APETX2对氯化锂-匹鲁卡品诱导痫性发作大鼠的影响及机制探究

目的 探索APETX2对氯化锂-匹鲁卡品诱导痫性发作大鼠的行为学影响及可能的机制。方法 成年雄性SPF级SD大鼠18只,侧脑室置管后随机分为:癫痫组(9只)、APETx2组(9只),癫痫造模后观察2组癫痫大发作潜伏期及发作强度; APETx2处理原代培养海马神经元,动态观察其对钙成像的影响。结果 APETx2组的SD大鼠癫痫潜伏期延长,大发作程度减轻; APETx2处理原代培养海马神经元钙内流下降。结论 APETx2可抑制氯化锂-匹鲁卡品诱导SD大鼠痫性发作,减少酸诱导海马神经元钙离子浓度增加可能为机制之一。     

己酮可可碱预处理对癫痫发作大鼠海马损伤的影响

目的观察己酮可可碱(Ptx)预处理对癫痫发作大鼠海马损伤的影响。方法健康、成年雄性Wistar大鼠分为3组:对照组、癫痫组和Ptx预处理组。对照组腹腔注射生理盐水(127mg·kg~(-1));癫痫组和Ptx组大鼠用氯化锂-匹罗卡品(Li-Pc)诱发癫痫发作,先腹腔注射氯化锂(127mg·kg~(-1)),20h后背部皮下注射匹罗卡品(15mg·kg~(-1));Ptx组大鼠在匹罗卡品注射前30min通过腹腔给予Ptx(60mg·kg~(-1))。观察大鼠癫痫发作情况,利用Timm和Thionin染色分别观察海马苔藓纤维发芽(MSF)和神经元损伤情况。结果癫痫组大鼠在海马苔藓纤维发芽明显增多,并伴有海马神经元的损伤和脱失,Ptx预处理降低了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作率和癫痫发作程度,延长了其癫痫发作潜伏期,减轻了Li-Pc诱发大鼠海马的苔藓纤维出芽及神经元的损伤。结论 Ptx预处理缓解了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作和海马损伤,可能成为治疗癫痫的一种方法。     

锂-匹罗卡品致痫大鼠脑组织中驱动蛋白家族成员17的表达情况

目的 观察驱动蛋白家族成员17 (KIF17)在锂-匹罗卡品致痫大鼠海马和颞叶皮质表达的变化,探讨其在癫痫发生、发展中的作用.方法 采用氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠模型,将49只雄性正常Wistar大鼠采用随机数字表法分成实验组(n=42)和对照组(n=7),实验组又分为6个亚组(n=7):包括癫痫后24h、72 h、7d、14 d、1个月、2个月组.运用蛋白质印迹法检测KIF17在致痫大鼠海马和颞叶皮质的表达变化,免疫荧光双标染色法确定KIF17的表达部位.结果 大鼠海马KIF17蛋白表达在癫痫持续状态(SE)后开始增高[积分吸光度(L4)比值:24 h 0.516±0.196、72 h0.742±0.313],在癫痫后7d时达到高峰(0.888±0.319),之后逐渐降低(14 d 0.770±0.271、1个月0.742±0.261、2个月0.714±0.271),但均显著高于对照组(0.495±0.203),差异均有统计学意义(t=7.051、4.974、7.419、8.795、8.264、6.676,均P＜0.05).大鼠颞叶皮质KIF17蛋白的表达在SE后24h时开始持续增高,并在30 d时达到高峰,且IA比值均明显高于对照组.免疫荧光双标染色法显示KIF17蛋白主要存在于神经元,包括兴奋性神经元和抑制性神经元,而在星形胶质细胞中不表达.结论 KIF17在锂-匹罗卡品致癫痫模型的发生发展过程中可能起着重要的作用.     

