紫草素通过PI3K/Akt通路促进人乳腺癌MCF-7细胞自噬

目的研究紫草素(Shikonin)对人乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测紫草素处理人乳腺癌MCF-7细胞24、48 h细胞的存活率,Western blot方法检测紫草素处理24 h和48 h时LC3、p62、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白水平。结果 1μmol.L-1紫草素处理细胞48 h以及2.5、5μmol.L-1紫草素处理MCF-7细胞24 h和48 h时,MCF-7细胞的活力受到明显抑制,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值增加,p62表达减少,总PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt均减少。结论紫草素促进乳腺癌MCF-7细胞自噬,其作用机制可能与PI3K/Akt通路受到抑制有关。     

金雀异黄酮对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及EGFR/PI3K/Akt通路的影响

目的研究金雀异黄酮(genistein)诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其机制。方法 MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞核凋亡形态学的影响;qRT-PCR法观察金雀异黄酮干预MDAMB-231细胞36 h后,EGFR mRNA表达水平的变化;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3,EGFR、Akt、p-Akt蛋白的变化;Akt激活剂胰岛素(insulin)、金雀异黄酮单独及联合胰岛素干预乳腺癌MDA-MB-231细胞后,Western blot检测Akt和p-Akt蛋白表达量的变化。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间浓度依赖性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖;Hoechst 33258染色结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDAMB-231细胞36 h后细胞核呈现典型凋亡形态学改变;qRTPCR结果显示,经金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,EGFR的mRNA表达水平明显下降(P<0.01);Western blot结果显示金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组对比,Bcl-2、EGFR、Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调(P<0.01),Bax、caspase-3蛋白表达水平明显上调(P<0.01),Akt激活剂胰岛素可以明显激活p-Akt(P<0.01),金雀异黄酮可以明显下调被激活的p-Akt(P<0.01)。结论金雀异黄酮能抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能与抑制EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。     

冬凌草甲素通过PI3K/Akt通路诱导MDA-MB-231细胞的凋亡

目的：研究冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响,初步探讨其作用机理。方法：体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用6、12、24μmol/L冬凌草甲素对其进行处理,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3、PARP及Akt、p-Akt、p-GSK3β表达的变化。结果：冬凌草甲素作用MDA-MB-231细胞24h后,可观察到细胞凋亡的形态学改变,以24μmol/L组最为明显。实验组与对照组相比,细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高（P〈0.01）,具有时间和剂量依赖性,凋亡相关蛋白procaspase-3下调,caspase-3底物PARP被逐步剪切,并伴随p-Akt、p-GSK3β蛋白水平下调（P〈0.05）。结论：冬凌草甲素可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的抑制有关。     

乳腺癌细胞培养上清液促进人脂肪间充质干细胞迁移和增殖的机制探讨

目的 探讨MDA-MB-231乳腺癌细胞培养上清液对人脂肪间充质干细胞（hAdMSC）迁移、增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 将MDA-MB-231细胞上清液和不含胎牛血清的RPMI-1640培养基以1∶4的体积比混匀后培养的hAdMSC为MDA-MB-231上清液组。向MDA-MB-231上清液组添加10μmol/L Reparixin(CXCR1/2抑制剂)为CXCR1/2抑制剂组;向MDA-MB-231上清液组添加10 nmol/L GSK690693(Akt抑制剂)为Akt抑制剂组。无任何刺激进行培养的hAdMSC为对照组。细胞划痕实验检测各组hAdMSC的迁移能力,CCK-8实验检测各组hAdMSC增殖情况,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞凋亡实验检测各组hAdMSC凋亡率,Western blot检测各组hAdMSC的mTOR/磷酸化mTOR(p-mTOR)和Akt/磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果 与对照组相比,MDA-MB-231上清液组hAdMSC的24 h和48 h细胞划痕闭合面积、细胞增殖水平以及p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量均增加...     

磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号通路参与核因子-κB受体活化因子配体诱导的MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用。方法 Transwell法测定RANKL刺激后MDA-MB-231细胞迁移能力的改变。蛋白印迹法检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达及RANKL刺激后pAkt及Akt的表达;检测数据用x珚±s表示,采用SPSS 16.0软件进行t检验。结果 MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强,RANKL的圈套受体骨保护素(OPG)可阻断RANKL诱导的细胞迁移(P<0.01)。RANKL刺激后MDA-MB-231细胞p-Akt表达升高,PI3K抑制剂LY294002抑制RANKL诱导的细胞迁移(P<0.01)。结论 PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移。     

