冰片对斑马鱼胚胎发育的安全性评价

目的:研究冰片对斑马鱼胚胎发育的影响。方法:以斑马鱼胚胎为模型,二甲基亚砜为助溶剂,制备冰片溶液(33.6、67.1、134.3、268.5、537.0、1 074.0μmol/L,即冰片①、②、③、④、⑤、⑥组),并且设空白对照组,以受精后小时(hpf)为时间段,对3hpf胚胎进行暴露染毒处理,每24 h更换1次冰片溶液,分别在8、24、48、72、96 hpf时间点以显微镜观察班马鱼胚胎发育形态,测定24 hpf斑马鱼胚胎自主抽动次数、48 hpf心率、孵化率、畸形率和死亡率。实时荧光定量聚合酶链反应法检测斑马鱼胚胎Sepn1基因表达的情况。结果:与空白对照组比较,冰片④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎48 hpf出现脊柱弯曲、心囊水肿、卵黄囊水肿,游泳异常的毒性症状;冰片②、③、④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎24 hpf自动抽动次数减少;冰片④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎24 hpf心率减少;在48 hpf时,冰片①、②、③、④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎孵化率降低;在72 hpf时,冰片②、③、④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎孵化率降低;在96 hpf时,冰片⑤、⑥组斑马鱼胚胎孵化率降低;冰片④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎96 hpf畸形率增加;24 hpf后,冰片④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎死亡率降低;冰片④组Sepn1 mRNA表达增强,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:高剂量冰片对斑马鱼胚胎发育有明显影响,且呈现一定的时间依赖性。建议婴幼儿、孕妇和哺乳期的妇女长时间或大剂量使用含冰片的药物均应谨慎。     

桔梗皂苷对斑马鱼心功能及胚胎发育的影响

目的探索桔梗总苷对斑马鱼心律及胚胎发育的影响。方法从中药饮片提取桔梗总苷,用不同浓度的桔梗总苷对不同发育阶段的斑马鱼胚胎进行处理,观察该药对斑马鱼心律及心脏发育的影响。结果桔梗总苷处理后发现,斑马鱼心率减缓但未出现心律失常;心脏功能相关的离子通道基因表达水平略有降低;高浓度(10mg·L-1)的桔梗总苷处理导致斑马鱼胚胎的死亡与畸形的比例显著增加,同时干扰了斑马鱼胚胎的发育过程。结论桔梗不能引起心律失常,但高浓度用药导致心率迟缓、心功能下降以及致畸致死效应。     

三氯异氰尿酸对斑马鱼胚胎及幼鱼的发育毒性

目的探讨新型消毒剂三氯异氰尿酸(TCCA)对斑马鱼胚胎及幼鱼的发育毒性。方法选择受精后2 h的斑马鱼胚胎进行染毒:①将胚胎置于含有TCCA 50,100,150,200,250和300 mg·L~(-1)的培养液中暴露48 h,检测半数致死浓度(LC_(50))。②将胚胎置于含有TCCA 0,10.4,20.8和41.7 mg·L~(-1)的培养液中暴露96 h,分别于暴露后48,72和96 h检测胚胎死亡率、畸形率和心率,采用羟胺法于暴露后2,4和6 h检测胚胎组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性,HE染色观察暴露后7 d幼鱼头部组织病理结构。结果 TCCA暴露48 h,斑马鱼胚胎LC_(50)为166.9 mg·L~(-1)。与正常对照组相比,暴露后96 h,TCCA 41.7 mg·L~(-1)组斑马鱼胚胎死亡率和畸形率显著升高(P<0.05),TCCA各剂量组心率显著下降(P<0.05);暴露后72h,TCCA41.7mg·L~(-1)组死亡率显著升高(P<0.05),20.8和41.7mg·L~(-1)组畸形率显著升高(P<0.05),心率显著下降(P<0.05);暴露后48 h,TCCA 41.7 mg·L~(-1)组畸形率显著升高(P<0.05)、心率显著下降(P<0.05)。TCCA暴露4和6 h,20.8和41.7 mg·L~(-1)组SOD活性较正常对照组显著下降(P<0.05)。TCCA暴露7 d后,与正常对照组相比,各浓度组斑马鱼幼鱼均出现脑和眼部间隙变大及眼部视网膜分层不明显的病理改变。结论 TCCA对斑马鱼胚胎发育有毒性作用,能引起胚胎发育早期SOD活性下降,造成幼鱼视网膜组织结构损伤。     

