苯致模拟失重大鼠肝细胞DNA-蛋白质交联的研究

摘要目的：探讨苯吸入染毒对尾吊模拟失重大鼠肝细胞DNA-蛋白质交联（DNA-protein crosslinks,DPC）作用。方法：将30只雄性SD大鼠随机分为3组：对照组和2个染毒组。对照组吸入新鲜空气。染毒组分别给予浓度为10mg／m3和50mg／m3的苯气体进行吸入染毒,每天24h,连续7d。结果：与对照组相比,低浓度的气态苯（10mg／m3）可以诱导显著的DNA-蛋白质交联作用（P〈0．05）,高浓度的气态苯（50mg／m3）可以诱导极显著的DNA-蛋白质交联作用（P〈0．01）。结论：高低浓度苯吸入染毒均可致肝细胞内的DPC系数显著上升,且随苯浓度上升,细胞中的DPC含量出现极显著上升。     

虎杖有效成分大黄素抗膀胱癌作用的分子机制研究

目的观察虎杖中有效成分大黄素对人膀胱癌T24细胞的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法200μmol／L大黄素干预膀胱癌T24细胞,通过流式细胞术检测细胞凋亡,Westernblot检测p53的蛋白表达,实时定量PCR（Real-timePCR）检测miR-34a的基因表达,应用化学方法合成成熟miR-34a瞬时转染T24细胞并检测细胞增殖水平。结果大黄素能够有效明显上调p53蛋白以及促进miR-34a的基因表达水平。转染miR-34a后T24细胞生长增殖明显受抑。结论大黄素具有良好的抗膀胱癌活性,其作用机制可能部分与促进膀胱癌细胞中p53表达、上调miR-34a,进而诱导膀胱癌细胞凋亡有关。     

国产新型光敏剂CDHS801光动力学疗法杀伤膀胱癌T24细胞效应的研究

目的探讨光敏剂CDHS801光动力学疗法在体外对人膀胱癌细胞的杀伤效应。方法将膀胱癌T24细胞分别与浓度为2．5、5．0、10．0、15．0、25．0和50．0μg／ml CDHS801共同孵育，以能量密度为6J／cm^2，波长为650nm半导体激光照射。另设空白对照组、CDHS801组（25．0μg/m1）、单纯激光组（6J／cm^2）。以MTT比色法测定T24细胞的生长抑制率。结果实验组2．0、5．0、10．0、15．0、25．0和50．0μg/ml CDHS801的细胞生长抑制率分别为12．34％、23．15％、31．44％、45.78％、53．04％和75．85％，与空白对照组、CDHS801组、激光组比较差异有显著意义。结论CDHS801光动力学疗法对膀胱癌T24细胞有明显杀伤效应，而且该效应呈现剂量效应关系。     

髂内动脉化疗联合手术治疗膀胱癌

目的：提高膀胱癌手术治疗的效果，尽可能保留有功能的膀胱，降低膀胱癌术后复发率。方法：对72例不同分期、分级的膀胱移行细胞癌患者随机分为两组，Ⅰ组40例行膀胱部分切除术或经尿道膀胱肿瘤电切术（TUR—Bt），术后加丝裂霉素膀胱灌注化疗；Ⅱ组32例术前行卡铂配伍阿霉素髂内动脉灌注化疗2次，后行膀胱部分切除术或经尿道膀胱肿瘤电切术，术后加丝裂霉素膀胱灌注化疗。均随诊2年，比较两组间治疗后膀胱癌复发率。结果：Ⅰ组，2年膀胱癌复发18例，复发率45％。Ⅱ组，2年膀胱癌复发6例，复发率18．75％。两组复发率比较差异有显著性（P〈0．05）。Ⅱ组髂内动脉灌注化疗前后膀胱癌细胞分级（G）降低15例，分期（T）降低16例。结论：术前加用卡铂配伍阿霉素髂内动脉灌注化疗可使部分膀胱癌降级、降期，提高手术切除率，降低术后膀胱癌复发率，术前加用卡铂配伍阿霉素髂内动脉灌注化疗结合保留膀胱的手术是治疗膀胱癌的有效方法。     