阿帕替尼抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的生长及机制研究

目的 探讨阿帕替尼对鼻咽癌CNE-2Z细胞生长抑制作用及其可能机制。方法 将鼻咽癌CNE-2Z细胞与不同浓度阿帕替尼（0，0.5，1，2 μmol·L^-1）共培养48 h，并分别定义为0，0.5，1，2 μmol·L^-1组。MTT法检测细胞生长抑制率，Annexin V-FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达，RT-PCR检测p-PI3K、p-Akt mRNA表达。按药物不同，将鼻咽癌CNE-2Z细胞分为4组：对照组、阿帕替尼组、740YP组、阿帕替尼+740YP组，48 h后Annexin V-FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blotting检测p-PI3K和p-Akt蛋白表达。结果 MTT检测结果表明，阿帕替尼呈浓度依赖性抑制CNE-2Z细胞的增殖（P<0.05），阿帕替尼对鼻咽癌细胞的半数抑制浓度（IC₅₀值）为1.518 μmol·L^-1。Annexin-V/PI联合流式细胞仪检测结果表明，阿帕替尼呈浓度依赖性诱导CNE-2Z细胞凋亡（P<0.05）。Western blotting检测结果表明，阿帕替尼呈剂量依赖性地促进促Bax、caspase-3和caspase-9的表达（P<0.05），抑制Bcl-2的表达（P<0.05）。阿帕替尼能抑制p-PI3K、p-Akt的蛋白和mRNA表达（P<0.05），但对PI3K、Akt蛋白表达无影响。细胞培养48 h后，对照组细胞凋亡率为（10.5±0.96）%，阿帕替尼组为（25.3±1.67）%，740YP组为（6.30±0.52）%，阿帕替尼+740YP组为（11.9±0.61）%，与对照组相比，阿帕替尼组凋亡率上调（P<0.05），740YP组凋亡率下调（P<0.05），阿帕替尼和740YP联用时，凋亡率比740YP组上调（P<0.05）。与对照组相比，阿帕替尼组p-PI3K、p-Akt蛋白表达下调（P<0.05），740YP组p-PI3K、p-Akt蛋白表达上调（P<0.05），阿帕替尼和740YP联用时，p-PI3K、p-Akt蛋白表达比740YP组下调（P<0.05）。结论 阿帕替尼可通过抑制PI3K/Akt信号转导通路而诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡，从而达到抑制其增殖的目的。     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬的作用研究

目的 探讨紫草素对人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬的影响及其机制。方法 取对数生长期人结肠癌SW480细胞,设对照组（DMSO）、紫草素（0.3、0.5、0.7 μg/mL）和LY294002（PI3K特异性抑制剂,5 μg/mL）组。药物干预48 h后,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SW480细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC流式细胞术分析细胞凋亡状况,蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax、LC3蛋白表达并计算Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值。结果 与对照组比较,经紫草素0.3、0.5、0.7 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够显著提高人结肠癌SW480细胞增殖抑制率和凋亡率（P<0.01）;经紫草素0.5、0.7 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够显著下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达,并上调Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05、0.01）,提高Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值（P<0.01）。与LY294002组比较,经紫草素0.7 μg/mL干预能够显著提高SW480细胞增殖抑制率和凋亡率（P<0.05、0.01）,下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达并上调Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05、0.01）,提高Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值（P<0.01）。结论 紫草素能够促进人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬,作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关。     

扁蓄苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨扁蓄苷对乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响。方法以不同浓度的萹蓄苷作用于体外生长至对数期的MDA-MB-231细胞48 h后,采用噻唑蓝染色(MTT)法检测扁蓄苷对细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色观察细胞染色质固缩情况,流式细胞术检测细胞周期,Western-blot检测PI3K/AKT信号通路核心蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT表达水平,RT-PCR技术检测通路下游细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl及周期相关蛋白CDK2基因表达情况。结果不同浓度的扁蓄苷(6.25、12.5、25、50、100μmol·L~(-1))作用于MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖活性受到抑制(P <0.01),且具有浓度依赖性;扁蓄苷(12.5、50、100μmol·L~(-1))作用细胞48 h后,细胞核染色质固缩;当扁蓄苷浓度为50μmol·L~(-1)时,S期细胞所占百分比显著增高(P <0.05),当扁蓄苷浓度为100μmol·L~(-1)时,G2/M期细胞所占百分比显著增高(P <0.05);随着扁蓄苷浓度的增加,通路核心位点PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P <0.01),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl、细胞周期蛋白CDK2基因表达水平下调(P <0.05)。结论扁蓄苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期、G2/M期,并诱导细胞凋亡。其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路下调Bcl-2、Bcl-xl、及CDK2基因表达进而诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

