三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的机制探讨

目的：探讨三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的机制。方法：通过对两种舌鳞癌细胞系OSC－19，Tca8113经三氧化二砷作用后电镜下形态学改变、流式细胞仪测得的细胞周期变化、线粒体跨膜电位改变、凋亡相关蛋白BCL－2、p16、p53、Caspase-3及PARP变化；初步探讨三氧化二砷诱导舌鳞癌细胞系凋亡的机制。结果：（1）三氧化二砷抑制口腔鳞癌细胞生长通过毒性损伤和诱导凋亡双重途径来实现；（2）经三氧化二砷作用后，western blot检测bcl-2、p53、p16基因表达蛋白无变化，而caspase-3,PARP发生改变；（3）经三氧化二砷作用后，两类舌鳞癌细胞系线粒体跨膜电位明显下降，细胞周期G2－M期阻滞，且与凋亡产生同步。结论：（1）线粒体和微管可能是三氧化二砷的主要作用位点，为三氧化二砷发挥凋亡诱导效应的启动因素；（2）Caspase-3途径的激活可能为三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的关键途径之一。     

三氧化二砷对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨不同剂量三氧化二砷(As2O3)对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制。方法体外培养人口腔鳞癌细胞株SCC-4,将处于对数生长期的SCC-4细胞接种于24只裸鼠后腿皮下,建立裸鼠移植瘤模型。荷瘤裸鼠随机分为四组,每组6只,分别为对照组(A)、As2O3低剂量组(B组)、中剂量组(C组)和高剂量组(D组)。分别于肿瘤细胞接种第6、9、12、15、18、21天按上述剂量给予裸鼠腹腔注射As2O3,对照组注射生理盐水。停药1周后处死动物,完整取出瘤块,测量肿瘤重量和体积,计算肿瘤抑制率,免疫组织化学法检测各组标本中Ki67、cleaved caspase-3、CD31的表达情况,计数阳性细胞数及微血管密度(MVD)并进行统计学分析。结果As2O3低、中、高剂量组均能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,中剂量组移植瘤体积抑制率最大为64.95%,低剂量组为32.99%,高剂量组为44.33%。免疫组化结果显示,用药后As2O3中剂量组Ki67的表达及MVD值明显低于对照组,凋亡蛋白cleaved capase-3的表达显著高于对照组(P<0.01),高剂量组凋亡蛋白cleaved capase-3的表达亦显著高于对照组(P<0.01),MVD值明显低于对照组(P<0.05),低剂量组Ki67、cleaved caspase-3、CD31的表达与对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。用药前各组裸鼠体重无差异(P>0.05),用药后高剂量组裸鼠体重显著低于对照组和中、低剂量组(P<0.05)。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用,其可能的机制为抑制肿瘤细胞增殖及血管生成,诱导肿瘤细胞凋亡。As2O3对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用与剂量有关。     

Garcinol对人口腔鳞癌细胞的抑制作用研究

目的 观察Garcinol对人口腔鳞癌细胞系SCC15增殖、细胞周期、凋亡和克隆形成能力的作用.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,采用不同浓度的Garcinol处理细胞后,通过MTT法检测对细胞增殖的影响,PI单染色法流式细胞仪检测对细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,克隆形成实验检测对细胞克隆形成能力的影响.结果 Garcinol能显著抑制SCC15细胞增殖(P＜0.01),并呈浓度和时间依赖性.Garcinol能抑制SCC15细胞周期由G1期向S期转变(P＜0.01),并呈浓度依赖性.Garcinol还能够诱导SCC15细胞凋亡(P＜0.01),并呈浓度依赖性.同时,Garcinol能抑制SCC15细胞的克隆形成能力(P＜0.01),并呈浓度依赖性.结论 Garcinol作为一种化学预防制剂,对人口腔鳞癌细胞SCC15具有显著的抑制作用,其机制主要包括抑制SCC15细胞增殖、细胞周期和克隆形成能力,并诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷对口腔鳞癌细胞系Nrf2通路的激活作用

目的探讨三氧化二砷(AS2O3)对人口腔鳞癌细胞系SCC-15中氧化应激Nrf2通路的作用。方法通过体外培养人口腔鳞癌细胞系SCC-15,采用细胞免疫荧光法检测不同浓度AS2O3对SCC-15中Nrf2及其下游基因Ⅱ相抗氧化酶—血红素氧合酶1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO1)表达水平的影响,计数平均光密度值。同时采用蛋白免疫印迹方法定量检测不同浓度AS2O3对SCC-15中Nrf2及其下游Ⅱ相抗氧化酶—血红素氧合酶1和醌氧化还原酶表达水平的影响。结果不同浓度的AS2O3对Nrf2、血红素氧合酶1和醌氧化还原酶均有一定的激活作用,并呈剂量依赖关系。结论 AS2O3可激活口腔鳞癌细胞系SCC-15的Nrf2信号通路,具有促进抗氧化基因表达的作用。     

