表没食子儿茶素没食子酸酯对人大肠癌株SW620增殖的抑制及与PAK1基因表达的相关性研究

目的 观测表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人大肠癌SW620细胞增殖及SW620细胞表达PAK1的影响.方法 用终浓度为40 μmol/L、60 μmol/L和80 ixmo1/L的EGCG干预人大肠癌细胞株SW620,在0、24、48和72 h不同时间点上用噻唑蓝(MTT)比色法检测EGCG对SW620细胞生长的影响;并以SW620细胞空白组为对照,用蛋白免疫印迹(Westerm blot)检测不同EGCG作用48 h时SW620细胞PAK1的表达水平变化.结果 EGCG对大肠癌SW620细胞增殖有显著的抑制作用,而且与SW620细胞空白对照组相比.EGCG处理组细胞的PAK1蛋白表达受到显著抑制.结论 EGCG抑制大肠癌SW620细胞增殖的机制可能与EGCG通过调控大肠癌细胞的PAK1表达相关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on the proliferation of SW620 cells and the expression of PAK1 gene. Methods Human colonic cancer cell line SW620 was treated with EGCG at 40, 60 and 80 μmol/L and cultured in RPMI 1640 medium for 0, 24, 48 and 72 h. The proliferation of SW620 cells was observed by MTT assay before and after EGCG treatment, and the expression of PAK1 protein was observed by Western blotting. Results SW620 cells treated with EGCG displayed a slowed growth in comparison with the control cells, and the growth rate decreased with the increase of EGCG concentration. PAK1 protein expression was lowered in SW62Q, cells after EGCG treatment for 48 h. Conclusion EGCG can inhibit the proliferation and partially reduce the expression of PAK1 protein in SW620 cells.     

EGCG对血小板源性生长因子-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

 目的  研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对血小板源性生长因子-BB (platelet-derived growth factor BB, PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖和迁移的影响并探讨其可能的机制。方法  组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉VSMC, 用RTCA (real time cellular analysis)仪器检测EGCG (10、50、100 μmol/L)和Jak2特异性抑制剂AG490 (50 μmol/L)对PDGF-BB (10 ng/mL)诱导的VSMC增殖和迁移的影响; 运用 Western blot检测Jak2、Stat3、Cyclin D1蛋白质水平及Stat3磷酸化水平。结果  RTCA检测结果显示, 10~100 μmol/L的 EGCG及50 μmol/L的AG490均能抑制PDGF-BB诱导的VSMC的增殖和迁移(P＜0.001)。Western blot检测结果显示, 50 μmol/L的EGCG能明显下调PDGF-BB刺激上调的VSMC的Jak2、Stat3、Cyclin D1蛋白质水平及Stat3磷酸化(p-Stat3)水平(P＜0.001), 且与其他两个浓度组相比较下调更为明显(P＜0.001); 50 μmol/L的AG490也能明显下调上述蛋白质水平(P＜0.001), 且50 μmol/L 的EGCG下调Jak2、Stat3、p-Stat3 蛋白质水平与AG490组比较无明显差异。结论  EGCG抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖和迁移可能通过抑制Jak2/ Stat3信号转导通路而实现。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对肥胖型哮喘小鼠气道 炎症和Treg/Th17免疫平衡的影响

