聚合酶链反应及染色法在口腔念珠菌白斑诊断中的应用

【目的】探讨聚合酶链反应技术在检测口腔白斑中念珠菌感染的应用。【方法】应用组织化学染色法和聚合酶链反应技术对口腔白斑是否存在念珠菌进行检测。【结果】 10 7例口腔白斑 ,经PAS和六胺银染色 ,16 .8% (18/ 10 7)的口腔白斑检出念珠菌菌丝。念珠菌细胞色素P4 50 基因片段PCR检出率为 10 % (11/ 10 7) ,其中的白色念珠菌EO3 基因片段的PCR检出率为 6 .5 % (7/ 10 7)。【结论】组织化学染色法能直观显示口腔白斑中念珠菌形态分布特点以及所引起的组织学改变 ,而PCR特异性强 ,可区分不同种属的念珠菌感染     

中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ／Ⅱ醌氧化还原酶基因多态性

目的：确定中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ／Ⅰ「ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：」醌氧化还原酶（ＮＱＯ１）基因ｃＤＮＡ的６０９位点Ｃ→Ｔ（Ｃ６０９→Ｔ）突变的频率分布。方法Ｌ：利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术分析了８１名正常中国汉族人ＮＱＯ１基因ｃＤＮＡ的６０９位点的多态性。结果：中国流放人ＮＱＯ１基因的Ｃ６０９→Ｔ的频率为０．５２６；基因型Ｔ６０９／Ｔ６０９、Ｃ６０９／Ｃ６０９与Ｃ６０９／     

聚合酶链反应在结核病诊断中的应用

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）对结核病的诊断价值。方法：应用ＰＣＲ技术检测４７份结核病患者的各种临床标本，并与传统细菌学检测结果比较。结果：ＰＣＲ检测阳性率为５７．４５％（２７／４７），明显高于传统细菌学检测者（１７．０２％，８／４７）（Ｐ〈０．００５）。其中，ＰＣＲ检测胸膜结核性胸水与脑膜结核性脑脊液的阳性率均显著高于传统学检测者（Ｐ〈０．０５）。ＰＣＲ检测的假阳性率为５．１３％（４／７８），     

卡氏肺孢子虫DNA的PCR检测

①目的探讨卡氏肺孢子虫的检测方法及感染状况。②方法收取病人痰液、肺组织及支气管灌洗液，常规方法提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，并与吉氏染色结果进行比较。③结果８６例住院病人，卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率为４１．９％，卡氏肺孢子虫包囊吉氏染色法的检出率为１４．９％，两种方法的检出率比较，差异有显著性（ｕ＝６．６３８，Ｐ＜０．０５）。尿毒症、肺癌、血液病和肺部炎症病人卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率分别为３７．５％，６１．５％，５０．０％和２０．８％，差异有显著性（χ２＝９．０１，Ｐ＜０．０５）。痰液、肺组织和支气管灌洗液标本，卡氏肺孢子虫ＤＮＡＰＣＲ的检出率分别为２８．６％，６１．９％和７７．８％，差异有极显著意义（χ２＝１２．３０，Ｐ＜０．０１）。吉氏染色法检测出的１０份卡氏肺孢子虫包囊阳性标本，ＰＣＲ检测皆为阳性；５７份阴性标本，ＰＣＲ检测出１５份为阳性。４份结核标本ＰＣＲ检测皆为阴性。④结论ＰＣＲ技术检测肺组织和支气管灌洗液标本中的卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，具有较高的敏感性和特异性     

肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除术标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ），聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况，８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９     

聚合酶链反应技术在腓骨肌萎缩症基因诊断中的应用

目的 探讨应用聚合酶链反应（ＰＧＲ）技术建立中国人腓骨肌萎缩症（ＣＭＴ）基因诊断的方法。方法 分别应用ＰＣＲ－双酶切、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）或ＰＣＲ直接测序等方法对３２个确诊的ＣＭＴ家系进行了ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、Ｇx３２等致病基因的突变检测。结果 ２１．９％的ＣＭＴ家系患者有Ｇx３２、ＭＰＺ和ＰＭＰ２基因的突变。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测到１０个家系有异常泳带,经ＰＣＲ测序证实有５个为多态;另５个为与疾病相关的致病的点突变,即４个Ｇx３２和１个ＭＰＺ基因的点突变。PCR-双酶切诊断了２个包含ＰＭＰ２２基因在内的大片段重复突变的ＣＭＴ１Ａ型家系。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ仅１个家系患者异常泳带,该结果也可经ＰＣＲ－ＳＳＣＲ方法检出。结论 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－双酶切可作为Ｇx３２、ＭＰＺ、ＰＭＰ２２基因的点突变和ＣＭＴ１Ａ的大片段重复突变的初筛的方法,而ＰＣＲ－ＤＧＧＥ方法用于Ｇx３２基因的突变检测不理想,点突变应经ＤＮＡ测序证实。     

