一种简便快速的液相色谱串联质谱法用于人体内血尿样品中奈诺沙星浓度的测定

目的建立一种简便快速高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的方法用于测定人血浆和尿液中奈诺沙星药物浓度。方法色谱柱为Waters Symmetry RP1 8柱(50mm×2.1 mmm,5μm),以加替沙星为内标,血浆和尿液样品测定采用0.1%甲酸乙腈混合溶液为流动相,比例分别为82:1 8和85:1 5,流速均为0.2 mL/min。采用蛋白沉淀法处理血浆样品,以液液萃取法清除尿液样品中杂质。ESI源正离子选择性反应临测(SRM),奈诺沙星检测通道:m/z 372.4→m/z354.1,内标检测通道:m/z376.1→m/z 332.2。结果本方法测定血浆和尿液中的奈诺沙星的线性范围均为5～100ng/mL,最低检测浓度均为5ng/mL血浆和尿液的奈诺沙星提取回收率分别为(98.49±4.69)%和(84.92±6.81)%,且血浆和尿液的RSD)分别小于或等于4.31%和9.76%。奈诺沙星血浆样品的方法日内、日间准确度分别为(99.27～103.75)%和(100.40～106.36)%;而尿液样品的方法日内、日间准确度依次为(103.52～11 5.94)%和(9 9.50～1 10.96)%,且基质效应、精密度、稳定性等均通过方法学验证。并已用于该药的人体药动学研究中药物浓度的测定。结论本方法操作简便、迅速,特异性强,灵敏度高,准确性好,符合奈诺沙星人体药物动力学研究中血尿样测定的方法学要求。     

HPLC法测定去甲万古霉素血清药物浓度

目的 建立人血清中去甲万古霉素的HPLC测定方法,用于去甲万古霉素血清药物浓度的临床监测.方法 色谱柱为Shima-pak C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇:磷酸二氢钾缓冲液(pH=3.2)=15:85,检测波长为236 nm,流速1 mL·min-1,柱温为35℃,去甲万古霉素为内标.结果 ...     

高效液相色谱法测定胎盘灌流液中格列苯脲的浓度

目的建立测定胎盘灌流液中格列苯脲浓度的高效液相色谱(HPLC)检测方法。方法采用的色谱柱为Symmetry Shield RP C18(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温40℃,流动相为NaH2PO4缓冲盐(25 mmol/L,pH值5.2)︰乙腈=1︰1;内标为格列齐特,流速1.0 mL/min,检测波长228 nm,采用液-液萃取预处理方法测定胎盘灌流液中格列苯脲的浓度。结果格列苯脲浓度线性范围为2.0～25.0μg/mL,线性方程为:y=0.226x+0.002,r=0.999 9(n=6),日内相对标准偏差(RSD)<3.1%,日间RSD<9.5%,方法学回收率为95.32%～103.35%。结论 HPLC检测方法灵敏、简便,可用于胎盘灌流液中格列苯脲浓度的检测。     

西酞普兰血药浓度测定方法改进及其在血浆中稳定性观察

目的 建立测定人血浆中西酞普兰浓度的超高效液相串联质谱法,观察西酞普兰在血浆中的稳定性。方法 流动相为体积分数0.05%甲酸溶液-乙腈（30∶70）,流速为0.1mL/min,进样量为5L,柱温为35℃,样品室温度为4℃。采用Agela公司Venusil MP C18色谱柱（2.1mm×50mm,3μm）分离,通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,以多反应监测方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 325.22→109.25（西酞普兰）和m/z 265.23→167.37（内标盐酸苯海拉明）。结果 西酞普兰的线性范围为0.55~137.04μg/L,日内、日间精密度相对标准差均〈10%;血浆中西酞普兰低、中、高浓度水平的提取回收率分别为（89.6±2.1）%、（72.4±0.6）%、（86.3±2.5）%,内标为（77.2±0.7）%,相对回收率分别为（92.6±7.0）%、（100.7±7.3）%、（106.4±4.4）%;西酞普兰血样长期冷冻稳定性、标准品溶液及内标贮备液长期稳定性、多次冻融稳定性、室温稳定性均较佳。结论 本研究建立的分析方法快速、准确、灵敏、简便,适用于西酞普兰血浆药物浓度测定。     