Desmosdumotin-CB环衍生物抑制MCF-7细胞增殖及其作用机制研究

目的 研究desmosdumotin-C（Des-C）B环对位氟修饰衍生物TPP对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测质量浓度为1.0、2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL的TPP作用48 h后,对MCF-7细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测20.0 μg/mL TPP作用0、24、48 h诱导MCF-7细胞的凋亡程度;流式细胞术检测20.0 μg/mL TPP作用0、24、48 h对MCF-7细胞中NF-κB P65阳性细胞表达率的影响。结果 作用48 h后,2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL的TPP对MCF-7细胞增殖均有显著抑制作用,且抑制率随着浓度的升高而增大;20 μg/mL TPP作用24、48 h均可诱导细胞凋亡;作用48 h后,20 μg/mL TPP可显著减少MCF-7中NF-κB P65阳性细胞率。结论 TPP显著抑制MCF-7细胞增殖,诱导MCF-7细胞凋亡,作用机制可能与下调NF-κB表达有关。     

野马追总黄酮的体内外抗乳腺癌活性及机制研究

目的 探究野马追总黄酮(TFE)的体内外抗乳腺癌活性及相关的作用机制。方法 MTT法检测TFE对乳腺癌细胞(MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-468)和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A增殖的影响;流式细胞术检测TFE对乳腺癌细胞周期和凋亡的影响;吖啶橙(AO)染色法检测TFE对细胞自噬的影响;Western blot检测细胞周期、凋亡、自噬相关蛋白的变化,以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化;建立MDA-MB-231细胞的裸鼠移植瘤模型,观察TFE的体内抗肿瘤活性。结果 TFE能明显抑制乳腺癌细胞增殖,并呈剂量依赖性,而对人正常乳腺上皮细胞无显著的抑制作用;TFE能增加G₂/M期细胞比例,上调p-cdc-2蛋白表达,下调cdc-2和Cyclin B1蛋白表达;TFE能显著增加乳腺癌细胞凋亡比例,上调促凋亡蛋白Bad和Bax表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达;TFV能够诱导乳腺癌细胞产生自噬,自噬相关蛋白LC3-II表达上升,p62表达降低;TFE能够抑制显著抑制PI3K和Akt的磷酸化水平;TFE能够在体内抑制裸鼠肿瘤的体积。结论 TFE通过抑制PI3K/Akt信号通路,阻滞细胞周期、诱导凋亡和自噬,进而在体内外抑制乳腺癌细胞的生长。     

乳痛方提取物通过蛋白激酶B通路影响人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的：研究乳痛方（RTP）提取物对人乳腺癌MCF-7细胞生长和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：实验分为空白对照组、阳性对照组（表柔比星）和RTP给药组,噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度方剂（0.5,1,2,4,8,16 mg·mL^-1）分别在24 h、48 h和72 h对MCF-7细胞增殖的抑制率;流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率;免疫蛋白印记法（Western blot）检测Bcl-2、Bax、总蛋白激酶B（Akt）和p-Akt的表达。结果：与空白组相比,高浓度的RTP能明显抑制MCF-7细胞的生长,且具有时间和剂量的依赖性。RTP可诱导MCF-7细胞凋亡,细胞凋亡率随给药浓度的增加而增强。Western blot表明,RTP可明显上调Bax蛋白表达,而下调Bcl-2和p-Akt蛋白表达水平,具有明显统计学差异（P<0.05或P<0.01）,且具有浓度依赖性,但对总Akt表达却无明显影响。结论： RTP可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达,抑制Akt磷酸化从而阻断P13K/Akt信号通路,启动线粒体凋亡途径有关。     

鱼腥草总黄酮调控PI3K/Akt信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究

目的：探讨鱼腥草总黄酮调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的诱导作用。方法：取对数期MCF-7细胞,随机分为4组（5个复孔）,低、中、高剂量组分别用3,6,9 g·L^-1鱼腥草总黄酮处理,对照组用磷酸盐缓冲液（PBS）处理。干预48 h后进行细胞形态学观察;对比干预12,24,48 h时的细胞凋亡率;对比干预48 h时PI3K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA和PI3K、Akt、磷酸化Akt（pAkt）、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量。结果：Hoechst 33258染色结果显示,干预后3剂量组部分细胞体积缩小、染色质浓缩,出现凋亡小体,且中剂量组凋亡现象最为明显;细胞凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最高、高剂量组其次、低剂量组其稍低、对照组最低,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;细胞凋亡率组内比较,对照组随时间的延长变化不显著（P>0.05）,3剂量组均随时间的延长显著增加（P<0.05）;PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最低、高剂量组其次、低剂量组稍高、对照组最高,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;Akt mRNA和蛋白相对表达量组间比较差异均不显著（P>0.05）。结论：鱼腥草总黄酮可促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡,其中浓度为6 g·L^-1时促凋亡作用最强,推测是通过下调PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白表达,上调Bax mRNA和蛋白的表达,与PI3K/Akt信号通路有关。     