活性炭纳米粒子对人胃癌BGC-823细胞作用的体外实验研究

目的：探讨活性炭纳米粒子（activated carbon nanoparticles,ACNP）对人胃癌BGC-823细胞的作用。方法：将ACNP以不同浓度和时间作用于BGC-823细胞,通过MTT试验观察ACNP对细胞增殖的抑制作用;测定培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）活性,判断细胞损伤状况;用甲基绿-派洛宁染色法及透射电镜观察细胞凋亡形态;用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果：ACNP能明显抑制BGC-823细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性,作用24,48,72h后的半数抑制浓度（IC50）分别是1．57,1．18,0．87g／L。低浓度ACNP（0．1,0．2g／L）作用24h后,LDH漏出量与对照组相比没有显著差异。0．1g／L的ACNP作用24h后,细胞出现凋亡特征的形态学改变。0．1,0．2g／L的ACNP作用24h后,细胞凋亡率分别为（5．01±1．16）％、（8．21±1．63）％,与对照组（2．48±0．58）％比较均有显著性差异;ACNP作用组的S期细胞所占比例明显增高。结论：ACNP抑制BGC-823细胞的增殖,可使细胞阻滞于S期。诱导细胞凋亡。     

神经生长因子和脑源性神经营养因子在氧化应激诱导细胞凋亡中的作用

目的 探讨神经生长因子（NGF）和脑源性神经营养因子（BDNF）在氧化应激诱导细胞凋亡的作用。方法 脂质体介导入NGF和BDNF基因转染鼠成纤维细胞NIH3T3,使目的基因在细胞中表达,过氧化氢（H2O2）处理转染细胞,吖啶橙荧光染色法和流式细胞检测细胞凋亡。结果 50μmol/LH2O2能诱导NIH3T3细胞凋亡,处理后24h凋亡率为16．7％,而NIH3T3细胞分别经NGF、BDNF和NGF／BDNF转染表达目的基因后,能对抗H2O2诱导的细胞凋亡,其24h凋亡率分别为8．21％、9．51％和6．26％。结论 氧化应激能诱导细胞凋亡,NGF和BDNF能抑制氧化应激诱导的细胞凋亡,两者具有协同作用。     

低剂量电离辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应

目的：观察低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的基本规律。方法：实验用X射线照射昆明雄性小鼠,其诱导剂量（D1）及其后攻击剂量（D2）分别是75mGy和1．5Gy。D1和D2间隔时间分别是3、6、12、24和60h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1和D2间隔3、6和12h ,D1 D2组胸腺细胞凋亡百发数明显低于D2组（P＜0．05）,G0／G1和G2＋M期细胞百分数也不同程度地低于D2组,而S期是分数却明显高于D2组（P＜0．0．5或P＜0．01）。结论上述结果指出,D1在75mGy,吸收剂量率为12．5mGy／min,D2在1．5Gy,吸收剂量率为0．287Gy／min;D1和D2间隔3－12h,可在全身照射条件下诱导小鼠胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

钬激光照射后人T-24膀胱癌细胞株中半胱天冬酶-3蛋白的表达及其意义

目的观察钬激光照射后人T-24膀胱癌细胞株中半胱天冬酶（Caspase）-3蛋白的表达，探讨其在T私细胞发生凋亡中的作用。方法取对数生长期人T-24膀胱癌细胞株，分对照组与实验组，试验组以800mJ钬激光直接照射而对照组仅以指示光照射不激发激光能量，照射后48h分别在光镜下观察细胞形态学的改变，免疫细胞化学染色检测半胱天冬酶．3蛋白在T-24细胞中的表达。结果800mJ钬激光照射后实验组细胞形态呈现出凋亡改变，半胱天冬酶-3蛋白呈现阳性表达。结论钬激光照射人T-24膀胱癌细胞株，可诱发肿瘤细胞凋亡，半胱天冬酶-3蛋白在诱导T-24细胞凋亡中可能发挥重要作用。     