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对肥胖型哮喘小鼠调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞17（Treg/Th17）免疫失衡的调节作用,为EGCG治疗肥胖型哮喘提供依据。方法：40只C57BL/6J小鼠分为正常对照组（采用正常饲料喂养）、肥胖组（采用高脂饲料喂养）、肥胖型哮喘组[采用高脂饲料喂养的同时给予卵白蛋白（OVA）致敏和激发,制备肥胖型哮喘模型],EGCG干预组（在OVA激发前1 h给予20 mg·kg^-1EGCG腹腔注射）和地塞米松干预组（在OVA激发前1 h给予2 mg·kg^-1地塞米松腹腔注射）,每组8只。采用无创肺功能仪测定各组小鼠的增强呼气间歇（Penh）值;HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,HE染色切片半定量方法进行小鼠气道炎症评分; ELISA法检测各组小鼠血清中脂联素、瘦素和支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素17A （IL-17A）水平;流式细胞术检测各组小鼠脾组织中Th17和Treg百分比。结果：肥胖组小鼠体质量高于正常对照组（P<0.05）,为正常对照组小鼠平均体质量的1.67倍。与正常对照组比较,肥胖型哮喘组小鼠Penh值和气道炎症评分均升高（P<0.05）,血清中瘦素水平升高（P<0.05）,BALF中IL-17A水平升高（P<0.05）,IL-10水平降低（P<0.05）,脾组织中Th17百分比升高（P<0.05）,Treg百分比降低（P<0.05）。与肥胖型哮喘组比较,EGCG干预组小鼠Penh值和气道炎症评分均降低（P<0.05）,血清中瘦素水平降低（P<0.05）,BALF中IL-17A水平降低（P<0.05）,BALF中IL-10水平升高（P<0.05）,脾组织中Th17百分比降低（P<0.05）,脾组织中Treg百分比升高（P<0.05）。结论：在肥胖型哮喘小鼠中存在Treg/Th17免疫失衡,EGCG能够抑制肥胖型哮喘小鼠的气道炎症及气道高反应性,能够改善Treg/Th17免疫失衡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对卵巢癌细胞A2780增殖和凋亡影响的研究

目的：探讨表没食子儿茶素中没食子酸酯(epigallocatechin-3-ganate, EGCG)对人卵巢癌A2780细胞株及裸鼠移植瘤细胞增殖的抑制、凋亡的诱导作用及相关分子机制。方法：(1)在体外,通过电镜及四甲基偶氮唑盐酶比色法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)观察不同浓度EGCG在不同时间点作用于A2780细胞后,对其细胞形态及增殖活力的影响。(2)在体内,通过建立A2780细胞裸鼠移植瘤模型,分别比较腹腔注射EGCG低、中、高剂量组和未注射EGCG组之间肿瘤体积及重量的变化;免疫组化及实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)检测增殖相关基因Ki-67及凋亡相关基因NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达情况。结果：体外EGCG诱导A2780细胞的形态学改变;MTT法结果显示,EGCG能显著地抑制A2780细胞的增殖活性,并呈时间-浓度依赖性;体内EGCG注射组与未注射组相比肿瘤体积随用药浓度增加而减小,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义;免疫组化和RT-PCR结果表明,EGCG能下调Ki-67、NF-κB(p65)、Bcl-2及上调Bax蛋白及mRNA的表达。结论：体外EGCG可有效抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖活力;体内EGCG能明显抑制人卵巢癌A2780细胞、裸鼠移植瘤细胞的增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与下调Ki-67和NF-κB(p65),促Bax/Bcl-2比值增高有关。     

肺癌细胞系中KEAP1与NRF2相互作用区域基因突变的检测

目的 检测非小细胞肺癌细胞系中KEAP1及NF-E2相关因子2(NRF2)相互作用结构域基因的突变情况.方法 以6个非小细胞肺癌细胞系为材料,检测KEAP1基因的第2至第6外显子及NRF2的DLG和ETGE基序编码序列的碱基序列突变情况,推测相应的氨基酸序列变异.同时检测供试细胞系的细胞内活性氧浓度,分析目标序列突变对肺癌细胞抗氧化系统的影响.结果 在KEAP1基因第4外显子区域发现4个所有癌细胞系共有的突变,部分细胞系的第3外显子区域还存在错义突变,所有NRF2-ETGE基序编码序列均存在多重遗传变异.活性氧检测发现供试细胞系活性氧浓度均高于肺胚细胞.结论 KEAP1和NRF2基因相互作用结构域的基因突变在供试细胞系内普遍存在,非小细胞肺癌细胞系对细胞内活性氧浓度失去调控能力是普遍现象.     

