脂质与糖尿病大鼠肾小球TGF-β/Smad信号通路的关系

目的 探讨脂质对糖尿病大鼠肾小球TGF-β／Smad信号通路的影响。方法 糖尿病大鼠随机分成普通饲料组，高脂饲料组、高脂饲料加辛伐他汀干预组（辛伐他汀组）和正常对照组。16周后，采用RT-PCR、免疫组化和Western印迹法检测大鼠肾小球转化生长因子β1（TGF-β1）、转化生长因子Ⅱ型受体（TβRⅡ）、Ⅵ型胶原（ColⅥ）mRNA和蛋白和磷酸化Smad2（p—Smad2）表达的变化。结果 与正常对照组比较，普通饲料组、高脂饲料组、辛伐他汀组肾小球TGF-β1、TβRⅡ、ColⅥmRNA和蛋白及p-Smad2表达均上调，高脂饲料组上调最为明显；与高脂饲料组比较，辛伐他汀组TGF-β1、TβRⅡ、ColⅥ和p-Smad2表达明显下调。结论 脂质通过激活TGF-β／Smad信号通路，加剧糖尿病肾脏病变；辛伐他汀抑制TGF-β／Smad通路的激活，延缓糖尿病肾病的进展。     

甘草酸对转化生长因子β1刺激肝星状细胞信号传导的作用

目的探讨甘草酸对转化生长因子β1(TGF β1)刺激大鼠肝星状细胞(HSC)胞内信号传导通路的作用。方法体外分离、培养大鼠肝HSC,甘草酸与TGFβ1刺激的HSC共同孵育。逆转录聚合酶链反应法检测1-1000 μmol/L甘草酸对TGF β1刺激的HSC中Smad2、3、7 mRNA的表达;Western印迹法检测1-1000μmol/L甘草酸对TGF β1刺激的HSC中Smad2、3、7蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达水平。结果TGFβ1促进HSC中Smad2、3、7 mRNA及蛋白的表达,同时促进Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。1-1000μmol/L甘草酸抑制Smad2、3、7 mRNA及蛋白的表达,并且抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,均呈剂量依赖性。结论甘草酸可能通过干预大鼠HSC中TGFβ信号通路而减少胶原合成和发挥抗纤维化作用。     

氧化苦参碱对转化生长因子-β1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞(HSC)培养活化和转化生长因子-β1,(TGF-β1)促活化作用影响,并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系.方法原代分离培养2d HSC,MTT法检测低浓度氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSG细胞毒作用(作用12 h)和增殖影响(作用48 h),或给予TGF-β1(5 ng/m1)和/(或)氧化苦参碱(2 mg/L)干预,相差显微镜观察HSC形态变化,分别以RT-PCR或Western blot法检测TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2/3、Smad 7以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和/(或)蛋白表达.结果氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSC无明显细胞毒作用,大于8 mg/L能抑制HSC增殖.氧化苦参碱(2 mg/L)抑制TGF-β1诱导HSC激活时的α-SMA表达和形态转化,伴随TGF-β1受体mRNA表达升高,Smad 7 mRNA表达上调及TGF-β1mRNA表达下降(与单纯TGF-β1处理组相比,分别上升1.25、0.87倍或下降1.92倍,P均＜0.05),但不影响TGF-β1Ⅱ型受体和Smad 3 mR-NA表达.Western blot检测Smad 2/3、Smad 7蛋白表达,与RT-PCR结果相似.氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用.结论低浓度氧化苦参碱(2 mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF-β1表达、上调TGF-β1Ⅰ型受体、恢复正常的TGF-β1跨膜信号转导,抑制HSC培养活化和TGF-β1促活化作用.     