17α-乙炔雌二醇对斑马鱼胚胎发育的致畸作用及其基因靶位

随着炔雌二醇临床适用范围的扩大和畜牧渔业中的滥用所导致的环境污染,使得建立准确、简便、快速的体内检测方法和开展对雌二醇的胚胎发育毒理研究愈显重要。本文以17α-乙炔雌二醇(17α-ethynylestradiol,EE2)为代表化合物,利用模式动物斑马鱼研究了EE2的致畸性、靶组织和靶基因及其对胚胎心律的影响。结果表明,EE2的半数致畸浓度(TC50)为0.8μg.mL-1,半数致死浓度(LD50)为3.3μg.mL-1;其致畸靶位涉及脑和眼、心、肌肉、骨骼、色素和内脏。EE2可导致胚胎心率异常。胚胎对EE2敏感期主要在器官形成期之前,且具有时间积累效应。RT-PCR结果显示,EE2可抑制头部发育基因如boz,促进躯干和尾部发育的基因如ntl、spt和成形素shh基因,干扰多功能的Nodal信号基因cyc、sqt和oep。本研究利用斑马鱼建立了快速、有效体内检测炔雌二醇类化合物胚胎毒性的方法。     

核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的毒性作用

目的研究核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的影响。方法将受精后时间（hpf）为3hpf的斑马鱼胚胎随机分组,分别加入0、0.01%、0.02%、0.04%、0.08%、0.16%和0.32%浓度的Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料,观察3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育的影响,记录胚胎48 hpf心率,计算72和96 hpf孵化率,96 hpf死亡率及畸形率;同时观察了4、24和48 hpf 3种染料穿透胚胎膜的情况。结果 Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料半数致死浓度（LC50）分别为0.037%、0.092%和0.130%。3种核酸染料0.04%～0.32%浓度组的胚胎48 hpf心率、72和96 hpf孵化率、96hpf死亡率和畸形率与对照组相比都存在显著差异,3种核酸染料96 hpf死亡率、72和96 hpf孵化率还存在剂量-效应关系。Gelsafe 0.08%～0.32%浓度组部分幼鱼出现心囊水肿和脊柱弯曲,0.32%Gelred组染毒后还出现眼点发育不全,Goodview0.04～0.16%浓度组部分幼鱼除心囊水肿和脊柱弯曲外,还出现尾部发育不全等畸形表征。0.01%Goodview 4 hpf能穿透胚胎膜进入胚胎内,随着浓度和时间增加,胚胎内荧光增强。而Gelred和Gelsafe 0.32%浓度下4 hpf未发现明显荧光蓄积点,24hpf和48 hpf仍未发现。结论 3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育有毒性,随着使用浓度的增加毒性增加。     

牛黄镇惊丸对斑马鱼胚胎发育的影响

目的 研究牛黄镇惊丸对斑马鱼胚胎发育的影响。方法 以斑马鱼胚胎为实验对象,体视光学显微镜下观察牛黄镇惊丸不同给药浓度（40、200、400、800、1 200 μg/mL）时斑马鱼胚胎的发育情况,包括胚胎致畸、致死检测。结果 给药浓度不高于200 μg/mL时,未见胚胎发育异常。浓度高于200 μg/mL（约相当于成人用量30倍,远超出正常有效剂量）时对胚胎发育具有一定的毒性,胚胎出现头和眼发育较小,瞳孔无色;心脏畸形、心率较弱、血池充血-回心血流不畅;腹部透明度较差、尾干扭曲,卵黄囊延伸结构变粗,脊索变细,无正常胚动,体长变短;撤药后畸形表型未见恢复,且毒性呈浓度相关性;半数致畸浓度（TD₅₀,受精后3 d）约373 μg/mL,半数致死浓度（LD₅₀）约为485 μg/mL。浓度为1 200 μg/mL时,胚胎在受精后1 d之内全部死亡。结论 牛黄镇惊丸给药浓度大于200 μg/mL时影响斑马鱼胚胎发育。其毒性作用发生在胚胎器官形成期,主要对胚胎的神经系统、心血管系统和骨骼等发育有影响。     