JAK2/STAT3通路在表皮生长因子诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用

目的探讨JAK2/STAT3通路在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法以人结肠癌细胞株LoVo为研究对象,分为对照组、表皮生长因子处理组(EGF组)、表皮生长因子与JAK2激酶抑制剂AG490共处理组(EGF+AG490组)。采用免疫荧光和Western blot检测各组LoVo细胞E钙粘素蛋白、磷酸化STAT3表达水平;Transwell法检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果细胞划痕实验对照组细胞划痕闭合约38%,EGF+AG490组细胞划痕闭合约40%,而EGF组闭合约80%。EGF组显著高于另2组(P<0.05);体外侵袭实验显示对照组透膜细胞数为(21.24±2.65)/视野,EGF+AG490组为(23.19±3.50)/视野,EGF组为(55.08±2.14)/视野。EGF组显著高于另2组(P<0.05);与EGF+AG490组结肠癌LoVo细胞相比,EGF组细胞P-STAT3表达增加72.4%,E-cadherin蛋白表达降低68.5%(P<0.05);免疫荧光显示EGF组细胞E-cadherin向细胞质内移位...     

右美托咪定调控Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤的作用研究

目的 探讨右美托咪定调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路对过氧化氢(H₂O₂)诱导心肌细胞氧化应激损伤的作用。方法 体外培养大鼠H9C2心肌细胞,设置对照组、H₂O₂组、1μmol右美托咪定+H₂O₂组、5μmol右美托咪定+H₂O₂组、10μmol右美托咪定+H₂O₂组。CCK-8法检测各组H9C2细胞增殖情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组H9C2细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测各组H9C2细胞Nrf2、HO-1 mRNA相对表达量;Western blotting检测各组H9C2细胞Nrf2、HO-1蛋白相对表达量。结果 与对照组比较,H₂O₂组H9C2细胞存活率、SOD水平、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对...     

Effects of (-)-epigallocatechin-3-gallate on expression of matrix metalloproteinase-1 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in fibroblasts irradiated with ultraviolet A

Skinphotodamage,aresultofultravioletirradiation,ismainlyduetotheimpairmenttostructuralproteinsofthedermisandthebasementmembraneHistologicalanalysisindicatesthatmajormodificationsincludedegenerationofcollagenfibersandmatrixmetalloproteinase(MMP)inducedchangesintheratiosofdifferenttypesofcollagen1　()Epigallocatechin3gallate(EGCG)isthemajorandmosteffectiveantioxidantingreenteaandcanofferprotectionagainsttheultravioletinduceddepletionofantioxidantenzymesandtheinductionofepidermallipidperoxidati…     

N-乙酰半胱氨酸对术后认知功能障碍模型小鼠认知功能及核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1信号通路的影响

目的 观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对术后认知功能障碍(POCD)模型小鼠认知功能和海马核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法 采用随机区组设计,利用随机数字表法将雄性3~4月龄C57BL/6J小鼠54只随机分为3组(n=18),分别为对照组、手术组、手术+NAC组。在异氟醚吸入麻醉下,手术组和手术+NAC组小鼠行左下肢胫骨骨折内固定术。手术+NAC组分别于麻醉前30 min、术后3 h和6 h腹腔内注射NAC 150 mg/kg,对照组和手术组腹腔注射生理盐水。术后第3天利用随机数字表法每组随机取6只小鼠,行Morris水迷宫测试小鼠空间认知和记忆功能,术后第7天完成测试。术后第1、3天取小鼠海马组织,酶联免疫吸附法检测小鼠海马组织中白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)浓度,Western blot及实时荧光定量PCR检测小鼠海马组织中Nrf2和HO-1的蛋白与mRNA表达。结果 3组小鼠的游泳速度差异均无统计学意义(F=2.135,P=0.114);与对照组和手术+NAC组小鼠相比,手术组小鼠的逃避潜伏期延长(P<0.01),穿越平台次数减少(P<0.01),目标象限停留时间减少(P<0.01)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组术后1 d海马组织IL-6和MDA含量均明显增高(P均=0.000),术后第3天手术组仍高于对照组(P=0.000),手术+NAC组IL-6(P=0.251)和MDA(P=0.103)含量降至对照组水平;与手术组相比,手术+NAC组术后第1、3天海马组织IL-6和MDA含量均明显降低(P均=0.000)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组海马组织Nrf2和HO-1蛋白表达均增高(P均=0.000);与手术组相比,手术+NAC组海马组织Nrf2和HO-1蛋白表达均明显增高(P均=0.000)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组Nrf2和HO-1 mRNA表达在术后第1天均明显增加(P均=0.000),手术+NAC组明显高于手术组(P=0.000)。术后第3天,Nrf2和HO-1的 mRNA表达进一步增强。结论 NAC预处理后的POCD小鼠降低海马组织氧化应激和炎性反应,改善认知功能,此作用与激活Nrf2/HO-1信号通路相关。     