99Tcm-HL91乏氧显像评价小鼠移植瘤放疗疗效

目的为^99Tc^m-4，9-二氮-3，3，10，10-四甲基十二烷-2，11-二酮肟（HL91）乏氧显像评价肿瘤放疗疗效提供依据。方法15只H22肝癌细胞小鼠移植瘤模型分成3组，每组各5只。A组不进行放疗；B组单次放疗25Gy后即刻进行^99Tc^m-HL91显像；C组单次放疗25Gy48h后进行^99Tc^m-HL91显像，计算B、C组放疗前后同一感兴趣区（ROI）内肿瘤组织与正常脑组织放射性计数比值（T／N）；测定A、B、C组凋亡细胞、G1期和S期细胞比例及观察肿瘤组织放疗前后病理变化。结果（1）B组放疗后T／N值较放疗前显著增高（P〈0．05）；C组放疗后T／N值较放疗前显著降低（P〈0．05）。（2）A、B、C组凋亡细胞之间比例差异具有统计学意义（P〈0．05，A〈B〈C）。（3）C组S期细胞所占比例明显低于A、B组，G1期细胞比例明显高于A、B组（P〈0．05）；C组肿瘤组织光学显微镜下可见凋亡细胞和大量细胞碎片。结论^99Tc^m-HL91显像是一种有价值的评价放疗疗效的手段。     

过氧化氢对体外关节软骨细胞损伤效应及丹参干预作用实验研究

目的：观察过氧化氢（H2O2）对体外培养关节软骨细胞的损伤效应及丹参（salvia miltiorrhiza，SM）的干预作用。方法：采用兔原代膝关节软骨细胞培养技术，将培养的软骨细胞随机分为正常组、损伤对照组（损伤组）和丹参组。损伤组用0．1mmol／L过氧化氢（终浓度）制造体外软骨细胞损伤模型，丹参组将不同浓度的丹参（终浓度0．01g／L、0．05g／L、0．25g／L）于过氧化氧损伤前30min加入，分别测定各组细胞活力（MTT法）及细胞凋亡的变化，测定培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）活性及丙二醛（MDA）含量（硫代巴比妥酸法）变化。结果：0．1mmo／L过氧化氢对体外关节软骨细胞有损伤作用，诱导细胞凋亡作用明显：丹参组细胞活性较损伤组显著升高，软骨细胞凋亡率明显下降，培养液上清LDH、MDA水平显著降低，丹参的保护作用呈浓度依赖性。结论：过氧化氢能诱导体外关节软骨细胞凋亡，丹参对过氧化氢造成的软骨细胞损伤具保护作用。     

THP和MMC膀胱内灌注治疗浅表性膀胱癌疗效观察

目的评价吡柔比星（THP）、丝裂霉素C（MMC）两种药物膀胱灌注治疗浅表性膀胱癌的不同疗效。方法将64例浅表性膀胱癌随机分为两组,分别用THP和MMC作膀胱灌注治疗药物,观察其不同疗效。结果所有病例随访3～24个月,平均14个月。THP组复发率11.76%（4/34）,MMC组复发率23.33%（7/30）,差别具有统计学意义（P〈0.05）。结论 THP膀胱灌注防治浅表性膀胱癌术后复发的疗效优于MMC,可作为临床一线用药。     

3种纳米颗粒对BGC-823细胞线粒体膜电位及细胞内活性氧水平的影响

目的探讨不同化学组成的纳米颗粒对人胃癌BGC-823细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）及细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平的影响。方法将不同浓度纳米活性炭（activated carbon nanoparticles,ACNP）、纳米二氧化硅（SiO2）、纳米二氧化钛（TiO2）作用于BGC-823细胞24h后,用流式细胞仪以罗丹明123（Rh123）作为荧光指示剂检测细胞MMP;用ROS捕获剂双氢罗丹明123孵育细胞,通过检测细胞内Rh123的平均荧光强度而测得细胞内ROS水平。结果经ACNP、纳米SiO2、纳米TiO2作用24h后,BGC-823细胞MMP呈剂量依赖性降低。0.1,0.2mg/mlACNP组细胞内ROS水平高于对照组（P〈0.05）;0.1,0.2,0.4mg/ml纳米SiO2组细胞内ROS水平呈剂量依赖性降低;0.1,0.2mg/ml纳米TiO2组细胞内ROS水平高于对照组（P〈0.05）。结论 ACNP诱导细胞发生氧化应激,生成ROS,可能进一步通过活化线粒体信号转导途径诱导细胞凋亡;化学活性较强的纳米SiO2和纳米TiO2在含水介质中能够产生大量ROS,作用于细胞后能直接引起膜脂质过氧化,导致细胞膜破裂,细胞坏死。     

