、对患者组和健康对照组的平滑后灰质图像以VBM方法进行两样本t检验。以阳性和阴性症状量表评估患者精神症状。【结果】 早发精神分裂症患者组灰质体积小于健康对照组的脑区有:右侧额下回(MNI: 43,20,-14;clutser = 407 voxels)、左侧额上回(MNI:-28,-3,65;cluster = 176 voxels)、右侧额上回(MNI: 48,-10,54;cluster = 141 voxels);未发现患者组灰质体积大于健康对照组的脑区。【结论】 早发精神分裂症存在右侧额下回和双侧额上回灰质异常,此异常改变可能与精神分裂症的神经病理机制有关。     

三种不同型别小鼠骨髓来源间质干细胞的生物学特性分析

【目的】间质干细胞(MSC)是一种间质来源的多潜能基质细胞,目前人和多种动物来源的MSC均已被成功分离鉴定。然而由于小鼠骨髓MSC的分离相对人和其他物种更为困难,关于小鼠骨髓MSC的克隆分析结果也相对有限且结果不尽一致。为此,本研究拟进一步探讨小鼠MSC的体外分离方法,并对MSC克隆形成单位进行生物学特性分析。【方法】 取C57BL/6小鼠,冲洗股骨骨髓腔获得骨髓单个核细胞悬液,低密度接种培养,并通过有限稀释克隆挑选获得三种形态、生长特点不同的克隆形成单位(CFU)。采用流式分析技术对三种类型的CFU进行表型分析,并用油红O和茜素红分别进行成脂和成骨分化诱导鉴定。【结果】 低密度培养并结合克隆化培养分离技术成功获得C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,并观察到偏圆形(MSC1)、长梭形(MSC2)以及纺锤形、多边形(MSC3)三种贴壁形态细胞类型;免疫表型分析显示,三种细胞均强表达Sca-1,不表达CD11b、CD45,部分表达CD90.2;体外诱导分化实验证实,MSC1仅具有向脂肪细胞分化的潜能,MSC2仅具有向成骨细胞分化的潜能;MSC3则具有成骨、成脂双向分化能力。【结论】 低密度培养并结合克隆化培养分离技术可成功分离小鼠骨髓间充质干细胞;小鼠MSCs是一种高度异质性的细胞群,其中可能含有多能MSC或单一分化方向的前体细胞等处于不同分化阶段的细胞类型。     

环磷酰胺预处理脐血移植小鼠模型的建立及其对骨髓龛位的影响

【目的】建立环磷酰胺 (CTX)预处理脐血移植 (UCBT)小鼠模型 ,并探讨预处理后骨髓龛位腾出的特点和机制。【方法】分别以 10 0 ,2 0 0 ,380mg/kg 3种剂量CTX腹腔注射BALB/c小鼠 ,检测注射后 1周内外周血象、骨髓及外周血CD34 细胞含量、骨髓细胞凋亡及病理学改变。用C5 7BL/ 6鼠脐血 (FNPB)作供体移植经“致死量”CTX预处理的BALB/c鼠 ,动态观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及移植物抗宿主病 (GVHD)情况。【结果】在CTX处理后 3～ 4d内 ,骨髓造血细胞损伤渐加重 ,血窦结构紊乱 ,细胞碎屑弥漫分布 ,外周血与骨髓CD34 细胞水平进行性降低至最低值 ,下降的速度和程度与CTX剂量呈正比。骨髓细胞凋亡发生率的峰值出现在第 1天 ,第 3天恢复正常。FNPB移植能明显提高受鼠存活率 ,重建部分造血与免疫功能 ,未见明显GVHD表现 ,并在受体内检出供体细胞的植入。【结论】成功建立CTX化疗预处理小鼠脐血移植模型。干细胞占据的龛位是在化疗预处理后 4d逐渐完成腾空 ,凋亡是参与此过程的机制之一。     

异基因骨髓间充质干细胞逆向嵌合体诱导小鼠皮肤移植耐受研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)诱导移植免疫耐受的可行性,建立小鼠异种逆向嵌合皮肤移植模型.方法 以GFP-C57BL/10雄鼠为BMSCs供者,选择免疫缺陷型BALB/C-nu/nu雌鼠为BMSCs受者,移植BMSCs,建立骨髓嵌合模型;通过RT-PCR检测Y染色体性别决定区基因(SRY)、免疫组化检测GFP蛋白表达量,确定嵌合产生的最佳时间.实验共分3组:将接受BMSCs移植一定时间后的BALB/C-nu/nu雌鼠的皮肤移植给C57BL/10雄鼠(实验组),将未接受BMSCs移植的BALB/C-nu/nu雌鼠的皮肤移植给C57BL/10雄鼠(排斥组),C57BL/10小鼠间进行同种异体皮肤移植(对照组).观察移植皮肤存活情况,检测存活皮肤的血管形成情况,以此探讨逆向嵌合皮肤移植的可行性.结果 成功建立骨髓嵌合模型,用1×106 BMSCs移植后4周,SRY基因和GFP蛋白的表达量最高,分别为1.22±0.10、458.0±3.4,与移植后1周、2周和6周比较差异均有统计学意义(P＜0.05),说明嵌合产生的最佳时间为移植后4周.实验组小鼠供者来源皮肤移植物存活＞14 d,排斥组平均为5d.结论 BMSCs移植后可形成嵌合体,并可逆向嵌合移植诱导异种小鼠皮肤移植耐受.     