布地奈德对支气管哮喘小鼠转化生长因子β信号通路的影响

支气管哮喘（简称哮喘）由于炎症反复刺激出现气道重塑，其中转化生长因子β（TGF-β）在哮喘气道重塑发病机制中发挥着重要作用，而TGF-β／Smad信号转导通路是TGF-β发挥其生物学作用的重要通路，我们的研究主要是观察布地奈德（BUD）对哮喘小鼠TGF-β／Smad信号转导通路各个环节的影响，探讨BUD对早期气道重塑的干预作用。     

MicroRNA-195与TGF-β1/Smads信号通路在自发性高血压大鼠心脏重构中的作用

目的　探讨微小核糖核酸195（microRNA-195,　miR-195）、转化生长因子β1/Smads　（TGF-β1/Smads）信号转导通路及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在自发性高血压大鼠（SHR）心脏重构中的作用,血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）类药物干预对SHR心脏形态结构及表达上述因子的影响。方法　以8周龄雄性SHR大鼠16只及Wistar大鼠8只为研究对象,将SHR大鼠随机分为SHR贝那普利干预组（SHR干预组,n8）、SHR对照组（n8）,Wistar大鼠作为正常对照组;SHR干预组大鼠予灌服贝那普利10　mg/（kg·d）,SHR对照组大鼠和正常对照组大鼠予蒸馏水灌胃,干预8周;干预前后测鼠尾动脉血压,干预8周后股动脉放血处死大鼠,HE染色观察大鼠心脏形态学改变,实时荧光定量多聚酶链式反应（qRT-PCR）法检测大鼠心脏中miRNA-195的表达,　Western　blot检测转化生长因子β1（transforming　growth　factor　beta1,　TGF-β1）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、Smad蛋白3（small　mother　against　decapentaplegic　protein　three,　Smad3）、I型胶原（Col-Ⅰ）和Ⅲ型胶原（Col-Ⅲ）蛋白表达水平。结果　SHR大鼠心脏miRNA-195　、AngⅡ、TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ的表达量均高于Wistar大鼠（P<0.01或P<0.05）,SHR干预组大鼠心肌细胞较SHR对照组明显变小,细胞排列较其紧密有序,miRNA-195　、AngⅡ、TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ表达量均明显降低（P<0.01或P<0.05）。结论　MiRNA-195可能通过上调AngⅡ及TGF-β1/Smads信号转导通路促进SHR心脏重构;贝那普利干预可抑制miRNA-195表达,可能通过下调AngⅡ及TGF-β1/Smads信号转导通路抑制SHR心脏重构。     

五灵胶囊调节TGF-β／Smad信号通路蛋白对胶原I、Ⅲ型表达的影响

目的探讨五灵胶囊（WL）调节肝纤维化大鼠肝组织及星状细胞（HSC）TGF-β／Smads信号转导蛋白对胶原I和Ⅲ型（COL～I、COL-Ⅲ）表达的影响。方法SD大鼠以高脂低蛋白饲养、饮用10％乙醇,皮下注射40％CCl4,隔4天注射1次,连续6周制备肝纤维化模型,灌胃给予WL3．86g／kg和秋水仙碱0．1mg／kg治疗1月;另体外分离HSC,以不同剂量的WL与HSC培养24h,最后3h加入TGF-β1 10ng／ml。实验结束后镜检肝细胞变性和肝组织纤维化程度,同时ELISA法测定血清COL-I、COL-Ⅲ和培养液COL—I含量,RT-PCR检测肝组织COL-I、COL-Ⅲ、TGF-β1 mRNA的表达。Western blot检测肝组织及HSC内COL—I、ProCOL—I、LN、α—SMA、ERK、p-ERK、TβRI、TβRⅡ、Smad2／3、Smad7蛋白表达。结果WL组大鼠肝细胞变性和肝纤维化程度明显减轻,血清COL-I、CoL-Ⅲ含量增加,COL-I、COL-ⅢmRNA表达降低。Western blot结果显示,WL能明显下调肝组织α—SMA、LN、p-ERK、TβRI、COL—I、ProCOL-I蛋白表达,对ERK、TβRⅡ、Smad2／3、Smad7蛋白表达无影响;显著下调HSCα—SMA、TβRII、p-ERK、Smad7表达,呈浓度依赖性抑制HSC分泌COL-I。结论WL抑制肝纤维化大鼠肝组织COL-I、COL-Ⅲ合成并增加COL—I降解,其作用位点是下调肝组织和HSCTGF-β／Smad、Ras／ERK信号通路蛋白p—ERK、TβRⅡ表达。     

Smad7与肝纤维化

转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝纤维化形成过程中具有重要作用.Smad蛋白家族是TGF-β细胞内信号转导的重要分子,其中Smad7能够抑制TGF-β信号转导通路,介导细胞内负反馈,从而阻断TGF-β介导的肝纤维化.此文就Smad7抑制肝纤维化机制作一综述.     

