MEK信号通路活化在榄香烯致人源U87MG胶质瘤细胞增殖抑制及G0/G1细胞周期阻滞中的作用

目的探讨MKK3和MKK6在榄香烯致人U87MG胶质瘤细胞增殖抑制和细胞周期阻滞中的作用。方法以不同浓度榄香烯作用于人U87MG及U251胶质瘤细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性。West-ern blot检测MEK信号通路中MKK3和MKK6的总蛋白及磷酸化蛋白含量。通过转染显性负突变质粒DN-MKK3和DN-MKK6,抑制MKK3和MKK6的活性。然后分别行MTT法和流式细胞术检测榄香烯对胶质瘤细胞的增殖抑制和细胞周期阻滞作用。结果榄香烯显著抑制了人胶质瘤细胞的增殖,呈时间和浓度依赖性,并可使细胞中MKK3和MKK6的磷酸化水平上调。抑制MKK3和MKK6的活性则可显著削弱榄香烯的抗胶质瘤增殖和G0/G1细胞周期阻滞作用。结论榄香烯可以通过将胶质瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,进而有效地抑制肿瘤细胞增殖,且MKK3和MKK6信号通路的激活在其中发挥着不可或缺的作用。     

榄香烯抑制Raf/MEK/ERK信号通路诱导人源胶质瘤U87细胞凋亡

目的探讨莪术提取物榄香烯体外诱导胶质瘤细胞凋亡的机制。方法采用流式细胞术、West-ern印迹等方法,分别检测不同浓度榄香烯对人源U87胶质瘤细胞的凋亡诱导及其对U87细胞Raf-1、ERK、癌基因Bcl-2蛋白质表达的影响。结果榄香烯对人源U87胶质瘤细胞具有明显的凋亡诱导作用,该增殖抑制效应呈时间依赖性。榄香烯可明显下调U87细胞的磷酸化Raf-1、ERK、Bcl-2表达。结论体外榄香烯对胶质瘤细胞具有明显的凋亡诱导作用(呈时间依赖性),抑制Raf/MEK/ERK信号通路,从而下调其下游信号癌基因Bcl-2的表达,最终启动凋亡程序可能是榄香烯诱导U87细胞凋亡的机制。     

榄香烯抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖和PCNA基因表达的研究

目的研究榄香烯(elemene)抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖和抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定不同浓度榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞的抑制作用,同时观察时间—效应关系,并求出半数致死浓度(IC50);免疫组化法检测IC50浓度榄香烯作用0、24和48h的U251细胞中PCNA蛋白表达差异;RT-PCR检测不同浓度或不同作用时间的榄香烯抑制PCNA基因的表达。结果榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性,IC50为0.062g·L-1。榄香烯对U251细胞内PCNA蛋白表达有明显的抑制作用;RT-PCR分别证实榄香烯抑制PCNA基因的表达,其PCNA基因mRNA表达值随药物浓度增加或作用时间延长增加而不断下降,呈剂量和作用时间的依赖性。结论榄香烯能有效下调PCNA基因表达,从而抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,对抗人脑胶质瘤具有广阔的前景。     

榄香烯阻碍大鼠胶质瘤C6细胞ERK信号通路中Hsp90/Raf-1分子复合体的形成

目的探讨莪术提取物榄香烯抑制胶质瘤细胞体外增殖的机制。方法采用细胞计数、免疫共沉淀、Western印迹等方法,分别检测不同浓度、不同作用时间榄香烯对C6胶质瘤细胞的增殖影响、对C6细胞中与Raf-1结合形成分子复合体的Hsp90水平的影响、对C6细胞Hsp90、Raf-1、ERK蛋白质表达的影响。结果榄香烯对大鼠C6胶质瘤细胞具有明显的抑制增殖作用,该增殖抑制效应呈剂量、时间依赖性。榄香烯可明显下调C6细胞中与Raf-1结合的Hsp90水平及C6细胞的磷酸化Raf-1、ERK表达,但不影响总Hsp90的表达水平。结论榄香烯能有效抑制胶质瘤细胞的体外增殖,破坏Hsp90的分子伴侣功能,阻碍Hsp90/Raf-1复合体的形成,使Raf-1不能被活化,最终下调胶质瘤细胞赖以生存的Raf/MEK/ERK通路,这可能是榄香烯抑制C6细胞增殖的机制。     

