大鼠生精小管体视学及PCNA、凋亡表达的发育变化研究

目的　探讨大鼠生精小管面积、管腔等体视学参数与生精细胞增殖、凋亡在发育过程中的变化及其之间的关系。　方法　应用免疫细胞化学、凋亡细胞原位检测和图像分析技术。　结果　大鼠从出生后生精小管平均面积逐渐增加 ,于生后 3月龄时达到最大 ,除与生后 6月龄组差异不显著外 ,与其他各组间差异显著 (P <0 0 5 ) ,6月龄后生精小管面积逐渐减少 ,2 5月龄时生精小管面积与 3周龄时相当 ;生精小管在 3周龄时开始出现管腔 ,在生后 6月龄时其平均面积最大 ,与其他各组间差异显著或极显著 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,至生后 2 5月龄 ,管腔不明显 ,多被结缔组织填充 ;生精细胞间于生后 10月龄开始出现空泡 ,生后 2 5月龄空泡化明显 ,生精小管基膜及间质血管增生严重。PCNA及凋亡的阳性表达在生后 3周龄出现高峰 ,生后 2 5月龄细胞凋亡又出现 1个高峰。　结论　 1 生后 3周龄至 3月龄生精细胞增殖旺盛是生精小管平均面积迅速增大的原因之一。 2 生后一定阶段生精小管管腔的出现与生精细胞的凋亡有关 ,而生精小管管腔的出现有利于精子的生成与运输。 3 衰老大鼠生殖功能的下降与其组织结构的纤维化及生精小管基膜厚度增加等因素有关     

三七总苷对大鼠自身免疫性睾丸炎的拮抗作用

目的:研究三七总苷(PNS)对自身免疫性睾丸炎模型鼠睾丸组织形态及血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和睾酮(T)含量的影响,以探讨PNS对睾丸炎的组织结构拮抗及作用机制。方法:建立大鼠睾丸炎模型,随机分为模型组和PNS拮抗组(200、400和800mg/kg),镜下观察各组睾丸组织结构变化。结果:800mg/kg PNS剂量组睾丸系数、生精小管直径、血清TNF-α和T含量与模型组比较,差异有统计学意义,光镜所见睾丸组织结构接近正常对照组形态;200mg/kg PNS剂量组和模型组生精上皮坏死、脱落,睾丸间质水肿,不同程度炎性细胞增生浸润。结论:400、800mg/kg PNS剂量组对大鼠睾丸炎症损伤具有拮抗作用。     

大鼠睾丸血管构筑的观察

本文通过血管灌注透明标本和微血管腐蚀铸型扫描电镜,观察大鼠睾丸的大血管和微细血管的构筑。大鼠生精小管的周围,有两种小血管配布。1.管间血管:该血管或为1条毛细血管前微动脉,或为2条并行的较大的毛细血管连结成网状,位于生精小管间三角形的间质柱内,并与小管平行走行。2.管周毛细血管:连于管间血管之间,呈绳梯状围绕生精小管,并在生精小管上皮下固有膜内,形成管周毛细血管网。本文还观察了大鼠睾丸较大血管及睾丸固有鞘膜脏层的血管配布特点,讨论了这些血管配布的意义。     

环磷酰胺对大鼠睾丸C-Kit表达的影响

目的探讨抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸中分化型精原干细胞的特异性表面标志物c-kit表达的影响。方法 20只8周龄大鼠随机分为对照组和实验组,每组10只;实验组每天腹腔注射环磷酰胺50 mg·kg-1·d-1,注射3 d,对照组腹腔注射0.9%的生理盐水;用药4周后取双侧睾丸,应用HE染色、免疫组织化学技术和Western blot技术,观察睾丸组织学变化、c-kit在睾丸中的分布情况及表达变化。结果 1实验组大鼠睾丸中生精上皮呈有序性排列,但生精上皮层数减少,管腔中精子数量减少。2免疫组化结果显示c-kit在睾丸的生精细胞中均匀表达,但实验组的c-kit表达明显下降。结论环磷酰胺对大鼠生精功能的损害可能和通过下调c-kit的表达有关。     