检测人血清中5-羟色胺的高效液相色谱-串联质谱技术方法

目的建立一种快速、灵敏地测定血清中5-羟色胺的高效液相色谱-串联质谱技术方法(LC-MS/MS)。方法采用同位素内标稀释法,直接沉淀蛋白,采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×50 mm,3.5μm),大气压化学电离源(APCI),正离子模式,选择5-HT的特征离子对177.1/160.0,内标d4-5-HT的特征离子对181.1/164.0。结果 5-HT在10~2000 ng/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9996),定量下限为10 ng/ml,提取回收率85%,日内和日间精密度15%。结论本LC-MS/MS技术方法准确可靠、重现性好,灵敏度高,适用于人血清样品中5-HT的浓度测定。     

LC-MS/MS检测血清万古霉素浓度方法的建立及评价

目的建立检测人血清中万古霉素浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法,并与化学发光微粒子免疫法(CMIA)比较方法学性能。方法血清样品经过甲醇沉淀蛋白质,采用安捷伦Poroshell 120EC C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.7μm)梯度洗脱分离,流动相为甲醇(0.1%甲酸)-水(0.1%甲酸),流速为0.5 m L/min,内标采用去甲万古霉素,质谱采用ESI正离子多反应监测扫描模式。用该方法定量检测112例临床服用万古霉素患者血清万古霉素含量,并与临床常用的CMIA所得结果进行比较。结果万古霉素在1~100μg/m L内线性关系良好(r2=0.996 4);方法日内日间精密度、准确度均满足药物定量检测要求,且无基质效应和残留效应。Wilcoxon符号秩和检验结果显示,LC-MS/MS测定结果与CMIA结果比较,差异有统计学意义(P0.05);相关性检验结果显示,两者线性相关性良好,Y=1.06X-0.37(r=0.986)。结论 LC-MS/MS法性能较好,价格优廉,与CMIA法有较好的相关性,且检测在准确度、精密度上优势明显,可用于临床检测万古霉素的血清药物浓度。     

高效液相色谱法同时测定人血浆中氟西汀和喹硫平浓度

目的建立同时测定人血浆中氟西汀和喹硫平浓度的高效液相色谱(HPLC)方法。方法采用HPLC同时测定血浆氟西汀和喹硫平浓度。色谱柱为Inertsil ODS-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为0.05 mol/L醋酸铵-甲醇(体积比22∶78),流速为0.8 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃,萃取剂为乙酸乙酯-二氯甲烷(体积比77∶23),内标物为卡马西平。结果卡马西平和喹硫平、氟西汀色谱峰完全分离,峰形良好,保留时间分别为4.91、6.53和7.48 min,血浆中杂质对测定不产生干扰。氟西汀在10～480μg/L、喹硫平在20～1 600μg/L范围内线性关系良好(r值分别为0.990 5、0.992 9);当信噪比(S/N)=3时,检测限分别为5、8μg/L。氟西汀和喹硫平低、中、高3种浓度绝对回收率均>75%,相对回收率>95%,日内、日间相对标准偏差(RSD)均<10%。结论该方法灵敏、准确、成本低廉,可用于临床氟西汀与喹硫平的血药浓度监测和药物动力学研究。     