蓝莓对大鼠肝纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的观察蓝莓对大鼠肝纤维化的预防作用及对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子（transforminggrowthfactor,TGF）-β1／Smads信号通路的影响。方法45只健康sD大鼠被随机分为正常对照组、模型组、蓝莓预防组、丹芍化纤胶囊预防组、蓝莓＋丹芍化纤胶囊预防组。每组9只。用四氯化碳（cch）制作大鼠肝纤维化模型,共8周。测定肝脏指数及血清ALT、AST并进行肝组织病理学检查,采用实时荧光定量RT—PCR检测TGF-β1、Smad4mRNA的表达,免疫组织化学法检测肝脏组织TGF-β1、Smad4及Smad7蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1及Smad4的表达增高（P〈0．05）,而Smad7的表达降低（P〈0．05）。与模型组比较,各预防组血清ALT及AST均明显降低（P〈0．05）,TGF-β1及Smad4的表达均降低（P〈0．05）,而Smad7的表达均增高（P〈0．05）。结论蓝莓对GEL所致大鼠肝纤维化有一定的预防保护作用,其机制可能与蓝莓影响TGF-β1／Smads信号转导通路,从而下调TGF-β1及smad4的表达,同时上调Smad7的表达有关。     

腺病毒介导反义Smad4基因大鼠体内转移对实验性肝纤维化的治疗作用

肝纤维化本质是过多的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)沉积于肝内。转化生长因子(TGF)-β1是最重要的促肝纤维化因子，它能促进肝贮脂细胞(HSC)合成胶原、纤维连接蛋白及蛋白多糖等ECM，抑制基质金属蛋白酶(MMP)合成，并促进HSC分泌组织金属蛋白酶Ⅰ抑制剂(TIMP-1)等从而减少ECM降解。Smad4是TGF-β信号传导通路中的一个关键性因子，因此，我们将腺病毒介导的反义Smad4基因转移至大鼠体内，观察其对CCl4／乙醇诱导大鼠肝纤维化模型的影响。     

外源Smad7基因对原代肝星状细胞活性和基因表达调控的影响

目的研究外源Smad7基因对原代肝星状细胞（HSC）活性和基因表达调控的影响。方法采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC，并予转化生长因子口。（TGFβ1）刺激，同时分别以重组腺病毒AdSmad7和对照病毒AdGFP感染原代HSC，RT—PCR法检测TGFβ1、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA在HSC中的表达，免疫细胞化学法检测HSC中a一平滑肌肌动蛋白（a—SMA）和Smad7表达。结果RT—PCR显示，与TGFβ1对照组比较，AdSmad7组Smad7 mRNA表达显著上调（P〈0．05），但TGFβ1、和Smad3 mRNA表达差异无统计学意义。免疫细胞化学染色显示，与其他各组比较，AdSmad7组HSC胞质中Smad7表达最高，α—SMA表达则明显降低（P〈0．01）。结论重组复制缺陷型腺病毒AdSmad7可在HSC中高效表达；外源Smad7基因可阻断TGFβ1，对HSC的活化作用，但对Smad3和TGFβ1，mRNA表达无明显影响。     

丹参酚酸B对大鼠肝星状细胞中丝裂原激活的蛋白激酶通路的抑制作用

目的 探讨丹参酚酸B(SA-B)对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)中丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的抑制作用。方法 分离大鼠HSC，于无包被塑料培养皿中原代培养7d，继以10^-6mol／L浓度的SA-B孵育，再加10ng／ml的转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激。以蛋白印迹法观察SA-B对TGF-β1刺激的HSC内细胞外调节的蛋白激酶(ERK)表达及其磷酸化和对HSC表面TGF-β1 I型受体(TβRI)，Ⅱ型受体(TβRⅡ)表达的影响，观察由此改变致HSC合成Ⅰ型胶原蛋白的变化。ELISA法测定HSC培养液中Ⅰ型胶原的含量。酶谱法观察基质金属蛋白酶2，9、13(MMP-2、MMP-9、MMP-13)的活性。结果 10^-6mol／L浓度的SA-B可抑制原代正常培养9d的HSC及TGF-β1刺激的HSC中ERK1／2的磷酸化，对TβRⅠ和TβRⅡ的表达无影响。SA-B可抑制原代正常培养的HSC合成Ⅰ型胶原，抑制TGF-β1刺激的HSCⅠ型胶原的合成及分泌。SA-B对HSC培养液中MMP-2和MMP-13的活性无明显作用，对MMP-9活性则有明显的促进作用。结论 SA-B抑制了正常原代培养已活化的HSC和经TGF-β1刺激的HSC内ERK信号传导通路，这一抑制作用与HSC的TGF-β1受体表达无关。SA-B通过抑制TGF-β1的信号传导，减少了HSC对Ⅰ型胶原的合成与分泌，此种细胞功能的改变可能与基质金属蛋白酶的降解作用无关。     