抗T细胞受体αβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓移植诱导小鼠皮肤移植耐受

目的:探讨抗T细胞受体(T cell receptor, TCR)αβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓细胞输注方法在同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导中的作用.方法:第0天,向C57BL/6小鼠(受体)尾静脉输注2×10⁸个BALB/c小鼠(供体)来源的骨髓细胞,同时腹腔注射抗TCRαβ单抗500 μg;第2天,向C57BL/6小鼠腹腔注射抗CD80单抗500 μg.第6天进行皮肤移植.在不同的时间对C57BL/6小鼠进行迟发型超敏反应测定和混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)分析,并进行MLR的白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)逆转实验、过继转移实验和嵌合体检查,探讨耐受形成的机制.结果:接受了抗TCRαβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓移植的C57BL/6小鼠,供体皮肤移植物平均存活70 d;在迟发型超敏反应和混合淋巴细胞反应中均表现出显著的低反应性.IL-2逆转实验结果表明克隆不应答可能参与了移植耐受的形成.体内、体外过继转移实验均显示耐受C57BL/6小鼠脾细胞中存在抑制细胞的活性.嵌合体检查结果表明在耐受C57BL/6小鼠的胸腺和脾中均形成了混合嵌合体,嵌合体水平随时间下降.结论:抗TCRαβ单抗和抗CD80单抗联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在组织相容性抗原完全不相同的成年小鼠间成功诱导出皮肤移植物的长期耐受.     

Efectsofbonegraftsonhematopoieticrecoveryinchimeric─resistantcombination

Ｅｆｅｃｔｓｏｆｂｏｎｅｇｒａｆｔｓｏｎｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｒｅｃｏｖｅｒｙｉｎｃｈｉｍｅｒｉｃ┐ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎＬｉＹｏｎｇ′ａｎ，ＬｉＺｈｉｃｈａｏ，ＨｉｒｏｋｏＨｉｓｈａ＊，ＦａｎＨｏｎｇｘｕｅ（Ｄｅｐｔ．ｏｆＴｏ...     

环孢霉素和供体脾细胞门静脉接种延长小鼠心脏移植存活

OBJECTIVE: To investigate the effect of portal venous inoculation of donor splenocytes combined with cyclosporin A (CsA) administration on cardiac allograft survival in mice. METHODS: Heterotopic cardiac transplantation between fully allogenic NIH/q and BALB/C strain mice was performed. A modified procedure of neonatal heart-in-ear transplantation, as originally described by Fulmer et al, was adopted. We prepared donor splenocytes from NIH/q or third-party C57BL/6 spleens for BALB/C recipients, which were injected preoperatively via the recipient portal vein or the systemic vein 1 week before the heart-in-ear transplantation. The recipients were subsequently treated with a short course of the immunosuppressive agent, CsA (4 mg/kg starting from 7 d before the operation till 5 d after it). RESULTS: Portal venous inoculation of donor splenocytes combined with CsA significantly prolonged cardiac graft survival (n=6, P<0.05) that reached 31.00+/-3.23 d, and 2 of the 6 allografts survived for more than 35 d. Donor splenocytes injected via the systemic vein or third-party C57BL/6 mice splenocytes injected via the portal vein did not prolong graft survival (P>0.05). CsA alone or portal venous inoculation of donor-specific splenocytes alone also prolonged graft survival (P<0.05), with mean graft survival time of 18.50+/-2.59 d and 16.11+/-1.97 d respectively. CONCLUSION: Combination of portal venous inoculation of donor-specific splenocytes and CsA can prolong murine cardiac allograft survival, which is donor antigen-specific.     