颞叶癫痫神经元型钙粘素mRNA表达研究

目的研究匹罗卡品诱导的颞叶癫痫神经元型钙粘素的表达变化.方法用氯化锂加匹罗卡品诱导SD大鼠颞叶癫痫模型,特异性探针原位杂交检测神经元型钙粘素mRNA表达.结果对照组动物神经元型钙粘素mRNA在皮层和海马各区均有表达,给药后4 h和12 h神经元型钙粘素mRNA在CA1、CA3和齿状回均表达下降,24 h开始恢复,注药后3 d神经元型钙粘素mRNA表达显著高于对照组,7 d表达最高.结论神经元型钙粘素mRNA在颞叶癫痫表达呈双相变化.     

氯化锂预处理时间的改变对锂-匹鲁卡品诱导大鼠痫性发作的影响

目的在锂-匹鲁卡品癫痫大鼠模型中探讨氯化锂的预处理时间的最佳变化范围.方法改变氯化锂的预处理时间表,观察其对大鼠痫性发作、潜伏期、痫性发作的程度和致死率的影响,同时行组织学观察.结果当氯化锂预处理时间范围在2～24 h内变化时,大鼠痫性发作率为100%,并且氯化锂的预处理时间与大鼠痫性发作的程度呈线性关联(P＜0.0001);当氯化锂提前48和72 h时,大鼠的痫性发作率下降到40%和0.结论根据试验需要和条件可以选择合适的氯化锂预处理时间(在2～24 h之间)来诱导相应的癫痫大鼠模型.     

癫痫持续发作时间与大鼠海马苔藓纤维发芽程度及自发性痫性发作的关系

目的探讨癫痫持续状态(SE)发作时间与致痫大鼠海马苔藓纤维发芽(MFS)程度及自发性痫性发作的关系。方法 104只雄性成年SD大鼠,随机分为对照组和3个SE实验组,建立氯化锂-重复低剂量匹罗卡品致痫大鼠模型;诱发SE30min(A组)、60min(B组)、90min(C组)后注射水合氯醛终止发作。各组大鼠自SE终止发作后于相同实验条件下普通饲养45d,观察大鼠行为及脑电图(EEG)的变化,记录自发性痫性发作的发生率。通过苏木精-伊红染色、Nissl染色和Timm硫化银组织化学染色方法观察各实验组海马MFS情况。结果氯化锂-重复低剂量匹罗卡品成功诱导大鼠SE的发生,发作程度均达Ⅳ级以上,EEG类似人类颞叶癫痫。80%的大鼠癫痫持续状态均发展为自发痫性发作,与SE时间无关。与对照组相比,实验A、B、C三组双侧海马CA3区均表现MFS(P0.05)。实验B组与A、C组相比,CA3区MFS明显增加(P0.05)。结论氯化锂-重复低剂量匹罗卡品可诱导SE,癫痫持续发作60min后终止的大鼠海马CA3区MFS明显增加,SE发作时间与海马MFS程度并不一定呈正相关。     

氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马结构中CLC-2、CLC-3氯通道表达变化的研究

目的 研究ClC-2、ClC-3氯通道在氯化锂-匹罗卡品大鼠慢性癫痫模型中分布和表达的变化,探讨其在癫痫发作病理机制中的作用.方法 Wistar大鼠采用随机数字表法分成致痫组(60只)与对照组(20只),其中致痫组根据处死及处理时间又分为24h组、14d组与30d组,每组20只.致痫组复制氯化锂-匹罗卡品大鼠慢性癫痫模型,在发作后24h、14d、30d时,分别予以:(1)免疫组化染色,观察ClC-2、ClC-3氯通道蛋白在海马表达的分布情况及其致病后不同时点的吸光度(A)值的变化;(2)RT-PCR,观察ClC-2、ClC-3氯通道mRNA在致痫后不同时点的变化.结果 (1)与对照组比较,致痫后14d至30d,致痫组免疫反应阳性神经元数和A值明显减少和降低,差异有统计学意义(P<0.05);ClC-2 mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).(2)与对照组比较,致痫组致痫后24 h,海马CA1、CA3及齿状回各层ClC-3免疫反应阳性神经元数和A值明显增加和升高,差异有统计学意义(P<0.05);ClC-3氯通道mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 癫痫慢性期的发作和ClC-2氯通道的减少有关.     