阴道加德纳菌致病株的检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测阴道加德纳菌（Ｇ．Ｖａｇ）致病株,探讨其临床诊断价值。在ＩＴＳ－２３ｓｒＲＮＡ基因上设计一对特异性引物Ｐ１／Ｐ２,建立ＰＣＲ反应体系,特异地扩增Ｇ．Ｖａｇ致病株。结果Ｇ．Ｖａｇ扩增片段４３３ｂｐ,１４１例有临床症状者检出３６例阳性,阳性率２５５％,１２９例无症状对照组检出６例阳性,阳性率４６％,两者比较差异有显著性。该ＰＣＲ反应体系特异地检测Ｇ．Ｖａｇ致病株,为临床诊断及其致病性的研究提供了新的检测方法     

用聚合酶链反应快速检测痰液中结核杆菌

本研究以结核杆菌染色体中重复出现的长度为１２３个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段作为聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的模板，合成一对寡核苷酸引物。痰液标本先经三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ），乙二胺四乙酸二钠（ＥＤＴＡ－２Ｎａ）和三硝基甲苯（Ｔｒｉｔｏｎｘ－１００）加热、震荡处理，裂解结核杆菌，再作ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝胶电泳。同时，与痰液直接涂片、抗酸染色镜检抗酸染色阳性杆菌作比较。用该ＰＣＲ检测的检出率为９１．４％（３２／３５），而涂片抗酸染色的检出率仅为３４．３％（１２／３５）。两者相比有非常显著性差异（ｘ２＝２４．４７６，Ｐ＜０．００１）。由于改进了ＰＣＲ前痰液标本的处理方法，使整个ＰＣＲ检测过程所需时间缩短至９ｈ。我们认为该ＰＣＲ检测结核杆菌是特异、敏感和快速的，可在临床实验室应用。     

双温聚合酶链反应检测喉乳头瘤中HPV—DNA

应用双温聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测喉乳头瘤石蜡包埋组织中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ》结果与常规ＰＣＲ（三温循环）相同；３０例喉乳头瘤中ＨＰＶ总检出率为４６．７％（１４／３０），ＨＰＶ－６／１１／１６的检出率分别为４０％（１２／３０）、１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０）１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０），ＨＰＶ－６的检出率极显著高于ＨＰＶ－１１／６（ｘ＾２＝１０．６，Ｐ〈）．     

聚合酶链反应检测临床标本中的肺炎支原体

作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测３～１３岁肺炎患儿１５０例咽拭标本中的肺炎支原体（ＭＰ），以分离培养及间接血凝试验（ＩＨＡ）为对照。ＰＣＲ检出率显著高于培养，若以ＩＨＡ为标准，ＰＣＲ阴性一致率为９６％、阳性一致率为７３％。不同病程ＭＰ－ＤＮＡ检出率无显著差异，提示即使病程较长仍可应用ＰＣＲ作出诊断。鉴于ＰＣＲ检测简便快速，可作呼吸道ＭＰ感染的常规诊断应用。但ＭＰ感染经敏感药物治疗可使ＰＣＲ结果阴性，因此，血清学检测尚不宜放弃。     

HpaII—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法（ＨａｐⅡ－ＰＣＲ）检测７８例急性白血病（ＡＬ）患者降钙素（ＣＴ）基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｄ特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率６８．８％（３３／４８），急性非淋巴细胞白血病７３．３％（２２／３０），敏感性达１０＾－３。证明ＣＴ基因５＇高度     

P53肿瘤抑制基因突变分析的技术方法探讨

聚合酶链反应－单链构型多态分析－脱氧核糖核酸序列测定技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ技术），对正确检测和评价人食管癌和癌前病变组织肿瘤抑制基因Ｐ５３的基因变化的影响进行了分析。结果：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ序列测定技术是分析肿瘤抑制基因Ｐ５３变化的较灵敏和可靠的方法。但是，肿瘤组织的取样误差和处理不当可造成对Ｐ５３基因突变的发生率和性质的错误结论。利用免疫组织化学技术定位检测Ｐ５３蛋白的变化，并据此在镜下组织切片中收集Ｐ５３蛋白免疫组化阳性细胞，然后进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ分析有助于提高Ｐ５３基因变化的检出率，阳性细胞浓集数量与Ｐ５３基因变化检出率呈正相关。     

人肝细胞癌中PTEN基因的DNA杂交及突变分析

目的　研究人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因缺失及第５、第８外显子突变。方法　应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因限制性片段长度多态性和纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。应用聚合酶链单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）检查ＰＴＥＮ基因的第５、第８外显子的突变。结果　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示,所有３４例肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见限制性片段长度多态性或纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。ＰＣＲＳＳＣＰ检测发现,２例肝细胞癌第５外显子ＰＣＲ产物均显示１条额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）。另２例肝细胞癌第８外显子ＰＣＲ产物呈现额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）,合计突变率为１１．８％（４／３４）。结论　所检３４例人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失,但存在突变。     