微小RNA-143-3p对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究微小RNA-143-3p(microRNA-143-3p,miR-143-3p)通过调节基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP2)对胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭的影响。方法体外培养胶质瘤U87 MG细胞,并随机分为miR-NC组和miR-143-3p mimic组;miR-NC组为转染阴性对照寡核苷酸的U87 MG细胞,miR-143-3p mimic组为转染miR-143-3p模拟物的U87 MG细胞。以细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测胶质瘤U87 MG细胞存活率,以划痕实验检测胶质瘤U87 MG细胞迁移能力,以Transwell实验检测胶质瘤U87 MG细胞侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测胶质瘤U87 MG细胞中MMP2表达水平。结果48 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(94.33±7.59)%和(71.43±7.01)%;72 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(93.45±8.11)%和(68.31±6.51)%;miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞迁移率分别为(42.03±5.72)%和(21.33±1.98)%;细胞侵袭数目为62.09±8.35和41.46±6.27;MMP2的表达量分别为1.01±0.10和0.68±0.07;以上指标,miR-143-3p mimic组与miR-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-143-3p通过MMP2抑制胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭。     

新型SMO抑制剂SI-4650对人神经胶质瘤U87MG细胞增殖、凋亡和自噬能力的影响

目的研究新型精胺氧化酶(spermine oxidase, SMO)小分子抑制剂SI-4650对人胶质瘤U87MG细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其分子机制。方法 MTT法检测细胞增殖情况;化学发光法检测SMO和乙酰多胺氧化酶(N~1-acetylpolyamine oxidase, APAO)的酶活性;高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内多胺含量;Transwell法分析U87MG细胞的迁移能力;PI单染后结合流式细胞术分析细胞周期;PI/FITC-Annexin V双染后结合流式细胞术、Western blot分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜(LSCM)和Western blot分析细胞自噬。结果 SI-4650可明显抑制U87MG细胞内SMO和APAO的酶活性,干扰多胺代谢,并降低U87MG细胞内总多胺含量。用SI-4650处理能抑制U87MG细胞的增殖和迁移能力,使细胞发生G_0/G_1周期阻滞,并诱导U87MG细胞发生凋亡和自噬性死亡。结论 SI-4650具有杀伤神经胶质瘤U87MG细胞的药理活性,其机制可能与干扰多胺代谢和诱导细胞凋亡和自噬相关。     

siRNA沉默PKM2抑制胶质瘤U87细胞的增殖和糖代谢能力

目的探讨小分子RNA干扰(siRNA)沉默M2型丙酮酸激酶(PKM2)基因表达对人脑胶质瘤U87细胞增殖和代谢的影响。方法合成PKM2siRNA并转染胶质瘤U87细胞,靶向抑制PKM2表达;将未转染和转染无义siRNA的细胞分别作为空白组和阴性对照组。MTT法检测U87细胞增殖,葡萄糖和乳酸检测试剂盒检测培养基代谢物。结果 PKM2siRNA能有效抑制U87细胞PKM2表达。下调PKM2表达后,细胞增殖能力受到明显抑制,同时葡萄糖消耗量和乳酸生成量也显著下降。结论干扰PKM2表达可显著抑制胶质瘤的增殖和代谢能力,可作为胶质瘤治疗的潜在靶点。     

β-榄香烯对人肝癌细胞侵袭转移及相关机制的实验研究

目的研究β-榄香烯对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法应用不同浓度的β-榄香烯作用于人肝癌细胞株HepG2 24h,以MTT法检测细胞黏附能力,采用Matrigel试剂、Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9蛋白的表达。结果随β-榄香烯浓度增大细胞黏附能力降低,同时侵袭及迁移细胞数目明显减少;β-榄香烯可以浓度依赖性地减少MMP-2及MMP-9蛋白表达。结论β-榄香烯可有效抑制人肝癌细胞侵袭转移能力,这主要是通过减少MMP-2及MMP-9蛋白的表达途径来实现。     