EGCG抑制卵巢癌细胞RASSF1A基因甲基化并上调其表达

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对卵巢癌细胞系A2780Ras相关区域家族1基因（RASSFl）甲基化及其表达的影响。方法体外培养A2780细胞,用0、10、30和50μmol／LEGCG与A2780细胞孵育24-72h,采用甲基化特异性PCR（MSP）检测RASSFlA基因启动子区域的甲基化改变情况;提取EGCG处理后A2780细胞的RNA,用逆转录PCR（RT-PCR）检测RASSFlA的表达水平。结果静息状态下,MSP结果显示A2780细胞可检测出RASSFlA基因启动子区域有明显的甲基化条带,当与50μmol／LEGCG孵育72h后,甲基化水平有所减弱,而非甲基化基因增多。RT-PCR显示EGCG呈剂量和时间依赖性地促进A2780细胞RASSFlA基因mRNA和蛋白表达。结论EGCG能使RASSFlA基因去甲基化,并上调其非甲基化基因和蛋白的表达水平,这可能是其抗肿瘤的奄耍机制。     

LXA4通过p38MAPK/Nrf2信号通路诱导H9c2心肌细胞HO-1高表达

目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)诱导心肌细胞H9c2中血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1表达可能涉及的信号转导通路?方法:分别用核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)的抑制剂ATRA?p38MAPK的抑制剂SB203580?LXA4联合ATRA?LXA4联合SB03580预处理H9c2细胞后进行缺氧/复氧处理,RT-PCR?Western blot?免疫荧光等检测HO-1?Nrf2以及p38MAPK mRNA和蛋白表达的变化?结果:与只行缺氧/复氧处理的细胞相比,LXA4预处理的H9c2细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P < 0.05),而ATRA?SB203580分别抑制了Nrf2的聚集和p38MAPK的磷酸化(P < 0.05),从而抑制了LXA4对HO-1的诱导(P < 0.05)?结论:LXA4预处理诱导心肌细胞H9c2的HO-1高表达,具有抗缺氧/复氧损伤的作用,其机制与p38MAPK/Nrf2信号通路有关?     

NLE1在结肠癌中的表达及其对HT29细胞增殖凋亡的影响

目的 验证Notchless同源物1(Notchless homolog 1,NLE1)在结肠腺瘤及腺癌组织中的表达水平,评价其可能作用及机制。方法 通过免疫组化及实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法评价NLE1在结肠正常黏膜、腺瘤组织及腺癌组织中的表达水平。通过慢病毒转染,评价NLE1沉默对HT29细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。结果 免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色显示,NLE1在结肠正常黏膜、腺瘤及腺癌组织中的高表达率分别为14.3% (15/105),44.0% (11/25)及68.6% (72/105),在腺癌中明显高于腺瘤(P<0.05),在腺瘤中明显高于正常黏膜(P<0.001)。实时荧光定量PCR显示,结肠正常黏膜、腺瘤及腺癌组织三组的NLE1 mRNA表达分别为1.38±0.82,5.04±2.09,7.57±1.25。腺癌组织中NLE1表达水平明显高于腺瘤(P<0.05),腺瘤组织中明显高于正常黏膜(P<0.01)。NLE1沉默显著抑制HT29细胞增殖(P<0.05)及克隆形成能力(P<0.05),促进其凋亡(P<0.05),并可促进Bax及Fas的表达。结论 结肠腺癌中高表达的NLE1可能通过影响肿瘤细胞增殖凋亡从而发挥促进肿瘤发生的作用。     