LC-MS/MS法同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度

目的建立可同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度的液质联用-质谱串联法(LC-MS/MS)。方法以地西泮为内标,血浆样品经乙酸乙酯萃取后经超高效液相色谱(Acquity UPLC)BEH C18色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm)分离,欧前胡素与异欧前胡素在质谱条件为正电喷雾电离(ESI~+)(m/z:271.5204.2),锥孔电压为20 V,碰撞能量为33 V,考察特异性、线性范围、定量下限、基质效应以及方法学回收率、精密度和稳定性。结果欧前胡素与异欧前胡素保留时间分别约1.5 min及2.4 min,欧前胡素浓度在0.1～20 ng/mL范围内线性良好(r~2=0.998 2),定量下限0.1 ng/mL(信噪比S/N10)。异欧前胡素浓度在0.05～10 ng/mL范围内线性良好(r~2=0.998 9),定量下限0.05 ng/mL(S/N10),基质效应为94.89%～110.70%,方法学回收率为94.3%～104.3%。欧前胡素与异欧前胡素的重复性以CV表示,CV分别4.91%、5.26%,期间CV分别16.39%、14.87%。冻融条件下二者CV均不大于7.21%,室温下均不大于10.44%。结论建立了同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度的LC-MS/MS法,该法灵敏度高、特异性好、稳定性好。     

LC-MS/MS法快速定量人血浆中克拉霉素的浓度

目的建立液相色谱串联质谱法测定人血浆中克拉霉素的浓度。方法选用ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1×50mm,1.7μm)的色谱柱,以含0.1%的甲酸纯水,含0.1%的甲酸95%乙腈为流动相,采用梯度洗脱进行分离,样本经蛋白沉淀及30%乙腈复溶后进样,选用API4000型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测。结果克拉霉素线性范围为4.00～2 000.00ng/mL,定量下限4.00ng/mL。准确度与精密度结果显相对偏差为1.20%～2.90%,低、中、高3个浓度提取回收率平均值均大于100%,基质效应小,稳定性好。结论该方法快速、灵敏、专属性强、重现性好,可用于人体克拉霉素血药浓度的监测及人体药代动力学研究。     

高效液相色谱法测定人血浆中加替沙星浓度

目的:建立HPLC法测定人血浆中加替沙星浓度的方法。方法:采用噻克硝唑为内标,色谱柱为Polaris C18-A柱(150*4.6mm),流动相为乙腈:0.05M的枸缘酸溶液(22:78),流速1.0ml/min,检测波长为295nm。结果:加替沙星血清浓度在0.015～6.48μg·ml-1范内具有良好线性关系,最低定量限为0.015μg·ml-1,方法回收率为99.1%～101.0%,日内、日间RSD均<7%。结论:本法简便、准确、灵敏,适用于加替沙星血药浓度监测及人体药代动力学研究。     

液相色谱-串联质谱法监测血清茶碱浓度及室间质量评价

目的对液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测茶碱进行方法学评价,探讨其在茶碱治疗药物监测(TDM)中的应用。方法在血清添加放射性核素内标茶碱-D6,经蛋白沉淀稀释后采用LC-MS/MS测定。以Capcell C18 MGⅢ(100 mm×2.0 mm,5μm)为分析柱进行反相色谱分离;以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水[20∶80(v/v)]为流动相,流速为0.3 m L/min;以电喷雾离子化串联四级杆质谱、正离子多反应监测进行定量检测。用建立的方法从2008年起连续参加卫生部临检中心茶碱TDM室间质量评价。结果 LC-MS/MS检测茶碱的线性范围为1~50μg/m L,批内和批间精密度分别为2.26%~6.65%和4.70%~6.84%,准确度分别为94.14%~104.00%。单个样品的监测分析时间为3.5 min。冻融(-30℃室温反复解冻3次)、室温放置24 h、自动进样器放置24 h、长期保存(-30℃放置28 d)的稳定性均良好。LC-MS/MS测定结果与室间质量评价靶值偏差为2.75%,斜率为1.04,相关系数(r2)为0.983。结论该LC-MS/MS采用放射性内标稀释,具有简单、快速、特异性和灵敏度较好的特点,连续6年测定结果符合全国室间质量评价要求,可用于茶碱的临床TDM。     