TLR4、MRP8在内侧颞叶癫痫幼大鼠海马中表达的动态变化

目的观察氯化锂-匹罗卡品致痫幼大鼠各期海马中Toll-样受体4(TLR4)、髓样相关蛋白8(MRP8)表达的变化,探讨其是否与内侧颞叶癫痫(MTLE)发生有关。方法 21d SD雄性大鼠90只,随机分对照组(30只)和模型组(60只),腹腔注射氯化锂。17～18h后模型组腹腔注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE);对照组予等量生理盐水取代匹罗卡品腹腔注射。按自发发作出现和稳定时间(自发痫性发作在致痫后约3w出现,8w趋稳定),对照组和模型组随机分6个亚组:急性模型组(SE后2h)、潜伏模型组(SE后3w)、慢性自发发作组(SE后8w)及相对应时间点对照组。每亚组动物10只。免疫组化、免疫印迹、RT-PCR技术测定各亚组幼大鼠海马内TLR4、MRP8的表达。结果 TLR4、MRP8在模型组海马内表达明显增多,以CA3、CA1、DG区显著;与对照组相比,差异有显著性(P0.05)。模型亚组内,TLR4、MRP8在急性期和慢性期表达明显增高,而潜伏期无明显表达变化;3组比较差异有显著性(P0.05)。结论大鼠海马内TLR4、MRP8表达增多可能与MTLE发生有关。探讨其机制可能为MTLE的治疗提供新的靶点。     

匹罗卡品致痫大鼠海马calpain活性变化和其对神经元死亡的影响

目的探讨在匹罗卡品致痫的癫痫持续状态（SE）大鼠模型中,钙蛋白酶在大鼠海马组织中的活性,及钙蛋白酶对神经元坏死、凋亡产生的影响。方法雄性成年wistar大鼠,应用匹罗卡品致痫产生SE后60min后终止发作,24h后取材,行HE染色及tunel染色,观察海马神经元的坏死及凋亡情况,以及western blot检测钙蛋白酶1（μ-calpain）的活性。结果癫痫持续状态后24h,海马组织HE染色神经元数量减少,tunel阳性细胞数增加,钙蛋白酶1出现76ku条带。结论大鼠癫痫持续状态后24h,钙蛋白酶1在海马组织神经元活性增加,海马神经元出现坏死及凋亡。钙蛋白酶1与神经元的死亡存在着正相关。     

MicroRNA-132拮抗剂两种不同注射方式在匹罗卡品诱导的幼年大鼠癫痫急性期的差异

目的探讨microRNA-132拮抗剂对氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年SD大鼠内侧颞叶癫痫(mesial temporal lobe epilepsy,MTLE)模型急性期的影响。方法实验分为4组:microRNA-132拮抗剂侧脑室置管组;microRNA-132拮抗剂阴性对照置管组;microRNA-132拮抗剂直接注射组;microRNA-132拮抗剂阴性对照直接侧脑室注射组;实验各组药物干预在造模前24 h进行。利用氯化锂-匹罗卡品建立SD大鼠MTLE模型,通过行为学观察各组大鼠癫痫持续状态发作潜伏时长,Racine评分观察各组大鼠抽搐发作的严重程度,脑电图监测癫痫样放电的频率及波幅,并统计实验各组大鼠诱导SE的成功率及24 h后的死亡率。结果在实验各组中,建模成功率无显著性差异,microRNA-132拮抗剂直接注射组幼年SD大鼠造模以后达到SE的潜伏时较其阴性对照组明显延长、癫痫发作的Racine评分明显下降、脑电图结果显示痫样放电的幅度及频率显著下降,死亡率降低,结果有统计学意义(P0.05)。MicroRNA-132拮抗剂侧脑室置管注射组与microRNA-132拮抗剂侧脑室直接注射组结果无统计学差异(P0.05)。结论 microRNA-132拮抗剂预处理SD大鼠能明显延长氯化锂-匹罗卡品诱导的SD幼年大鼠癫痫发作的潜伏期,减轻急性期抽搐严重程度及大脑样痫放电,降低大鼠癫痫持续状态后的死亡率。提示microRNA-132拮抗剂对氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年SD大鼠MTLE的发生具有抑制作用,抑制microRNA-132有可能成为癫痫持续状态药物治疗的潜在靶点和新方向。     

氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠脑髓鞘转录因子的表达及其意义

目的探讨氯化锂-匹罗卡品致     

喹啉对癫(癎)大鼠海马神经元连接蛋白36表达的影响

目的:探讨喹啉对癫癎大鼠海马神经元连接蛋白36(Cx36)表达的影响.方法:64只SD大鼠随机分为正常对照组、癫癎模型组、地西洋治疗组和喹治疗组,每组16只大鼠.采用氯化锂-匹罗卡品诱导制作癫癎大鼠模型,地西泮治疗组子以1mg/kg地西泮治疗,喹啉治疗组予以60mg/kg喹啉治疗.术后分别采用Racine评分和脑电图检查判断癫癎发作情况.分别用免疫荧光染色法、Western blot法检测各组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36的表达.结果:与正常对照组比较,癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著升高(均P<0.01).癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平比较差异无统计学意义.与癫癎模型组及地西泮治疗组比较,喹啉治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著降低(均P<0.01).结论:癫癎大鼠海马神经元Cx36表达水平升高,喹啉能抑制这一变化.     

癫痫模型大鼠心肌组织钠氢交换体1的表达及与凋亡的关系

目的 探讨癫痫模型大鼠心肌组织钠氢交换体1(NHE1)的表达及凋亡情况.方法 选取SD雄性大鼠共40只纳入研究,采用氯化锂-匹罗卡品构建癫痫模型作为模型组(n=22),采用腹腔注射生理盐水作为对照组(n=18);模型成功后第60天,麻醉处死后取心肌组织,应用蛋白印迹和RT-PCR检测NHE1的表达,进一步应用流式细胞仪...     

癫癎大鼠海马区白细胞介素1受体1免疫反应阳性细胞的观察

目的:探讨白细胞介素1受体1(IL-1R1)在海马区的表达与癫(疒间)发病的关系。方法:用免疫细胞化学法,观察成年和美解眠致(疒间)大鼠海马区IL-1R1免疫反应(IL-1R1-IR)阳性细胞分布。结果:成年大鼠海马区存在IL-1R1-IR阳性细胞。美解眠致(疒间)后,海马区该阳性细胞数显著增多(P＜0.01);致(疒间)前后给予尼莫地平,海马区该阳性细胞均较癫(疒间)大鼠显著减少(P＜0.01),与正常比较无显著差异(P＞0.05)。结论:海马区IL-1R1参与癫(疒间)的病理过程,其机制可能与其介导该区细胞内信号传导有关。尼莫地平不仅可以阻止癫(疒间)发作,而且可以减轻其继发的脑损伤。     

Scorpion ethanol extract and valproic acid effects on hippocampal glial fibrillary acidic protein expression in a rat model of chronic-kindling epilepsy induced by lithium chloride-pilocarpine

