新生隐球菌生物膜体外抗真菌药物敏感性研究

目的了解新生隐球菌生物膜对氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑和卡泊芬净的体外敏感性。方法采用标准微量稀释法测定上述4种抗真菌药物对20株新生隐球菌悬浮状态与生物膜状态的最低抑菌浓度(MIC),MIC结果判定采用四甲基偶氮唑盐[XTT,2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide inner salt]-降解法。结果悬浮新生隐球菌20株均对两性霉素B敏感(<1μg/mL),3株对氟康唑耐药(>64μg/mL);1株对伊曲康唑耐药;20株均对卡泊芬净耐药。而生物膜新生隐球菌显示:在20株中,除4株对两性霉素B敏感外,其余各株均对两性霉素B耐药。20株菌均对氟康唑和伊曲康唑耐药,远远高于耐药浓度。对卡泊芬净,均高于其耐药浓度。结论标准微量稀释法结合四甲基偶氮唑盐(XTT)-降解法测定新生隐球菌生物膜对抗真菌药物的敏感性其结果具有可重复性和一致性的特点;新生隐球菌生物膜的明显降低抗真菌药物的敏感性。     

隐球菌与体外培养角质形成细胞的相互作用

目的：研究隐球菌与体外培养的角质形成细胞的相互作用。方法：检测新生隐球菌对体外培养的角质形成细胞HaCaT株（简称HaCaT细胞）的时间-浓度黏附率、通透率;检测新生隐球菌对细胞的损伤;透射电镜观察二者相互作用的超微结构。结果：新生隐球菌标准野生株B3501（简称B3501）可以对HaCaT细胞产生黏附与侵袭,黏附率与侵袭率呈现时间依赖性;同时,B3501还可以使HacaT细胞凋亡率升高,对其造成损伤,这与菌体的活力相关。超微结构可见新生隐球菌与角质形成细胞的黏附与侵袭过程。结论：活的隐球菌黏附与侵袭角质形成细胞是其感染皮肤的重要条件。进一步明确二者的相互作用对隐球菌发病机制的研究具有重要意义。     

新生隐球菌格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的多重聚合酶链反应鉴定

目的 建立一种基于核糖体基因内间隔区（IGS）的多重聚合酶链反应（PCR）,用于快速鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌。方法 选取新生隐球菌和格特隐球菌IGS中变异度最高的Ⅰ区（IGS1）为靶点,经ClustalW2多重比对,并结合Oligo6软件在不同序列位点设计针对新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌的引物用于多重PCR分析。通过51株新生隐球菌（VNⅠ-VNⅣ和VNB基因型）和41株格特隐球菌（VGⅠ-VGⅣ基因型）对该方法进行验证,并将该方法与已报道的CGB显色培养和采用特异性引物GPA1A、CLA4D和SOD1gattii扩增格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的单一引物PCR方法进行比较。结果 基于IGS的多重PCR分析成功鉴定所有92株新生隐球菌和格特隐球菌,对其他常见致病酵母的扩增均阴性,显示所设计引物较高的特异性;已报道的基于GPA1A和CLA4D引物PCR分别在鉴定2株和1株格特隐球菌时出现假阳性结果;CGB培养基在鉴定1株格鲁比变种和1株新生变种时出现假阳性结果。上述方法在鉴定时均未出现假阴性结果。结论 建立的多重PCR可快速准确地鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种、AD杂合子和格特隐球菌,且优于已报道的单一引物PCR 或CGB显色培养法。     

几种快速提取新生隐球菌DNA的方法

目的　探讨几种快速提取新生隐球菌DNA方法的效果。方法　分别用玻璃珠机械破裂法、酶消化法、高渗剂破裂法及三法联合法提取有荚膜的新生隐球菌B 3 50 1野生株DNA ,用联合法提取 5种血清型新生隐球菌标准株的DNA ,用紫外分光光度计检测提取DNA的浓度和纯度。结果　 4种方法抽提 2ml新生隐球菌培养液 (菌体数约为 1×10 8个 /ml) ,可获得DNA的量约是 64～ 2 0 3 μg。酶消化法、高渗剂破裂法及三法联合法抽提的DNA ,其OD2 60 /OD2 80比值均小于 1.8。结论　除玻璃珠机械破裂法外 ,酶消化法、高渗剂破裂法 ,以及三法联合法均可用于快速抽提新生隐球菌的DNA。以三法联合法效果最好     