重组骨脱细胞细外基复合Wistar大鼠成骨细胞体外培养的形态学观察

目的新型重组骨脱细胞细胞外基质(REAECM)的制备及其细胞相容性的初步检测,为骨组织工程寻找一种新型的细胞外支架提供实验依据。方法应用体外细胞培养技术,对鼠成骨细胞和REAECM体外进行联合培养1-4周,通过相差显微镜、光镜、电镜观察细胞在材料中的生长情况。结果成骨细胞可以在REAECM上发生良好的黏附、增殖,并且可以长入REAECM的孔隙内。结论REAECM可作为构建组织工程骨的一种较好的支架材料,具有网状孔隙结构;在体外和成骨细胞复合培养时表现出良好的细胞相容性,可以作为一种天然的骨组织替代材料。     

大鼠睾丸支持细胞的分离纯化与鉴定

目的　简化大鼠睾丸支持细胞的分离纯化方法 ,通过不同方法对Sertoli细胞进行形态学观察鉴定。方法　取鼠龄 16～ 2 2天的雄性Wistar大鼠睾丸 ,采用酶次第消化 ,培养过程中纯化Sertoli细胞 ,并用多种方法对Sertoli细胞进行鉴定。结果　大鼠睾丸支持细胞占培养细胞总数的 90 %以上。HE染色 ,Sertoli细胞突起很多 ,核仁清晰 ,在胞质中可见吞噬物和大小不等的空泡 ;甲基绿 派洛宁染色 ,Sertoli细胞富含RNA ;Feulgen染色和透射电镜 ,核仁周围可见卫星核小体。结论　本实验培养方法可获得更多、纯度高的Sertoli细胞 ,HE染色、甲基绿 派洛宁染色、Feulgen染色和透射电镜是鉴定Sertoli细胞的有效方法     

大鼠脊髓祖细胞的分离与体外培养

采用bFGF、EGF及神经元无血清培养基分离培养大鼠脊髓祖细胞，并对脊髓祖细胞进行了分化和电生理实验。脊髓祖细胞可增生分化成神经元和胶质细胞，并具有电流特性。有希望应用于脊髓创伤的治疗。     

大鼠睾丸支持细胞的分离、纯化和鉴定

目的 培养高纯度的大鼠睾丸支持细胞,并应用检测ABP mRNA原位杂交方法加以鉴定.方法 选用18～22d龄SD雄性大鼠睾丸,采用0.25%胰蛋白酶、0.1%透明质酸酶、 0.1%胶原酶三酶依次消化法分离支持细胞,置于32℃ 5% CO2的培养箱培养,48h后用20mmol/L Tris-HCl低渗处理培养细胞.培养1周后应用伊红染色、吖啶橙荧光染色、Feulgen染色对所培养的支持细胞进行鉴定,同时应用原位杂交检测ABP mRNA方法鉴定分离培养的支持细胞.结果 培养1周后所获培养的支持细胞纯度达95%以上.分离培养的支持细胞ABP mRNA表达阳性,其形态结构特征与用其他方法鉴定为支持细胞的形态结构特征一致.结论 采用三酶连续消化及低渗处理法分离培养的支持细胞纯度高,而且应用原位杂交方法检测ABP mRNA是一种新的、特异、有效的鉴定支持细胞及其功能的方法.     

胚胎大鼠颅盖骨分离细胞早期体外培养的组织化学观察

本实验采用胚胎后期Sprague-Dawley大鼠颅盖骨(连同骨膜)分离细胞进行体外培养。并以活体相差、HE染色及组织化学染色等技术进行早期观察。发现骨外膜再生层骨生成细胞和骨髓区未分化间充质细胞在体外培养条件下,都可发育成为细胞体积很大的鳞片形细胞,具有许多突起,并以突起与相邻细胞连接。鳞片形细胞的胞浆Sirius red染色呈淡红色,偏光显微镜下无双折射,表明细胞已开始形成胶原的前体。细胞碱性磷酸酶反应呈阴性,表明细胞仍然处于骨生成细胞阶段。     