干扰素诱导跨膜蛋白3 在结肠癌组织中的表达及对结肠癌细胞凋亡的调控作用研究

目的 探讨干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM 3）在结肠癌组织中的表达及对结肠癌细胞凋亡的调控作用。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测结肠癌组织和对应的癌旁组织中IFITM 3 的表达水平。细胞转染si-IFITM 3 抑制IFITM 3 的表达,同时转染si-control 作为对照,MTT 检测转染后48 h的细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot 检测细胞中Bcl-2、Bax、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平。结果 IFITM 3 在结肠癌组织中的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义（P <0.05）。si-IFITM 3 组结肠癌细胞HT29 和HCT116 的存活率与si-control 组相比下降,差异有统计学意义（均P <0.05）。转染si-IFITM 3 后的结肠癌细胞HT29 和HCT116 凋亡率高于si-control 组,差异有统计学意义（均P <0.05）。转染si-IFITM 3 后的结肠癌细胞HT29 和HCT116 中STAT3 蛋白表达水平没有变化,p-STAT3、Bcl-2 蛋白表达水平低于si-control 组,Bax 蛋白表达水平高于si-control 组。结论 干扰素诱导跨膜蛋白3在结肠癌组织中过度表达。抑制干扰素诱导跨膜蛋白3 的表达,可以抑制结肠癌细胞的增殖,促进癌细胞凋亡,其作用机制与Bcl-2、Bax、STAT3 有关。     

大鼠液压冲击脑损伤Nrf2、HO-1和NQO-1动态表达变化及意义

目的 探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NADPH quinineoxidoreductase-1,NQO-1)的表达变化及其意义.方法 成年雄性SD大鼠56只制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1h、6h、12 h、24 h、3d、7d用干湿质量法测定脑组织含水量,Westernblot测定Nrf2胞浆、胞核蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白;用实时荧光定量PCR测定Nrf2 mRNA表达.结果 自冲击伤后6h,脑组织含水量开始增加,24h达高峰,持续至3d,然后开始下降(P＜0.05).组织学观察印证了脑水肿趋势.Western blot检测结果显示胞浆Nrf2蛋白于伤后12 h开始持续降低,而胞核Nrf2蛋白则于1h开始升高,24 h达到高峰,3d时降低,7d后明显降低,但仍高于NC组(P＜0.05).HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致.实时荧光定量PCR显示TBI组术后各时间点Nrf2 mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 液压冲击伤后出现核因子Nrf2转位激活,可能通过上调HO-1、NQO-1蛋白表达发挥神经保护作用.     

质粒介导的短发卡状RNA特异性抑制大肠癌cerb-B1基因的表达

目的:体外构建编码人类基因cerb-B1短发卡状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,观察其对结肠癌LoVo细胞cerb-B1基因和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的特异性抑制作用.方法:体外合成cerb-B1基因的DNA模板引物,和Pgenesil-1质粒构建编码shRNA的表达载体.应用脂质体Lipofectamine 2000转染人结肠癌LoVo细胞,转染成功后以G418筛选4周,实时荧光定量RT-PCR(Real Time RT-PCR)检测cerb-B1基因的mRNA表达,Western-blot检测EGFR蛋白的表达.结果:质粒载体经酶切鉴定证实DNA模板插入质粒成功,且测序与设计结果相符,成功的构建了针对原癌基因cerb-B1的质粒表达载体.质粒载体成功转染后,cerb-B1基因mRNA表达下降了(81.3±2.8)%,EGFR蛋白表达下降了(73.4±2.3)%,和对照质粒载体组比较有显著性差异.结论:说明本研究构建的针对cerb-B1基因的质粒表达载体可以显著抑制cerb-B1基因和EGFR蛋白在人结肠癌LoVo细胞的表达,为结肠癌的基因治疗提供了新的思路.     

aR1治疗脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的效果和机制

目的 探讨Maresin-1（MaR1）治疗脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠的效果和机制。方法将雄性SPF级BALB/c小鼠45只随机分为3组。对照组经口气管插管滴入3 mg/kg生理盐水。LPS组经口气管插管滴入3 mg/kg LPS。MaR1组经口气管插管滴入3 mg/kg LPS,1 h后尾静脉注射1 ng/只MaR1。对比分析3组小鼠肺组织损伤评分、免疫印迹分析小鼠肺组织MAPKs、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达,以及氧化应激标记分析3组小鼠肺组织核因子-E2相关因子2（Nrf-2）表达和抗氧化酶的情况。结果与LPS组比较,MaR1组能改善LPS诱导的ALI小鼠肺组织损伤评分（P=0.000）;MaR1组能显著抑制LPS诱导的ALI小鼠MAPKs和p65NF-κB的磷酸化,两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;MaR1组通过上调抗氧化酶增加Nrf-2的核转运,两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;MaR1组抑制了LPS诱导的ALI模型肺组织中活性氧介导的氧化应激反应,两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论MaR1治疗小鼠ALI机制可能是通过抑制MAPK和NF-κB的磷酸化,同时活化多种抗氧化酶保护肺组织有关。     