新生隐球菌ISC10基因的cDNA克隆及序列分析

目的克隆新生隐球菌ISC10基因(Meiosis-specific protein required for spore formation)的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析。方法从新生隐球菌B3501菌株中分离提取总RNA,逆转录成cDNA,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得新生隐球菌ISC10基因,构建pGM-T/ISC10重组载体,测序后与GenBank中ISC10基因(DQ332212)进行同源性比较和序列分析。结果所克隆的基因共编码267个氨基酸,分子量为31.65KD,与GenBank中ISC10基因(DQ332212)序列同源性达99.10%,编码的蛋白质在67位氨基酸由Ala(丙氨酸)突变为Pro(脯氨酸),233位氨基酸由Thr(苏氨酸)突变为Ser(丝氨酸)。结论所克隆的基因为新生隐球菌的一个新基因,其相关生物学信息的明确,为应用分子生物学技术进一步深入研究新生隐球菌的感染和致病机制奠定了基础。     

PCR-RFLP鉴别念珠菌、曲霉和隐球菌的探讨

为快速鉴别３类医学上重要真菌－念珠菌、曲霉和隐球菌,应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）的分子生物学说法方法对白念珠菌、克柔念珠菌、季地蒙念珠菌、近平滑珠菌、热带念珠菌、乳念珠菌、新生隐球菌格梯变种、新生隐球菌新生变种、罗伦隐球菌格梯变种、新生隐球菌新生变种、罗伦隐球菌１、工霉、黄曲霉和杂色曲霉进行体外研究。新生隐新生变种、罗伦隐球菌、曲霉隐球菌放增出３１０ｂｐ经ＰＣＲ含珠菌、     

80株中国大陆新生隐球菌环境株表型和分子特征的初步研究

目的了解中国大陆地区新生隐球菌环境株的分布情况,及其表型和基因型特征。方法采用CACA培养基培养1372份来自中国大部分地区私人和公共养鸽场所的鸽粪标本,分离出新生隐球菌,并对其表型和基因型特征进行分析。结果共分离出80株新生隐球菌,分离阳性率约为5．5％,所有菌株37℃生长良好,有完整荚膜,尿素酶试验阳性。ITS序列分析证实分离出的新生隐球菌均属于血清型A。M13-PCR显示,其基因型为我国及东南亚地区特征性的VNIC型,显示了与临床株的高度一致性。结论中国大陆地区的新生隐球菌临床株与环境株显示了高度的同源性,提示对于易感人群,阻断与相应环境的接触可有效预防新生隐球菌的感染。     

黑素与新生隐球菌

黑素的产生与多种微生物的毒力相关.新生隐球菌主要通过酚氧化酶(漆酶)合成黑素,黑素主要通过抵抗宿主微生物杀伤机制和影响宿主免疫应答来致病.主要就新生隐球菌黑素的微观结构、生物合成,漆酶的分子调节,黑素与新生隐球菌毒力的关系,黑化对真菌生存的影响及与抗真菌治疗的关系等方面进行概述,以期通过对黑素特征的理解为抗真菌药物的开发和对疾病的治疗策略选择提供帮助.

Abstract：

The production of melanin is associated with the virulence of various microorganisms.Cryptococcus neoformans produces melanin mainly via phenoloxidase(laccase)pathway.Melanin contributes to virulence likely by reducing the susceptibility of melanized fungi to host defense mechanisms and affecting immune responses in infected hosts.This review mainly focuses on the microstructure and biosynthesis of Cryptococcus neoformans melanin, molecular regulation of laecase, relationship between melanin and Cryptococcus neoformans virulence, effects of melanization on the survival of fungi, relationship between melanization and antifungal treatment, ete, which may facilitate the design and development of antifungal agents and strategies.     