工程化同种胰岛移植治疗1型糖尿病小鼠的实验研究

 目的 将外源蛋白FasL修饰的供者胰岛移植于糖尿病小鼠肾包膜下,观察其治疗1型糖尿病的效果。方法 采用ProtExTM技术将嵌合蛋白SA-FasL修饰于供者小鼠胰岛,流式细胞检测蛋白的表达;以近交系小鼠BALB/c和C57BL/6分别为胰岛移植的供受者,进行同种小鼠胰岛移植,部分受者联合免疫抑制剂雷帕霉素（rapamycin,RPM）治疗,从手术当日开始应用RPM（0.2 mg/kg）,连续治疗10天。根据移植胰岛的不同及有无联合RPM治疗将受者分为5组：(1) SA-FasL修饰组（FasL组,n=33）;(2) SA-FasL修饰+RPM治疗组（FasL-RPM组,n=31）;(3) SA修饰组（SA组,n=27）;(4) SA修饰+RPM治疗组（SA-RPM组,n=30）;(5)未修饰胰岛组（Islet组,n=20）。术后连续3天测定血糖,其后每周测定尿糖3次。若受者尿糖阳性并连续2天血糖≥250 mg/dL为移植排斥反应,尿糖阴性超过100天为移植胰岛长期存活。结果 激光共聚焦显微镜观察生物素呈绿色,FasL蛋白呈红色表达于胰岛表面,胰岛细胞的平均生物素化效率为（90.8±0.9）%,FasL蛋白平均表达率为（82.6±2.2）%。FasL组中28%受者的移植胰岛获得长期存活,联合应用RPM之后（FasL-RPM组）长期存活率提高到92%,两组间差异有显著统计学意义（P<0.05）;SA组于术后25天全部受者均发生排斥反应,移植胰岛平均存活时间（mean survival time,MST）为（16±1.5）天,联合应用RPM之后（SA-RPM组）21%受者的移植胰岛获得长期存活,但显著低于FasL-RPM组的存活率（P<0.05）。Islet组于术后22天全部受者均发生排斥反应,移植胰岛MST为（14±1.7）天。结论 表达FasL嵌合蛋白的工程化胰岛移植于糖尿病小鼠并联合短程免疫抑制剂治疗,有可能诱导移植胰岛长期存活,对1型糖尿病的治疗具有潜在的临床意义。     

泡状棘球蚴感染纯系小鼠诱导免疫耐受的实验研究

目的探讨感染泡球蚴的小鼠皮肤移植后免疫系统的变化对移植物的影响。方法采用小鼠尾部皮肤移植建立小鼠皮肤移植模型。将64只C57BL/6小鼠及64只BALB/c小鼠各随机分为4组,每组各16对小鼠,其中16只C57BL/6小鼠为供体,16只BALB/c小鼠为受体。A组:空白对照组(非同系移植不予以任何干预);B组:实验组1,以健康C57BL/6小鼠尾部皮肤移植至BALB/c小鼠(感染泡球蚴1个月后);C组:药物对照组,采用非同系移植加药物[西罗莫司(商品名:雷铂霉素)]干预,皮肤移植术后5d每日给予西罗莫司1.5mg/kg干预;D组:实验组2,以健康C57BL/6小鼠尾部皮肤移植至BALB/c小鼠(感染泡球蚴3个月后)。术后观察BALB/c小鼠尾部移植皮肤生长情况。每组留8只用于观察BALB/c小鼠术后尾部移植皮肤生存期,每组于术后3、5、7、9d4个时间点各取2只小鼠尾部移植皮片,用于观察小鼠尾部移植皮肤病理变化情况。结果 A、B、C、D组移植皮肤存活时间平均为(6.00±0.76)、(7.50±0.93)、(13.25±1.04)、(11.5±0.93)d。C组小鼠移植皮片存活时间较D组长,差异有统计学意义(P<0.05)。C、D组移植皮肤存活时间较A、B组延长,差异有统计学意义(P<0.01)。组织病理学检查:A、B组移植皮片均在术后1周左右发生明显的逐渐加重的急性免疫排斥反应,C、D组移植皮片的免疫排斥反应较A、B组轻。结论小鼠感染泡状棘球蚴后有利于同种异体移植皮片的存活,可以延长移植皮片的生存时间。该模型为研究感染泡球的免疫实验研究提供了良好的实验平台,为进一步研究泡球蚴感染后机体免疫状态的变化提供了理论依据。     