成年大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离

目的应用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法以不同培养条件,探讨体外获得高质量、高活性的成年大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的方法。方法取成年雄性SD大鼠双侧股骨,应用全骨髓贴壁法,分为10%国产TBD胎牛血清+DMEM组、10%国产TBD胎牛血清+DMEM/F12组、12.5%国产TBD胎牛血清+DMEM/F12组、10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12组4组,3只/组;应用密度梯度离心培养法,以10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12作为培养基,取3只大鼠作为一组。比较不同培养方法及培养条件对BMSCs生长增殖的影响。结果全骨髓贴壁法中10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12组原代细胞即可7～9 d达融合,传代到第4代细胞活力仍很好。其余3组原代细胞达融合的时间均超过10 d,且传代后细胞活力差,容易出现老化。密度梯度离心培养法原代贴壁细胞太少,无法达融合。结论本实验采用的培养方法中,10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12培养基的全骨髓贴壁分离法,是体外获取成年大鼠BMSCs最佳方法。     

饮酒对小鼠睾丸生精小管一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原表达及细胞凋亡影响的研究

目的　探讨酒精对小鼠睾丸的组织结构、内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、增殖细胞核抗原 (PCNA)及细胞凋亡的影响。　方法　用 5 %、10 %及 15 % 3种不同浓度的酒精作用于 2 2d龄小鼠 ,取睾丸做石蜡切片、HE染色 ;用免疫组织化学方法检测睾丸eNOS、细胞增殖的变化 ;TUNEL法检测细胞凋亡的变化 ,并进行统计学分析。　结果　随着酒精浓度的增大 ,睾丸组织结构发生明显改变 ,生精小管的直径逐渐减小 ,eNOS阳性细胞面积密度逐渐增大 ,单位面积内PCNA阳性细胞和凋亡细胞数目增加 ,高浓度酒精组与其他组差异极显著 (P <0 0 1)。　结论　酒精可使生精小管的直径变小 ,eNOS及PCNA表达增强 ,凋亡细胞增加并随酒精浓度的增大而变化加重。这可能是过量饮酒导致生精细胞减少 ,生殖能力降低的重要因素。     

鱼藤酮对体外培养的大鼠中脑脑片多巴胺能神经元的毒性作用

目的研究鱼藤酮（rotenone）对多巴胺（DA）能神经元的早期毒性作用,并探索一种较理想的组织模型.方法采用界面组织培养法建立SD乳鼠的中脑脑片长期培养体系.加入鱼藤酮作用一定的时间,并用测定培养基中乳酸脱氢酶（LDH）活力、组织中DA含量以及进行酪氨酸羟化酶（TH）染色等技术观察它对整个脑片及脑片上DA能神经元的毒性效应.结果不同浓度的鱼藤酮作用24 h后,组织中DA含量随浓度增加明显下降,TH阳性神经元突起呈串珠样改变,数量减少甚至消失.低浓度鱼藤酮作用14 d后,脑片组织中的DA水平显著降低,但未见明显的DA能神经元形态学变化.结论建立了长期、稳定的中脑脑片培养体系;鱼藤酮对整个脑片以及脑片上DA能神经元的毒性作用具有浓度依赖性;功能性损伤早于形态学变化,突起的变性是形态学变化的早期特征.     

磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶在大鼠睾丸的表达

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的3个亚家族成员细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N-端激酶(JNK)和p38 MAPK的活化形式在睾丸中的定位,了解MAPKs在生精过程中所起的作用。方法免疫组织化学方法检测正常大鼠睾丸中磷酸化的p-ERKJ、NK、p38 MAPK的表达情况。结果正常大鼠睾丸中p-ERK主要分布于精原细胞、细线前期到粗线期的初级精母细胞以及9~12期长形精子细胞的细胞核,p-JNK则主要位于支持细胞与支持细胞、支持细胞与生精细胞(尤其是19期精子细胞)之间,而p-p38 MAPK除了在生精小管的部分细胞胞质中有分布外,其表达最明显的部位是在间质细胞的细胞质。结论ERKJ、NK和p-38 MAPK分别定位于正常大鼠睾丸内的不同部位,提示MAPKs不同的亚家族成员分别在精子发生的不同环节中发挥主要作用。ERK可能参与生精细胞增殖、分化的信号转导,JNK则可能通过调节细胞的黏附而最终影响生精细胞的迁移与精子释放过程,而p38 MAPK除了可能与JNK一起参与精子释放的调节外,最主要的作用可能是睾酮合成分泌的调节。     