舒筋定痛片对斑马鱼胚胎发育的急性毒性研究

目的 采用斑马鱼胚胎模型评价舒筋定痛片样品的急性毒性。方法 以模式生物斑马鱼胚胎为实验对象,以不同硼砂含量的舒筋定痛片样品给药处理,野生型为阴性对照,于不同发育时间点观察给药后胚胎的发育情况,包括胚胎致畸、致死检测。结果 舒筋定痛片4组测试样品在不同浓度下对斑马鱼胚胎发育有明显影响,高浓度时胚胎毒性以导致胚胎发育停滞为主,中浓度时可致发育滞后并出现心脏、脑、躯干等主要器官畸形,低浓度时大多数胚胎发育接近正常,少数胚胎出现胚胎发育中轻度的滞后。结论 舒筋定痛片测试样品对斑马鱼胚胎发育的影响主要表现为高、中浓度下的胚胎发育停滞、滞后;同时,研究表明同一企业样品毒性作用与其中所含硼砂存在一定剂量依赖性正相关。     

17α-乙炔雌二醇对斑马鱼胚胎发育的致畸作用及其基因靶位

随着炔雌二醇临床适用范围的扩大和畜牧渔业中的滥用所导致的环境污染, 使得建立准确、简便、快速的体内检测方法和开展对雌二醇的胚胎发育毒理研究愈显重要。本文以17α-乙炔雌二醇 (17α-ethynylestradiol, EE2) 为代表化合物, 利用模式动物斑马鱼研究了EE2的致畸性、靶组织和靶基因及其对胚胎心律的影响。结果表明, EE2的半数致畸浓度 (TC₅₀) 为0.8 μg·mL⁻¹, 半数致死浓度 (LD₅₀) 为3.3 μg·mL⁻¹; 其致畸靶位涉及脑和眼、心、肌肉、骨骼、色素和内脏。EE2可导致胚胎心率异常。胚胎对EE2敏感期主要在器官形成期之前, 且具有时间积累效应。RT-PCR结果显示, EE2可抑制头部发育基因如boz, 促进躯干和尾部发育的基因如ntl、spt和成形素shh基因, 干扰多功能的Nodal信号基因cyc、sqt和oep。本研究利用斑马鱼建立了快速、有效体内检测炔雌二醇类化合物胚胎毒性的方法。     

丙烯酰胺对斑马鱼胚胎发育过程中microRNA表达的影响

目的研究丙烯酰胺(ACR)对斑马鱼胚胎发育过程中小分子RNA(miRNA microRNA)表达的影响,探讨丙烯酰胺发育毒性机制。方法将斑马鱼胚胎分为10mmol/LACR染毒组,二甲亚砜(DMSO)组和空白对照组,分别处理受精后6 h的斑马鱼胚胎(6 hpf hours past fertilization);采用核苷酸锁定(LNA locked nucleic acid)修饰的microRNA探针进行胚胎整体原位杂交。结果10 mmol/L ACR可导致斑马鱼胚胎表现出多系统的畸形,胚胎表现出心率减慢,心包水肿,体轴缩短;胚胎整体原位杂交显示ACR诱导miRNA表达增加。结论ACR对斑马鱼胚胎发育过程中microRNA的表达有影响。     

芙朴感冒颗粒对斑马鱼胚胎发育的影响

摘要：目的:研究芙朴感冒颗粒对斑马鱼胚胎发育的影响,为临床安全用药提供相关参考资料。方法:选择6 h的斑马鱼胚胎为实验模型,设置空白对照组和芙朴感冒颗粒低、中、高（10,20,50 g·L-1）浓度组,显微镜下观察并记录斑马鱼胚胎发育情况,检测自主运动次数、心率、畸形率、孵化率、泳速等,以初步分析芙朴感冒颗粒对斑马鱼胚胎发育的影响。结果:芙朴感冒颗粒可致斑马鱼胚胎发育畸形,主要表现为心包囊肿、充血和脊柱弯曲;芙朴感冒颗粒能明显抑制斑马鱼胚胎自主运动和心率;芙朴感冒颗粒低浓度时促进胚胎孵化和斑马鱼胚胎孵育后仔鱼的泳速,高浓度则抑制胚胎孵化和仔鱼泳速。结论:芙朴感冒颗粒可影响斑马鱼胚胎的正常发育。     

用四甲基联苯胺对粪便潜血定量分析

目的 为探讨粪便潜血的定量方法.方法 利用四甲联苯胺(TMB),双氧水对粪便混合后,离心取上清液做血红蛋白测定,并对其影响因素做了探讨.用5mg/L和40mg/L的Hb液,分别测定20次.结果 批内CV分别为2.5%和3.7%,批间CV分别为3.4%和4.8%,线性范围为0.5mg/L～60mg/L.浓度过高可稀释后测定.结论 粪便潜血的定量测定对患者消化道出血量的判定更加准确.     