高效液相色谱法测定三七接骨丸中三七皂苷R1的含量

目的:采用反相高效液相色谱法测定三七接骨丸中三七皂苷R1的含量。方法:色谱柱为Diamonsic C18(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0ml/min,柱温为30℃,检测波长为203nm。结果:三七皂苷R1在进样量0.1008～0.504μg时线性关系良好,r=0.9999。平均加样回收率为97.60%,RSD为2.05%。结论:该方法简便、准确、专属性强,可用于本品的质量控制。     

HPLC-ELSD同时测定银迪清胶囊中靛蓝和靛玉红含量

目的:建立同时测定银迪清胶囊中靛蓝和靛玉红含量的方法。方法:采用高效液相色谱—蒸发光散射检测法,色谱柱为Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为乙腈-0.1%冰醋酸水溶液(52:48,v/v),流速:1.0m L·min-1;ELSD参数:漂移管温度为110℃,空气流速为2.5 L·min-1;进样量:20μL。结果:靛蓝质量浓度在350~3500μg·m L-1范围内,其自然对数与峰面积的自然对数成良好的线性关系(r=0.999 0),平均回收率为100.3%(RSD=2.1,n=6);靛玉红质量浓度在5~50μg·m L-1范围内,其自然对数与峰面积的自然对数成良好的线性关系(r=0.999 5),平均回收率为99.4%(RSD=2.3,n=6)。结论:建立的方法简便、准确、重现性好,可用于银迪清胶囊的质量控制。     

HPLC法测定人血中阿莫西林的方法学研究

目的 建立一种实用的HPLC法用于人血中阿莫西林含量测定.方法 采用含1%磷酸的甲醇溶液沉淀蛋白,高效液相色谱法测定.以替硝唑为内标,色谱柱为Waters XBridge C18,150 mm×4.6 mm,waters保护柱;流动相为:甲醇:0.01 mol/L磷酸二氢钾(pH2.3)=16:84,流速为1.0 mL/min,柱温30 ℃,检测波长为225 nm.结果 血浆内源性物质对样品测定没有干扰.阿莫西林的线性范围为0.25～32.0 μg/mL(r=0.999 9).阿莫西林以及替硝唑各浓度点的稳定性实验的RSD均小于15%.结论 该方法样品处理简便,结果准确,灵敏度较高,可用于人血浆中阿莫西林含量的测定以及阿莫西林药代动力学研究.     

反相高效液相色谱法测定血浆中埃索美拉唑浓度

目的:建立反相高效液相色谱法测定人血浆中埃索美拉唑(esomeprazole,EMZ)浓度。方法:血浆样品用二氯甲烷萃取后经YMCC18(150mm×4·6mm,5μm)色谱柱(柱温:35℃),用流动相甲醇-0·02mol·L-1醋酸铵(NH3·H2O调pH7·6)=51:49,以流速1ml·min-1洗脱分离,用卡马西平为内标,检测波长306nm。结果:标准曲线线性范围3·9~2000·0ng·ml-1;萃取回收率70·6%~76·7%;加样回收率89·1%~104·6%;日内测定RSD为4·8%~6·6%,日间测定RSD为2·8%~5·6%。结论:本方法快速、灵敏、准确、简便,适用于EMZ血药浓度测定及药代动力学研究。     

高效液相紫外法测定胰腺炎患者血浆中维生素C浓度

目的建立一种反相高效液相紫外检测法来测定胰腺炎患者血浆中维生素C的浓度。方法将胰腺炎患者血浆样本经预处理后用反相高效液相色谱（HPLC）仪进行浓度测定。色谱条件为KromasilC18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇和5％偏磷酸（15：85）,pH=4．0,检测波长为245nm,流速为1．0mL／min。柱温39℃。结果在上述色谱条件下,血浆中的VC得到良好分离,线性范围2．5～500μg/mL,日内差异和日间差异分别为0．22％和0．97％;回收率为98．64％。测定胰腺炎患者血浆中维生素C的浓度平均测定值为11．31μg／mL,明显低于健康人测定值23．67μg／mL。结论该方法能更简单、快速、准确、灵敏测定胰腺炎患者血浆中维生素C的浓度。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中二甲双胍的浓度