氯化汞中毒对大鼠肾小管酶活性的影响

目的：检测氯化汞中毒对肾小管上皮细胞酶化学的影响,方法：制作氯化汞中毒大鼠模型,以铈盐为捕捉剂,分别用Ogawa法,改良Hansson法和Kobayashi法对5′－核苷酸酶,碳酸酐酶,及Na^ -K^ ATP酶进行细胞化学检测,并对微区元素进行X－射线能谱分析,结果：染毒组上述三种酶活性都有所降低,以近曲小管为著,X－射线能谱图有铈峰,但未见汞峰。结论：汞对大鼠肾近曲小管上皮有明显毒性作用。     

不同诱导剂对大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用

目的 观察体外不同诱导方法对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的作用.方法 体外培养、扩增骨髓MSCs,分别采用化学诱导剂(2-巯基乙醇 二甲基亚砜)和生物诱导剂,诱导骨髓MSCs分化为神经细胞.用神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学方法对诱导后的细胞进行鉴定和诱导率分析.应用组织学方法显示尼氏体.结果 倒置显微镜下可见,MSCs经两种方法诱导48h后,细胞均向神经细胞分化,胞体呈锥形、多角形,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支.免疫组织化学鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达NSE、NF,不表达GFAP.化学诱导剂组NSE阳性细胞率为86.9%,NF阳性细胞率为85.6%;生物诱导剂组NSE阳性细胞率为88.2%,NF阳性细胞率为86.8%,两组间无显著差异(P＞0.05).硫堇-伊红染色显示胞体内有大量的尼氏体.结论 体外两种诱导方法均可诱导大鼠骨髓MSCs分化为神经细胞.     

FOCAL ATROPHY OF THE SEMINIFEROUS TUBULE IN THE HUMAN TESTIS

Three types of focal atrophy of the seminiferous tubule, A, B and A+B type, were recognized in the 250 testes obtained from human subjects who died of acute death. The A-type consists of complete hyalinized scarring of the tubule and the B-type of varing degrees of tubular collapse. The A+B type shows combined atrophy of A and B-type in which B-type occurs peripherally to A-type occlusion in sequence and might be induced by local obstruction of luminal flow. Focal tubulitis is uncommon but has been observed in the A+B type atrophy which is characterized by sperm retention and the presence of sperm-phagocytic macrophages in the lumen. Areas around the rete testis and periseptal zones of the testis are preferential sites for tubular atrophy. B-type atrophy as an abortive form of A-type is predominant in the younger groups of the second to third decades, and the incidence of A-type increases after the fifth decade. It is suggested that A and B-type are brought about by locally limited ischemia in relation to circulatory disturbance with arteriolar hyalinosis which commonly appears focally in the postpuberal testis.     

大鼠睾丸支持细胞发育的形态学研究

对７０例不同胎龄及生后不同发育阶段Ｗｉｓｔａｒ大鼠睾丸支持细胞的发育进行了光镜、电镜研究。结果：１．依形态学特点，将支持细胞的发育过程初步分为４期：分化前期（胚胎１１～１５ｄ）、分化期（胚胎１５ｄ～生后１至２周）、成熟前期（生后２周～青春期前）、成熟期（青春期后）。２．胚胎及新生时，在支持细胞间见到两侧胞膜紧密相贴及不典型的桥粒连接等；自生后４周，见到紧密连接。３．自胚胎１７ｄ至成熟以后，在支持细胞与其周围的生殖细胞间见到大量类似桥粒和类似中间连接等不典型的细胞连接。４．胚胎１９ｄ及新生期，睾丸索内除支持细胞及生殖细胞外，尚可见一种特殊的细胞。