Smad7蛋白表达调控在抗肝纤维化研究中的应用前景

肝纤维化是慢性肝损伤的病理修复反应,为诸多慢性肝病发展至肝硬化的重要病理过程。转化生长因子-β1(TGF-β1)是肝纤维化形成中关键的细胞因子,主要通过TGF-β/Smads信号转导通路发挥生物学作用,Smad7是该通路中重要的负反馈调控蛋白。Smad7可以与Smad2、Smad3竞争性同TβRⅠ结合,使与Smad2、Smad3结合的TGF-β-TβRⅠ-TβRⅡ三重复合物减少,从而抑制Smad2、Smad3活化所介导的TGF-β信号传导~([1])。Smad7     

p15与c-Myc在TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞肥大中的表达及与TGF/Smad信号通路的关系

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心肌细胞肥大中Smad信号通路及其目的蛋白p15的表达。方法建立TGF-β1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大模型。PI染色标记细胞双链RNA法检测心肌细胞RNA表达量,间接检测心肌细胞肥大。实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关基因β肌球蛋白重链(β-MHC)的表达。Smad2 siRNA干扰Smad信号通路表达并检测其相关蛋白表达。Western blot检测心肌细胞p-Smad2、Smad2、Smad2/3、p15及c-Myc蛋白表达。结果 TGF-β1可诱导体外培养的心肌细胞肥大基因的表达,β-MHC的表达明显高于对照组(P0.01)。PI染色标记细胞双链RNA法检测发现,TGF-β1组RNA含量明显增高(P0.01),与对照组相比,TGF-β1可明显上调p-Smad2、Smad2、Smad2/3及Smad通路目的蛋白p15、c-Myc的表达(P0.01)。给予Smad2 siRNA特异性干扰后,p15表达较TGF-β1组减少(P0.01)。结论 TGF-β1可能通过Smad蛋白通路诱导心肌细胞肥大形成,此过程中相关目的蛋白p15表达增加。     

磷酸化细胞外信号调节激酶和Smad4 mRNA在胃癌中的表达

转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路障碍对肿瘤发生发展具有相当重要的作用。Smad4基因所编码的Smad4蛋白在TGF-β的信号转导中处于瓶颈地位。本研究采用免疫组化和分子原位杂交方法，对胃癌组织中磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)蛋白和Smad4 mRNA的表达进行检测，旨在探讨它们与胃癌发生发展的关系。     

Smad7在人慢性髓细胞白血病细胞株K562中的表达

目的：观察人慢性髓细胞白血病细胞株K562中Smad7基因和蛋白的表达；探讨转化生长因子(TGF—β1）mad7的诱导作用。方法：采用逆转录-聚合酶链反应、蛋白印迹法方法检测K562细胞与TGF-1共育前后Smad7 mRNA蛋白表达水平。结果：K562细胞中具有Smad7的表达，且可由外源性TGF-β1短暂诱导，Smad7的表达及变化在转录及翻译水平上基本保持一致。结论：Smad7参与K562细胞TGF-β信号的传导，Smad7与TGF-β1之间存在自身调节负反馈通路。     