PI3K/Akt信号与吴茱萸碱抑制人结肠癌细胞增殖的关系研究

目的 研究吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)对结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制.方法 采用结晶紫染色分析Evo(0、0.5、1、2、4μmol/L)对LoVo细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术分析Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对LoVo细胞凋亡的促进作用;Western blot法分析Evo(0、0.5、1 μmol/L)对LoVo细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Caspase-3蛋白表达水平的影响;利用缺氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor 1-alpha,HIF-1 α)荧光素酶报告质粒检测Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对HIF-1 α转录活性的影响.采用Western blot法分析Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对LoVo细胞中HIF-1 α、Akt1/2和磷酸化Akt1/2蛋白水平的影响.结果 与对照组相比,Evo明显抑制LoVo细胞增殖,下调PCNA蛋白水平,促进LoVo细胞凋亡;报告质粒统计结果显示,Evo呈浓度依赖性降低HIF-1α荧光素酶报告质粒活性(Evo为0.5μmol/L时,P＜0.05;Evo为1μmol/L或2μmol/L时,P＜0.01);Western blot检测结果显示,Evo能够明显降低HIF-1 α蛋白水平,下调Akt1/2磷酸化水平.结论 Evo能够抑制LoVo细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与Evo下调HIF-1α蛋白表达,抑制PI3 K/Akt信号转导相关.     

抗凋亡基因Bag-1和Bcl-2在结肠癌组织中的表达及其相互关系

目的 研究抗凋亡基因Bag-1和Bcl-2在结肠癌组织中的表达及其意义，并探讨两者间的关系。方法 应用免疫组织化学SABC法（链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法）对64例结肠癌组织及10例正常结肠组织中Bag-1和Bd-2基因的表达进行检测。结果 Bag-1和Bcl-2在结肠癌中的表达与结肠癌病理类型、肿瘤直径、浸润深度及有无淋巴结转移无关，但Bag-1与病理分级、远处转移、Dukes分期及预后密切相关（P〈0．05），而Bcl-2与这几项临床病理因素无明显相关性（P〉0．05）；Bag-1和Bcl-2在结肠癌的发生发展过程中呈正相关（r=0．475）。结论 结肠癌组织中有不同水平的Bag-1和Bcl-2蛋白的高表达，它们可以作为结肠癌早期筛选的-项指标，并对疾病的预后有着重要意义。     

雷帕霉素对莱菔硫烷诱导人结肠癌细胞UGT1A同工酶及CYP3A4表达的调控

目的 以人结肠癌Caco-2细胞为模型,观察雷帕霉素 (Rapa) 对莱菔硫烷 (SFN) 诱导葡萄糖醛酸转移酶(UGT) 1A1、UGT1A8、 UGT1A10及细胞色素P450 (CYP) 3A4的调控,探讨Rapa对SFN化学预防效应的影响。方法 实验分为对照组、10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组。透射电镜观察细胞超微结构,Western blotting法测定微管相关蛋白1轻链3 (LC3) 和核因子E2 P45相关因子2 (Nrf2) 的表达,实时荧光定量PCR法测定UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10及CYP3A4 mRNA的表达,免疫荧光法观察Nrf2的核内转位。结果 透射电镜观察到10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组细胞中自噬体及自噬溶酶体的形成;与对照组相比,25μmol/L SFN组、25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组可诱导LC3-II蛋白及UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10 mRNA的表达增加,诱导Nrf2蛋白的表达及核内转位增强,且25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组的作用更显著;而10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组中,CYP3A4 mRNA的表达均受到抑制。结论 Rapa可协同增强SFN对Caco-2细胞自噬效应的诱导;Rapa可能通过上调Nrf2信号通路,使SFN诱导 UGT1A1、UGT1A8和UGT1A10表达增加,进而增强SFN的化学预防效应,同时未影响SFN对CYP3A4转录抑制效应。