老年原发性高血压AT1—R基因多态性的研究

目的 研究老年原发性高血压（ＥＨ）血管紧张素ＩＩ１型受体（ＡＴ１－Ｒ）基因Ａ／Ｃ＾１１６６多态性的特征。方法 应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术检测８７例汉族老年ＥＨ患者和５５例正常老年人的ＡＴ１－Ｒ基因Ａ／Ｃ＾１１６６多态性分布。结果 ８７例老年ＥＨ患者的Ｃ＾１１６６等位基因频率为０．１ １５,５５例正常老年人为０．０３６,经统计学分析两组间有显著差异（Ｐ〈０．０５）     

聚合酶链反应在诊断肺结核中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对７８例患者的痰、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和胸水标本进行结核菌检测；并同时进行涂片抗酸染色、皮肤结核菌素试验及血结核菌抗体检测。结果：ＰＣＲ阳性率为４６．１５％，与涂片镜检、结核菌素试验强阳性、血结核菌抗体阳性率（分别为３．８５％、１７．９５％、１１．５４％）相比均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。由此可见ＰＣＲ方法比传统方法具有更高的结核杆菌检出率。     

聚合酶链反应技术检测临床标本中军团病杆菌

探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测临床标本中军团病杆菌（ＬＤＢ）对军团菌病的诊断价值。用ＰＣＲ技术对３１例ＬＤＢ培养和（或）血清学阳性、临床诊断为军团菌病患者急性期的临床标本，军团菌巨噬细胞感染增效基因（ｍｉｐ ｇｅｎｅ）６３０ｂｐ片段进行ＤＮＡ扩增，并与军团菌培养和血清血诊断（间接荧光抗体检查法）比较。结果：ＰＣＲ技术诊断军团菌病的阳性率为９０．３％９２８／３１），比培养的阳性率（６２．６％，１     

EB病毒与复发性阿弗它溃疡的关系

目的 探讨ＥＢ病毒与复发性阿弗它溃疡（ＲＡＵ）的关系。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测ＲＡＵ患者的怕期粘膜损害、间歇期愈合粘膜标本各８０例的ＥＢＶ－ＤＮＡ,并以６０例健康口腔粘膜作对照。结果 ＥＢＶ－ＤＮＡ的阳性检出率分别是：ＲＡＵ组溃疡期粘膜损害为３９％（３１／８０）,明显高于对照组正常粘膜的８％（５／６０）（Ｐ〈０．０５）。间歇期愈合粘膜为１１％（９／８０）,低于溃疡期粘膜损害（Ｐ〈０     

用聚合酶链反应技术诊断结核病

用聚合酶链反应技术对结核杆菌特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因１２３ｂＰ的片段进行扩增。该法检测人型结核杆菌灵敏度可达到１０ｆｇＤＮＡ，对１４９份结核患者临床标本检测结果显示ＰＣＲ总阳性率（６９．１％）明显高于直接涂片荧光镜检（１５．４％）与细菌培养（１０．１％）的阳性率（Ｐ＜０．０１）。研究表明ＰＣＲ是一种特异、敏感、快速诊断结核病的好方法，值得推广。     

肺炎患儿肺炎支原体感染的实验室检测

目的：探讨肺炎患儿肺炎支原体（ＭＰ）感染的实验室检测方法。方法：使用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测６７６例肺炎患儿ＭＰ的感染,其中１３９例同时采用支原体培养进行检测;１１２例做间接血凝试验（ＩＨＡ）。结果：ＰＣＲ法对ＭＰ感染的检出率明显高于培养法（Ｐ〈０．０１）,双份血清ＩＨＡ的检测率和ＰＣＲ法比较无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,单份血清ＩＨＡ的检出率明显低于ＰＣＲ法（Ｐ〈０．０１）。结论：ＰＣＲ法     

双温聚合酶链反应检测喉乳头瘤中HPV－DNA

应用双温聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测喉乳头瘤石蜡包埋组织中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ。结果与常规ＰＣＲ（三温循环）相同：３０例喉乳头瘤中ＨＰＶ总检出率为４６．７％（１４／３０），ＨＰＶ－６／１１／１６的检出率分别为４０％（１２／３０）、１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０），ＨＰＶ－６的检出率极显著高于ＨＰＶ－１１／６（ｘ２＝１０．６，Ｐ＜０．０１）。初步结果表明，本地区喉乳头瘤主要与ＨＰＶ－６的感染密切相关。该法具有缩短检测时间、节省一个恒温水浴箱等优点。