The present study analyzed the effects of ethanol extracts of scorpion on epilepsy prevention and hippocampal expression of glial fibrillary acidic protein in a lithium chloride-pilocarpine epileptic rat model. Results were subsequently compared with valproic acid. Results showed gradually- increased hippocampal glial fibrillary acidic protein expression following model establishment; glial fibrillary acidic protein mRNA expression was significantly increased at 3 days, reached a peak at 7 days, and then gradually decreased thereafter. Ethanol extracts of scorpion doses of 580 and 1 160 mg/kg, as well as 120 mg/kg valproic acid, led to a decreased number of glial fibrillary acidic protein-positive cells and glial fibrillary acidic protein mRNA expression, as well as decreased seizure grades and frequency of spontaneously recurrent seizures. The effects of 1 160 mg/kg ethanol extracts of scorpion were equal to those of 120 mg/kg valproic acid. These results suggested that the anti-epileptic effect of ethanol extracts of scorpion were associated with decreased hippocampal glial fibrillary acidic protein expression in a rat model of lithium chloride-pilocarpine induced epilepsy.     

Reconstruction of the adenosine system by bone marrow-derived mesenchymal stem cell transplantation

In the present study, we transplanted bone marrow-derived mesenchymal stem cells into the CA3 area of the hippocampus of chronic epilepsy rats kindled by lithium chloride-pilocarpine. Immunofluorescence and western blotting revealed an increase in adenosine A1 receptor expression and a decrease in adenosine A2a receptor expression in the brain tissues of epileptic rats 3 months after transplantation. Moreover, the imbalance in the A1 adenosine receptor/A2a adenosine receptor ratio was improved. Electroencephalograms showed that frequency and amplitude of spikes in the hippocampus and frontal lobe were reduced. These results suggested that mesenchymal stem cell transplantation can reconstruct the normal function of the adenosine system in the brain and greatly improve epileptiform discharges.     

头痛型癫痫的临床和脑电图分析

本文报告85例头痛型癫痫。绝大多数为儿童和青少年。主要的临床症状为反复发作性剧烈头痛,或伴有其他植物神经症状和意识障碍,大部分头颅CT检查未见异常。脑电图检查对诊断和鉴别诊断有重要意义。通过常规检查和诱发试验大多数显示阵发性两侧半球或两额部同步对称性中至极高波幅2～7Hz慢波,阵发性或散发性尖波、尖—慢波、棘波、棘—慢波,少数局限于颞、顶、枕部的棘—慢波发放。本病预后较好。本组72.3％病例经系统服用一种抗癫痫药半年至一年后,头痛基本控制,多次脑电图检查未见典型的痫性放电。两者结合,方可考虑逐渐减药或停药为宜。     

儿童癫的个性分析

目的　探讨儿童癫的个性特点。方法　采用艾森克人格问卷 (少年 )对 4 4例儿童原发性癫 (癫组 )及 4 0例健康儿童 (对照组 )进行对照研究。结果　癫组E量表分低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,N、P、L量表均分高于对照组 ,经统计处理 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　患有癫疾病患儿个性偏于内向不稳定、精神质及对自己行为有掩饰现象。采用心理行为治疗、给予社会支持及精神支持可提高儿童癫的治疗质量。     

Cx36在癫持续状态大鼠海马神经元的表达

目的观察连接蛋白36（Cx36）在癫持续状态大鼠海马神经元的表达。方法建立36只氯化锂-匹罗卡品诱导的癫持续状态大鼠模型,随机分为生理盐水组、喹啉组、辛醇组（每组12只）,分别予以腹腔注射生理盐水、喹啉、辛醇,通过Racine评分判断大鼠给药前后癫发作情况,利用免疫荧光染色法、Western-blot法检测各组大鼠海马Cx36的表达。结果喹啉组和辛醇组给药前后大鼠行为学评分比较差异有统计学意义（P〈0.01）;而生理盐水组差异无统计学意义（P〉0.05）。喹啉组和辛醇组大鼠海马神经元Cx36的表达明显低于生理盐水组（P〈0.01）,但2组Cx36的表达量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 Cx36在癫发作中起着重要作用,可能成为潜在的治疗靶点。