凝血酶体外促进肺癌细胞Glc-82周期进程和增殖及其分子机制

目的探讨凝血酶体外促进肺癌细胞Glc-82周期进程和增殖及其作用机制。方法采用CCK8法检测凝血酶（thrombin）对Glc-82细胞增殖活性的影响,确定其量效和时效关系;利用碘化丙锭（propidium iodide,PI）单染和AnnexinⅤ-FITC/PI双染在流式细胞仪上检测细胞周期和凋亡;以荧光实时定量PCR检测10号染色体上与张力蛋白同源缺失的磷酸酶基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromatosome 10,PTEN）mRNA水平的变化,免疫印迹法检测PTEN蛋白表达和AKT磷酸化水平的变化。结果凝血酶（0.5和1.0 U/ml）可以有效促进细胞的增殖（P〈0.01）。凝血酶（0.5 U/ml）促进Glc-82细胞由G1期向S期转化,可以抑制PTEN的表达,提高AKT磷酸化水平,但对细胞凋亡没有影响。结论凝血酶（0.5 U/ml）可以促进肺癌细胞Glc-82周期进程和细胞增殖,可能系通过PTEN/PI3K/AKT信号分子途径发挥作用。     

经直肠经阴道超声在无症状镜下血尿诊断中的应用

目的评价经直肠经阴道超声检查对诊断无症状镜下血尿病变的临床意义。方法85例临床怀疑泌尿道疾病患者（49例男性和36例女性，年龄22～75岁，平均36-3岁）于镜下血尿出现后接受了经直肠或经阴道超声检查。全部患者的超声检查操作是采用5．0～7．5MHz的探头在膀胱轻度充盈状态下进行的。结果85例患者中，膀胱与前列腺病见于25例，其中，8例超声疑诊膀胱癌患者经手术和病理证实为早期膀胱移行细胞癌。本组膀胱癌的检出率为9．4％（8／25）。结论经直肠或经阴道超声检查对诊断无症状镜下血尿的病变具有高度敏感性，故应作为仅早发现膀胱癌的常规方法。     

黄荆子乙酸乙酯提取物增强顺铂诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡的作用

目的观察黄荆子乙酸乙酯提取物（the acetoacetate extract of Vitexnegundoseed,Evn-50）和顺铂（cisplatin,DDP）在体外对人卵巢癌细胞株COC1凋亡的影响,探讨Evn-50提高COC1细胞株对顺铂化疗敏感性的机制。方法Evn-50,DDP以及两药联合分别处理人卵巢癌COC1细胞株,台盼蓝染色计数法检测药物对细胞生长的抑制率,并用流式细胞术、AO/CB荧光双染色法测Evn-50,DDP以及两药联合对细胞凋亡的影响。结果细胞抑制率在联用组中随Evn-50剂量的增加而增加,且明显高于同剂量单用组（P〈0.01）;细胞凋亡率在联用组中随Evn-50剂量的增加而增加,且高于同剂量单用组（P〈0.01）,流式细胞仪分析结果显示Evn-50呈浓度依赖性将COC1细胞阻滞在G2/M期,而DDP将COC1细胞阻滞在G1/S期。结论Evn-50有增强顺铂诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡的作用,其机制可能与二者对卵巢癌细胞株COC1周期阻滞点不同有关。     