三氧化二砷联合放疗对口腔癌移植瘤小鼠治疗作用的研究

目的 观察三氧化二砷(As2O3)和低剂量放疗联合应用对口腔鳞癌裸鼠移植瘤模型的治疗作用.方法 将人口腔鳞癌细胞株Tca8113接种于24只裸鼠后腿皮下,建立裸鼠移植瘤模型;随机分为4组:对照(A)组、As2O3(B)组、放疗(C)组和As2O3放疗联合治疗(D)组,每组6只.自肿瘤接种后6 d开始:B组和D组腹腔内注射As2O3;C组和D组接受放射治疗;A组腹腔注射生理盐水.停药一周后处死动物,测量瘤块体积,计算肿瘤生长抑制率,采用免疫组织化学法检测各组标本中增殖相关蛋白Ki-67、凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、血管内皮损伤标志物von Willebrand Factor(vWF)的表达情况,计数阳性细胞数及微血管密度(microvessel density,MVD)并进行统计学分析.结果 C、D组的移植瘤体积显著低于A组(P<0.05),D组与B、C组相比亦有显著降低(P<0.05).B、C、D组移植瘤生长抑制率分别为20%、57%、82%.免疫组化结果显示:D组中Ki-67在的表达及MVD值明显低于其他三组,Cleaved Caspase-3的表达显著高于其他三组,统计学均有显著性差异(P<0.01);与A组相比,B、C、D组Ki-67、Cleaved Caspase-3的表达以及MVD值均有显著性差异(P<0.001).结论 As2O3能够提高放疗对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的治疗作用,其抗肿瘤作用的可能机制为抑制肿瘤细胞增殖和血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡.     

口腔鳞癌细胞FasL表达对肿瘤浸润淋巴细胞及癌细胞凋亡的影响

目的 研究口腔鳞癌细胞FasL表达及其对癌细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)凋亡的影响.方法 38例口腔鳞癌为实验组,10例正常口腔黏膜为对照组.采用免疫组织化学方法和末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位末端标记技术,观察癌组织FasL表达,计算TIL和癌细胞的凋亡指数,观察癌细胞FasL表达与TIL及癌细胞凋亡的关系.结果 FasL在正常口腔黏膜不表达,在鳞癌组织中表达明显上调(P＜0.05),FasL表达与口腔鳞癌分化程度无关(P＞0.05).口腔鳞癌细胞FasL表达阳性组癌细胞凋亡指数明显低于FasL表达阴性组,同时TIL的凋亡指数高于FasL表达阴性组(P＜0.05),口腔鳞癌细胞凋亡指数与TIL凋亡指数呈负相关(r＝-0.72,P＜0.05).结论 口腔鳞癌细胞可能通过上调表达FasL诱导TIL的凋亡,间接地使癌细胞凋亡下调而保护了自己,是口腔鳞癌组织免疫反攻击的体现.     

全反式维甲酸和三氧化二砷对人口腔鳞癌细胞系KB细胞周期的影响

目的研究全反式维甲酸（all-trans retinoi cacid,ATRA）和三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导分化对人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞周期的影响及意义。方法采用流式细胞技术观察人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞经不同浓度ATRA和As2O3诱导分化后96h时的细胞周期的变化。结果ATRA作用于KB细胞后,加药组与对照组相比,被阻断在G1期的细胞比率轻度升高,S期比率下降,抑制率随浓度增高无明显升高的趋势。As2O3三个不同浓度作用KB细胞96h时,没有明显改变各细胞周期所占的比例。抑制率随作用浓度的增加而升高。结论ATRA和低浓度As2O3对人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞具有诱导分化作用,ATRA诱导KB细胞分化可能与G1、G0期阻滞有关。     

细胞角蛋白13在全反式维甲酸和三氧化二砷诱导分化人口腔鳞癌细胞系KB中的表达

目的研究细胞角蛋白（cytokertin,CK）13及其基因在全反式维甲酸（all—transretinoicacid,ATRA）和三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导分化人口腔未分化鳞癌细胞系KB中的表达和意义。方法采用MTT法观察ATRA和As2O3对KB细胞的敏感程度,Western blot法和RT—PCR法观察KB细胞经ATRA和As2O3诱导分化后的CK13和CK13-mRNA的表达。结果MTT法显示ATRA和As2O3的ICS0分别为35．9×10^-6mol／L和1．55×10^-6mol／L,As2O3对KB细胞药物化学敏感性比ATRA高;Western blot法显示ATRA和As2O3对KB细胞诱导分化后24hCK13无表达,48hCK13出现弱表达,72hCK13出现明显的表达;RT-PCR法显示ATRA和As2O3对KB细胞诱导分化后24hCK13-mRNA表达明显升高,48h达到高峰,72h出现下降的趋势,并且CK13-mRNA的表达变化提前于CK13的表达。结论CK13可作为口腔鳞癌诱导分化标记物和判断临床口腔鳞癌诱导分化疗效的指标。     

紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的作用

目的：研究紫草素对体外培养的口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察紫草素对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用光镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术及流式细胞术观察紫草素对Tca8113细胞凋亡的影响。采用SPSS12．0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果：MTr检测显示．紫草素在0-50μmol／L浓度范围内。对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性（P〈0．01）．电镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体,DNA琼脂糖凝胶电泳观察到典型梯状条带,流式细胞仪结果显示亚G1期细胞明显增加,各组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．01）。结论：紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用．可用于口腔鳞癌化学防治的新尝试。     