骨成形蛋白7拮抗转化生长因子β1致肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的作用

目的:观察骨成形蛋白7(BMP-7)拮抗转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质(ECM)分泌作用,并对相关信号通路进行研究,对BMP-7抗纤维化机制进行深入探讨。方法:将不同浓度BMP-7预处理HK-2细胞,随后予以5ng/mlTGF-β1刺激,利用荧光实时定量PCR和Western印迹检测ECM表达、利用Western印迹和凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测相关信号通路蛋白表达。结果:荧光实时定量PCR和Western印迹结果表明,BMP-7可以浓度依赖方式下调TGF-β1刺激后HK-2细胞I型胶原,III型胶原,纤维连接蛋白在mRNA和蛋白水平表达。TGF-β1可促进HK-2细胞Smad2、Smad3磷酸化。但TGF-β1上调的Smad2、Smad3磷酸化可被BMP-7抑制,差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。EMSA结果表明,BMP-7则可抑制TGF-β1上调的NF-κB活性。结论:BMP-7可通过抑制Smad2/3磷酸化、抑制NF-κB的DNA结合活性达到阻断TGF-β1诱导HK-2分泌ECM的效应。     

抑癌基因Smad4与胃肠道肿瘤

Smad4是一种肿瘤抑制基因，其编码的蛋白是转化生长因子-β（TGF-β）超家族细胞内信号转导和调节的中心分子。Smad4突变失活引起的TGF-β信号转导紊乱，导致肿瘤细胞对TGF-β的生长抑制作用逃逸，与胃肠道肿瘤的发生发展存在一定关系。突变的Smad4蛋白较野生型更易被泛素介导的蛋白酶体降解。     

Smad3、Smad7基因表达与肝纤维化发病关系研究

目的：探讨Smad3和Smad7编码基因在肝纤维化大鼠肝星状细胞（HSC）中的表达及意义。方法：注射四氯化碳（CCl4)制备大鼠肝纤维模型，按诱导时间将动物随机分为1、4、8周及正常对照组4例，行肝组织胶原VG染色，转化生产因子（TGF）β1免疫组化检测，同时分别以RT－PCR、Western blot检测原工分离HSC的Smad3、Smad7mRNA和蛋白表达。结果：肝纤维化形成过程中肝组织胶原生成逐渐增多，TGFβ表达增强。与正常对照相比，各期肝纤维化大HSC中Smad3mRNA表达增加（P＜0．05），注射CCl4后1周，Smad7mRNA较正常一过性升高（P＜0．05）。第4周和第8周表达水平则持续下降（P＜0．01），Smad3和Smad7的蛋白表达与其mRNA基本一致。结论：Smad3和Smad7在肝纤维化发生，发展中起不同的介导作用，提示通过靶向性阻断HSC Smad3信号和（或）加强Smad信号有望成为治疗肝纤维化的新手段。     

全反式维甲酸对TGF—β诱导肾小球系膜细胞CTGF及信号通路的影响

目的探讨全反式维甲酸（atRA）在转化生长因子β（TGF—β）／Smad信号通路中诱导系膜细胞表达结缔组织生长因子（CTGF）的作用。方法培养第4代大鼠。肾小球系膜细胞分组：对照组;TGF—β（5、10ng／ml）组;TGF—β＋Staurosporine组;药物组：atRA（10^-3、10^-6、10^-9mol/L）预处理24h后,再加TGF—β（10ng／ml）共培养。分别提取4、12、24h细胞总蛋白,用Western blot法测CTGF蛋白和Smad2蛋白的表达。结果在外源性TGF—β刺激下,CTGF、Smad2蛋白的表达明显增加（P〈0．05）。与TGF—β组比较,药物组CTGF、Smad2蛋白表达明显减少（P〈0．05）,呈时间和浓度依赖性;各组不同时间段内Smad2蛋白和CTGF蛋白表达呈正相关（P〈0．05）。结论TGF-β可刺激大鼠肾小球系膜细胞CTGF和Smad2蛋白的表达,atRA可以抑制其表达,且此作用可能与Smad2信号通路有关。     

转化生长因子-β与Smad 7在肾脏疾病中的作用

转化生长因子β(TGF-β)是多功能细胞因子,具有调节细胞分裂、炎症反应,以及促进细胞外基质沉积等多种作用。Smad 7蛋白是近年来被认识的TGF-β1细胞内信号转导的负调控蛋白,能自动反馈调节TGF-β1对靶基因的转录。本文着重介绍TGF-β与Smad 7在肾脏疾病中所起的作用以及尚需解决的问题作一简要综述。