乳腺癌细胞条件培养基对骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

目的 探讨MCF-7乳腺癌细胞条件培养基对骨髓间充质干细胞（BMSC）增殖、凋亡和迁移的影响及分子机制。方法 正常环境下培养的BMSC为对照组,以MCF-7细胞条件培养基培养的BMSC为MCF-7条件培养基组,向MCF-7条件培养基组添加10 nmol/L GSK690693(Akt抑制剂)为Akt抑制剂组,向MCF-7条件培养基组添加10μmol/L Reparixin(CXCR1/2抑制剂)为CXCR1/2抑制剂组。MTT实验检测各组BMSC增殖情况,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞凋亡实验检测各组BMSC凋亡率,Transwell细胞迁移实验检测各组BMSC的迁移能力,酶联免疫吸附试验检测两种细胞培养上清液和MCF-7细胞条件培养基中白细胞介素（IL）-8蛋白含量,Western blot检测各组BMSC的蛋白激酶B(Akt)/磷酸化Akt(p-Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）/磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达。结果 与对照组相比,MCF-7条件培养基组BMSC的细胞增殖水平、迁移数目以及p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量均增高,细胞凋亡率...     

miR-328-5p对乳腺癌细胞的调控机制研究

目的 探究miR-328-5p对乳腺癌细胞的调控机制。方法 选取乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231及正常乳腺上皮细胞系MCF10A,据不同转染方法分为Control组、miR-NC组、miR-328-5p mimic组及转染miR-328-5p mimic+整合素α5(ITGA5)组,采用RT-PCR检测乳腺癌细胞系内miR-328-5p、ITGA5 mRNA,采用CCK-8法检测乳腺癌细胞MCF-7增殖情况,采用Annexin-FITC/PI双染法流式细胞术检测乳腺癌细胞MCF-7凋亡情况,采用Western blot法检测ITGA5、PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平。结果 乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中miR-328-5p mRNA含量显著低于正常乳腺上皮细胞系MCF10A,而ITGA5 mRNA含量显著高于正常乳腺上皮细胞系MCF10A(P<0.05)。miR-328-5p mimic组miR-328-5p mRNA含量显著高于Control组和miR-NC组(P<0.05)。miR-328-5p转染后ITGA5荧光素酶...     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨阿司匹林对缺氧/复氧H9c2细胞凋亡的影响

摘要：目的:探究阿司匹林（aspirin）对缺氧/复氧（H/R） H9c2心肌细胞凋亡的影响及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/m TOR）信号通路的关系。方法:正常培养H9c2心肌细胞16 h,作为对照组（control组）;缺氧、复氧处理H9c2心肌细胞,作为H/R组;培养基中加入aspirin,作为H/R+aspirin组;培养基中加入阻断剂LY294002,作为H/R+aspirin+PI3K/AKT特异阻断剂LY294002组（H/R+aspirin+LY组）;检测细胞活力、细胞凋亡情况及细胞中PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化m TOR（p-mTOR）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达情况。结果:H/R组H9c2心肌细胞存活率低于Control组,凋亡率高于Control组（P<0.05）; aspirin预处理组细胞存活率高于H/R组,H/R+aspirin组H9c2心肌细胞凋亡率低于H/R组（P<0.05）; H/R+aspirin+LY组细胞存活率低于H/R+aspirin组,细胞凋亡率高于H/R+aspirin组（P<0.05）。H/R组H9c2心肌细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3蛋白表达高于Control组,Bcl-2蛋白表达低于Control组（P<0.05）; H/R+aspirin组H9c2心肌细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达高于H/R组,caspase-3蛋白表达低于H/R组（P<0.05）; H/R+aspirin+LY组p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达低于H/R+aspirin组,caspase-3蛋白表达高于H/R+aspirin组（P<0.05）。结论:aspirin预处理可减轻H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,显著提高心肌细胞存活率,减少细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt/m TOR信号通路实现的。     