吡嗪酰胺对斑马鱼胚胎发育和氧化应激效应的影响

目的 本文研究吡嗪酰胺(PZA)对斑马鱼胚胎的发育毒性及其产生机制。方法 采用受精后4h的斑马鱼胚胎进行吡嗪酰胺不同浓度的暴露,分别于暴露后24、48、72和96h进行死亡率、孵化率的统计。给药96h后进行斑马鱼幼鱼形态评分、行为学分析、活性氧簇(ROS)和氧化应激指标检测。结果 表明吡嗪酰胺显著抑制斑马鱼胚胎孵化,导致斑马鱼幼鱼发育畸形(如卵黄囊吸收迟滞、鱼鳔缺失、心包水肿和体节模糊等),同时吡嗪酰胺的暴露造成斑马鱼幼鱼运动行为能力的降低。吡嗪酰胺的暴露能够引起斑马鱼体内ROS、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平的变化。结论 吡嗪酰胺对斑马鱼胚胎有明显的发育毒性,并呈剂量和时间依赖性,氧化应激在吡嗪酰胺发育毒性中起着重要的作用。     

斑马鱼胚胎发育毒性评价方法的建立

目的以致胚胎毒性阳性药物全反式维甲酸（ATRA）及丙戊酸钠进行斑马鱼胚胎发育毒性试验,建立有效的斑马鱼胚胎发育毒性评价方法。方法采用水浴染毒法,将受精后2h（2hpf）的斑马鱼胚胎暴露于不同浓度梯度的阳性约物。分别在24、48、72和144hpf观察并记录畸形及死亡的胚胎数目。统计阳性药物的EC50和LG50,计算致畸指数（TI=LC50／EG50）。结果两种阳性药物所致斑马鱼胚胎发育早期（24～48hpf）与发育后期（72～144hpf）的畸形表现不同。在72hpf,两种阳性药物对胚胎孵化率均有明显抑制作甩144hpf可见ATRA（≥1．6×10^-3mg／L）和丙戊酸钠（≥1．25×10^2mg／L）严晕致畸作用,T1分别为10.35和5．72。两种阳性药物胚胎敛畸率及死亡率均呈明显的浓度依赖关系,且与已有动物试验及体外试验结果相符。结论以两种阳性药物建立有效的斑马鱼胚胎发育毒性评价方法,可进行进一步的验证。     

佐匹克隆及其杂质对斑马鱼胚胎发育毒性的比较研究

目的 对佐匹克隆及其主要杂质的斑马鱼胚胎发育毒性进行比较研究.方法 以斑马鱼胚胎为实验对象,在体视光学显微镜下观察佐匹克隆及其主要杂质(杂质A、B、C和2-氨基-5-氯吡啶)在不同暴露浓度时对斑马鱼胚胎发育情况的影响,包括胚胎致畸、致死情况的检测与统计.结果 佐匹克隆及其4个杂质对斑马鱼胚胎发育的毒性表型类似;毒性作用...     

利用斑马鱼模型研究靛玉红及其衍生物抑制血管生成作用的构效关系

目的 利用斑马鱼模型考察中药单体靛玉红(Ind)及其衍生物的抑制血管生成活性及其量效关系,并为斑马鱼模型在新药构效关系研究中的应用提供实验依据。方法 选用TG(VEGFR2：GFP)系血管荧光转基因斑马鱼作为筛选模型,分别用Ind及其衍生物靛玉红-3’-单肟(IMO)、6-溴-靛玉红-3’-单肟(BIO)处理斑马鱼胚胎,以节间血管数作为指标,考察药物对斑马鱼胚胎抑制血管生成的影响。结果 在相同的剂量下,Ind、IMO与BIO抑制斑马鱼节间血管(ISV)生成的作用依次增强,三者都显示明显的量效关系。Ind、IMO 与BIO的半数有效剂量(EC₅₀),分别为89.10,5.188和2.686 μmol·L^-1。结论 在靛玉红母体结构改造中,随着C-3’位肟化以及C-6位溴原子的引入,溶解性明显改善,其抑制血管生成活性也逐渐增强。     