新生隐球菌毒力因子的信号调节

新生隐球菌为一种普遍存在的异宗交配的腐生担菌纲类真菌,是少数人类机会性致病真菌之一,其利用复杂的信号途径来感应生存环境、控制生殖及多种致病因素.已经被系统研究的信号途径包括G蛋白-环磷酸腺苷-蛋白激酶A、神经钙蛋白-钙调节蛋白、促分裂原激活蛋白激酶、Ras信号途径等.概述这4种主要信号途径的作用,以期通过对这些传导途径各个环节的了解,为寻找新的药物靶点,治疗新生隐球菌病提供帮助.

Abstract：

Cryptococcus neoformans, as a ubiquitous heterothallic basidiomycetous fungus,is also one of few opportunistic human fungal pathogen.It utilizes complex signaling pathways to sense environments and control reproduction and virulence factors.Well-studied signaling pathways in Cryptococcus neoformans include G protein-cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A, calcineurin-calmodulin ,mitogen-activated protein kinase and Ras signaling pathway.This review mainly describes the role of these four signaling pathways,so as to provide clues to the search for new drug targets for the treatment of Cryptococcus neoformans infection by improving the understanding of these signaling transduction pathways.     

白癜风患者郎格罕细胞的光,电镜研究

白癜风患者郎格罕细胞的光、电镜研究杜娟①朱铁君①郎格罕细胞（ＬＣ）是抗原呈递细胞，在许多皮肤病的发病中占重要地位，很多文献也报道了ＬＣ在白癜风皮损中的数量变化，但结论很不一致。本研究旨在通过严格的自身平行对照，观察白癜风患者白斑、白斑边缘及远离白斑处...     

新生隐球菌L型致病性的实验研究

以稳定新生隐球菌Ｌ型感染小鼠后，部分脑组织中出现长丝体和巨形体。病原分离，新生隐球菌大小不一、形态不规则。病理学检查，各脏器主要表现为间质性炎症。我们认为：①新生隐球菌Ｌ型致病的特征性表现为间质性炎症；②隐球菌性肉芽肿的形成可能与病灶处新生隐球菌变异成Ｌ型有关。     

传染性软疣样皮损表现的播散性隐球菌病2例

报告2例播散性隐球菌病。除系统累及表现外，皮损为传染性软疣样丘疹，组织液、血液及脑脊液检查找到隐球菌，皮损和淋巴结组织病理学检查见孢子。提示当发热性疾病伴传染性软疣样皮损时，应警惕隐球菌感染。避免误诊和延误诊断的关键是提高对本病的认识和对可疑病例做真菌检查。     

氟康唑与5-氟胞嘧啶体外联合抗新生隐球菌临床分离株的实验研究

目的 评价新生隐球菌临床分离株对氟康唑和5—氟胞嘧啶联合用药的敏感性及判断两药物之间相互作用的方式。方法 采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)M27—A推荐的棋盘微量稀释法，检测了20株新生隐球菌临床分离株对氟康唑、5—氟胞嘧啶及两药联合的体外药物敏感性，同时对两药的作用方式进行了判定。结果 联合用药时显著减少了每一药物MIC值的几何均数，在35％受试菌表现为协同作用方式，在55％的受试菌株表现为相加作用方式，在10％受试菌株表现为无关作用方式，未观察到拮抗作用出现。测定不同浓度下药物单独和组合作用的一株菌的菌落形成单位(cfu／mL)，每一种联合用药组合都较5—氟胞嘧单独用药有明显减少。结论 氟康唑与5—氟胞嘧啶联合比单一药物体外抗新生隐球菌的活性高。     

新生隐球菌cap60荚膜缺陷株转化系统的构建

目的 构建新生隐球菌荚膜缺陷株ｃａｐ６０的转化系统。方法与结果：（１）在新生隐球菌的荚膜缺陷株ｃａｐ６０中利用５－氟乳清乳（５－ＦＯＡ）反选择法筛选到一个尿嘧啶合成基因突变株。（２）利用带有以新生隐球菌ｕｒａ５基因为选择标记的质粒载体ｐＣｎｔｅｌｌ－ｄ通过电转化法和化学转化法成功地转化该ｕｒａ５突变株。     