四氢姜黄素增强姜黄素抗乳腺癌作用机制初探

目的探讨口服姜黄素体内抗乳腺癌的作用及机制。即其主要代谢产物——四氢姜黄素增强姜黄素抑制乳腺癌细胞生长的作用及机制。方法用MTT法及克隆形成法检测姜黄素与四氢姜黄素单独或联合作用对人乳腺癌MCF-7、MDAMB-231细胞增殖的影响;用PI染色结合流式细胞术检测姜黄素和四氢姜黄素单独或联合作用对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞周期分布的影响;用Annexin V/PI双染结合流式细胞术检测姜黄素和四氢姜黄素单独或联合作用对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡的影响;用Western印迹法检测姜黄素和四氢姜黄素单独或联合作用后人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞中凋亡相关蛋白Fas、FADD、c FLIP、活化胱天蛋白酶3/8及PARP的表达水平。结果 10～40μmol·L~(-1)的四氢姜黄素对于两种人乳腺癌细胞生长抑制作用较弱,而相同剂量的姜黄素可明显抑制乳腺癌细胞生长,两药联用对于MCF-7和MDA-MB-231细胞的生长抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加而增加,且对肿瘤细胞的抑制作用明显强于对应的单药处理组,且多个剂量组合的CI值小于1。与对照组相比,四氢姜黄素及姜黄素单加或联用均不影响MCF-7及MDA-MB-231细胞的周期分布,但却发现姜黄素或四氢姜黄素联合姜黄素处理48及72 h后,两种细胞中sub-G1期细胞凋亡峰显著上调,且两药联用组的细胞凋亡比率显著大于姜黄素单加组。进一步Annexin V/PI双染结合流式细胞术的结果显示,与对照组相比,四氢姜黄素组没有凋亡产生,姜黄素组可随时间依赖性的诱导两种乳腺癌细胞发生凋亡,而四氢姜黄素与姜黄素联用后,细胞凋亡比率较姜黄素组有了极显著的增加。与对照组相比,姜黄素可上调Fas表达,且明显减少原型胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和PARP的蛋白表达,相反,剪切形式胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和PARP明显增加,同时下调抗凋亡蛋白cFLIP的表达,但四氢姜黄素对于以上蛋白作用并不明显,而四氢姜黄素与姜黄素共同处理后可以明显增加姜黄素对于以上凋亡相关蛋白表达水平的改变。结论四氢姜黄素能够在体外增强姜黄素诱导的乳腺癌细胞凋亡,提示姜黄素及其体内代谢产物共同发挥抗乳腺癌作用,且其代谢产物可能具有增效作用。     

基于ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨玫瑰花甲醇提取物对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨玫瑰花甲醇提取物（RE）对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法：采用CCK8法检测不同浓度RE对PC-3细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞ROS水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyt-C、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果：RE呈浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,24 h和48 h后的IC₅₀值分别为31.30 mg·mL^-1和16.76 mg·mL^-1;RE能显著诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,且呈现浓度依赖性;RE可显著提高PC-3细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）,且具有浓度依赖性;RE能显著上调PC-3细胞Bax、cleaved caspase-3、Cyt-C的蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以上均呈现浓度依赖性。结论：本研究表明RE在体外有明显抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖作用,并可能通过调控ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导其凋亡,研究结果可为玫瑰花及其组方临床治疗前列腺癌提供实验依据。     

马钱子碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究

目的本研究旨在观察马钱子碱（Brucine）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制和诱导凋亡作用,并分析Brucine在诱导细胞凋亡过程中对Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的调控作用。方法人乳腺癌细胞株MDA-MB-231（雌激素受体阴性）细胞以L-15培养基体外培养,用MTT法测定Brucine对细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;以碘化丙啶（PI）单染流式细胞仪检测细胞凋亡;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测Brucine对MDA-MB-231的诱导凋亡作用;Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase3的表达。结果Brucine对MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;流式细胞术PI染色结果显示随着Brucine浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度依赖,与对照组相比差异有显著性（P〈0.05）;早期凋亡率和晚期凋亡率先增加后降低,但死亡细胞逐渐增加;且随着Brucine浓度的增加抗凋亡基因Bcl-2表达水平明显降低,而促凋亡基因Bax和Caspase-3表达明显增高。结论Brucine能够诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其分子机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关。     

芹菜素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的　研究芹菜素对子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期的HEC-1-B细胞,加入0、20、40和80 μmol/L的芹菜素,采用CCK-8法检测培养24、48和72 h后细胞的光密度,计算增殖抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸化AKT（p-AKT）的表达水平。结果　20~80 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞的增殖明显受到抑制,细胞凋亡率升高,同时促凋亡蛋白Bax表达增高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。0、5、10和20 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot结果显示,40 μmol/L芹菜素能够下调PI3K/AKT通路蛋白p-PI3K和p-AKT的表达。结论　芹菜素能够抑制HEC-1-B细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。