目的采用液相色谱-串联质谱法测定人血浆中二甲双胍的浓度。方法血浆样品用乙腈(含0.1%甲酸)沉淀蛋白后用二氯甲烷反洗后进行分析。使用Agilent C8(75 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱。流动相:A泵:5 mmol/L醋酸铵(三乙胺调pH值至7.5),B泵:乙腈。线性梯度洗脱,流速0.4 mL/min。采用电喷雾离子源,多反应离子监测。用于定量分析的离子对二甲双胍为130.2/71.1,内标吗啉胍为172.2/60.2。结果线性范围为50～2 000 ng/mL,最低定量限为50 ng/mL,预处理回收率为81.7%～98.0%,二甲双胍的基质效应<9.97%,日内和日间相对标准偏差均<5.2%。结论液相色谱-串联质谱法快速、简便、灵敏度高,是一种适用于人血浆中药物浓度的测定及药物动力学和生物利用度研究的方法。     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中异烟肼、利福平及其在健康男性体内的药物代谢动力学研究

目的?建立可靠的测定人血浆中异烟肼（INH）和利福平（RFP）浓度的高效液相色谱－串联质谱法,用于研究健康男性体内的药物代谢动力学特征。方法?以稳定同位素作为内标,血浆样品经甲醇沉淀蛋白质处理后检测。INH采用Atlantis HILIC（50 mm×2.1 mm,3 μm）色谱柱,以水和5 mmol／L甲酸铵90%乙腈水溶液（均含0.01%甲酸）为流动相;RFP 采用Syncronis C18（50 mm×2.1 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈和50%乙腈水溶液为流动相;二者均为梯度洗脱。使用电喷雾离子源,正离子多反应监测方式进行检测。结果?INH、RFP 分别在5～5 000 ng／mL、10～10 000 ng／mL范围内线性关系良好（r＞0.99）。方法专一性强,精密度以变异系数表示,均小于7%,无明显基质效应。结论?本方法操作简便,特异性高,可用于人体药物代谢动力学及治疗药物监测等研究。     

HPLC-MS/MS法在白血病患者血浆维生素C水平测定中的临床应用

目的建立测定白血病患者血浆维生素C水平的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法,并应用于临床。方法采用HPLC-MS/MS法,L-Ascorbic Acid-1-13 C为内标,XBridge?C18(4.6 mm×50.0mm,5μm)色谱柱,流动相为(0.1%甲酸)甲醇-(2mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸)水,梯度洗脱,流速为0.8mL/min,柱温60℃,进样量10μL。采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测。并对123份白血病患者标本及407份健康志愿者标本进行了检测,测定结果用t检验进行比较分析。结果维生素C的水平在0.5～50.0μg/mL范围内线性关系良好(r0.990 0),日内及日间精密度(RSD)均小于5%,回收率在90%～110%;与健康人相比,患者体内维生素C水平明显偏低[(8.8±3.0)vs.(2.4±3.9)μg/mL,P0.01]。结论该方法快速、准确、灵敏度高、操作简单,适用于临床中患者血浆中维生素C水平的检测。建议白血病患者应适当补充维生素C。     

HPLC法测定和胃合剂中橙皮苷的含量

目的:建立HPLC法测定和胃合剂中橙皮苷含量的方法。方法:色谱柱为Alltech C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-水(33∶67);流速1.0ml/min;柱温28℃;检测波长284nm。结果:高效液相色谱法测定,橙皮苷进样量在0.174～1.392μg范围内的线性关系良好(r=1),平均加样回收率99.51%,RSD为1.1%(n=6)。结论:本法操作简便、准确,重复性好,可作为该制剂的质量控制标准。