Nd:YAG激光泪道成形术联合丝裂霉素C治疗泪道阻塞疗效评价

目的评价Nd:YAG激光泪道成形术联合丝裂霉素C治疗泪道阻塞的效果。方法 Nd:YAG泪道激光成形术联合丝裂霉素C治疗192例218只眼,丝裂霉素C浓度为0.4mg/ml、泪道内浸润时间2min。术后随访观察3～36个月泪道引流的恢复情况和有无丝裂霉素C的不良反应。结果总治愈193只眼(88.5%),3只眼出现下泪点撕裂,随访对导泪无影响,无丝裂霉素C不良反应和并发症发生。结论 Nd:YAG激光泪道成形术联合丝裂霉素C治疗泪道阻塞安全有效,MMC局部发挥抗增殖抗瘢痕作用,可有效提高手术成功率。     

伽玛刀联合华蟾素治疗肺腺癌的临床研究

目的探讨全身伽玛刀联合华蟾素治疗肺腺癌的临床疗效。方法48例肺腺癌患者随机分为2组,联合组（24例）接受全身伽玛刀联合华蟾素治疗,对照组（24例）接受单纯伽玛刀治疗,观察两组患者的疗效和生存期差异。结果治疗后联合组的患者在肿瘤体积变化、肝内及腹腔转移率、1年生存率、肿瘤标志物水平、生活质量及部分实验室结果等临床疗效指标上,均明显优于对照组（P〈0．05）。结论全身伽玛刀联合华蟾素治疗肺腺癌有较好的临床疗效,能进一步提高患者的生活质量和远期生存率。     

莪术油配伍椒目仁油对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

目的观察不同剂量莪术油配伍椒目仁油对小鼠移植性肿瘤S180的抑瘤作用,以及对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480的体外抑瘤作用。方法 72只二级昆明小鼠采用肿瘤移植法建立小鼠荷瘤动物模型;椒莪软胶囊灌胃给药,剂量分别为0.3、0.6、1.2 ml/kg;氟尿嘧啶22.5 mg/kg作为阳性对照药腹腔注射给药;连续给药15 d,观察药物对肿瘤生长的抑制作用。对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480进行传代培养后,制备不同剂量(椒莪软胶囊0.015 625、0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1、2、4 mg/ml)含药血清、氟尿嘧啶阳性药血清和肿瘤移植模型不用药对照血清,作用于人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝比色法观察血清对两种细胞的抑制作用。椒莪软胶囊0.0、6.25、12.5、25.0μg/ml给药15 h后,经流式细胞仪测定对人源性肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响。结果①椒莪软胶囊0.3、0.6、1.2 ml/kg肿瘤抑制率分别为19.73%、32.22%和46.68%。随着给药剂量的增加,坏死的肿瘤细胞所占比例也相应增加,生长活跃的肿瘤细胞逐渐减少。②抑制作用随剂量升高而作用增强,对人源性肝癌细胞株HepG2体外最低药物物浓度为0.062 5 mg/ml,对大肠癌细胞株SW480体外最低药物浓度为0.125 mg/ml。③椒莪软胶囊可明显促进人源性肝癌细胞株HepG2的细胞凋亡。结论椒莪软胶囊对小鼠移植性肿瘤有明显的抑制作用,对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480有明显的抑制作用。椒莪软胶囊在临床具有广阔的应用前景。     

腹腔注射环磷酰胺对小鼠精子凋亡的影响

目的观察腹腔注射环磷酰胺对小鼠精液常规和精子凋亡的影响。方法将20只雄性昆明小鼠随机分为对照组和实验组,按60 mg/kg体重给对照组小鼠腹腔注射NS,60 mg/kg体重给实验组小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5 d,常规饲养观察34 d,然后对小鼠睾丸进行病理切片观察病理形态变化,对小鼠精子进行精液常规分析,对精子行FITC-AV/PI染色后用流式细胞仪检测精子凋亡率。结果实验组小鼠睾丸生精细胞、间质细胞和部分支持细胞明显变性,对照组与实验组精子密度分别为（5.20±1.34）×106/ml、（1.73±0.03）×106/ml,精子活力分别为（14.49±0.30）%、（6.64±1.88）%,精子成活率分别为（68.39±15.13）%、（39.96±4.89）%,精子凋亡率分别为8.38±0.45、14.84±1.22,两组比较有显著差异（P〈0.05）。结论腹腔注射环磷酰胺可使小鼠睾丸生精功能降低,精子凋亡增加,造成小鼠少弱精症。