Effects of β-elemene inhibition of tumor invasion and metastasis properties of human hepatocarcinoma cells and its possible mechanism

目的 研究β-榄香烯对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 应用不同浓度的β-榄香烯作用于人肝癌细胞株HepG2 24 h,以MTT法检测细胞黏附能力,采用Matrigel试剂、Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9蛋白的表达.结果 随β-榄香烯浓度增大细胞黏附能力降低,同时侵袭及迁移细胞数目明显减少;β-榄香烯可以浓度依赖性地减少MMP-2及MMP-9蛋白表达.结论 β-榄香烯可有效抑制人肝癌细胞侵袭转移能力,这主要是通过减少MMP-2及MMP-9蛋白的表达途径来实现.     

β-榄香烯对多发性骨髓瘤细胞的白细胞介素-6表达的影响

目的探讨β-榄香烯对多发性骨髓瘤(MM)的白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,以期了解β-榄香烯抗MM的分子机制。方法人MM细胞系RPMI 8226与不同浓度的β-榄香烯作用,以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MM细胞培养上清中IL-6的浓度,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-6基因表达。结果不同浓度的β-榄香烯作用RPMI 8226细胞48h后,培养上清中IL-6浓度与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR检测结果表明,不同浓度的β-榄香烯作用于RPMI 8226细胞48h,RPMI 8226细胞的IL-6基因mRNA表达强度与对照相比均明显降低。结论β-榄香烯能明显减少MM细胞IL-6的自分泌,抑制RPMI 8226细胞的IL-6基因表达。提示β-榄香烯降低IL-6表达可能是其抗MM的机制之一。     

β-榄香烯对肝癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察β-榄香烯对体外培养肝癌细胞增殖以及细胞周期的影响。方法肝癌7402细胞体外培养,β-榄香烯干预;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测β-榄香烯对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期。结果肝癌7402细胞经过β-榄香烯干预,其存活率明显降低,并呈剂量依赖性。细胞周期检测结果显示,β-榄香烯干预后,进入S期和G2期细胞明显减少,G1期细胞增多,细胞周期被阻滞于G1期。结论β-榄香烯可明显抑制肝癌细胞的增殖及细胞周期,阻滞细胞从G1期进入S期。     

YAP-c-Myc信号通路抑制涉及冬凌草甲素抗神经胶质瘤作用

目的探讨冬凌草甲素对神经胶质瘤U87细胞增殖、迁移和凋亡影响及其作用机制是否涉及抑制YAP-c-Myc信号通路。方法采用MTT法检测冬凌草甲素对U87细胞活力的影响;划痕试验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测caspase-3、Bcl-2、Bax、YAP、c-Myc mRNA的表达;Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax、YAP、p-YAP(Ser127)、c-Myc蛋白的表达。结果冬凌草甲素呈剂量依赖性抑制神经胶质瘤U87细胞增殖(P<0.05)及迁移(P<0.01);流式细胞术分析细胞凋亡率明显增加(P<0.01);caspase-3 mRNA和蛋白表达均增高(P<0.05),Bcl-2/Bax mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),YAP、c-Myc的mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),p-YAP的蛋白表达增高(P<0.05)。结论冬凌草甲素可促进神经胶质瘤U87细胞增殖、迁移并促进胶质瘤细胞凋亡,其机制可能与抑制YAP信号通路相关。     

δ-榄香烯通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对肿瘤细胞增殖的影响;ELISA法定量检测细胞DNA片段化;Annexin-VFITC/PI流式细胞术检测细胞PS外翻的影响;用Westernblot分析药物对蛋白质表达的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖。DNA核小体的检测、细胞PS外翻证实δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的;Bax蛋白转入线粒体内,细胞色素C的释放以及凋亡因子AIF从线粒体释放入胞质,δ-榄香烯激活caspase信号通路,引起pro-caspase-3蛋白水解为caspase-3,进一步发生PARP底物的断裂。结论δ-榄香烯通过线粒体途径诱导DLD-1细胞发生凋亡。     