Deep cutaneous ulcers and sinus formation in an immunocompetent adult

This report describes a case of unusual deep skin ulcers with tortuous sinus tract formation in an immunocompetent woman. She was initially diagnosed with a Staphylococcus aureus skin infection and histopathologically diagnosed with pyoderma gangrenosum. However, culture from the deep end of ribbon gauze inserted into the subcutaneous sinus tract revealed shiny, light-yellow mucoid colonies, which were identified as Cryptococcus neoformans var. grubii. She was treated with fluconazole for nine months and completely healed. Cryptococcosis is an opportunistic infection caused by variants of C. neoformans species. Cutaneous manifestations of cryptococcosis are quite divergent, rarely occurring as deep skin ulcers with sinus formation.     

新型隐球菌核型的脉冲电泳分析

用脉冲电泳技术分离了包括３个变种、５种血清型在内的２０株新型隐球菌染色体ＤＮＡ，发现其基因组由１０～１２条染色体组成，大小在０．４～２．１Ｍｂ之间，总长度约１５Ｍｂ。特别是注意到电泳核型与血清型之间有相关性，并观察到菌株间的带型也存在不同程度的差异，提示电泳核型分析可作为变种鉴别和种内分型的新的基因型方法。     

首次从非AIDS患者中分离出尿素酶阴性新生隐球菌

最近，作者等从一非ＡＩＤＳ又无免疫缺陷的新生隐球菌脑膜炎患者脑脊液中有首次分离出一株尿素酶阴性新生隐球菌，经与尿素酶阳性的新生隐球菌和尿素酶阳性的白念珠菌反复对照，并经动物实验证明，经南京医科大学附属和线医院情报室联机检索，国际上未见类似报告。     

Cutaneous cryptococcus in an elderly woman with chronic essential dermatitis

Cryptococcus neoformans is a common cause of life-threatening infection. Cutaneous manifestations of Cryptococcus can be primary or secondary, most commonly from immunosuppression. With the global emergence of acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), incidence of cryptococcosis is increasing and now represents a major life-threatening fungal infection in these patients. Nonspecific lesions may cause misdiagnosis. Disseminated Cryptocoocus requires early clinical diagnosis and effective management to decrease mortality. We review a case of cutaneous Cryptococcus as a complication of chronic essential dermatitis treated with long-term immunosuppressive agents and discuss updated guidelines on the treatment of Cryptococcus.     

PCR检测深部致病真菌感染的研究

目的探讨PCR在可疑深部真菌感染临床标本检测中的应用。方法对60份临床标本分别进行传统真菌培养以及真菌通用引物PCR和三重PCR检测。结果真菌培养阳性共19份，其中白念珠菌10份、烟曲霉2份、新生隐球菌2份、其他菌株5份（包括光滑念珠菌2份、热带念珠菌2份、克柔念珠菌1份）；真菌通用PCR检测共有21份阳性，经三重PCR检测共有15份阳性，分别为白念珠菌10份、烟曲霉3份、新生隐球菌2份。PCR方法与传统培养方法相比，检出率差异无统计学意义。结论PCR检测可疑深部真菌感染临床标本快速简便，稳定性好，敏感性和特异性均较理想，适合临床实验室常规使用。     

伊曲康唑与氟胞嘧啶体外联合抗新生隐球菌临床分离株的实验研究

目的：评价新生隐球菌临床分离株对伊曲康唑与氟胞嘧啶联合用药的敏感性及两种药物之间相互作用的方式。方法：采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的棋盘微量稀释法，检测了20株新生隐球菌临床分离株对伊曲康唑、氟胞嘧啶及两药联合用药的体外药物敏感性，同时对两种药物的作用方式进行了判定：结果：联合用药时显著减少了每一药物MIC值的几何均数，25％受试菌株表现为协同作用方式，60％的受试菌株表现为相加作用方式，15％受试菌株表现为无关作用方式，未观察到拮抗作用。测定不同浓度下单一药物和联合用药的一株菌的菌落形成单位，联合用药较氟胞嘧啶单独用药菌落形成单位有减少现象。结论：伊曲康唑与氟胞嘧啶联合应用较两种药物单独应用的体外抗新生隐球菌的活性高。