骨刺片对斑马鱼胚胎发育的急性毒性研究

目的 研究两批骨刺片样品对斑马鱼胚胎发育的急性毒性作用。方法 以斑马鱼胚胎为试验对象,观察骨刺片样品A（0.01、0.05、0.10、0.20、0.30、0.50、1.00 mg/mL）、样品B（0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00、10.00 mg/mL）对斑马鱼胚胎发育的影响,包括胚胎致畸、致死检测;同时采用超高效液相色谱法-四极杆飞行时间-质谱（UPLC-QTOF-MS）对两批样品所含化学成分进行定性分析。结果 两批样品对斑马鱼胚胎发育的影响相似,主要表现为高浓度下的致死作用,低浓度下主要以发育滞后表型为主;但二者作用浓度存在一定差异,样品A的半数致畸剂量（TD₅₀）为225.4 mg/mL,半数致死剂量（LD₅₀）为292.0 mg/mL;样品B的TD₅₀为60.3 mg/mL,LD₅₀为1.382 mg/mL。UPLC-QTOF-MS分析结果显示,两批样品所含主要化学成分基本一致,但某些成分含量存在一定差异;初步分析显示既是有效成分又是毒性成分的士的宁含量与斑马鱼胚胎试验结果呈正相关。结论 斑马鱼胚胎模型可用于评价骨刺片样品的急性毒性,两批骨刺片样品对斑马鱼胚胎发育影响均表现为高浓度下的致死作用,低浓度下,特别是样品B表现为轻度非正常表型,且均可逆。     

miR-144-3p mimic对泼尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼骨量的影响

目的 通过观察miR-144-3p模拟物（miR-144-3p mimic）对泼尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼骨量及骨密度的影响,探讨miR-144-3p在骨质疏松治疗中的作用。方法 选择最合适的miR-144-3p mimic给药浓度,构建泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型,实验分5组：空白对照组、mimic negative control组、mimic组、mimic+泼尼松龙组、泼尼松龙组。茜素红进行骨骼染色,AxioVision Rel 4.6成像软件拍摄,Image pro plus 6.0图片分析软件分析斑马鱼骨量的变化。结果 注射0.08pmol/尾的幼鱼出现心包水肿、心率减慢、死亡现象,心包水肿发生率较其他组差异具有统计学意义（P<0.05）,选择0.04pmol/尾为最大检测剂量（MTD）;q-PCR检测注射miR-144-3p mimic 36h和72h后,miR-144-3p的表达量与空白对照组相比分别增加,差异具有统计学意义（P<0.001）;mimic组较空白对照组骨染色面积明显增加,骨密度增加,差异有统计学意义（P<0.05）;mimic+泼尼松...     

MCI-002对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及机制

目的研究3-甲氧基-4-O-（2’-亚甲基-3’5’6’-三甲基吡嗪基）阿魏酸钠（MC I-002）对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及机制。方法应用大鼠局灶性脑缺血损伤模型,观察MC I-002对脑缺血大鼠神经行为、脑含水量、脑梗死率、病理组织学以及组织内超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、血栓烷B2（TXB2）和6-酮-前列腺素（6-Keto-PG I2）的影响。结果MCI-002可改善局灶性脑缺血大鼠的神经行为,降低脑含水量和脑梗死率,改善其病理组织学,显著升高6-keto-PGF1α/TXB2比值、提高SOD活力、降低MDA含量且呈剂量依赖性。结论MCI-002对大鼠局灶性脑缺血有很好的保护作用,其机制可能与调节PG I2/TXA2比值,改善能量代谢和抗氧化有关。     

联苯胺对大鼠肝脏线粒体同工酶的影响

采用不同浓度联苯胺(50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg)对大鼠进行腹腔注射，研究了大鼠肝脏线粒体Ca^2 -ATP酶和超氧化物歧化酶(SOD)活性及其同工酶的变化。结果表明在联苯胺作用下这2种酶的活性表现为低浓度被激活，高浓度被抑制；在同工酶谱中出现了ATPl、SOD3和SOD4这3种酶的特异性表达。分析认为，联苯胺对大鼠肝脏线粒体的毒性作用可能为一种混合机制。     

FABP3过表达对斑马鱼胚胎心脏发育及线粒体DNA拷贝数的影响

目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育形态及线粒体DNA拷贝数影响。方法构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼胚胎作为空白对照(C组)。收集受精后12、24、48、72hpf斑马鱼胚胎,利用体式显微镜观察其发育情况,并统计其死亡率;RT-PCR技术检测胚胎线粒体DNA拷贝数。结果 A组斑马鱼心脏在12、24、48、72hpf各时间点发育大体形态、死亡率与C组比较均无明显差异。A组24hpf时斑马鱼线粒体DNA的拷贝数高于C组(P<0.05);而在48、72hpf时,两组间斑马鱼线粒体DNA拷贝数无统计学差异(P>0.05)。结论 FABP3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育的形态无明显影响,对线粒体功能起保护作用。