异硫氰酸苄酯抑制人胶质瘤U87MG细胞体外侵袭和诱导凋亡的作用和机制

目的 研究异硫氰酸苄酯对人胶质瘤U87MG细胞体外侵袭和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法 采用MTS实验考察异硫氰酸苄酯对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用;2,5 μmol·L^-1异硫氰酸苄酯作用24 h后,采用Transwell实验、黏附实验和划痕实验观察异硫氰酸苄酯对人胶质瘤细胞侵袭、黏附和迁移能力的影响;应用Real-time-PCR和Western blot法检测相应浓度异硫氰酸酯处理后人胶质瘤U87MG细胞中MMP-2、MMP-9、CD44、Survivin、Bcl-2、Net1、RohA、caspase-3、caspase-8和p-AKT的表达变化;应用报告基因技术检测NF-κB转录活性的变化;采用ELISA法测定胞内8-OH-dG含量;10,20 μmol·L^-1异硫氰酸酯作用24 h后,采用流式细胞术观察其对细胞凋亡的作用。结果 异硫氰酸苄酯可显著抑制人胶质瘤U87MG细胞体外增殖;与0 μmol·L^-1组相比,2,5 μmol·L^-1异硫氰酸苄酯对人胶质瘤细胞U87MG侵袭、黏附和迁移能力有明显的抑制作用;不同浓度异硫氰酸苄酯处理后,肿瘤细胞MMP-2、MMP-9、CD44、Survivin、Bcl-2、NET1和RhoA的mRNA和蛋白表达、AKT磷酸化水平和NF-κB转录活性明显下调,caspase-3和caspase-8表达以及8-OH-dG含量显著上调;10,20 μmol·L^-1异硫氰酸苄酯可显著诱导细胞凋亡。结论 异硫氰酸苄酯抑制人胶质瘤细胞U87MG的侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制AKT/NF-κB信号转导途径,进而调节侵袭和凋亡相关基因表达有关。     

Let-7a靶向调节周期素D2抑制胶质瘤细胞增殖

目的探讨let-7a通过靶向调控周期素D2(cyclin D2)对胶质瘤细胞增殖的影响。方法在U87和U251胶质瘤细胞中转染入化学合成的let-7a模拟物上调let-7a表达,荧光素酶报告基因实验检测let-7a与周期素D2的靶向调控关系,Western blot检测转染let-7a后周期素D2的表达情况,MTT和流式细胞术检测let-7a对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。结果在胶质瘤细胞中周期素D2是let-7a的靶基因,过表达的let-7a可下调周期素D2表达和抑制胶质瘤细胞增殖。结论let-7a可通过靶向调控周期素D2而抑制胶质瘤细胞增殖。     

Let-7a inhibits proliferation of glioma by target regulation of cyclin D2

目的 探讨let-7a通过靶向调控周期素D2 (cyclin D2)对胶质瘤细胞增殖的影响.方法 在U87和U251胶质瘤细胞中转染入化学合成的let-7a模拟物上调let-7a表达,荧光素酶报告基因实验检测let-7a与周期素D2的靶向调控关系,Western blot检测转染let-7a后周期素D2的表达情况,MTT和流式细胞术检测let-7a对胶质瘤细胞增殖的抑制作用.结果 在胶质瘤细胞中周期素D2是let-7a的靶基因,过表达的let-7a可下调周期素D2表达和抑制胶质瘤细胞增殖.结论 let-7a可通过靶向调控周期素D2而抑制胶质瘤细胞增殖.     