维生素K3对腺样囊性癌细胞株的生长抑制作用及其与As2O3的联合效果

目的:探讨维生素K3(VitK3)对腺样囊性癌细胞的凋亡诱导作用及其与As2O3的联合效果。方法:体外培养人腺样囊性癌细胞株(SACC-83),分别以VitK3、As2O3以及两者联合孵育细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测对腺样囊性癌细胞的抑制率,Annexin-V/Pl双染色流式细胞技术检测凋亡细胞的百分数,倒置显微镜及AO/EB染色观察细胞凋亡后的形态。采用SPSS 13.0软件包对数据进行方差分析和t检验。结果:体外实验表明,VitK3能抑制SACC-83细胞生长并呈剂量和时间依赖性,细胞死亡方式以凋亡为主。VitK3与As2O3联合应用时,具有协同作用。结论:VitK3能抑制腺样囊性癌细胞生长,并且与As2O3联合时有协同作用。     

TFAR19在口腔白斑和口腔鳞癌中表达的研究

目的研究凋亡相关基因tfar19在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测17例正常口腔黏膜、60例口腔白斑,30例口腔鳞癌组织标本中TFAR19蛋白的表达。结果①口腔正常黏膜组TFAR19染色阳性率为88.2%,白斑组TFAR19染色阳性率为63.3%,口腔鳞癌组TFAR19染色阳性率为30%,3组间染色阳性率分别有统计学差异(分别为P≤0.05)。应用Crosstabs相关性统计分析,TFAR19染色阳性率与组织病变恶性度显负相关(r=-0.997,P<0.05)。②口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织的TFAR19细胞染色强度指数分别为199.34±25.33、130.23±19.21,和59.44±13.83,各组间分别有显著性差异。结论tfar19基因在口腔黏膜上皮成癌过程中的确发挥着重要的作用,并且可以推测tfar19基因的表达缺失发生在肿瘤形成的早期。     

NEK2基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

利用 Real-Time PCR 检测细胞周期相关蛋白激酶2（NEK2）mRNA 在20例口腔正常黏膜组织及42例口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中的表达。结果显示,NEK2 mRNA 在 OSCC 中高表达（P ＜0．050）,不同分化程度（P ＜0．05）、不同临床分期组间差异具有统计学意义（P ＜0．05）。有无淋巴结转移（P ＞0．05）、不同年龄、不同性别组间差异无统计学意义（P ＞0．05）。NEK2基因表达增高可能参与 OSCC 的形成。     

Acetylshikonin inhibits growth of oral squamous cell carcinoma by inducing apoptosis

ObjectivesRecently, shikonin derivatives from Lithospermum erythrorhizon have been suggested as potential chemotherapeutic agents against numerous types of cancers in addition to their traditional uses, e.g., as anti-inflammatory agents. Acetylshikonin, one of shikonin derivatives, has also been reported to possess anticancer activity. However, few studies of the effectiveness of acetylshikonin against cancer cells have been conducted, and there are no studies of oral cancers. In this study, we investigated the usefulness of acetylshikonin as a treatment regimen for oral cancers by observing the growth inhibitory function of acetylshikonin and the involved mechanisms.DesignsThe viability, cell cycle, and ratio of apoptotic cells of oral squamous cell carcinoma (OSCC) cells were observed after treatment with acetylshikonin using MTT assay, flow cytometric analysis, and Annexin V/PI staining, respectively. In addition, molecular changes of apoptosis-related pathways and the role of reactive oxygen species (ROS) were analyzed in acetylshikonin-treated cells.ResultsWe observed that acetylshikonin significantly suppressed the growth of OSCC cells by inducing apoptotic cell death, and acetylshikonin affected the viability of a normal keratinocyte cell line HaCaT to a lesser degree, suggesting that acetylshikonin may be a good chemotherapeutic reagent with less toxicity to normal tissues. In addition, we found that acetylshikonin-induced apoptosis of OSCC cells is mediated by ROS as well as G2 cell cycle arrest. ROS production in response to acetylshikonin treatment enhanced the phosphorylation of JNK and p38 MAPK, which are in the major pathways of apoptotic cell death mechanisms.ConclusionsIn summary, our data suggest that acetylshikonin is a strong candidate for use as a selective chemotherapeutic agent for the treatment of OSCC.     

FOXP3和GITR在口腔扁平苔藓及口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的研究FOXP3、GITR在口腔扁平苔藓（OLP）和口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化方法检测30例OLP组织、30例OSCC组织和15例口腔正常黏膜（NOM）组织中FOXP3、GITR的表达。结果NOM组FOXP3和GITR阴性表达;OLP组和OSCC组FOXP3和GITR表达分别较NOM组显著增加（P〈0.01）;OLP组和OSCC组之间FOXP3和GITR表达无显著性差异（P〉0.05）;FOXP3和GITR在OLP组和OSCC组中的表达存在正相关关系。结论在OLP的发生及发展成OSCC过程中,FOXP3和GITR均可能起着一定的作用。