TJU103对小鼠同种异基因造血干细胞移植模型GVHD的预防作用

目的探讨TJU103对小鼠同种异基因造血干细胞移植模型移植物抗宿主病(GVHD)是否起预防作用。方法(1)用单向混合淋巴细胞培养方法检测TJU103对T淋巴细胞增殖的影响;(2)以BALB/c(H-2d)、CB6F1(H-2d/b)分别作为完全异基因移植和半相合基因移植的受鼠,给予9.0Gy全身照射后4h,单纯照射组经尾静脉注射0.3mlD-Hank's液,不进行细胞移植;对照组经尾静脉注射C57BL/6小鼠混合细胞悬液(4.5×106骨髓细胞 3.0×107脾细胞),但不进行其他治疗处理;实验组经尾静脉注射C57BL/6小鼠混合细胞悬液(4.5×106骨髓细胞 3.0×107脾细胞) TJU103(终浓度25μg/ml),此后腹腔注射TJU10350μg/d,共7d,然后观察其造血恢复、植入及GVHD的情况。结果(1)TJU103可以显著抑制T细胞活化增殖,其抑制作用呈剂量依赖性,在25μg/ml浓度时,可以抑制83%细胞增殖。(2)由于没有给予GVHD防治措施,对照组受鼠GVHD的发生率和死亡率分别为10/10和10/10;而完全异基因移植实验组小鼠GVHD发生率仅为2/10,30d生存率增加至8/10(P<0.01),中位生存期延长至30d以上(P<0.01);半相合基因移植实验组小鼠GVHD发生率为1/10,30d生存率增加至9/10(P<0.01),中位生存期延长至30d以上(P<0.01)。结论TJU103不仅可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,而且可显著降低小鼠同种异基因造血干细胞移植模型GVHD的发生率。     

ICOS-Ig combined with CsA induces long term survival of cardiac allografts in mouse

Objective： To study the synergistic effect of ICOS-Ig combined with cyclosporine （CsA） on mouse heart transplantation and explore its therapeutic potential. Methods： ICOS-Ig fusion protein was generated by fusing the extraeellular portion of human ICOS and Fc portion of human IgG. To investigate the effect of ICOS-Ig on T-cell proliferation in vitro, ICOS-Ig or IgG was added to the primary MLR cultures （BALB/c spleen T cells as responder cells and irradiated C57BL/6 spleen cells as stimulator cells）. The cells responsiveness rates were detected by 3H-TdR methods. Then the T cells of each group in primary MLR were cultured as responder cells for secondary MLR, and irradiated C57BL/6 （donor） or C3H （third party） spleen cells as stimulator cells. To study the effect of ICOS-Ig on T-cell proliferation in vivo, CFSE-labeled C57BL/6 spleen cells were transferred to irradiated BALB/c mice. Mice were then treated with IgG, ICOS-Ig or CsA. Seventy two hours after transfer, the spleen cells of the mice were harvested for the detection of CD4^＋CFSE^＋ and CD8^＋CFSE^＋ by FACS. C57BL/6 mouse underwent transplantation of the hearts of BALB/c mouse and were then randomly divided into five equal groups： no treatment group, control lgG treated group （250 gg i.p. d2, 4, 6）, ICOS-Ig treated group （250 μg i.p. d2, 4, 6）, CsA treated group （10 mg/kg i.p. d0-6）, ICOS-Ig combined with CsA group. The cardiac allograft survival was monitored by daily palpation. Results： In primary MLR, ICOS-Ig inhibited T-cell proliferation, （inhibition ratio 58i8.2% in 50 μg/ml）. In secondary MLR, ICOS-Ig specifically inhibited donor spleen cells, which suggested ICOS-Ig could induce donor-specific hyporesponsiveness. In the CFSE dye assay, CD4^＋CFSE^＋ and CD8^＋CFSE^＋ in ICOS-Ig and CsA group was stronger than those in control group, which showed ICOS-Ig and CsA could inhibit the proliferation of allo-reactive T cells in vivo. In mouse heart transplantation model, survival was significantly prolonged in animals treated with ICOS-Ig or CsA as compared with controls. Moreover, ICOS-Ig combined with CsA group had even longer engraftment （〉100 d） than ICOS-Ig or CsA used alone. In histological examination, it was found that there were congestions and edemas in no treatment and IgG treated recipients, together with a lot of inflammatory cells infiltrated. Allogeneic hearts from ICOS-Ig and/or CsA immunized recipients revealed milder histological changes. It was revealed in mechanical analysis that splenic T cells from recipients also exhibited depressed mixed leukocyte reactions （MLR） and cytotoxic lymphocyte reactions （CTL）. Conclusion： These data suggest that ICOS-Ig combined with CsA induces a long-term survival of mouse cardiac allografts, whereas monotherapy is less effective in this regard. Thus, ICOS-Ig combined with CsA treatment may be a novel regimen to combat allograft rejection.     

同品系小鼠卵巢移植方法的建立

目的 建立KM、ICR、C57BL/6J、BALB/C四个品系新鲜卵巢异体同位移植的方法.方法 上述四个品系出生10 d、20 d、4周的仔鼠作为供体,取出整个卵巢,将卵巢原位移植到同品系4周龄受体雌鼠,术后置于屏障系统内精心饲养,5~8周后,与同品系成年雄鼠交配,观察移植受体是否有正常的繁殖功能.结果 同品系不同时间段的新鲜卵巢,移植到同品系受体中,移植卵巢在受体体内可以恢复正常功能,受体可以正常交配,产生正常的仔鼠.结论 同品系不同日龄的异体同位卵巢移植方法可行.