β-榄香烯对血管内皮细胞增殖及成血管能力的影响

目的观察β-榄香烯对血管内皮细胞增殖,细胞周期以及成血管能力的影响,探讨β-榄香烯对肿瘤血管生成的抑制作用。方法人脐静脉内皮细胞ECV-304体外培养,β-榄香烯干预;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测β-榄香烯对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;Matrigel胶检测细胞成血管能力。结果ECV-304细胞经过β-榄香烯干预,其存活率明显降低,并呈计量依赖性。细胞周期检测结果显示,β-榄香烯干预后,G1期细胞增多,进入S期及G2期细胞明显减少,细胞周期被阻滞于G1期;接种于Matrigel胶的ECV-304细胞经β-榄香烯干预后,形成管腔数目减少,成血管能力明显降低。结论β-榄香烯可直接干扰血管内皮细胞的增殖及细胞周期,阻滞细胞从G1期进入S期及G2期,并降低其成血管能力。     

汉防已甲素抑制人结肠癌细胞增殖与TGF-β1的关联机制研究

目的研究汉防已甲素(tetrandrine,Tet)抑制人结肠癌细胞增殖与TGF-β1的关系。方法利用细胞增殖抑制实验、定量PCR、流式细胞术、Annexin V-EGFP染色以及Western blot实验,分析Tet对HCT116细胞增殖和凋亡的影响;利用定量PCR、Western blot、细胞增殖抑制和免疫荧光实验,分析在结肠癌细胞中Tet抗结肠癌作用与TGF-β1的关系,以及TGF-β1介导Tet抗结肠癌作用可能的分子机制。结果与对照组相比,Tet抑制HCT116细胞增殖、诱导G1阻滞和细胞凋亡;Tet增加TGF-β1在HCT116细胞中的m RNA和蛋白表达水平,TGF-β1增强Tet抑制HCT116细胞增殖和促进其凋亡,抑制TGF-β1明显减弱Tet的这种作用;Tet降低Akt1/2/3的磷酸化水平,抑制PI3K增强Tet对结肠癌细胞增殖的抑制作用;TGF-β1增强Tet对Akt1/2/3磷酸化的抑制作用,而Tet降低Akt1/2/3磷酸化水平的作用可被TGF-β1抑制剂部分逆转;沉默PTEN促进Akt1/2/3磷酸化,但TGF-β1能翻转沉默PTEN对Akt1/2/3磷酸化的促进作用。结论 Tet能抑制结肠癌细胞增殖和促进凋亡,机制可能与其通过促进TGF-β1表达,抑制Akt1/2/3磷酸化有关。     

β-榄香烯抗DDP耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP 作用及机制研究

目的:研究β-榄香烯对DDP耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP增殖生长、逆转耐药的作用,以及对耐药细胞中耐药相关蛋白表达的影响。方法:CCK-8法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞克隆形成的影响;流式细胞术研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞凋亡的影响;CCK-8法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞产生顺铂(DDP)耐药的逆转指数;Western Blot法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞中耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达水平的影响。结果:β-榄香烯在20、40、80μmol·L^-1时能够抑制SKOV3/DDP细胞的增殖、克隆形成并促进细胞凋亡;β-榄香烯在不具有直接杀伤细胞作用的10μmol·L^-1时即可以逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药,其逆转耐药指数为2.58倍;β-榄香烯在20、40、80μmol·L^-1时能够减少耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达。结论:β-榄香烯能够直接抑制SKOV3/DDP细胞增殖、促进其凋亡并逆转细胞DDP耐药,其作用机制可能与减少耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达有关。     

Livin基因shRNA对恶性胶质瘤生长和凋亡的影响

目的 研究livin基因短发夹RNA(shRNA)对恶性胶质瘤生长和凋亡的影响.方法 将构建的livinβ基因shRNA真核表达载体以脂质体法转染C6细胞.应用Western blot检测livin表达水平;采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化.结果 Livin基因的shRNA可显著抑制C6细胞livin表达(P<0.01),转染组细胞生长受到显著抑(P<0.01),C6细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞.结论 Livin基因的shRNA导入C6胶质瘤细胞后抑制了livin基因在人胶质瘤细胞C6中的表达,并显著地诱导C6细胞发生凋亡.